Thử nghiệm hiệu quả chủng vi khuẩn lactic có đồng thời hoạt tính probiotic và giảm cholesterol trên mô hình chuột thí nghiệm nghiên cứu khoa học

TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CỦA SINH VIÊN THỬ NGHIỆM HIỆU QUẢ CHỦNG VI KHUẨN LACTIC CĨ ĐỒNG THỜI HOẠT TÍNH PROBIOTIC VÀ GIẢM CHOLESTEROL TRÊN MƠ HÌNH CHUỘT THÍ NGHIỆM Sinh viên thực hiện: Người hướng dẫn: Phạm Thị Minh Trang Nguyễn Thị Linh Giang Lê Thị Anh Thiện Phạm Trần Phương Dung ThS Dương Nhật Linh TP Hồ Chí Minh, 2013 LỜI CÁM ƠN NGHIÊN CỨU KHOA HỌC LỜI CẢM ƠN Với lịng kính trọng biết ơn chân thành, em xin cảm ơn đến Th.S Dƣơng Nhật Linh Th.S Nguyễn Văn Minh - giảng viên khoa Công Nghệ Sinh Học, trƣờng ĐH Mở Tp Hồ Chí Minh ngƣời truyền đạt kinh nghiệm quý báu sống, bên cạnh động viên tạo điều kiện cho em suốt thời gian học đại học hoàn thành nghiên cứu Xin tỏ lòng biết ơn đến quý thầy cô khoa Công Nghệ Sinh Học, trƣờng ĐH Mở Tp Hồ Chí Minh Cảm ơn thầy ln tận tình dạy kiến thức quý báu cho em năm đại học Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến giúp đỡ tận tình thầy PGS.TS Trần Cát Đơng – Trƣởng môn vi ký sinh trùng, thầy cô tồn thể anh chị mơn dƣợc lý – Trƣờng Đại học Y dƣợc TP.HCM hỗ trợ em nhiều q trình hồn thành đề tài nghiên cứu Em xin chân thành cảm ơn thầy Nguyễn Thanh Thuận - giảng viên trƣờng đại học Thủ Dầu Một tạo điều kiện, giúp đỡ em hoàn thành đề tài Em xin gửi lời cảm ơn cô Tôn Nữ Tùng Kim-giảng viên khoa Cơng Nghệ Sinh học, tồn thể anh/chị bạn phòng sinh học phân tử tạo điều kiện thuận lợi cho em hoàn thành nghiên cứu Xin gửi lời cảm ơn đến anh Đan Duy Pháp, ngƣời giúp đỡ, truyền đạt kiến thức thực tế trình nghiên cứu Chị Võ Ngọc Yến Nhi, chị bên cạnh, theo sát ngƣời chia sẻ buồn vui suốt thời gian thực đề tài Xin gửi lời cảm ơn đến tập thể anh/chị, bạn, em phịng thí nghiệm CN Vi Sinh, trƣờng ĐH Mở Tp Hồ Chí Minh ln giúp đỡ động viên tơi suốt q trình thực hồn thành đề tài Và tận đáy lịng, vơ biết ơn gia đình điểm tựa vũng chắc, hỗ trợ, động viên tạo điều kiện cho đƣợc nhƣ ngày hơm Bình Dƣơng, ngày 21 tháng 04 năm 2013 Phạm Thị Minh Trang SVTH : PHẠM THỊ MINH TRANG i NGHIÊN CỨU KHOA HỌC MỤC LỤC MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU TỔNG QUAN VỀ PROBIOTIC 1.1 Khái niệm Q trình chuyển hóa tác dụng probiotic Tiêu chí chọn lọc chủng probiotic (Dƣơng Thanh Liêm, 2009) Tình hình nghiên cứu probiotic nƣớc 1.1.1 1.1.2 1.1.3 1.1.4 1.2 TỔNG QUAN VỀ VI KHUẨN LACTIC 10 1.3 TỔNG QUAN VỀ CHOLESTEROL 12 Giới thiệu 12 Chức 13 Phân loại 14 Tổng hợp cholesterol 15 Cơ chế điều hòa lƣợng cholesterol máu 16 Bài tiết 17 Chuyển hóa vi sinh vật 17 1.3.1 1.3.2 1.3.3 1.3.4 1.3.5 1.3.6 1.3.7 PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH DANH VI SINH VẬT .18 1.4 Định danh vi sinh vật phƣơng pháp truyền thống 18 Định danh vi sinh vật kỹ thuật giải trình tự 18 1.4.1 1.4.2 