TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH, SỐ 43, THÁNG 6 NĂM 2021 DOI 10 35382/18594816 1 43 2021 820 HIỆU QUẢ DIỆT VI KHUẨN Vibrio parahaemolyticus CỦA DỊCH TRÍCH HẠT TRÂM BẦU (Combretum quadrangular[.]
TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH, SỐ 43, THÁNG NĂM 2021 DOI: 10.35382/18594816.1.43.2021.820 HIỆU QUẢ DIỆT VI KHUẨN Vibrio parahaemolyticus CỦA DỊCH TRÍCH HẠT TRÂM BẦU (Combretum quadrangulare) TRONG NƯỚC AO NI TƠM Nguyễn Cơng Tráng1 , Phan Ngọc Duyên2 , Lâm Quang Huy3 EFFICIENCY OF KILLING ON Vibrio parahaemolyticus IN WATER FROM SHRIMP CULTURED POND OF THE EXTRACTS FROM SAKAE NAA SEED (Combretum quadrangulare) Nguyen Cong Trang1 , Phan Ngoc Duyen2 , Lam Quang Huy3 Tóm tắt – Nghiên cứu xác định hiệu diệt khuẩn Vibrio parahaemolyticus dịch trích từ hạt trâm bầu Nghiên cứu chọn nồng độ 17, 20, 23 26 mL/L (dịch hạt trâm bầu/nước ao nuôi tôm) để khảo sát hiệu diệt vi khuẩn Vibrio parahaemolyticus nước ao nuôi tôm thẻ; BKC (nồng độ 0,5 mg/L) chọn làm nghiệm thức đối chứng Kết cho thấy, hiệu diệt Vibrio parahaemolyticus dịch hạt trâm bầu tăng dần theo nồng độ thời gian từ hai đến mười sau sử dụng Ở nồng độ 26 mL/L, hạt trâm bầu cho hiệu diệt Vibrio parahaemolyticus cao (93,8%) hai 95,9% mười sau sử dụng Ngược lại, hiệu diệt Vibrio parahaemolyticus BKC mạnh thời điểm hai sau sử dụng (96,1%) giảm dần theo thời gian Dịch hạt trâm bầu (26 mL/L) cho khả diệt Vibrio parahaemolyticus nước ao tôm tương đương với BKC (0,5 mg/L) Từ khóa: Combretum quadrangulare, hạt trâm bầu, hiệu diệt khuẩn, Vibrio parahaemolyticus naa’s seed extract The experiment selected concentrations of 17, 20, 23 and 26 mL/L of seed extract per liter of water to assess resistance on Vibrio parahaemolyticus, and BKC chemical (concentration of 0.5 mg/L) was chosen control treatments The results showed that the killing ability on V parahaemolyticus of the extract from sakae naa’s seed has gradually increased with the rising-concentration and the period of 2-10 hours after using At a concentration of 26 mL/L, the extract of seeds gave the highest abilities to kill V parahaemolyticus (93.8%) at hours and 95.9% at 10 hours after using In contrast, killing abilities on V parahaemolyticus of BCK were highest at hours after using (96.1%) and gradually decreased by time to time The extracts from the seeds of sakae naa (at 26 mL/L of concentration) gave the killing ability on V parahaemolyticus was equivalent to those of BKC at 0.5 mg/L of concentration Keywords: bactericidal ability, Combretum quadrangulare, sakae naa seed, Vibrio parahaemolyticus Abstract – This study was carried out to determine the bactericidal effect of the sakae I ĐẶT VẤN ĐỀ Tôm thẻ chân trắng (TCT) đối tượng thủy sản có giá trị kinh tế cao, nuôi phổ biến nhiều nơi nước ta Theo VASEP [1], diện tích ni tôm nước lợ năm 2019 nước ta 720.000 ha, sản lượng đạt 750.000 tấn, đó, sản lượng tơm TCT chiếm 480.000 Khi diện tích ni tơm TCT mở rộng, sản lượng tôm ngày tăng bùng phát 1,2,3 Trường Đại học Tiền Giang Ngày nhận bài: 15/02/2021; Ngày nhận kết bình duyệt: 11/6/2021; Ngày chấp nhận đăng: 20/6/2021 Email: nguyencongtrang@tgu.edu.vn 1,2,3 Tien Giang University Received date: 15th February 2021; Revised date: 11th June 2021; Accepted date: 20th June 2021 