Nghiên cứu một số điều kiện công nghệ sản xuất vắc xin rota bán thành phẩm sử dụng chai nhựa nhiều tầng

TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI LUẬN VĂN THẠC SĨ Nghiên cứu số điều kiện công nghệ sản xuất vắc xin Rota bán thành phẩm sử dụng chai nhựa nhiều tầng NGUYỄN HỒNG QUÂN quanminh80@gmail.com Ngành Công nghệ sinh học Giảng viên hướng dẫn: PGS TS Quản Lê Hà Giảng viên hướng dẫn: TS Nguyễn Thuý Hường Viện: Công nghệ sinh học – Công nghệ thực phẩm HÀ NỘI, 2021 TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI LUẬN VĂN THẠC SĨ Nghiên cứu số điều kiện công nghệ sản xuất vắc xin Rota bán thành phẩm sử dụng chai nhựa nhiều tầng NGUYỄN HỒNG QUÂN quanminh80@gmail.com Ngành Công nghệ sinh học Giảng viên hướng dẫn: PGS TS Quản Lê Hà Chữ ký GVHD Giảng viên hướng dẫn: TS Nguyễn Thuý Hường Chữ ký GVHD Viện: Công nghệ sinh học – Công nghệ thực phẩm HÀ NỘI, 04/2021 CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc BẢN XÁC NHẬN CHỈNH SỬA LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên tác giả luận văn : Nguyễn Hồng Quân Đề tài luận văn: Nghiên cứu số điều kiện công nghệ sản xuất vắc xin Rota bán thành phẩm sử dụng chai nhựa nhiều tầng Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số SV: CB190010 Tác giả, Người hướng dẫn khoa học Hội đồng chấm luận văn xác nhận tác giả sửa chữa, bổ sung luận văn theo biên họp Hội đồng ngày… .………… với nội dung sau: - Đã sửa lỗi in ấn, tả Bổ sung ưu nhược điểm chai mười tầng phần tổng quan - Bổ sung phương pháp phân tích cịn thiếu Bổ sung thêm kết biện luận Ngày Giáo viên hướng dẫn PGS TS Quản Lê Hà TS Nguyễn Thuý Hường CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG tháng năm 2021 Tác giả luận văn Nguyễn Hồng Quân Lời cảm ơn Để hoàn thành nhiệm vụ giao luận văn, nỗ lực học hỏi thân cịn có hướng dẫn tận tình thầy cô giúp đỡ động viên đồng nghiệp, bạn bè, người thân gia đình Qua trang viết này, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành tới: PGS TS Quản Lê Hà - giảng viên Viện công nghệ sinh học công nghệ thực phẩm - Trường Đại học bách khoa Hà Nội TS Nguyễn Thuý Hường – Phó giám đốc Trung tâm Nghiên cứu, Sản xuất Vắc xin Sinh phẩm Y tế hướng dẫn bảo tận tình cho em suốt q trình học tập, nghiên cứu hồn thành đề tài Trong thời gian học tập nghiên cứu vừa qua, nhận giúp đỡ tạo điều kiện thầy cô Viện công nghệ sinh học công nghệ thực phẩm thầy Phịng Đào tạo - Trường Đại học bách khoa Hà Nội Tôi xin chân thành cảm ơn giúp đỡ q báu Tồn nội dung nghiên cứu luận văn thực phòng Sản xuất vắc xin Bán thành phẩm Phòng Kiểm định chất lượng - Trung tâm Nghiên cứu sản xuất vắc xin sinh phẩm y tế (POLYVAC) Tôi xin chân thành cảm ơn giúp đỡ quý báu tập thể cán phòng Sản xuất vắc xin Bán thành phẩm Phòng Kiểm định chất lượng tạo điều kiện nhiệt tình giúp đỡ thời gian thực đề tài Nhân xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Ban