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU 22 2.2 VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 22 Đối tƣợng nghiên cứu 22 Các chủng vi khuẩn thử nghiệm 22 Mơi trƣờng – hóa chất 23 Thuốc thử - thuốc nhuộm 23 Dụng cụ 24 Trang thiết bị 24 2.2.1 2.2.2 2.2.3 2.2.4 2.2.5 2.2.6 SƠ ĐỒ THÍ NGHIỆM 25 2.3 2.3.1 2.3.2 cấy 2.3.3 2.3.4 2.3.5 2.3.6 2.3.7 2.3.8 2.3.9 2.3.10 2.3.11 2.3.12 Tái phân lập 26 Sàng lọc chủng có khả hấp thu cholesterol tế bào vi khuẩn từ môi trƣờng nuôi 26 Sàng lọc chủng vi khuẩn có khả sinh enzyme BSH 27 Thử khả sinh enzym ngoại bào 31 Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn 33 Khả chịu pH dày 34 Khả chịu mật 35 Thử khả nhạy cảm với kháng sinh(MIC) 36 Kiểm tra khả huyết giải 37 Định danh kỹ thuật giải trình tự 37 Xây dựng mơ hình gây tăng cholesterol chuột 41 Khảo sát khả giảm cholesterol 41 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 44 3.1 TÁI PHÂN LẬP 45 3.2 SÀNG LỌC CÁC CHỦNG VI KHUẨN LACTIC CÓ KHẢ NĂNG GIẢM CHOLESTEROL .45 3.2.1 3.2.2 3.2.3 Thử nghiệm khả giảm cholesterol môi trƣờng nuôi cấy 45 Định tính khả sinh enzyme BSH 52 Xác định hoạt tính enzyme BSH 55 SVTH : PHẠM THỊ MINH TRANG ii NGHIÊN CỨU KHOA HỌC 3.2.4 MỤC LỤC Kết xác định hoạt độ chung hoạt độ riêng enzyme BSH chủng khảo sát 58 SÀNG LỌC CÁC CHỦNG VI KHUẨN CĨ HOẠT TÍNH PROBIOTIC CAO 62 3.3 3.3.1 3.3.2 3.3.3 3.3.4 3.3.5 3.3.6 Khả sinh enzyme ngoại bào 62 Hoạt tính kháng khuẩn 64 Khả chịu muối mật 68 Khả chịu pH dày 70 Kiểm tra khả huyết giải 72 THỬ NGHIỆM NHẠY/ KHÁNG KHÁNG SINH 74 3.4 TĨM TẮT KẾT QUẢ SÀNG LỌC ĐỒNG THỜI HOẠT TÍNH PROBIOTIC VÀ KHẢ NĂNG GIẢM CHOLESTEROL CỦA 39 CHỦNG THỬ NGHIỆM .77 ĐỊNH DANH BẰNG PHƢƠNG PHÁP SINH HỌC PHÂN TỬ 80 3.5 3.5.1 3.5.2 3.6 Tách chiết, PCR tinh sản phẩm 16S rDNA 80 Kết giải trình tự dựng phát sinh loài: 81 KẾT QUẢ XÂY DỰNG MƠ HÌNH TĂNG CHOLESTEROL TRÊN CHUỘT 85 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 87 4.1 KẾT LUẬN 88 4.2 KIẾN NGHỊ 88 SVTH : PHẠM THỊ MINH TRANG iii NGHIÊN CỨU KHOA HỌC DANH MỤC VIẾT TẮT DANH MỤC VIẾT TẮT MT Môi trƣờng KL Khuẩn lạc v/p Vòng/phút TB Tế bào OD Optical Density LAB Lactic acid bacteria HHD Homofermentative-Heterofermentative Differrential medium WHO World Health Organization GRAS Generally recognized as safe BSH Bile salt hydrolase LDL Low Density Lipoprotein HDL High Density Lipoprotein nm 16S rDNA ANOVA BLAST bp nanomet Trình tự DNA mã hóa cho RNA ribosome tiểu phần 16S One-way analysis of variance Basic Local Alignment Search Tool base pair SVTH : PHẠM THỊ MINH TRANG iv NGHIÊN CỨU KHOA HỌC DANH MỤC DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Các giống khác vi khuẩn lactic .11 Bảng 2.1 Xây dựng đồ thị đƣờng chuẩn biểu diễn mối quan hệ nồng độ cholesterol giá trị OD550 26 Bảng 2.2 Xây dựng đồ thị đƣờng chuẩn biểu diễn mối quan hệ nồng độ taurine giá trị OD570 28 Bảng 2.3 Xây dựng đồ thị đƣờng chuẩn