58 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH, SỐ 43, THÁNG NĂM 2021 lào nghiên cứu để ứng dụng xu để thay hóa chất, kháng sinh phịng, trị bệnh cho tơm TCT [6]-[9] Việc sử dụng thảo mộc xu chúng thân thiện với mơi trường Đối với trâm bầu, Việt Nam, có vài nghiên cứu ban đầu nhằm mục tiêu đưa loại vào ứng dụng cho phòng trị bệnh cho nuôi tôm TCT Tuy nhiên, nghiên cứu thực điều kiện phòng thí nghiệm lây lan loại dịch bệnh gây hại tôm nuôi gia tăng Các loại dịch bệnh ngày phức tạp khó phịng trị Đặc biệt, hội chứng EMS vi khuẩn Vibrio parahaemolyticus (V parahaemolyticus) bị nhiễm Bacteriophage gây hay gọi hội chứng gan tụy cấp tính tơm bệnh vô nguy hiểm Hội chứng làm tôm chết cấp tính hàng loạt, gây thiệt hại nặng cho người nuôi tôm thẻ chân trắng nước châu Á Việt Nam [2] Khi tôm TCT bị bệnh, người nuôi thường dùng kháng sinh Đây biện pháp xử lí Tuy nhiên, thực tế cho thấy có lạm dụng loại hóa chất, kháng sinh phịng trị bệnh cho tơm ni Điều gây ảnh hưởng nghiêm trọng đến sức khỏe vật ni, hệ sinh thái, an tồn thực phẩm đặc biệt tạo nhiều chủng vi khuẩn kháng lại thuốc kháng sinh, làm giảm hiệu trình trị bệnh [3] Để góp phần giảm thiểu thách thức rủi ro nêu, việc sử dụng loại dược liệu thảo mộc diệp hạ châu, trâm bầu, sài đất, cỏ mực, giác giải pháp khuyến khích ứng dụng ni động vật thủy sản an toàn nhiều so với loại kháng sinh, hóa chất [4] Trâm bầu (Combretum quadrangulare) loại thường gặp vùng Đồng sông Cửu Long có nhiều ứng dụng điều trị bệnh người thủy sản Theo đó, nhiều nghiên cứu ban đầu xác định, dịch trích từ hạt trâm bầu (C quadrangulare) có tính kháng mạnh với vi khuẩn V parahaemolyticus [4], [5] Tuy nhiên, nghiên cứu thực điều kiện phịng thí nghiệm Do đó, việc khảo sát khả diệt V parahaemolyticus dịch trích hạt trâm bầu (DTTB) điều kiện thực tiễn ao nuôi điều cần thiết Kết nghiên cứu cung cấp liệu quan trọng cho nghiên cứu tiếp theo, nhằm tìm khả ứng dụng hạt trâm bầu phòng trị bệnh vi khuẩn V parahaemolyticus cho nghề nuôi tơm II NƠNG NGHIỆP – THỦY SẢN Nguyễn Cơng Tráng [4] nghiên cứu tính kháng vi khuẩn V parahaemolyticus dịch trích từ trâm bầu (C quadrangulare) điều kiện in vitro Kết cho thấy, dịch trích từ lá, vỏ hạt trâm bầu có tính kháng V parahaemolyticus với đường kính vịng kháng khuẩn trung bình 13,2 mm Trong đó, dịch trích từ hạt cho tính kháng mạnh dịch trích từ từ vỏ với đường kính vịng kháng khuẩn 16,3 mm, 11,8 mm 11,4 mm Tính kháng khuẩn dịch trích trâm bầu tỉ lệ phối trộn nước cất, giảm dần theo tăng dần nước cất, cụ thể, đường kính vịng kháng khuẩn NT1 14,2 mm, NT2 13,3 mm, NT3 14,1 mm NT4 12,3 mm Nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) dịch trích từ hạt trâm bầu (tỉ lệ trích 1/5) vi khuẩn V parahaemolyticus 7,5 µL/mL Bên cạnh đó, Triệu Thị Thanh Hằng [5] nghiên cứu khả kháng số loài vi khuẩn gây bệnh động vật thủy sản dịch trích từ hạt trâm bầu Nghiên cứu trích dịch từ hạt trâm bầu hai phương pháp: phương pháp ngâm lạnh cồn trích nước có gia nhiệt Kết cho thấy, dịch trích ngâm lạnh cồn dịch trích gia nhiệt nước hạt trâm bầu có tính kháng từ thấp đến cao với ba loài vi khuẩn Edwardsiella ictaluri, Aeromonas hydrophylla, V parahaemolyticus DTTB từ hạt cho tính kháng khuẩn mạnh dịch trích từ dịch trích nước có gia nhiệt cho tính kháng mạnh dịch trích cồn Nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) dịch trích hạt trâm bầu E ictaluri (16 µL/mL) Với vi khuẩn A hydrophila, MIC dịch trích hạt (12 µL/mL) thấp so với MIC dịch trích (28,8 µL/mL) Với V parahaemolyticus, MIC TỔNG QUAN NGHIÊN CỨU Hiện nay, có nhiều loại thảo mộc tỏi, gừng, riềng, cỏ gà, thầu dầu, lưỡi rắn, mật gấu, chùm ngây, lược vàng, ô rô, sài đất, sim, cỏ 59 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH, SỐ 43, THÁNG NĂM 2021 dịch trích hạt (14,4 µL/mL) thấp MIC dịch trích (21,6 µL/mL) Nghiên cứu cho thấy DTTB sử dụng cho nghiên cứu nhằm tìm giải pháp ứng dụng DTTB vào phịng trị bệnh cho động vật thủy sản III NÔNG NGHIỆP – THỦY SẢN B Phương pháp thực 1) Kiểm tra yếu tố chất lượng nước: Các tiêu chất lượng nước theo dõi nhiệt độ (o C), pH, kiềm (mg/L), NH4+ (mg/L), NO2− (mg/L) Nhiệt độ đo nhiệt kế, pH bút đo Hanna; kiềm, NH4+ NO2− kiểm tra testkit Sera (do Đức sản xuất) 2) Trích dịch hạt trâm bầu: Trái trâm bầu sau hái tách lấy hạt, hạt xay nhuyễn pha với nước cất theo tỉ lệ 1/5 (1 g hạt hòa với g nước cất) với nước thành hỗn hợp Trích dịch theo phương pháp Dodia [10], hỗn hợp gia nhiệt nồi hấp vô trùng với nhiệt độ 98o C ba Hỗn hợp sau gia nhiệt, để nguội lọc giấy lọc thưa để thu lấy dịch DTTB sau lọc bảo quản tủ lạnh 4o C chờ sử dụng cho thí nghiệm 3) Bố trí thí nghiệm: Thí nghiệm khảo sát khả diệt V parahaemolyticus tiến hành cách sử dụng DTTB hay BKC với mẫu nước ao nuôi tôm TCT 45 ngày tuổi Nước ao chứa khuẩn V parahaemolyticus (có tự nhiên) bố trí thùng xốp (thể tích 94,5L), thùng chứa 60 lít nước ao Thí nghiệm bố trí thời gian 12 nhà lưới, khơng có sục khí TN bố trí theo kiểu ngẫu nhiên với sáu nghiệm thức, nghiệm thức lặp lại năm lần, đơn vị thí nghiệm thùng xốp chứa nước ao có khuẩn + Nghiệm thức đối chứng: Thí nghiệm có hai nghiệm thức (NT) đối chứng NT0: sử dụng nước ao ni tơm thẻ khơng xử lí BKC hay DTTB, để làm NT đối chứng âm, mục đích theo dõi phát triển V parahaemolyticus tự nhiên nước ao nuôi theo thời gian NT1: sử dụng nước nuôi tôm dùng BKC 80% với nồng độ 0,5 ppm (nồng độ diệt khuẩn định kì ao nuôi tôm theo hướng dẫn nhà sản xuất) để diệt khuẩn, làm NT đối chứng dương + Nghiệm thức có sử dụng DTTB: NT2, NT3, NT4 NT5 nghiệm thức sử dụng nước nuôi tôm TCT xử lí DTTB với nồng độ 17 mL/L, 20 mL/L, 23 mL/L, 26 mL/L (mL DTTB/L nước ao) Các nồng độ DTTB chọn thí nghiệm dựa kết nhóm tác giả thực gồm: thí nghiệm xác định LC50 DTTB tơm TCT 45 ngày ni thí nghiệm xác định nồng độ ức chế PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU A Vật liệu nghiên cứu Trâm bầu: Chọn trái già, thu hái xã Thân Cửu Nghĩa, huyện Châu Thành, tỉnh Tiền Giang Sau hái về, trái tách lấy hạt để sử dụng Nguồn nước thí nghiệm: Nước lấy ao đất nuôi tôm TCT 45 ngày tuổi, có độ mặn 15o/oo Các tiêu chất lượng nước ao thí nghiệm sau: nhiệt độ 28o C, pH 8,5, kiềm 142,4 mg/L, NH4+ 0,5 mg/L NO2− mg/L Vi khuẩn V parahaemolyticus: Là nguồn vi khuẩn có sẵn nước ao nuôi tôm thẻ chân trắng 45 ngày nuôi với mật độ kiểm tra ban đầu 40.080 CFU/mL Nguồn gốc ao lấy mẫu nước vi khuẩn: Ao nuôi tôm thẻ chân trắng sử dụng để lấy nước vi khuẩn làm thí nghiệm thuộc Trại Nuôi tôm Công ty TNHH NTTS Tuấn Hiền (huyện Tân Phú Đông, tỉnh Tiền Giang) Môi trường hóa chất: Mơi trường cấy khuẩn CHROM AgarT M Vibrio Hóa