lãnh đạo Trung tâm Nghiên cứu, sản xuất vắc xin sinh phẩm y tế (POLYVAC) Tiến sĩ Nguyễn Th Hường – Phó giám đốc Trung tâm, nơi tơi công tác, tạo điều kiện thuận lợi cho suốt thời gian học tập nghiên cứu Cuối xin chân thành cảm ơn bạn bè đồng nghiệp gia đình ln quan tâm giúp đỡ động viên suốt thời gian học tập hồn thành khóa luận Hà Nội, Ngày tháng năm 2021 Học viên Nguyễn Hồng Quân Tóm tắt nội dung luận văn Vi rút Rota tác nhân gây tiêu chảy cấp nặng thường gặp nguyên nhân hàng đầu gây tiêu chảy cấp trẻ nhỏ Bệnh tiêu chảy cấp vi rút Rota gánh nặng bệnh tật trẻ, gia đình tồn xã hội Bệnh tiêu chảy vi rút rota khơng có thuốc điều trị, sử dụng liệu pháp truyền dịch bù điện giải trẻ bị tiêu chảy gây nước Biện pháp phòng bệnh hữu hiệu sử dụng vắc xin Sau 13 năm nghiên cứu, nhà khoa học Việt Nam sản xuất thành công vắc xin ngừa tiêu chảy vi rút Rota Vắc xin Rotavin-M1 Trung tâm Nghiên cứu sản xuất vắc xin sinh phẩm y tế (POLYVAC) nghiên cứu, phát triển sản xuất cấp phép lưu hành từ tháng 5/2012, đến có triệu liều vắc xin xuất xưởng sử dụng cho trẻ em 63 tỉnh thành Việt Nam Tuy nhiên, với công suất sản xuất vắc xin Rota bán thành phẩm chai nhựa 225 cm2 thu lượng vắc xin không lớn Nếu vắc xin RotavinM1 sử dụng chương trình tiêm chủng mở rộng năm tới, phải sản xuất lượng vắc xin lớn nhiều Do POLYVAC đặt mục tiêu phải sản xuất vắc xin Rotavin - M1 với số lượng lớn chất lượng đảm bảo ổn định đủ cung cấp cho chương trình tiêm chủng mở rộng Với ý nghĩa thực tiễn trên, tiến hành đề tài: “Nghiên cứu số điều kiện công nghệ sản xuất vắc xin Rota bán thành phẩm sử dụng chai nhựa nhiều tầng” Mục tiêu đề tài: - Xác định điều kiện công nghệ để sản xuất vắc xin Rota bán thành phẩm sử dụng chai nhựa nhiều tầng Nội dung nghiên cứu - Xác định số thông số sản xuất chai nhựa nhiều tầng - Xây dựng quy trình sản xuất vắc xin Rota bán thành phẩm chai nhựa nhiều tầng - Thẩm định đánh giá quy trình sản xuất lô vắc xin Rota bán thành phẩm chai nhựa nhiều tầng Kết thực hiện: Xác định số thơng số cơng nghệ quy trình sản xuất vắc xin bán thành phẩm chai nhựa 10 tầng diện tích 636 cm2/tầng + Nồng độ ni tế bào: 80000 TB/mL + Nồng độ FBS sử dụng: % + Thời gian nuôi tế bào: 04 ngày + Nồng độ gây nhiễm: 0,006 PFU/TB + Thời gian gặt: 68 - 72 sau gây nhiễm + Thể tích mơi trường nuôi vi rút: 2000 mL/chai 10 tầng Đã thiết lập quy trình sản xuất vắc xin Rota bán thành phẩm 24 chai nhựa 10 tầng diện tích 636 cm2/tầng - Thẩm định sản xuất 03 lô vắc xin Rota bán thành phẩm 24 chai nhựa 10 tầng diện tích 636 cm2/tầng cho kết thơng số sản xuất ổn định, chất lượng vắc xin loạt đạt yêu cầu với hiệu giá cao Tính khoa học thực tiễn: - Kết nghiên cứu áp dụng vào quy trình sản xuất vắc xin Rota bán thành phẩm Trung tâm Nghiên cứu sản xuất vắc xin Sinh phẩm Y tế Học viên Nguyễn Hồng Quân MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Vi rút Rota 1.1.1 