Nghiên cứu một số giải pháp công nghệ làm khả năng sinh tổng hợp gsh của nấm men saccharomyces cerevisiae

TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI LUẬN VĂN THẠC SĨ Nghiên cứu số giải pháp công nghệ làm tăng khả sinh tổng hợp GSH nấm men Saccharomyces cerevisiae TRẦN THỊ HOA Hoa.TT202926M@sis.hust.edu.vn Ngành Công nghệ Sinh học Giảng viên hướng dẫn: PGS TS Trần Liên Hà TS Trương Hương Lan Viện: Chữ ký GVHD Chữ ký GVHD Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm HÀ NỘI, 10/2022 LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP HVTH: Trần Thị Hoa GVHD: PGS.TS Trần Liên Hà, TS Trương Hương Lan LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS Trần Liên Hà, TS Trương Hương Lan ĐỀ TÀI LUẬN VĂN Đề tài: Nghiên cứu số giải pháp công nghệ làm tăng khả sinh tổng hợp GSH nấm men Saccharomyces cerevisiae Tác giả luận văn: Trần Thị Hoa Ngành: Công nghệ Sinh học Giảng viên hướng dẫn: PGS.TS Trần Liên Hà TS Trương Hương Lan Khoá: 2020B Ngày tháng năm 2022 Cán hướng dẫn HVTH: Trần Thị Hoa Cán hướng dẫn LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS Trần Liên Hà, TS Trương Hương Lan LỜI CẢM ƠN Để luận văn đạt kết tốt đẹp, nhận hỗ trợ, giúp đỡ nhiều quan, tổ chức, cá nhân Với tình cảm sâu sắc chân thành nhất, cho phép tơi bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến tất cá nhân quan tạo điều kiện giúp đỡ trình học tập nghiên cứu Trước hết xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo trường Đại học Bách khoa Hà Nội nói chung, thầy viện Cơng nghệ Sinh học Cơng nghệ Thực phẩm nói riêng dạy dỗ cho kiến thức môn đại cương môn chuyên ngành, giúp tơi có sở lý thuyết vững vàng tạo điều kiện giúp đỡ tơi suốt q trình học tập Với quan tâm, dạy dỗ, bảo tận tình chu đáo thầy cơ, đến tơi hồn thành luận văn thạc sĩ khoa học, đề tài: “Nghiên cứu số giải pháp công nghệ làm tăng khả sinh tổng hợp GSH nấm men Saccharomyces cerevisiae” Đặc biệt xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới PGS.TS Trần Liên Hà TS Trương Hương Lan – người dìu dắt, giúp đỡ đồng hành với suốt khoảng thời gian học tập nghiên cứu đề tài Và thiếu hướng dẫn tận tâm cô chú, anh chị môn Thực phẩm Dinh dưỡng, Viện công nghiệp thực phẩm nơi thực luận văn Cuối cùng, xin cảm ơn gia đình ln u thương, hỗ trợ tơi mặt để tơi n tâm rèn luyện, học tập trường Đại học Bách khoa Hà Nội Với kinh nghiệm cịn hạn chế, luận văn khơng thể tránh thiếu sót Tơi mong nhận bảo, đóng góp ý kiến thầy giáo để tơi có điều kiện bổ sung, nâng cao kiến thức mình, phục vụ tốt cơng tác thực tế sau Hà Nội, ngày HVTH: Trần Thị Hoa tháng Học viên năm 2022 LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS Trần Liên Hà, TS Trương Hương Lan TĨM TẮT NỘI DUNG LUẬN VĂN Mục đích luận văn nghiên cứu nhằm khảo sát, lựa chọn nguyên liệu cho môi trường cải tiến làm tăng khả sinh tổng hợp GSH chủng nấm men S cerevisiae YM22, tiếp tiến hành tối ưu hố thông số nhiệt độ, pH, thời gian nuôi cấy, tỷ lệ cấp giống khảo sát sơ trước việc thiết kế thí nghiệm theo phương pháp bề mặt đáp ứng (RSM) kết hợp với mơ hình BoxBehnken (BBD) Tiến hành khảo sát thời gian nồng độ bổ sung axit amin tiền chất chất phụ trợ lượng Sau khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến q trình trích ly GSH từ sinh khối nấm men cồn ethanol Nghiên cứu chọn môi trường cải tiến làm tăng khả sinh tổng hợp GSH chủng S cerevisiae YM22 bao gồm thành phần: Rỉ đường, glucose, sucrose; cao đậu tương, cao nấm men, cao malt, ZnSO4, (NH4)2HPO4, MgSO4, K2HPO4, KH2PO4 Đồng thời tìm điểm tối ưu thông số nhiệt độ, pH, thời gian ni cấy, tỷ lệ cấp giống mà hàm lượng GSH cao gấp 3,6 lần so với ban đầu Tiếp đó, xác định thời điểm nồng độ bổ sung thích hợp L-cysteine natri citrate Nghiên cứu khảo sát sơ yếu tố ảnh hưởng đến q trình trích ly GSH