chất sử dụng BKC (80%) Công ty TNHH SX & TM TOPAZ sản xuất Vật liệu khác: Cân điện tử, nồi hấp, cốc thủy tinh, thùng xốp, ca nhựa, đĩa petri, micropipet, testkit đo chất lượng nước, khúc xạ kế, dụng cụ cấy khuẩn Hình 1: Một số nguyên vật liệu dùng nghiên cứu (hạt trâm bầu-A, dịch hạt trâm bầu-B, hóa chất BKC-C) 60 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH, SỐ 43, THÁNG NĂM 2021 NÔNG NGHIỆP – THỦY SẢN tối thiểu (MIC) DTTB vi khuẩn V parahaemolyticus (kết xác định giá trị LC50 DTTB tôm TCT 45 ngày nuôi 29,3 mL/L MIC DTTB V parahaemolyticus 14,4 µL/mL) + Các tiêu theo dõi: Các yếu tố môi trường nước (nhiệt độ, pH, kiềm NH4+ , NO2− ) mật độ vi khuẩn V parahaemolyticus ghi nhận thời điểm bố trí thí nghiệm sau giờ, 10 sau sử dụng BKC DTTB + B: Số khuẩn lạc sau xử lí DTTB BKC (CFU/mL) 2) Xử lí số liệu: Số liệu sau thu thập, sử dụng phần mềm SPSS 16.0 để xử lí Phân tích ANOVA yếu tố phép thử Duncan (α = 0,05) để so sánh khả diệt khuẩn V parahaemolyticus nghiệm thức với C Thu thập xử lí số liệu A Các yếu tố mơi trường nước 1) Cấy khuẩn tính tốn số liệu: Mật độ vi khuẩn V parahaemolyticus nước nghiệm thức cấy, đếm tính theo phương pháp pha loãng tới hạn MPN (Most Probate Number) Cấy khuẩn: Mẫu khuẩn V parahaemolyticus nước nghiệm thức cấy đĩa petri chứa môi trường thạch CHROMagar Cấy 0,1 mL mẫu nước pha loãng từ 10 – 100 lần/đĩa, phương pháp cấy trang, thời điểm ban đầu (chưa xử lí BKC DTTB) 2, 6, 10 sau sử dụng BKC DTTB Ghi nhận số lượng khuẩn lạc V parahaemolyticus: Đĩa CHROMagar sau cấy khuẩn, ủ tủ ấm 30o C, sau 24 ủ đọc kết đếm số lượng khuẩn lạc cho màu tím đĩa Cơng thức tính mật độ vi khuẩn V parahaemolyticus: Chất lượng môi trường nước yếu tố quan trọng theo dõi suốt q trình tiến hành thí nghiệm Các tiêu đo trước thực thí nghiệm (sau 02 giờ, 06 10 sử dụng BCK hay DTTB) Các yếu tố chất lượng nước thùng xốp (đơn vị thí nghiệm) q trình thí nghiệm kiểm tra thể qua Bảng Bảng cho thấy, nhiệt độ dao động khoảng 28 – 29o C Nhiệt độ khơng có chênh lệch qua nghiệm thức lại dao động theo thời gian Khoảng biến động nhiệt độ 10 thí nghiệm 1o C Sự dao động ảnh hưởng yếu tố thời tiết lên nước thí nghiệm Tuy nhiên, với khoảng nhiệt độ 28 – 29o C, chủng vi khuẩn nước ấm V parahaemolyticus tăng sinh tốt Sự chênh lệch pH thể rõ (Bảng 1) Mức biến động pH nằm khoảng 7,0 – 8,5 pH bắt đầu có xu hướng giảm DTTB thêm vào môi trường nước giảm dần nồng độ dịch trích tăng lên Nguyên nhân thành phần hạt trâm bầu chứa triterpenoids, flavonoids, miscellaneous – hợp chất có khả diệt khuẩn làm giảm pH nước nuôi [11] Ngược lại, nghiệm thức, pH ổn định theo thời điểm ghi nhận (từ đến 10 giờ) Như vậy, pH mơi trường nước, thí nghiệm biến động phụ thuộc vào nồng độ DTTB không phụ thuộc vào thời gian sử dụng dịch trích Khoảng dao động giảm pH từ 0,5 đến 1,5 thời gian ngắn (02 đến 10 giờ) làm ảnh hưởng đến tăng sinh V parahaemolyticus nước, pH giảm IV Mi = (Ai ∗ Di )/V Trong đó: + Mi mật độ vi khuẩn (CFU/mL) + Di độ pha loãng + Ai số khuẩn lạc đếm đĩa nồng độ pha lỗng (i) + V (mL) thể tích nước mẫu (từ NT) pha loãng cho vào đĩa Cơng thức tính tỉ lệ diệt vi khuẩn V parahaemolyticus: Tỉ lệ diệt khuẩn(%) = (A − B)/A ∗ 100 Trong đó: + A: Số khuẩn lạc trước xử lí DTTB BKC (CFU/mL) 61 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH, SỐ 43, THÁNG NĂM 2021 NÔNG NGHIỆP – THỦY SẢN Bảng 1: Các yếu tố chất lượng nước thí nghiệm (Ghi chú: Giá trị bảng trung bình; G sau sử dụng DTTB BKC) 102.480 CFU/mL) Kết thể chi tiết qua Hình ngun nhân làm tăng hiệu diệt khuẩn DTTB nghiệm thức Độ kiềm khơng có biến động qua NT suốt 10 tiến hành thí nghiệm (Bảng 1) Điều cho thấy, độ kiềm không bị ảnh hưởng mơi trường nước có DTTB hay BKC Kiềm không biến động nên không làm ảnh hưởng đến trình tăng sinh V parahaemolyticus nước Nước dùng thí nghiệm có diện hai yếu tố NH4+ NO2− (Bảng 1) Nguyên nhân ao nuôi tôm thẻ chân trắng 45 ngày nên có tích lũy dinh dưỡng Tuy nhiên, mơi trường nước ô nhiễm nhẹ thuận lợi cho phát triển vi khuẩn V parahaemolyticus Khi nước giàu đạm (NH4+ , NO2− ), nguồn thức ăn cho vi khuẩn nhiều hơn, vi khuẩn tăng sinh tốt Trong suốt 10 diễn thí nghiệm, nồng độ NH4+ NO2− khơng có biến động Điều cho thấy, diện DTTB BKC môi trường nước không làm thay đổi nồng độ NH4+ NO2− nên không làm ảnh hưởng đến tăng sinh V parahaemolyticus nước Hình 2: Sự gia tăng mật độ V parahaemolyticus NT0 q trình thí nghiệm Nhìn chung, suốt q trình diễn thí nghiệm, mật độ vi khuẩn V parahaemolyticus NT0 đối chứng âm không ngừng tăng lên Mật độ trung bình vi khuẩn lúc ban đầu 40.080 CFU/mL, sau 02 49.200 CFU/mL, 06 71.680 CFU/mL 10 102.480 CFU/mL Qua cho thấy, mơi trường nước ao ni bình thường, khơng diệt khuẩn chất sát trùng, vi khuẩn luôn tồn tăng sinh cách mạnh mẽ B Mật độ vi khuẩn V parahaemolyticus nước theo thời gian NT0 thực nhằm kiểm tra mật độ vi khuẩn V parahaemolyticus có sẵn mơi trường nước ao ni khơng có tác động hóa chất hay sản phẩm diệt khuẩn Mật độ vi khuẩn V parahaemolyticus có biến động tăng đáng kể từ thời điểm ban đầu đến thời điểm kết thúc thí nghiệm (40.080 – C Hiệu diệt khuẩn V parahaemolyticus theo nghiệm thức Hiệu diệt khuẩn DTTB BKC đánh giá thông qua tỉ lệ diệt khuẩn (TLDK) thể chi tiết qua Bảng 62 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH, SỐ 43, THÁNG NĂM 2021 NÔNG NGHIỆP – THỦY SẢN Bảng 2: Tỉ lệ diệt khuẩn V parahaemolyticus (%) dịch trích hạt trâm bầu BKC nghiệm thức (Ghi chú: giá trị thể bảng trung bình ± sai số chuẩn Các giá trị hàng có chứa kí tự chữ khác khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,05)) với (p < 0,05) TLDK NT1 (BKC) NT5 (DTTB: 26 mL/L) khác biệt khơng có ý nghĩa với (p > 0,05) Nồng độ DTTB có tỉ lệ diệt khuẩn thấp NT2 (82,5%) cao NT5 (94,8%) Điều chứng minh, DTTB (26 mL/L) có khả ứng dụng tốt so với nồng độ khác thời điểm Ở thời điểm 10 sau sử dụng, nhìn chung, TLDK BKC DTTB nghiệm thức thí nghiệm tiếp tục có xu hướng tăng lên so với thời điểm 02 06 giờ, đồng thời khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) nghiệm thức với Riêng NT4 NT5 có TLDK khác khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê so với NT1 (p > 0,05) Ở thời điểm này, NT5 cho TLDK cao (95,9%), cao NT1 (94,1%) NT2, cho khả diệt khuẩn thấp (85,3%) Tại thời điểm này, kết cho thấy, khả diệt khuẩn DTTB nồng độ 26 mL/L tốt so với nồng độ lại Bảng cho thấy, TLDK DTTB tăng dần theo nồng độ theo thời gian từ 17 mL/L (81,0% thời điểm 02 giờ) đến 26 mL/L (95,9% thời điểm 10 giờ) Tất nghiệm thức có chứa DTTB qua thời điểm có khả diệt vi khuẩn V parahaemolyticus Hiệu diệt V parahaemolyticus mạnh nồng độ DTTB tăng Qua thí nghiệm trên, thấy DTTB nồng độ 26 mL/L cho TLDK cao nhất, khác biệt có ý nghĩa (p < 0,05) với nồng độ cịn lại có khả diệt khuẩn tương đương với hóa chất BKC Tại thời điểm 02 sau sử dụng, BKC DTTB tất nghiệm thức có khả diệt vi khuẩn V parahaemolitycus TLDK hóa chất nghiệm thức khác biệt có ý nghĩa thống kê với (p < 0,05) Trong đó, TLDK NT1 (BKC: 0,5 ppm) NT5 (DTTB: 26 mL/L) khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê với (p > 0,05) Điều cho thấy, hiệu diệt khuẩn NT5 (DTTB: 26 mL/L) tương đương với NT1 (BKC), đồng thời cao (93,78%) so với nghiệm thức lại NT2 (với TLDK 81,0%) cho khả diệt khuẩn thấp so với NT cịn lại Vì vậy, muốn diệt V parahaemolitycus nhanh nước ao nuôi tôm, người nuôi chọn DTTB với nồng độ 26 mL/L để sử dụng, DTTB (26 mL/L) cho TLDK mạnh tương đương với BKC Sau 06 sử dụng, TLDK BKC có xu hướng giảm, nhiên, tỉ lệ DTTB tất nghiệm thức có xu hướng tăng so với thời điểm 02 TLDK khác biệt có ý nghĩa thống kê D Hiệu diệt khuẩn V parahaemolyticus theo thời gian Mật độ vi khuẩn V parahaemolyticus nghiệm thức cịn có biến động theo thời gian sau sử dụng hóa chất thể qua Bảng Bảng cho thấy, mật độ vi khuẩn V parahaemolyticus theo thời gian (sau 02, 06 10 giờ) tất nghiệm thức khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) Ở NT1 (BKC), NT3 (DTTB: 63 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH, SỐ 43, THÁNG NĂM 2021 NÔNG NGHIỆP – THỦY SẢN Bảng 3: Mật độ vi khuẩn V parahaemolyticus nghiệm thức theo thời gian (Ghi chú: giá trị thể bảng trung bình ± độ lệch chuẩn Các giá trị hàng có chứa kí tự chữ khác khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,05)) 20 mL/L) NT4 (DTTB: 23 mL/L) mật độ vi khuẩn V parahaemolyticus khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) qua thời điểm sau sử dụng hóa chất Ở NT2 (DTTB: 17 ml/L) NT5 (DTTB: 26 mL/L) mật độ vi khuẩn thời điểm 02 10 sau sử dụng DTTB, khác biệt có ý nghĩa (p < 0,05) khác biệt ý nghĩa (p > 0,05) với thời điểm 06 Mật độ vi khuẩn V parahaemolyticus qua thời điểm (02, 06 10 sau sử dụng hóa chất) có xu hướng giảm nghiệm thức có chứa DTTB; nhiên, mật độ vi khuẩn lại có xu hướng tăng NT1 (BKC: 0,5 ppm) NT0 (NT đối chứng âm) Điều chứng minh rõ ràng, hiệu diệt khuẩn BKC giảm dần theo thời gian sử dụng từ 02 đến 10 giờ, hiệu DTTB tăng dần theo thời gian sử dụng từ 02 đến 10 có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) với thời điểm 06 10 Tổng hợp kết Bảng Bảng cho thấy, BKC hóa chất có khả diệt khuẩn V parahaemolyticus mạnh có tác dụng 02 sau sử dụng, thời gian sau sử dụng kéo dài TLDK giảm dần (Bảng 4) Trong DTTB ngược lại, khả diệt khuẩn V parahaemolyticus tăng dần theo nồng độ thời gian sau sử dụng (Bảng Bảng 4), DTTB thảo dược nên có thời gian bán rã dài; điều cho thấy, hiệu diệt khuẩn DTTB trì dài so với BKC Kết từ Bảng 2, Bảng Bảng cho thấy, khả diệt khuẩn V parahaemolyticus DTTB mạnh nồng độ cao hiệu tăng theo thời gian sau sử dụng Tuy nhiên, phân tích tương tác nghiệm thức (nồng độ DTTB) thời gian sau sử dụng (Nghiệm thức*Thời gian) khả diệt V parahaemolyticus, tương tác lại khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) (Bảng 2) Vì vậy, chúng tơi chọn nồng độ DTTB 26 mL/L để ứng dụng trình diệt khuẩn V parahaemolyticus cho tơm DTTB ln cho hiệu diệt khuẩn cao nồng độ Bên cạnh đó, để ứng dụng DTTB vào phịng trị bệnh ao nuôi tôm TCT hiệu nhất, nghiên cứu chọn nồng độ 17 mL/L DTTB cho TLDK tương đối cao (81,0-85,3%) nồng độ này, nhiên làm giảm pH nồng độ 20, 23 26 mL/L nên ảnh hưởng đến môi Để đánh giá sâu hiệu diệt khuẩn BKC DTTB, nghiên cứu tính TLDK nghiệm thức theo thời gian Kết thể qua Bảng Bảng cho thấy, TLDK BKC DTTB khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) Ở NT3 NT4, TLDK DTTB cao thời điểm 10 khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) với thời điểm 02 06 Ở NT2 NT5, hiệu diệt khuẩn DTTB cao thời điểm 10 (85,3%, 95,9%) khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) với thời điểm 02 06 Riêng NT1, hiệu diệt khuẩn BKC thời điểm 02 cao (96,1%) lại khác biệt không 64 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH, SỐ 43, THÁNG NĂM 2021 NÔNG NGHIỆP – THỦY SẢN Bảng 4: Tỉ lệ diệt V parahaemolyticus DTTB BKC theo thời gian (Ghi chú: giá trị thể bảng trung bình ± sai số chuẩn Các giá trị hàng có chứa kí tự chữ khác khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,05)) trường nước ao nuôi tôm TCT chi phí cho sử dụng DTTB thấp Theo Nantachit and Roongjang [12], thành phần Steroidoids hạt trâm bầu có tính kháng khuẩn mạnh, chống lại ung thư gan ung thư mô đại tràng người với nồng độ 300 mcg/mL chiết xuất DMSO (dimethyl sulfoxide) Như vậy, thấy hoạt chất từ hạt trâm bầu không kháng khuẩn gây bệnh tơm TCT, mà cịn kháng khuẩn gây bệnh người Tại Việt Nam, Hồng Mộng Huyền [8] nghiên cứu ứng dụng cao chiết số thảo mộc thầu dầu, lưỡi rắn, mật gấu để diệt khuẩn Vibrio harveyi V parahaemolyticus gây bệnh tơm với kết cao Trước đó, Đái Thị Xuân Trang Võ Thị Tú Anh [13] nhận định, dịch chiết cỏ mực (Eclipta alba) có tính kháng mạnh với V parahaemolyticus phân lập từ ruột tôm sú (Penaeus monodon) nồng độ µg/mL Kết hợp với nghiên cứu trên, nghiên cứu nhóm tác giả bổ sung trâm bầu vào danh sách thảo mộc có khả diệt khuẩn V parahaemolyticus cho nghề nuôi tôm nước lợ nói chung nghề ni tơm TCT nói riêng V nguồn nước lấy từ ao nuôi tôm thẻ chân trắng B Đề xuất Nghiên cứu xác định thời gian bán rã (T1/2) dịch trích hạt trâm bầu nước ao ni tơm Thực thêm thí nghiệm khảo sát tính kháng dịch trích hạt trâm bầu vi khuẩn khác họ Vibrionaceae V harveyi, V vulnificus V cholerae LỜI CẢM ƠN Nhóm tác giả chân thành cảm ơn Cơng ty TNHH NTTS Tuấn Hiền (huyện Tân Phú Đông, tỉnh Tiền Giang) hỗ trợ cho thực nghiên cứu Cảm ơn sinh viên Cao Tuấn Đức Nguyễn Duy Linh (lớp Đại học NTTS 14 – Trường Đại học Tiền Giang) hỗ trợ theo dõi thí nghiệm TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] VASEP (Hiệp hội Chế biến Xuất Thủy sản Việt Nam) Tổng quan ngành thủy sản Việt Nam; 2020 Truy cập từ: http://vasep.com.vn/1192/OneContent/tong-quannganh.htm [Ngày truy cập 15/08/2020] [2] Lightner DV, Redman RM, Pantoja CR, Noble BL, Tran L Early mortality syndrome affects shrimp in Asia (40) Global Aquaculture Advocate; 2012 [3] Cao Thành Trung, Nguyễn Văn Hảo, Lê Hồng Phước Thực trạng sử dụng thuốc hóa chất chế phẩm sinh học ao nuôi thâm canh, vấn đề tôm bệnh diện rộng mơ hình trang trại Mỹ Thanh, Sóc Trăng Trong Kỉ yếu Báo cáo Hội nghị Khoa học Thủy sản Toàn quốc lần thứ IV 2011; Trường Đại học Nơng lâm Thành phố Hồ Chí Minh KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT A Kết luận Dịch trích hạt trâm bầu có khả diệt vi khuẩn V parahaemolyticus, hiệu diệt khuẩn dịch trích hạt trâm bầu tăng dần theo nồng độ sử dụng thời gian tiếp xúc Sử dụng dịch trích hạt trâm bầu nồng độ từ 17-26 mL/L để diệt vi khuẩn V parahaemolyticus 65 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH, SỐ 43, THÁNG NĂM 2021 [4] [5] [6] [7] [8] Nguyễn Công Tráng, Ngô Thị Kim Cúc, Phan Ngọc Thịnh Khảo sát tính kháng khuẩn Vibrio parahaemolyticus dịch trích từ trâm bầu (Combretum quadrangulare) Tạp chí Khoa học Trường Đại học An Giang 2018;19(1): 1–6 Triệu Thanh Hằng, Nguyễn Công Tráng, Cao Tuấn Đức, Lê Thị Thúy Vy Nghiên cứu khả kháng số loại vi khuẩn gây bệnh động vật thủy sản dịch trích từ hạt trâm bầu (Combretum quadragulare) điều kiện in vitro Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ 2018;54(2): 151–157 Chaweepack T, Muenthaisong B, Chaweepack S, KameiK The potential of galangal (Alpinia galanga Linn.) extract against the pathogens that cause white feces syndrome and acute hepatopancreatic necrosis disease (AHPND) in Pacific white shrimp (Litopenaeus vannamei) International Journal of Biology 2015;7(3): 8–17 Đặng Thị Lụa, Lại Thị Ngọc Hà, Nguyễn Thanh Hải Tác dụng diệt khuẩn dịch chiết sim hạt sim (Rhodomyrtus tomentosa) vi khuẩn gây bệnh hoại tử cấp tơm ni nước lợ Tạp chí Khoa học Phát triển 2015;7: 1101–1108 Hồng Mộng Huyền, Võ Tấn Huy, Trần Thị Tuyết Hoa Hoạt tính kháng khuẩn số cao chiết thảo dược kháng vi khuẩn gây bệnh tơm ni Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ 2018;54(2): 143–150 [9] [10] [11] [12] [13] 66 NÔNG NGHIỆP – THỦY SẢN Nguyễn Thị Diễm Phương, Trần Phạm Vũ Linh, Bùi Thị Thanh Tịnh, Bùi Thị Mỹ Hạnh, Trần Thị Yến Nhi, Ngô Huỳnh Phương Thảo Khảo sát số thảo dược kháng Vibrio parahaemolyticus pVPA3-1 gây bệnh hoại tử gan tụy cấp tính tơm ni Tạp chí Khoa học – Cơng nghệ Thủy sản 2019;3: 107–114 Dodia DA, Patel IS, Pathak AR Antifeedant properties of some indigenous plant extracts against larvae of Helicoverpa armigera Pestology 1995;19: 21–22 Rajiv R, Singh RK, Jash SK, Sarkar A, Gorai, D Combretum quadrangulare (Combretaceae): Phytochemical Constituents and Biological activity Indo American Journal of Pharmaceutical Research 2014;4(11): 5266–5299 Nantachit K, Roongjang S Anti-mycobacterium and anti-cancer activities of combretin, an isolated steroidal alkaloid from the seeds of Combretum quadrangulare Kurz Journal of Pharmacy and Pharmacology 2016;4: 88–98 Đái Thị Xuân Trang, Võ Thị Tú Anh Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn dịch chiết cỏ mực (Eclipta alba) vi khuẩn phân lập từ ruột tôm sú (Penaeus monodon) Tạp chí Sinh học 2015;37(1se): 261–266 ... luận Dịch trích hạt trâm bầu có khả diệt vi khuẩn V parahaemolyticus, hiệu diệt khuẩn dịch trích hạt trâm bầu tăng dần theo nồng độ sử dụng thời gian tiếp xúc Sử dụng dịch trích hạt trâm bầu nồng... dịch trích từ hạt trâm bầu Nghiên cứu trích dịch từ hạt trâm bầu hai phương pháp: phương pháp ngâm lạnh cồn trích nước có gia nhiệt Kết cho thấy, dịch trích ngâm lạnh cồn dịch trích gia nhiệt nước. .. nguồn nước lấy từ ao nuôi tôm thẻ chân trắng B Đề xuất Nghiên cứu xác định thời gian bán rã (T1/2) dịch trích hạt trâm bầu nước ao ni tơm Thực thêm thí nghiệm khảo sát tính kháng dịch trích hạt trâm