biểu diễn mối quan hệ nồng độ Albumin giá trị OD595 29 Bảng 2.4 Thành phần phản ứng PCR 39 Bảng 2.5 Chƣơng trình phản ứng PCR 39 Bảng 3.1 Bảng tóm tắt kết sàng lọc đồng thời hoạt tính probiotic khả giảm cholesterol 10 chủng vi khuẩn 78 DANH MỤC ĐỒ THỊ Đồ thị 3.1 Sự tƣơng quan tuyến tính nồng độ cholesterol (µg/mL) giá trị OD550 46 Đồ thị 3.2 Khả giảm cholesterol môi trƣờng chủng thử nghiệm 51 Đồ thị 3.3 Khả giảm cholesterol môi trƣờng chủng thử nghiệm 51 Đồ thị 3.4 Đƣờng tƣơng quan tuyến tính nồng độ taurine (mM) giá trị OD570 56 Đồ thị 3.5 Đƣờng tƣơng quan tuyến tính nồng độ BSA (µg/0,2mL) giá trị OD595 57 Đồ thị 3.6 Biểu diễn hoạt độ chung (U/mL) hoạt độ riêng (U/mg) chủng vi khuẩn 61 Đồ thị 3.7 Đồ thị biểu diễn khả chịu muối mật chủng vi khuẩn 69 Đồ thị 3.8 Tỉ lệ sống chủng thử nghiệm theo thời gian 1, pH 71 SVTH : PHẠM THỊ MINH TRANG v NGHIÊN CỨU KHOA HỌC DANH MỤC DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Hệ vi sinh vật tồn hệ thống tiêu hóa Hình 1.2 Mơ tả số ảnh hƣởng vi khuẩn vào thể Hình 1.3 Streptococcus (66) 12 Hình 1.4 Lactobacillus (61) 12 Hình 1.5 Cơng thức cấu tạo cholesterol .13 Hình 1.6 Cholesterol hình thành mảng bám mạch máu 14 Hình 1.7 Cơ chế tổng hợp cholesterol 15 Hình 2.1 Sơ đồ thí nghiệm 25 Hình 2.2 Sơ đồ bố trí thí nghiệm hiệu giảm cholesterol 42 Hình 3.1 Vi khuẩn môi trƣờng MRSA 45 Hình 3.2 Khả sinh enzyme BSH 55 Hình 3.3 Khả sinh enzyme ngoại bào 64 Hình 3.4 Hoạt tính kháng khuẩn với vi khuẩn S.typhi, L monocytogenes 68 Hình 3.5 Kết thử tiêu huyết thạch máu 74 Hình 3.6 Thử nghiệm MIC chủng E16.2 76 Hình 3.7 Kết điện di sau phản ứng PCR 80 Hình 3.8 Trình tự chủng NT1.5 sau hiệu chỉnh 81 Hình 3.9 Trình tự chủng E16.2 sau hiệu chỉnh 82 Hình 3.10 Trình tự chủng YK1.1 sau hiệu chỉnh .82 Hình 3.12 Cây phả hệ phân tử chủng định danh 84 SVTH : PHẠM THỊ MINH TRANG vi ĐẶT VẤN ĐẾ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC ĐẶT VẤN ĐỀ Theo khảo sát gần tổ chức Y tế giới, bệnh tim mạch vành nguyên nhân dẫn đến tử vong đƣợc dự báo gia tăng Ƣớc tính khoảng 17,5 triệu ngƣời chết bệnh tim mạch năm 2005, chiếm 30% tất ca tử vong toàn cầu Trong số ca tử vong 7,6 triệu đau tim 5,7 triệu đột quỵ Khoảng 80% ca tử vong xảy nƣớc có thu nhập thấp trung bình Nếu xu hƣớng đƣợc phép tiếp tục, ƣớc tính đến năm 2015 có 20 triệu ngƣời chết đột quỵ, bệnh tim mạch Do giảm cholesterol máu trở thành vấn đề cấp bách, đƣợc nhiều nhà khoa học giới quan tâm nghiên cứu Bệnh tim mạch nguyên nhân quan trọng dẫn đến tử vong liên quan chặt chẽ với việc tăng cholesterol Vì giảm cholesterol huyết điều quan trọng để ngăn ngừa bệnh tim mạch (Livia Alm cs., 1982) Do việc nghiên cứu phƣơng pháp làm giảm cholesterol máu vấn đề mà nhà khoa học quan tâm theo nghiên cứu cho thấy có nhiều phƣơng pháp làm giảm cholesterol máu nhƣ: sử dụng thuốc giúp làm giảm lƣợng choleterol nhƣ: statins, loại thuốc