Lịch sử phát vi rút Rota 1.1.2 Phân loại vi rút Rota 1.1.3 Đặc điểm vi rút Rota 1.1.4 Hình thái cấu trúc 1.1.5 Các thành phần hoá học vi rút Rota chức 1.1.6 Phân nhóm týp huyết 1.1.7 Tính chất hố lý 1.1.8 Khả gây bệnh vi rút Rota 10 1.2 1.3 1.1.9 Nuôi cấy 10 1.1.10 Sự nhân lên vi rút Rota tế bào 11 Bệnh tiêu chảy cấp tình hình tiêu chảy cấp vi rút Rota 13 1.2.1 Triệu chứng bệnh tiêu chảy cấp vi rút Rota 13 1.2.2 Phương pháp điều trị 14 1.2.3 Khả lây lan 14 1.2.4 Điều trị phòng bệnh 15 Tình hình phát triển vắc xin phòng bệnh vi rút Rota 15 1.3.1 Vắc xin sản xuất từ chủng vi rút có nguồn gốc từ động vật 16 1.3.2 Vắc xin Rota tái tổ hợp 17 1.3.3 Vắc xin Rota sản xuất từ chủng có nguồn gốc từ người 19 1.4 Sản xuất vắc xin Rotavin - M1 20 1.4.1 Tóm tắt quy trình sản xuất vắc xin Rota bán thành phẩm 20 1.4.2 Một số yếu tố sản xuất ảnh hưởng đến chất lượng vắc xin 21 1.5 Tiêu chuẩn chất lượng vắc xin Rota bán thành phẩm 23 CHƯƠNG NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.1 Nguyên vật liệu 26 2.2 Phương pháp sản xuất vắc xin Rota bán thành phẩm 26 2.2.1 Phương pháp lấy tế bào 27 2.2.2 Phương pháp cấy truyền tế bào 27 2.2.3 Phương pháp gây nhiễm 28 2.2.4 Phương pháp gặt hộn 29 2.2.5 Phương pháp lọc 29 2.3 Thiết kế nghiên cứu 30 2.3.1 Xác định nồng độ tế bào ni ban đầu thích hợp 30 2.3.2 Xác định nồng độ FBS thích hợp 30 2.3.3 Xác định thời gian ni thích hợp 30 2.3.4 Xác định nồng độ gây nhiễm thích hợp 30 2.3.5 Xác định thời gian gặt thích hợp 31 2.4 2.3.6 Xác định lượng mơi trường trì thích hợp 31 2.3.7 Thẩm định sản xuất vắc xin Rota bán thành phẩm 31 Các phương pháp đánh giá 31 2.4.1 Phương pháp đếm tế bào 31 2.4.2 Xác định số phát triển tế bào (CGI) 33 2.4.3 Phương pháp chuẩn độ hiệu giá 34 2.5 Xử lý số liệu 35 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 36 Xác định số thông số sản xuất chai nhựa nhiều tầng 36 3.1.1 Lấy tế bào Vero từ bình Ni tơ -1960C 36 3.1.2 Xác định nồng độ nuôi ban đầu thích hợp 37 3.1.3 Xác định nồng độ FBS thích hợp 38 3.1.4 Xác định thời gian nuôi thích hợp 40 3.1.5 Xác định nồng độ gây nhiễm thích hợp 41 3.1.6 Xác định thời gian gặt thích hợp 42 3.1.7 Xác định lượng môi trường nuôi vi rút thích hợp 43 3.2 Xây dựng quy trình sản xuất vắc xin Rota bán thành phẩm chai nhựa nhiều tầng 45 3.3 Thẩm định sản xuất vắc xin Rota bán thành phẩm 24 chai 10 tầng diện tích 636 cm2 48 3.3.1 Sản xuất vắc xin Rota bán thành phẩm sử dụng chai 10 tầng 48 3.3.2 Kiểm tra chất lượng vắc xin Rota bán thành phẩm 49 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 54 4.1 Kết luận 54 4.2 Kiến nghị 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO 55 3.1 DANH MỤC HÌNH VẼ Hình 1.1 Hình ảnh vi rút Rota chụp kính hiển vi điện tử [15] Hình 1.2 Hình minh họa thành phần hóa học cấu trúc vi rút Rota [18] Hình 1.3 Sự nhân lên vi rút Rota tế bào [14] 13 Hình 1.4 Tiêu chảy cấp vi rút