từ sinh khối nấm men sử dụng cồn ethanol, bao gồm: ảnh hưởng nồng độ ethanol, nồng độ chất/ethanol, nhiệt độ trích ly thời gian trích ly đưa nhận xét ảnh hưởng yếu tố tới trình thu nhận GSH từ sinh khối nấm men Luận văn làm tài liệu tham khảo cho sinh viên trường đại học, độc giả muốn nghiên cứu khảo sát tối ưu hố thơng số trình lên men Trong khuân khổ luận văn chắn chưa thể giải triệt để mục tiêu đề tài, mong nhận giúp đỡ đóng góp ý kiến q thầy hội đồng để đề tài hoàn chỉnh Học viên HVTH: Trần Thị Hoa LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS Trần Liên Hà, TS Trương Hương Lan MỤC LỤC DANH MỤC BẢNG BIỂU DANH MỤC HÌNH VẼ 11 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT 12 LỜI MỞ ĐẦU PHẦN TỔNG QUAN 1.1 Glutathione 1.1.1 Cấu trúc glutathione 1.1.2 Chức glutathione 1.2 Công nghệ sản xuất glutathione 1.2.1 Lịch sử cấu trúc phân tử glutathione 1.2.2 Tổng hợp glutathione phương pháp hoá học 1.2.3 Tổng hợp glutathione phương pháp enzyme 1.2.4 Tổng hợp glutathione phương pháp lên men vi sinh vật 11 1.3 Giải pháp công nghệ làm tăng khả sinh tổng hợp glutathione vi sinh vật 14 1.3.1 Cải tiến thành phần môi trường nuôi cấy 14 1.3.2 Tối ưu thơng số q trình lên men 15 1.3.3 Bổ sung axit amin tiền chất chất phụ trợ lượng 15 1.4 Hiện trạng sản xuất glutathione phương pháp vi sinh 16 1.5 Nấm men Saccharomyces cerevisiae sinh tổng hợp GSH 18 1.5.1 Nấm men Saccharomyces cerevisiae 18 1.5.2 Ứng dụng công nghệ nấm men Saccharomyces cerevisiae 19 1.5.3 Sinh tổng hợp glutathione Saccharomyces cerevisiae 20 1.5.4 Vai trò glutathione nấm men Saccharomyces cerevisiae 23 1.6 Thu nhận glutathione từ sinh khối nấm men Saccharomyces cerevisiae 24 1.7 Ứng dụng glutathione 26 PHẦN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 2.1 Vật liệu, hóa chất thiết bị nghiên cứu 28 2.1.1 Vật liệu 28 2.1.2 Môi trường nuôi cấy 29 HVTH: Trần Thị Hoa LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS Trần Liên Hà, TS Trương Hương Lan 2.1.3 Thiết bị nghiên cứu 29 2.2 Phương pháp nghiên cứu 29 2.2.1 Phương pháp phân tích 29 2.2.2 Phương pháp thiết kế thí nghiệm 32 PHẦN KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 37 3.1 Khảo sát lựa chọn nguyên liệu thay để tạo môi trường cải tiến sinh tổng hợp GSH nấm men 37 3.1.1 Nguồn dinh dưỡng cacbon 37 3.1.2 Nguồn dinh dưỡng nitơ 39 3.1.3 Nguyên tố vi lượng 42 3.1.4 Khảo sát ảnh hưởng axit amin tới trình sinh tổng hợp GSH nấm men S cerevisiae YM22 43 3.2 Nghiên cứu lựa chọn tối ưu hoá điều kiện lên men sinh tổng hợp glutathione 45 3.2.1 Tối ưu hoá điều kiện nhiệt độ, pH, thời gian nuôi cấy tỷ lệ nhân giống 45 3.2.2 Khảo sát ảnh hưởng chế độ thơng khí tới q trình sinh tổng hợp GSH nấm men S cerevisiae YM22 50 3.2.3 Dựng đường cong sinh trưởng nấm men S cerevisiae YM22 51 3.3 Khảo sát thời gian nồng độ bổ sung axit amin tiền chất chất phụ trợ lượng 53 3.3.1 Ảnh hưởng thời điểm bổ sung L-cysteine đến trình lên men sinh tổng hợp GSH 53 3.3.2 Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ L-cysteine đến trình lên men sinh tổng hợp GSH 54 3.3.3 Nghiên cứu lựa chọn thời điểm nồng độ bổ sung natri citrate 55 3.3.4 Động học sinh trưởng chủng nấm men S cerevisiae YM22 57 3.4 Khảo sát điều kiện thu hồi glutathione từ sinh khối nấm men phương pháp trích ly cồn ethanol 58 3.3.1 Ảnh hưởng nồng độ cồn ethanol đến hiệu suất trích ly GSH 59 3.3.2 Ảnh hưởng tỷ lệ sinh khối khơ/dung mơi ethanol đến hiệu suất trích ly GSH 60 3.3.3 Ảnh hưởng nhiệt độ trích ly đến hiệu suất trích ly GSH 61 HVTH: Trần Thị Hoa LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS Trần Liên Hà, TS Trương Hương Lan 3.3.4 Ảnh hưởng thời gian trích ly đến hiệu suất trích ly GSH 62 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 64 DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO 65 PHỤ LỤC 73 HVTH: Trần Thị Hoa LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS Trần Liên Hà, TS Trương Hương Lan DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 1 Xu hướng phát triển công nghệ sản xuất GSH Bảng 1.2 Tổng hợp nghiên cứu sản xuất GSH vi sinh vật phương pháp enzyme Bảng 1.3 Các hướng nghiên cứu khác việc tăng cường sinh khối nồng độ glutathione sản xuất GSH vi sinh vật 11 Bảng 1.4 Thống kê nghiên cứu sinh tổng hợp GSH vi sinh vật tái tổ hợp 13 Bảng Các chiến lược xu hướng sản xuất GSH lên men vi sinh vật 17 Bảng So sánh trình thu hồi GSH từ sinh khối nấm men phương pháp trích ly cồn ethanol sử dụng nước nóng 25 Bảng 1.7 Các ứng dụng chế tác dụng glutathione sản phẩm liên quan 27 Bảng Ma trận bố trí thí nghiệm mã hố biến 34 Bảng 3.1 Ảnh hưởng nguồn cacbon thay tới phát triển khả lên men GSH S cerevisiae YM22 38 Bảng 3.2 Ảnh hưởng tỉ lệ rỉ đường thay glucose tới khả phát triển sinh tổng hợp GSH chủng S cerevisiae YM22 39 Bảng 3.3 Ảnh hưởng nguồn nitơ khác tới phát triển khả lên men GSH S cerevisiae YM22 40 Bảng 3.4 Ảnh hưởng tỉ lệ cao chiết đậu tương tới khả phát triển sinh tổng hợp GSH chủng S cerevisiae YM22 41 Bảng 3.5 Ảnh hưởng số loại muối khoáng vi lượng (FeSO4, ZnSO4, MnSO4) tới sinh tổng hợp GSH 42 Bảng 3.6 Ảnh hưởng nồng độ muối ZnSO4 đến khả sinh tổng hợp GSH S cerevisiae YM22 43 Bảng 3.7 Ảnh hưởng việc bổ sung loại axit amin khác đến khả sinh tổng hợp glutathione chủng S cerevisiae YM22 44 Bảng Các mức thí nghiệm biến số 45 Bảng Ma trận thực nghiệm kết thực nghiệm theo ma trận 45 Bảng 10 Bảng kết phân tích hồi quy tuyến tính 46 Bảng 3.11 Ảnh hưởng tốc độ lắc tới trình sinh tổng hợp GSH nấm men S cerevisiae YM22 50 HVTH: Trần Thị Hoa LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS Trần Liên Hà, TS Trương Hương Lan Bảng 3.12 Ảnh hưởng tốc độ sục khí tới q trình sinh tổng hợp GSH nấm men S cerevisiae YM22 51 Bảng 3.13 Ảnh hưởng thời điểm bổ sung chất L-cysteine đến trình lên men sinh tổng hợp GSH chủng S cerevisiae YM22 53 Bảng 3.14 Ảnh hưởng tỷ lệ chất L-cysteine đến trình lên men sinh tổng hợp GSH chủng S cerevisiae YM22 54 Bảng 3.15 Ảnh hưởng thời điểm bổ sung natri citrate khác tới sinh tổng hợp GSH chủng S cerevisiae YM22 56 Bảng 3.16 Ảnh hưởng hàm lượng natri citrate đến trình lên men sinh tổng hợp GSH chủng S cerevisiae YM22 56 HVTH: Trần Thị Hoa LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS Trần Liên Hà, TS Trương Hương Lan N Hàm lượng sinh khối khô (g/L) Hàm lượng GSH sinh khối (mg/g) Hàm lượng GSH dịch lên men (mg/L) 95% Confidence Interval for Mean Std Deviation Mean Std Error Lower Bound Upper Bound 1.00 13.2000 07000 04041 13.0261 13.3739 2.00 13.7700 04359 02517 13.6617 13.8783 3.00 14.0000 01732 01000 13.9570 14.0430 4.00 14.7600 07000 04041 14.5861 14.9339 5.00 13.3600 04000 02309 13.2606 13.4594 6.00 13.2300 04359 02517 13.1217 13.3383 Total 18 13.7200 56562 13332 13.4387 14.0013 1.00 24.7400 05196 03000 24.6109 24.8691 2.00 25.8000 02646 01528 25.7343 25.8657 3.00 26.0700 06245 03606 25.9149 26.2251 4.00 26.3000 09849 05686 26.0553 26.5447 5.00 25.4500 05196 03000 25.3209 25.5791 6.00 24.9800 05568 03215 24.8417 25.1183 Total 18 25.5567 57925 13653 25.2686 25.8447 1.00 326.5700 2.41137 1.39220 320.5798 332.5602 2.00 355.2667 1.47656 85249 351.5987 358.9346 3.00 364.9800 45033 26000 363.8613 366.0987 4.00 388.1833 75739 43728 386.3019 390.0648 5.00 340.0100 54443 31432 338.6576 341.3624 6.00 330.4867 77861 44953 328.5525 332.4208 Total 18 350.9161 21.99353 5.18393 339.9790 361.8532 ANOVA Sum of Squares Hàm lượng sinh khối khô Between Groups (g/L) Within Groups Hàm lượng GSH sinh khối (mg/g) 1.082 031 12 003 Total 5.439 17 Between Groups 5.658 1.132 046 12 004 5.704 17 8203.814 1640.763 19.348 12 1.612 8223.162 17 Within Groups Between Groups Within Groups Total HVTH: Trần Thị Hoa Mean Square Total Hàm lượng GSH dịch lên men (mg/L) df 5.408 F Sig 418.668 000 297.811 000 1017.633 000 LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS Trần Liên Hà, TS Trương Hương Lan Post Hoc Tests Multiple Comparisons Tukey HSD 95% Confidence Interval (I) Thời điểm bổ (J) Thời điểm bổ Mean Dependent Variable sung Natri citrate (h) sung Natri citrate (h) Difference (I-J) Hàm lượng sinh khối khô (g/L) 1.00 2.00 -.57000* 04150 000 -.7094 -.4306 3.00 -.80000* 04150 000 -.9394 -.6606 4.00 -1.56000* 04150 000 -1.6994 -1.4206 5.00 -.16000* 04150 022 -.2994 -.0206 6.00 -.03000 04150 975 -.1694 1094 1.00 57000* 04150 000 4306 7094 3.00 -.23000* 04150 001 -.3694 -.0906 4.00 -.99000* 04150 000 -1.1294 -.8506 5.00 41000* 04150 000 2706 5494 6.00 54000* 04150 000 4006 6794 1.00 80000* 04150 000 6606 9394 2.00 23000* 04150 001 0906 3694 4.00 -.76000* 04150 000 -.8994 -.6206 5.00 64000* 04150 000 5006 7794 6.00 77000* 04150 000 6306 9094 1.00 1.56000* 04150 000 1.4206 1.6994 2.00 99000* 04150 000 8506 1.1294 3.00 76000* 04150 000 6206 8994 5.00 1.40000* 04150 000 1.2606 1.5394 6.00 1.53000* 04150 000 1.3906 1.6694 1.00 16000* 04150 022 0206 2994 2.00 -.41000* 04150 000 -.5494 -.2706 3.00 -.64000* 04150 000 -.7794 -.5006 4.00 -1.40000* 04150 000 -1.5394 -1.2606 6.00 13000 04150 073 -.0094 2694 1.00 03000 04150 975 -.1094 1694 2.00 -.54000* 04150 000 -.6794 -.4006 3.00 -.77000* 04150 000 -.9094 -.6306 4.00 -1.53000* 04150 000 -1.6694 -1.3906 5.00 -.13000 04150 073 -.2694 0094 2.00 -1.06000* 05033 000 -1.2291 -.8909 3.00 -1.33000* 05033 000 -1.4991 -1.1609 4.00 -1.56000* 05033 000 -1.7291 -1.3909 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 Hàm lượng 1.00 GSH sinh khối (mg/g) HVTH: Trần Thị Hoa Std Error Sig Lower Bound Upper Bound LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 Hàm lượng 1.00 GSH dịch lên men (mg/L) 2.00 3.00 GVHD: PGS.TS Trần Liên Hà, TS Trương Hương Lan 5.00 -.71000* 05033 000 -.8791 -.5409 6.00 -.24000* 05033 005 -.4091 -.0709 1.00 1.06000* 05033 000 8909 1.2291 3.00 -.27000* 05033 002 -.4391 -.1009 4.00 -.50000* 05033 000 -.6691 -.3309 5.00 35000* 05033 000 1809 5191 6.00 82000* 05033 000 6509 9891 1.00 1.33000* 05033 000 1.1609 1.4991 2.00 27000* 05033 002 1009 4391 4.00 -.23000* 05033 007 -.3991 -.0609 5.00 62000* 05033 000 4509 7891 6.00 1.09000* 05033 000 9209 1.2591 1.00 1.56000* 05033 000 1.3909 1.7291 2.00 50000* 05033 000 3309 6691 3.00 23000* 05033 007 0609 3991 5.00 85000* 05033 000 6809 1.0191 6.00 1.32000* 05033 000 1.1509 1.4891 1.00 71000* 05033 000 5409 8791 2.00 -.35000* 05033 000 -.5191 -.1809 3.00 -.62000* 05033 000 -.7891 -.4509 4.00 -.85000* 05033 000 -1.0191 -.6809 6.00 47000* 05033 000 3009 6391 1.00 24000* 05033 005 0709 4091 2.00 -.82000* 05033 000 -.9891 -.6509 3.00 -1.09000* 05033 000 -1.2591 -.9209 4.00 -1.32000* 05033 000 -1.4891 -1.1509 5.00 -.47000* 05033 000 -.6391 -.3009 2.00 -28.69667* 1.03677 000 -32.1791 -25.2142 3.00 -38.41000* 1.03677 000 -41.8924 -34.9276 4.00 -61.61333* 1.03677 000 -65.0958 -58.1309 5.00 -13.44000* 1.03677 000 -16.9224 -9.9576 6.00 -3.91667* 1.03677 025 -7.3991 -.4342 1.00 28.69667* 1.03677 000 25.2142 32.1791 3.00 -9.71333* 1.03677 000 -13.1958 -6.2309 4.00 -32.91667* 1.03677 000 -36.3991 -29.4342 5.00 15.25667* 1.03677 000 11.7742 18.7391 6.00 24.78000* 1.03677 000 21.2976 28.2624 1.00 38.41000* 1.03677 000 34.9276 41.8924 1.03677 000 6.2309 13.1958 -23.20333* 1.03677 000 -26.6858 -19.7209 000 21.4876 28.4524 2.00 4.00 5.00 HVTH: Trần Thị Hoa 9.71333* 24.97000* 1.03677 LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS Trần Liên Hà, TS Trương Hương Lan 4.00 5.00 6.00 6.00 34.49333* 1.03677 000 31.0109 37.9758 1.00 61.61333* 1.03677 000 58.1309 65.0958 2.00 32.91667* 1.03677 000 29.4342 36.3991 3.00 23.20333* 1.03677 000 19.7209 26.6858 5.00 48.17333* 1.03677 000 44.6909 51.6558 6.00 57.69667* 1.03677 000 54.2142 61.1791 1.00 13.44000* 1.03677 000 9.9576 16.9224 2.00 -15.25667* 1.03677 000 -18.7391 -11.7742 3.00 -24.97000* 1.03677 000 -28.4524 -21.4876 4.00 -48.17333* 1.03677 000 -51.6558 -44.6909 6.00 9.52333* 1.03677 000 6.0409 13.0058 1.00 3.91667* 1.03677 025 4342 7.3991 2.00 -24.78000* 1.03677 000 -28.2624 -21.2976 3.00 -34.49333* 1.03677 000 -37.9758 -31.0109 4.00 -57.69667* 1.03677 000 -61.1791 -54.2142 5.00 -9.52333* 1.03677 000 -13.0058 -6.0409 * The mean difference is significant at the 0.05 level Homogeneous Subsets Hàm lượng sinh khối khô (g/L) Tukey HSDa Subset for alpha = 0.05 Thời điểm bổ sung Natri citrate (h) N 1.00 13.2000 6.00 13.2300 5.00 2.00 3.00 4.00 3 13.2300 13.3600 13.7700 14.0000 14.7600 Sig .975 073 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Hàm lượng GSH sinh khối (mg/g) Tukey HSDa Thời điểm bổ sung Natri citrate (h) HVTH: Trần Thị Hoa Subset for alpha = 0.05 N LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS Trần Liên Hà, TS Trương Hương Lan 1.00 6.00 5.00 2.00 3.00 4.00 24.7400 24.9800 25.4500 25.8000 26.0700 26.3000 Sig 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Hàm lượng GSH dịch lên men (mg/L) Tukey HSDa Subset for alpha = 0.05 Thời điểm bổ sung Natri citrate (h) N 1.00 6.00 5.00 2.00 3.00 4.00 3 326.5700 330.4867 340.0100 355.2667 364.9800 388.1833 Sig 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Tỷ lệ natri citrate bổ sung Descriptives N Hàm lượng sinh khối khô (g/L) Hàm lượng sinh khối khô (g/L) Mean Std Deviation 95% Confidence Interval for Mean Lower Std Error Bound Upper Bound 1.00 13.2000 04583 02646 13.0862 13.3138 2.00 14.0700 03464 02000 13.9839 14.1561 3.00 14.7900 06928 04000 14.6179 14.9621 4.00 15.2300 02646 01528 15.1643 15.2957 5.00 15.0200 04583 02646 14.9062 15.1338 Total 15 14.4620 76937 19865 14.0359 14.8881 1.00 24.7400 11358 06557 24.4579 25.0221 2.00 25.7800 02646 01528 25.7143 25.8457 HVTH: Trần Thị Hoa LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP Hàm lượng GSH dịch lên men (mg/L) GVHD: PGS.TS Trần Liên Hà, TS Trương Hương Lan 3.00 26.3700 04359 02517 26.2617 26.4783 4.00 27.2600 05568 03215 27.1217 27.3983 5.00 26.6900 04000 02309 26.5906 26.7894 Total 15 26.1680 89150 23018 25.6743 26.6617 1.00 326.5733 2.52468 1.45763 320.3017 332.8450 2.00 362.7267 1.26057 72779 359.5952 365.8581 3.00 390.0133 2.16613 1.25062 384.6324 395.3943 4.00 415.1667 1.56427 90313 411.2808 419.0525 5.00 400.8867 1.81475 1.04775 396.3786 405.3948 Total 15 379.0733 32.51580 8.39554 361.0667 397.0800 ANOVA Sum of Squares Hàm lượng sinh khối Between Groups khô (g/L) Within Groups 2.066 022 10 002 8.287 14 11.086 2.772 040 10 004 11.127 14 14765.092 3691.273 36.791 10 3.679 14801.883 14 Between Groups Within Groups Total Hàm lượng GSH dịch lên men (mg/L) Between Groups Within Groups Total Mean Square 8.265 Total Hàm lượng sinh khối khô (g/L) df F Sig 947.849 000 686.042 000 1003.311 000 Post Hoc Tests Multiple Comparisons Tukey HSD Dependent Variable Hàm lượng sinh khối khô (g/L) (I) Hàm lượng natri citrate bổ sung (g/L) 1.00 2.00 3.00 HVTH: Trần Thị Hoa (J) Hàm lượng natri citrate bổ sung (g/L) Mean Difference (I-J) Std Error Sig 95% Confidence Interval Lower Upper Bound Bound 2.00 -.87000* 03812 000 -.9955 -.7445 3.00 -1.59000* 03812 000 -1.7155 -1.4645 4.00 -2.03000* 03812 000 -2.1555 -1.9045 5.00 -1.82000* 03812 000 -1.9455 -1.6945 1.00 87000* 03812 000 7445 9955 3.00 -.72000* 03812 000 -.8455 -.5945 4.00 -1.16000* 03812 000 -1.2855 -1.0345 5.00 -.95000* 03812 000 -1.0755 -.8245 1.00 1.59000* 03812 000 1.4645 1.7155 LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP 4.00 5.00 Hàm lượng sinh khối khô (g/L) 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 Hàm lượng GSH dịch lên men (mg/L) 1.00 2.00 HVTH: Trần Thị Hoa GVHD: PGS.TS Trần Liên Hà, TS Trương Hương Lan 2.00 72000* 03812 000 5945 8455 4.00 -.44000* 03812 000 -.5655 -.3145 5.00 -.23000* 03812 001 -.3555 -.1045 1.00 2.03000* 03812 000 1.9045 2.1555 2.00 1.16000* 03812 000 1.0345 1.2855 3.00 44000* 03812 000 3145 5655 5.00 21000* 03812 002 0845 3355 1.00 1.82000* 03812 000 1.6945 1.9455 2.00 95000* 03812 000 8245 1.0755 3.00 23000* 03812 001 1045 3555 4.00 -.21000* 03812 002 -.3355 -.0845 2.00 -1.04000* 05190 000 -1.2108 -.8692 3.00 -1.63000* 05190 000 -1.8008 -1.4592 4.00 -2.52000* 05190 000 -2.6908 -2.3492 5.00 -1.95000* 05190 000 -2.1208 -1.7792 1.00 1.04000* 05190 000 8692 1.2108 3.00 -.59000* 05190 000 -.7608 -.4192 4.00 -1.48000* 05190 000 -1.6508 -1.3092 5.00 -.91000* 05190 000 -1.0808 -.7392 1.00 1.63000* 05190 000 1.4592 1.8008 2.00 59000* 05190 000 4192 7608 4.00 -.89000* 05190 000 -1.0608 -.7192 5.00 -.32000* 05190 001 -.4908 -.1492 1.00 2.52000* 05190 000 2.3492 2.6908 2.00 1.48000* 05190 000 1.3092 1.6508 3.00 89000* 05190 000 7192 1.0608 5.00 57000* 05190 000 3992 7408 1.00 1.95000* 05190 000 1.7792 2.1208 2.00 91000* 05190 000 7392 1.0808 3.00 32000* 05190 001 1492 4908 4.00 -.57000* 05190 000 -.7408 -.3992 2.00 -36.15333* 1.56612 000 -41.3076 -30.9991 3.00 -63.44000* 1.56612 000 -68.5942 -58.2858 4.00 -88.59333* 1.56612 000 -93.7476 -83.4391 5.00 -74.31333* 1.56612 000 -79.4676 -69.1591 1.00 36.15333* 1.56612 000 30.9991 41.3076 3.00 -27.28667* 1.56612 000 -32.4409 -22.1324 4.00 -52.44000* 1.56612 000 -57.5942 -47.2858 5.00 -38.16000* 1.56612 000 -43.3142 -33.0058 LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS Trần Liên Hà, TS Trương Hương Lan 3.00 4.00 5.00 1.00 63.44000* 1.56612 000 58.2858 68.5942 2.00 27.28667* 1.56612 000 22.1324 32.4409 4.00 -25.15333* 1.56612 000 -30.3076 -19.9991 5.00 -10.87333* 1.56612 000 -16.0276 -5.7191 1.00 88.59333* 1.56612 000 83.4391 93.7476 2.00 52.44000* 1.56612 000 47.2858 57.5942 3.00 25.15333* 1.56612 000 19.9991 30.3076 5.00 14.28000* 1.56612 000 9.1258 19.4342 1.00 74.31333* 1.56612 000 69.1591 79.4676 2.00 38.16000* 1.56612 000 33.0058 43.3142 3.00 10.87333* 1.56612 000 5.7191 16.0276 4.00 -14.28000* 1.56612 000 -19.4342 -9.1258 * The mean difference is significant at the 0.05 level Homogeneous Subsets Hàm lượng sinh khối khô (g/L) Tukey HSDa Hàm lượng natri citrate bổ sung (g/L) Subset for alpha = 0.05 N 1.00 2.00 3.00 5.00 4.00 Sig 13.2000 14.0700 14.7900 15.0200 15.2300 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Hàm lượng sinh khối khô (g/L) Tukey HSDa Hàm lượng natri citrate bổ sung (g/L) Subset for alpha = 0.05 N 1.00 2.00 3.00 5.00 4.00 HVTH: Trần Thị Hoa 24.7400 25.7800 26.3700 26.6900 27.2600 LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS Trần Liên Hà, TS Trương Hương Lan Sig 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Hàm lượng GSH dịch lên men (mg/L) Tukey HSDa Hàm lượng natri citrate bổ sung (g/L) Subset for alpha = 0.05 N 1.00 2.00 3.00 5.00 4.00 3 326.5733 362.7267 390.0133 400.8867 415.1667 Sig 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Khảo sát yếu tố ảnh hưởng q trình thu hồi GSH phương pháp trích ly cồn ethanol Ảnh hưởng nồng độ cồn ethanol tới q trình trích ly Descriptives Hàm lượng GSH skk (mg/g) N Mean Std Deviation Std Error 95% Confidence Interval for Mean Lower Bound Upper Bound Minimum Maximum 25.00 27.9233 09452 05457 27.6885 28.1581 27.85 28.03 30.00 29.9400 06245 03606 29.7849 30.0951 29.89 30.01 35.00 28.5933 27025 15603 27.9220 29.2647 28.33 28.87 40.00 27.6000 26000 15011 26.9541 28.2459 27.34 27.86 Total 12 28.5142 95247 27495 27.9090 29.1193 27.34 30.01 ANOVA Hàm lượng GSH skk (mg/g) Sum of Squares Between Groups Within Groups Total HVTH: Trần Thị Hoa df Mean Square 9.672 3.224 307 038 9.979 11 F 84.033 Sig .000 LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS Trần Liên Hà, TS Trương Hương Lan Post Hoc Tests Multiple Comparisons Dependent Variable: Hàm lượng GSH skk (mg/g) Tukey HSD (I) Nồng độ cồn (J) Nồng độ cồn ethanol ethanol 25.00 30.00 35.00 40.00 Mean Difference Std (I-J) Error 95% Confidence Interval Lower Upper Sig Bound Bound 30.00 -2.01667* 15993 000 -2.5288 -1.5045 35.00 -.67000* 15993 013 -1.1822 -.1578 40.00 32333 15993 257 -.1888 8355 25.00 2.01667* 15993 000 1.5045 2.5288 35.00 1.34667* 15993 000 8345 1.8588 40.00 2.34000* 15993 000 1.8278 2.8522 25.00 67000* 15993 013 1578 1.1822 30.00 -1.34667* 15993 000 -1.8588 -.8345 40.00 99333* 15993 001 4812 1.5055 25.00 -.32333 15993 257 -.8355 1888 30.00 -2.34000* 15993 000 -2.8522 -1.8278 35.00 -.99333* 15993 001 -1.5055 -.4812 * The mean difference is significant at the 0.05 level Homogeneous Subsets Hàm lượng GSH skk (mg/g) Tukey HSDa Nồng độ cồn ethanol N Subset for alpha = 0.05 40.00 27.6000 25.00 27.9233 35.00 30.00 3 28.5933 29.9400 Sig .257 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Ảnh hưởng tỷ lệ nấm men/cồn ethanol Descriptives Hàm lượng GSH skk (mg/g) 95% Confidence Interval for Mean N Mean HVTH: Trần Thị Hoa Std Deviation Std Error Lower Bound Upper Bound Minimu m Maximu m LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS Trần Liên Hà, TS Trương Hương Lan 100 29.9400 06557 03786 29.7771 30.1029 29.87 30.00 200 33.7600 15875 09165 33.3657 34.1543 33.58 33.88 300 28.0933 07638 04410 27.9036 28.2831 28.01 28.16 400 27.7167 16073 09280 27.3174 28.1159 27.60 27.90 12 29.8775 2.50296 72254 28.2872 31.4678 27.60 33.88 Total ANOVA Hàm lượng GSH skk (mg/g) Sum of Squares Between Groups Within Groups Total df Mean Square 68.790 22.930 122 015 68.913 11 F Sig 1499.520 000 Post Hoc Tests Multiple Comparisons Dependent Variable: Hàm lượng GSH skk (mg/g) Tukey HSD Mean Difference (IJ) 95% Confidence Interval (I) tỷ lệ nấm men khô/cồn (J) tỷ lệ nấm men khô/cồn 100 200 -3.82000* 10097 000 -4.1433 300 1.84667* 10097 000 1.5233 400 2.22333* 10097 000 1.9000 100 3.82000* 10097 000 3.4967 300 5.66667* 10097 000 5.3433 400 6.04333* 10097 000 5.7200 100 -1.84667* 10097 000 -2.1700 200 -5.66667* 10097 000 -5.9900 400 37667* 10097 024 0533 100 -2.22333* 10097 000 -2.5467 200 -6.04333* 10097 000 -6.3667 300 -.37667* 10097 024 -.7000 200 300 400 Std Error Sig Lower Bound Multiple Comparisons Dependent Variable: Hàm lượng GSH skk (mg/g) Tukey HSD 95% Confidence Interval (I) tỷ lệ nấm men khô/cồn HVTH: Trần Thị Hoa (J) tỷ lệ nấm men khô/cồn Upper Bound LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS Trần Liên Hà, TS Trương Hương Lan 100 200 300 400 200 -3.4967 300 2.1700 400 2.5467 100 4.1433 300 5.9900 400 6.3667 100 -1.5233 200 -5.3433 400 7000 100 -1.9000 200 -5.7200 300 -.0533 * The mean difference is significant at the 0.05 level Homogeneous Subsets Hàm lượng GSH skk (mg/g) Tukey HSDa Subset for alpha = 0.05 tỷ lệ nấm men khô/cồn N 400 300 100 200 3 27.7167 28.0933 29.9400 33.7600 Sig 1.000 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Ảnh hưởng nhiệt độ trích ly Descriptives Hàm lượng GSH skk (mg/g) N Mean Std Std Deviation Error 95% Confidence Interval for Mean Lower Upper Bound Maximu m m 20.00 32.6033 49166 28386 31.3820 33.8247 32.05 32.99 25.00 33.4900 44193 25515 32.3922 34.5878 33.01 33.88 30.00 32.4733 45654 26359 31.3392 33.6075 32.19 33.00 35.00 30.4500 43589 25166 29.3672 31.5328 30.15 30.95 Total 12 32.2542 1.22577 35385 31.4753 33.0330 30.15 33.88 HVTH: Trần Thị Hoa Bound Minimu LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS Trần Liên Hà, TS Trương Hương Lan ANOVA Hàm lượng GSH skk (mg/g) Sum of Squares Between Groups Within Groups Total df Mean Square 14.857 4.952 1.671 209 16.528 11 F Sig 23.710 000 Post Hoc Tests Multiple Comparisons Dependent Variable: Hàm lượng GSH skk (mg/g) Tukey HSD Mean Difference (IJ) Std Error 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound (I) Nhiệt độ trích ly (J) Nhiệt độ trích ly 20.00 25.00 -.88667 37315 160 -2.0816 3083 30.00 13000 37315 984 -1.0650 1.3250 35.00 2.15333* 37315 002 9584 3.3483 20.00 88667 37315 160 -.3083 2.0816 30.00 1.01667 37315 098 -.1783 2.2116 35.00 3.04000* 37315 000 1.8450 4.2350 20.00 -.13000 37315 984 -1.3250 1.0650 25.00 -1.01667 37315 098 -2.2116 1783 35.00 2.02333* 37315 003 8284 3.2183 20.00 -2.15333* 37315 002 -3.3483 -.9584 25.00 -3.04000* 37315 000 -4.2350 -1.8450 30.00 -2.02333* 37315 003 -3.2183 -.8284 25.00 30.00 35.00 Sig * The mean difference is significant at the 0.05 level Homogeneous Subsets Hàm lượng GSH skk (mg/g) Tukey HSDa Nhiệt độ trích ly Subset for alpha = 0.05 N 35.00 30.00 32.4733 20.00 32.6033 25.00 33.4900 Sig Means for groups in homogeneous subsets are displayed HVTH: Trần Thị Hoa 30.4500 1.000 098 LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS Trần Liên Hà, TS Trương Hương Lan a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Ảnh hưởng thời gian trích ly Descriptives Hàm lượng GSH skk (mg/g) 95% Confidence Interval for Mean Lower Std N Mean Deviation Std Error Bound Minimu Upper Bound m Maximum 1.00 23.0400 26889 15524 22.3720 23.7080 22.87 23.35 2.00 33.8067 22898 13220 33.2378 34.3755 33.55 33.99 3.00 35.5500 22068 12741 35.0018 36.0982 35.34 35.78 4.00 32.7900 67104 38743 31.1230 34.4570 32.33 33.56 Total 12 31.2967 5.09570 1.47100 28.0590 34.5343 22.87 35.78 ANOVA Hàm lượng GSH skk (mg/g) Sum of Squares Between Groups Within Groups Total df Mean Square 284.381 94.794 1.247 156 285.628 11 F Sig 607.911 000 Post Hoc Tests Multiple Comparisons Dependent Variable: Hàm lượng GSH skk (mg/g) Tukey HSD Mean 95% Confidence Interval (I) Thời gian (giờ) (J) Thời gian (giờ) 1.00 2.00 -10.76667* 32242 000 -11.7992 -9.7342 3.00 -12.51000* 32242 000 -13.5425 -11.4775 4.00 -9.75000* 32242 000 -10.7825 -8.7175 1.00 10.76667* 32242 000 9.7342 11.7992 3.00 -1.74333* 32242 003 -2.7758 -.7108 4.00 1.01667 32242 054 -.0158 2.0492 1.00 12.51000* 32242 000 11.4775 13.5425 2.00 1.74333* 32242 003 7108 2.7758 4.00 2.76000* 32242 000 1.7275 3.7925 1.00 9.75000* 32242 000 8.7175 10.7825 2.00 -1.01667 32242 054 -2.0492 0158 2.00 3.00 4.00 HVTH: Trần Thị Hoa Difference (IJ) Std Error Sig Lower Bound Upper Bound LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS Trần Liên Hà, TS Trương Hương Lan -2.76000* 3.00 32242 000 -3.7925 -1.7275 * The mean difference is significant at the 0.05 level Homogeneous Subsets Hàm lượng GSH skk (mg/g) Tukey HSDa Thời gian (giờ) N Subset for alpha = 0.05 1.00 4.00 32.7900 2.00 33.8067 3.00 Sig 35.5500 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 HVTH: Trần Thị Hoa 23.0400 054 1.000 ... ĐỀ TÀI LUẬN VĂN Đề tài: Nghiên cứu số giải pháp công nghệ làm tăng khả sinh tổng hợp GSH nấm men Saccharomyces cerevisiae Tác giả luận văn: Trần Thị Hoa Ngành: Công nghệ Sinh học Giảng viên hướng... glutathione phương pháp vi sinh 16 1.5 Nấm men Saccharomyces cerevisiae sinh tổng hợp GSH 18 1.5.1 Nấm men Saccharomyces cerevisiae 18 1.5.2 Ứng dụng công nghệ nấm men Saccharomyces cerevisiae. .. bột nấm men giàu GSH Nấm men bột CN101921712 Chuyển đổi công nghệ di truyền Phaffia rhodozyma [8] [54] 1.5 Nấm men Saccharomyces cerevisiae sinh tổng hợp GSH 1.5.1 Nấm men Saccharomyces cerevisiae