ức chế, fibrates, acid bile resin, niacin… nhƣng sử dụng loại thuốc gây số tác dụng phụ Trong năm gần có nhiều nghiên cứu chứng minh bile salt hydrolase (BSH) từ vi khuẩn ( Lactobacillus, Bifidobacterium, Enterococcus,…) có tác dụng làm giảm cholesterol ngƣời động vật (Ma´ire Begley, 2006; Martin D cs., 2006; Pardo I cs., 1992) Sử dụng probiotic chứa vi khuẩn có bile salt hydrolase theo đƣờng uống đƣợc chứng minh giảm đáng kể cholesterol từ 22 – 33% (De Smet I cs., 1994; De Smet I cs., 1995) ngăn chặn cholesterol cao chuột cho ăn chế độ ăn giàu chất béo Đây vấn đề đƣợc nhà khoa học nƣớc quan tâm nghiên cứu Việt Nam, chƣa có nghiên cứu liên quan đến vấn đề này, sản phẩm probiotic có tác dụng làm giảm cholesterol cần thiết Vì vậy, tiến hành thực đề tài: “THỬ NGHIỆM HIỆU QUẢ CHỦNG VI KHUẨN LACTIC CĨ ĐỒNG THỜI HOẠT TÍNH PROBIOTIC VÀ GIẢM CHOLESTEROL TRÊN MƠ HÌNH CHUỘT THÍ NGHIỆM” SVTH : PHẠM THỊ MINH TRANG NGHIÊN CỨU KHOA HỌC ĐẶT VẤN ĐẾ Chúng thực đề tài với mục tiêu sau: - Tái phân lập sàng lọc chủng đồng thời có hoạt tính probiotic giảm cholesterol - Định danh chủng vi khuẩn theo phƣơng pháp sinh học phân tử - Xây dựng mơ hình chuột gây tăng cholesterol Do thời gian thực nghiên cứu có hạn nên chúng tơi chƣa thực thử nghiệm hiệu giảm cholesterol chủng mơ hình chuột nhƣ đề cƣơng đăng ký SVTH : PHẠM THỊ MINH TRANG NGHIÊN CỨU KHOA HỌC TỔNG QUAN TÀI LIỆU CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU SVTH : PHẠM THỊ MINH TRANG NGHIÊN CỨU KHOA HỌC PHỤ LỤC PHỤ LỤC  16 Các trình tự DNA đƣợc sử dụng để thiết lập phát sinh loài đề tài STT TÊN L casei L fermentum L plantarum L casei L.gastrius L aviarius L salivarius 10 11 12 13 14 15 L acidophilus L paracasei L plantarum L plantarum L paracasei L paracasei L secaliphilus L acidophilus L animalis CECT_4529 NGUỒN LC3 (Hoàng Quốc Khánh cs., 2011) L18 (Hoàng Quốc Khánh cs., 2011) WCFS1 ATCC334 (Hoàng Quốc Khánh cs., 2011) (Hoàng Quốc Khánh cs., 2011) (Hoàng Quốc Khánh cs., 2011) 3c KLDS K-46 DB8 IR65 TMW1.1313 X61138 NBRC_15882 FJ556999.1 ACCESSION NUMBER AY675252.1 DQ523484.1 NR_075041.1 NR_075032.1 AY253658.1 AB001836.2 DQ444477.1 AY773953.1 FJ861114.1 KC430920.1 JQ680434.1 KC108659.1 AM411002.1 X61138 AB326550.1  Bảng kết Blast trình tự sau hiệu ch nh Genbank Mẫu NT1.5 SVTH : PHẠM THỊ MINH TRANG 100 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC PHỤ LỤC Mẫu E16.2 Mẫu YK1.1 SVTH : PHẠM THỊ MINH TRANG 101 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC PHỤ LỤC PHỤ LỤC A Kết xử lý thống kê ANOVA yếu tố khả kháng khuẩn chủng thử nghiệm Staphylococcus aureus Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance NT1.5 0 S21.2 0 CM3.6.1 0 S1.12 0 E12.1 0 DC3.3 0 E15.1 0 BT1 0 S3.2 0 NH2 0 BT2 0 CM2.6 0 S29.2 0 DC1.2 0 E8.1 0 S17.1 0 NT1.7.2 0 MC1.3 0 KC2.1 25.5 8.5 0.25 DC3.6.1 0 CM3.5.2 0 VK1 0 VN2.2 0 CM1.2 0 E16.1 0 NT1.7.1 0 