Rota dẫn đến tình trạng trẻ bị nước nghiêm trọng [27] 14 Hình 1.5 Hình minh họa thành phần vắc xin RotaTeq Merck [31] 18 Hình 1.6 Vắc xin tái tổ hợp UK [35] 19 Hình 1.7 ROTAVIN-M1 - Vắc xin ngừa tiêu chảy vi rút Rota (Việt Nam) [37] 20 Hình 1.8 Quy trình sản xuất vắc xin Rota bán thành phẩm 20 Hình 2.1 Quy trình sản xuất vắc xin Rota bán thành phẩm 27 Hình 3.1 Tế bào Vero sau ngày nuôi 36 Hình 3.2 Tế bào Vero sau ngày nuôi 36 Hình 3.3 Hình ảnh tế bào nồng độ nuôi ban đầu 38 Hình 3.4 Hình ảnh tế bào nồng độ FBS 39 Hình 3.5 Hình ảnh tế bào thời gian nuôi 40 Hình 3.6 Lượng vi rút chai nồng độ gây nhiễm khác 42 Hình 3.7 Hiệu suất vi rút chai mức mơi trường khác 44 Hình 3.8 Lượng tế bào 01 chai 10 tầng 48 Hình 3.9 Thể tích vắc xin thu sau lọc 49 Hình 3.10 Hiệu giá vắc xin thu sau lọc 49 DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Độ lớn gen vi rút Rota Bảng 1.2 Đặc điểm protein vi rút Rota Bảng 2.1 Nguyên vật liệu sản xuất vắc xin Rota bán thành phẩm 26 Bảng 3.1 Lượng tế bào 01 chai nồng độ nuôi khác 37 Bảng 3.2 Tỷ lệ tăng trưởng tế bào số CGI nồng độ nuôi khác 38 Bảng 3.3 Lượng tế bào 01 chai CGI nồng độ FBS khác 39 Bảng 3.4 Lượng tế bào 01 chai CGI thời gian nuôi khác 40 Bảng 3.5 Kết hiệu giá vắc xin sau gặt nồng độ gây nhiễm khác 41 Bảng 3.6 Hiệu giá vắc xin thời điểm gặt khác 42 Bảng 3.7 Hiệu giá vắc xin thu sau gặt mức môi trường khác 43 Bảng 3.8 Hiệu suất vi rút thu mức môi trường khác 44 Bảng 3.9 Kết sản xuất vắc xin Rota bán thành phẩm sử dụng chai 10 tầng 48 Bảng 3.10 Kết kiểm tra chất lượng mẫu nước công đoạn sản xuất tế bào 50 Bảng 3.11 Kết kiểm tra chất lượng vắc xin bán thành phẩm trước lọc (mẫu RSH) 51 Bảng 3.12 Kết kiểm tra mẫu vắc xin sau lọc (mẫu RBM) 52 3.3 Thẩm định sản xuất vắc xin Rota bán thành phẩm 24 chai 10 tầng diện tích 636 cm2 3.3.1 Sản xuất vắc xin Rota bán thành phẩm sử dụng chai 10 tầng Chúng tiến hành thẩm định sản xuất 03 lô vắc xin Rota bán thành phẩm cơng suất 24 chai nhựa 10 tầng diện tích 636 cm2/tầng Kết thu sau: Bảng 3.9 Kết sản xuất vắc xin Rota bán thành phẩm sử dụng chai 10 tầng Lô sản xuất Kết đếm tế bào (Triệu tế bào/chai) Thế tích vắc xin thu sau lọc (lít) Hiệu giá vắc xin sau lọc (Lg PFU/mL) Lô Lô Lô tb SD 1020 1011 1014 1015 4,58 48,2 48,5 48,1 48,3 0,21 7,14 7,08 7,12 7,11 0,03 Hình 3.8 Lượng tế bào 01 chai 10 tầng Kết bảng 3.9 hình 3.8 cho ta thấy lượng tế bào chai lô sản xuất 24 chai 10 tầng diện tích 636 cm2/tầng đạt khoảng tỷ tế bào thấp 1,01 tỷ, cao 1,02 tỷ tế bào Như quy trình thực ổn định 48 Hình 3.9 Thể tích vắc xin thu sau lọc Kết bảng 3.9 hình 3.9 cho ta thấy thể tích vắc xin thu sau lọc lô sản xuất 24 chai 10 tầng diện tích 636 cm2/tầng đạt 48 lít thấp 48,1 lít, cao 48,5 lít Như quy trình thực ổn định Hình 3.10 Hiệu giá vắc xin thu sau lọc Kết bảng 3.9 hình 3.10 cho ta thấy hiệu giá vắc xin sau lọc lô sản xuất 24 chai 10 tầng diện tích 636 cm2/tầng đạt lg PFU/mL thấp 7,08 cao 7,14 lg PFU/mL Như quy trình thực ổn định 3.3.2 Kiểm tra chất lượng vắc xin Rota bán thành phẩm Kết đánh giá chất lượng lô vắc xin Rota bán thành phẩm sản xuất chai 24 chai 10 tầng/lơ diện tích 636 cm2/tầng thể bảng sau: 49 Bảng 3.10 Kết kiểm tra chất lượng mẫu nước công đoạn sản xuất tế bào TT Đánh Kết Thử nghiệm Lô Lô Lô giá Myco Âm Âm Âm plasma tính tính tính Đạt Khơng q 20% Quan số chai tế bào bị sát tế bỏ không bào đối nguyên nhân chứng đặc hiệu Không 20% Không 20% số chai tế bào bị số chai tế bào bị bỏ không bỏ không nguyên nhân đặc nguyên nhân đặc hiệu Đạt hiệu Hấp phụ Không phát Không phát Không phát thấy vi rút gây thấy vi rút gây thấy vi rút gây hồng cầu hấp phụ hồng hấp phụ hồng hấp phụ hồng cầu cầu cầu Đạt Khơng có Khơng có Khơng có phát triển vi phát triển vi phát triển vi khuẩn, nấm khuẩn, nấm khuẩn, nấm Đạt Tác nhân ngoại lai tế bào MA104 Không phát tác nhân ngoại lai nước tế bào nuôi cấy tế bào MA104 Không phát tác nhân ngoại lai nước tế bào nuôi cấy tế bào MA104 Không phát tác nhân ngoại lai nước tế bào nuôi cấy tế bào MA104 Đạt Tác nhân ngoại lai tế bào Vero Không phát tác nhân ngoại lai nước tế bào nuôi cấy tế bào Vero Không phát tác nhân ngoại lai nước tế bào nuôi cấy tế bào Vero Không phát tác nhân ngoại lai nước tế bào nuôi cấy tế bào Vero Đạt Tác nhân ngoại lai tế bào Hep2C Không phát tác nhân ngoại lai nước tế bào nuôi cấy tế bào Hep2C Không phát tác nhân ngoại lai nước tế bào nuôi cấy tế bào Hep2C Không phát tác nhân ngoại lai nước tế bào nuôi cấy tế bào Hep2C Đạt Vô trùng Kết bảng 3.10 cho ta thấy 03 lô nước nuôi cấy tế bào Vero sản xuất không bị nhiễm vi khuẩn, nấm, mycoplasma Tất lô 50 không bị nhiễm tác nhân ngoại lai gây huỷ hoại tế bào, gây hấp phụ hồng cầu, tế bào đạt tiêu chuẩn sử dụng cho sản xuất vắc xin Bảng 3.11 Kết kiểm tra chất lượng vắc xin bán thành phẩm trước lọc (mẫu RSH) TT nghiệm Đánh Kết Thử Lô Lô Lô giá Myco Âm Âm Âm plasma tính tính tính Đạt Vơ trùng Khơng có Khơng có Khơng có phát triển vi phát triển vi phát triển vi khuẩn, nấm khuẩn, nấm Đạt khuẩn, nấm Không phát Không phát Không phát Tác nhân tác nhân tác nhân tác nhân ngoại lai nước tế bào nuôi cấy tế bào ngoại lai nước tế bào nuôi cấy tế bào ngoại lai nước tế bào nuôi cấy tế bào MA104 MA104 MA104 Tác nhân ngoại lai tế bào Vero Không phát tác nhân ngoại lai nước tế bào nuôi cấy tế bào Vero Không phát tác nhân ngoại lai nước tế bào nuôi cấy tế bào Vero Không phát tác nhân ngoại lai nước tế bào nuôi cấy tế bào Vero Đạt Không phát Tác nhân tác nhân ngoại lai ngoại lai tế nước tế bào bào nuôi cấy Hep2C tế bào Hep2C Không phát tác nhân ngoại lai nước tế bào nuôi cấy tế bào Hep2C Không phát tác nhân ngoại lai nước tế bào nuôi cấy tế bào Hep2C Đạt Hiệu giá (lg PFU/mL) 7,32 7,23 7,28 Đạt Nhận dạng G1[P8] G1[P8] G1[P8] Đạt ngoại lai tế bào MA104 Đạt 51 Kết bảng 3.11 cho ta thấy 03 mẫu vắc xin trước lọc không bị nhiễm vi khuẩn, nấm, mycoplasma Tất lô không nhiễm tác nhân ngoại lai, nhận dạng cho kết vi rút rota typ G1P[8] Hiệu giá 03 lô vắc xin lg PFU/mL Bảng 3.12 Kết kiểm tra mẫu vắc xin sau lọc (mẫu RBM) TT nghiệm Vô trùng Đánh Kết Thử Lơ Lơ Lơ Khơng có phát Khơng có phát Khơng có phát triển vi triển vi khuẩn, triển vi khuẩn, giá Đạt khuẩn, nấm nấm nấm 7,14 7,08 7,12 Đạt 13,92 µg/liều 14,11 µg/liều 14,06 µg/liều Đạt Hiệu giá (lg PFU/mL) ADN tồn dư Theo kết thu bảng 3.12 nhận thấy mẫu vắc xin sau lọc sản xuất không bị nhiễm trùng, nhiễm nấm Lượng ADN tồn dư nhỏ 100 µg/liều Hiệu giá 03 lơ vắc xin lg PFU/mL Vắc xin Rota bán thành phẩm sản xuất đạt yêu cầu chất lượng theo tiêu chuẩn WHO Vắc xin Rota bán thánh phẩm sản xuất từ tế bào Vero Trong trình sản xuất có sử dụng huyết bê Do chúng phải kiểm tra vi rút ngoại lai cách nghiêm ngặt Ngay từ nguyên liệu đầu tế bào, huyết có yêu cầu kiểm tra có mặt tác nhân ngoại lai Nhưng WHO yêu cầu vắc xin bán thành phẩm chúng phải kiểm tra phịng thí nghiệm động vật Trong phịng thí nghiệm mẫu vắc xin phải trung hồ hết vi rút Rota Sau mẫu tiến hành gây nhiễm loại tế bào (tế bào MA104, tế bào Vero khác lô sản xuất, tế bào Hep2C) để xem tế bào bị huỷ hoại chứng tỏ mẫu bị nhiễm vi rút ngoại lai Kết kiểm tra ni cấy tế bào trình bày bảng từ 3.10 đến 3.12 cho thấy toàn mẫu thử đạt tiêu chuẩn kiểm tra nuôi cấy tế bào Điều chứng tỏ nguyên liệu đầu dùng sản xuất (tế bào, huyết bê, chủng vi rút) không bị nhiễm tác nhân ngoại lai qui 52 trình sản xuất ổn định không bị tạp nhiễm Kết chứng tỏ vắc xin POLYVAC sản xuất đủ an toàn để dùng cho người Hiệu giá vắc xin Rotavin - M1 yêu cầu tối thiểu lg PFU/mL Như cần vắc xin bán thành phẩm có hiệu giá lg PFU/mL đủ tiêu chuẩn pha thành vắc xin thành phẩm Qua bảng 3.12 ta thấy 03 lơ vắc xin có hiệu giá vắc xin bán thành phẩm lg PFU/mL Hiệu giá vắc xin đạt cao chứng tỏ chủng G1P[8] POLYVAC sản xuất liều gây nhiễm mà đề tài thu thích hợp Các thông số lượng môi trường gây nhiễm thời gian gây nhiễm vi rút thích hợp 53 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận - Xác định số thông số công nghệ quy trình sản xuất vắc xin bán thành phẩm chai nhựa 10 tầng diện tích 636 cm2/tầng + Nồng độ nuôi tế bào: 80000 TB/mL + Nồng độ FBS sử dụng: % + Thời gian nuôi tế bào: 04 ngày + Nồng độ gây nhiễm: 0,006 PFU/mL + Thời gian gặt: 68 - 72 sau gây nhiễm + Thể tích mơi trường ni vi rút: 2000 mL/chai 10 tầng - Xây dựng quy trình sản xuất vắc xin Rota bán thành phẩm chai nhựa 10 tầng diện tích 636 cm2/tầng với kích cỡ lơ 24 chai - Thẩm định sản xuất 03 lô sản xuất vắc xin Rota bán thành phẩm 24 chai nhựa 10 tầng diện tích 636 cm2/tầng cho kết thơng số công nghệ sản xuất ổn định, chất lượng vắc xin lô đạt yêu cầu với hiệu giá cao + Lượng vắc xin thu từ lô đạt 48 L + Hiệu giá vắc xin thu lô đạt 105 PFU/mL + Lượng ADN tồn dư lơ