YK1.1 0 CM1.3 0 S23.2 0 SVTH : PHẠM THỊ MINH TRANG 102 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC PHỤ LỤC E16.2 0 E3.1 0 S15.1 0 S3.1 0 CM2.7 0 SC2.1 0 CM3.3 0 S28.1 0 NH1 0 MC1.5 0 ANOVA Source of Variation SS Between Groups df 211.1923 Within Groups Total MS 38 5.557692 0.5 78 211.6923 116 Pvalue F 867 F crit 1.07E88 1.557986 0.00641 Bacillus cereus Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance 0 18 0 0 0 0 16 0 0 0 0 10 16 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 SVTH : PHẠM THỊ MINH TRANG 103 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC PHỤ LỤC 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 17 8.5 0.5 0 0 0 0 0 0 0 0 0 10 22.5 11.25 0.125 10 20 10 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 ANOVA Source of Variation SS Between Groups 861.9038 Within Groups Total 0.625 862.5288 df MS F 38 22.68168 1415.337 P-value F crit 1.43E51 1.708736 39 0.016026 77 Strepβgroup A Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average SVTH : PHẠM THỊ MINH TRANG Variance 104 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC PHỤ LỤC 20.5 10.25 0.125 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 17 8.5 0.5 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 11 20 10 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 SVTH : PHẠM THỊ MINH TRANG 105 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC PHỤ LỤC ANOVA Source of Variation SS Between Groups 512.2372 Within Groups df 0.625 Total 512.8622 MS F P-value 38 13.47993 841.1474 F crit 3.58E47 1.708736 39 0.016026 77 P aeruginosa Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance 0 0 0 0 0 0 0 11 21 10.5 0.5 0 0 0 12 23 11.5 0.5 0 0 0 14 27 13.5 0.5 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 11 21 10.5 0.5 9.5 19 9.5 0.5 0 0 0 0 0 11 20 10 0 0 SVTH : PHẠM THỊ MINH TRANG 106 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC PHỤ LỤC 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 19 9.5 0.5 0 11 21 10.5 0.5 0 ANOVA Source of Variation SS Between Groups 1476.615 Within Groups df 3.5 Total 1480.115 38 MS F P-value 38.8583 432.9925 F crit 1.44E41 1.708736 39 0.089744 77 S paratyphi A Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance 11 20 10 10 21 10.5 0.5 22 11 2 0 11 22 11 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 21 10.5 0.5 0 0 0 0 0 0 0 SVTH : PHẠM THỊ MINH TRANG 107 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC PHỤ LỤC 0 10 20 10 0 0 21 10.5 0.5 0 11 19 9.5 0.5 0 0 0 0 0 0 0 0 0 11 20 10 10 18 0 0 10 22 11 2 0 0 0 0 0 11 20 10 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 ANOVA Source of Variation SS Between Groups 1754.154 Within Groups df Total 1760.154 MS F P-value 38 46.16194 300.0526 F crit 1.77E38 1.708736 39 0.153846 77 S typhi Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance 0 0 0 SVTH : PHẠM THỊ MINH TRANG 108 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC PHỤ LỤC 0 11 22 11 0 0 0 0 0 0 10 22 11 0 0 18 14 24 12 0 0 11 22 11 11 21 10.5 0.5 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 ANOVA Source of SS df MS SVTH : PHẠM THỊ MINH TRANG F P-value F crit 109 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC PHỤ LỤC Variation Between Groups 1183.154 Within Groups 0.5 Total 1183.654 38 31.13563 2428.579 3.86E56 1.708736 39 0.012821 77 L.monocytogenes Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance 12 24 12 12 23 11.5 0.5 11 22 11 10 22 11 12 23 11.5 0.5 11 21 10.5 0.5 0 11 21 10.5 0.5 13 26 13 12 24 12 12 23 11.5 0.5 20 10 11 22 11 10 21 10.5 0.5 11 24 12 12 24 12 13 24 12 12 25 12.5 0.5 12 25 12.5 0.5 13 25 12.5 0.5 11 24 12 12 23 11.5 0.5 11 21 10.5 0.5 12 24 12 12 24 12 12 23 11.5 0.5 11 23 11.5 0.5 11 22 11 12 21 10.5 0.5 13 23 11.5 0.5 SVTH : PHẠM THỊ MINH TRANG 110 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC PHỤ LỤC 0 0 0 0 0 12 20 10 11 21 10.5 0.5 11 23 11.5 0.5 12 24 12 10 24 12 2 0 ANOVA Source of Variation SS Between Groups 1182.487 Within Groups Total 14.5 1196.987 df MS F 38 31.11808 83.69691 P-value F crit 8.34E28 1.708736 39 0.371795 77 B Số liệu thống kê xây dựng mơ hình tăng cholesterol chuột  Bảng số cholesterol: Kết trả trung tâm medic SVTH : PHẠM THỊ MINH TRANG 111 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC PHỤ LỤC Bảng tổng hợp sau lấy ch số cholesterol (mmol/L) sau gây tăng trừ ch số cholesterol ban đâu cá thể: SVTH : PHẠM THỊ MINH TRANG 112 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC PHỤ LỤC Lần lặp lại Tiêm 250mg/kg Tiêm 600mg/kg Ăn 10% kem 10 11 12 8,48 8,96 9,47 9,23 10,29 7,59 9,58 9,07 8,27 10,37 9,7 10,9 12,14 12,1 12,96 12,75 15,93 13,4 15,17 14,79 15,68 10,37 12,96 12,15 5,58 6,94 9,07 8,27 6,36 6,34 7,6 6,61 7,24 7,1 6,31 7,46 Ăn chế độ thành phần 3,99 4,26 4,89 4,72 4,27 4,97 2,36 5,85 5,58 5,62 6,31 7,46 Đối chứng 3,66 2,18 3,32 2,94 2,7 2,85 0,88 2,37 3,2 2,82 2,82  Bảng anova xây dựng mơ hình tăng cholesterol chuột Hình ảnh bố trí mơ hình chuột: SVTH : PHẠM THỊ MINH TRANG 113 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC Lô PHỤ LỤC Lô Lô Lô Lô SVTH : PHẠM THỊ MINH TRANG 114 ... thực đề tài: “THỬ NGHIỆM HIỆU QUẢ CHỦNG VI KHUẨN LACTIC CÓ ĐỒNG THỜI HOẠT TÍNH PROBIOTIC VÀ GIẢM CHOLESTEROL TRÊN MƠ HÌNH CHUỘT THÍ NGHIỆM” SVTH : PHẠM THỊ MINH TRANG NGHIÊN CỨU KHOA HỌC ĐẶT VẤN... lọc chủng đồng thời có hoạt tính probiotic giảm cholesterol - Định danh chủng vi khuẩn theo phƣơng pháp sinh học phân tử - Xây dựng mơ hình chuột gây tăng cholesterol Do thời gian thực nghiên cứu. .. PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU CHƢƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU SVTH : PHẠM THỊ MINH TRANG 21 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU  Thời gian: