Khảo sát ảnh hưởng của nano berberine lên một số đặc tính sinh học của nguyên bào sợi nướu người nghiên cứu in vitro

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ TRẦN VĂN VUI KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA NANO BERBERINE LÊN MỘT SỐ ĐẶC TÍNH SINH HỌC CỦA NGUYÊN BÀO SỢI NƯỚU NGƯỜI – NGHIÊN CỨU IN VITRO LUẬN VĂN THẠC SĨ BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ TRẦN VĂN VUI KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA NANO BERBERINE LÊN MỘT SỐĐẶC TÍNH SINH HỌC CỦA NGUYÊN BÀO SỢI NƯỚU NGƯỜI – NGHIÊN CỨU IN VITRO Chuyên ngành: Răng Hàm Mặt Mã số: 8720501 LUẬN VĂN THẠC SĨ Người hướng dẫn khoa học: TS.BS Nguyễn Quang Tâm Cần Thơ - 2022 LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Tác giả luận văn Trần Văn Vui LỜI CẢM ƠN Trong q trình hồn thành luận văn này, nhận giúp đỡ chân thành quý báu thầy cô, anh chị bạn bè đồng nghiệp quan cơng tác Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến thầy hướng dẫn khoa học TS.BS Nguyễn Quang Tâm giúp đỡ, bảo tận tình suốt q trình thực luận văn Tơi xin trân trọng cảm ơn cô PGS.TS Trần Lê Bảo Hà thầy Phịng thí nghiệm kỹ nghệ mô vật liệu Y sinh, Bộ môn Sinh lý học Công nghệ sinh học động vật, Khoa Sinh học - Công nghệ sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh nhiệt tình giúp đỡ tơi hồn thiện luận văn Tôi xin trân trọng cảm ơn trung tâm nghiên cứu triển khai – Khu công nghệ cao TP Hồ Chí Minh cung cấp vật liệu Nano Berberine làm nghiên cứu Nhân cám ơn bạn đồng nghiệp cung cấp hình ảnh, tài liệu số liệu cho Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến giúp đỡ q báu Cuối tơi xin chân thành cảm ơn Ban lãnh đạo nhà trường, Phòng sau đại học Ban lãnh đạo khoa Răng Hàm Mặt tồn thể thầy giáo giảng dạy lớp cao học gia đình tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ tơi hồn thành khóa học Xin chân thành cảm ơn, Tác giả luận văn Trần Văn Vui MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC ĐỐI CHIẾU THUẬT NGỮ ANH - VIỆT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC BIỂU ĐỒ DANH MỤC HÌNH MỞ ĐẦU Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1.Tổng quan nguyên bào sợi Nano Berberine 1.2.Thử nghiệm độc tính tế bào 12 1.3.Thử nghiệm đánh giá đặc tính tăng sinh di cư tế bào 14 1.4.Thử nghiệm co gel collagen 15 1.5.Tình hình nghiên cứu nước 15 Chương 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Đối tượng 17 2.2 Phương pháp nghiên cứu 17 2.3 Đạo đức nghiên cứu 32 Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 33 3.1 Độc tính Nano Berberine tế bào nguyên bào sợi nướu người 33 3.2 Tác động Nano Berberin lên tăng sinh di cư nguyên bào sợi nướu người 37 3.3 Tác động Nano Berberine lên co gel collagen nguyên bào sợi nướu người 46 Chương 4: BÀN LUẬN 50 4.1 Về độc tính Nano Berberine tế bào nguyên bào sợi nướu người 51 4.2 Tác động Nano Berberine lên tăng sinh di cư nguyên bào sợi nướu người 51 4.3 Tác động Nano Berberine lên co gel collagen nguyên bào sợi nướu người 57 KẾT LUẬN 61 KIẾN NGHỊ 63 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT BAC Benzalkonium chloride BBr Berberine CHX Chlorhexidine DAMP Danger - associated Molecular Patterns DMEM/F12 Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium/ Ham’s nutrient mixture F12 DMSO Dimethyl sulfoxide ECM Extracellular matrix EDTA Ethylene diaminetetraacetid acid EMT Epithelial mesenchymal transition FBS Fetal bovine serum IL Interleukin hGF Human gingival fibroblast HPMC Hydroxypropyl methylcellulose MTT 3-(4, 5–dimethylthiazol–2–yl) –2, 5diphenyltetrazoliumbromid OD Optical denity PBS Phosphate buffered saline PEG Polyethylene glycol RER Rough endoplastic reticulum RGR Relative cell growth rate SMC Smooth muscle cell DANH MỤC ĐỐI CHIẾU THUẬT NGỮ ANH – VIỆT Phosphate buffered saline Hổn hợp nước muối phốt phát Fetal bovine serum Huyết thai bò Inverted microscope Kính hiển vi đảo ngược Optical denity Mật độ quang học Rough endoplastic reticulum Mạng lưới nội chất thô Danger-associated Molecular Pattern Mơ hình phân tử gây hại Extracellular matrix Nền ngoại bào Human gingival fibroblast cells Nguyên bào sợi nướu người Epithelial mesenchymal transition Sự chuyển dạng biểu mô – trung mơ Viable cell Tế bào cịn sống Smooth muscle cell Tế bào trơn In vitro Trong ống nghiệm Relative cell growth rate Tỷ lệ tăng trưởng tương đối DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Mức độ độc tế bào dựa theo phần trăm RGR 20 Bảng 3.1 Kết nghiệm thức đánh giá độc tính Nano Berberin tế bào hGF 34 Bảng 3.2 Phân loại độc tính Nano Berberine 2% theo nồng độ pha loãng 35 Bảng 3.3 Đánh giá tác động Nano Berberine lên tăng sinh 37 Bảng 3.4 Tăng sinh tế bào mẫu nghiên cứu ngày 38 Bảng 3.5 Tăng sinh tế bào mẫu nghiên cứu ngày 39 Bảng 3.6 Tăng sinh tế bào mẫu nghiên cứu ngày 39 Bảng 3.7 Tăng sinh tế bào mẫu nghiên cứu ngày 41 Bảng 3.8 Tăng sinh tế bào mẫu nghiên cứu ngày 42 Bảng 3.9 Nghiệm thức đánh giá tác động Nano Berberine lên di cư hGF 44 Bảng 3.10 Sự thay đổi diện tích vùng vơ bào 45 Bảng 3.11 Nghiệm thức đánh giá tác động Nano Berberine 2% x 10-4 lên co gel collagen hGF 47 Bảng 3.12 Diện tích co gel collagen ngày ngày 48 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 Độc tính Nano Berberine 2% theo nồng độ pha loãng 36 Biểu đồ 3.2 Xu hướng tăng sinh mẫu nghiên thử nghiệm 43 Biểu đồ 3.3 Phần trăm diện tích vùng vơ bào thời điểm 24 46 Biểu đồ 3.4 Phần trăm diện tích co gel collagen ngày 49 TẠP CHÍ Y DƯỢC HỌC CẦN THƠ – SỐ 51/2022 17 Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng đánh giá kết phẫu thuật điều trị gãy xương bánh chè Bệnh viện Đa khoa Trung ương Cần Thơ Bệnh viện Đa khoa thành phố Cần Thơ năm 2021-2022 Trần Hoàng Anh Phan Đình Mừng Nguyễn Lê Hoan Nguyễn Nữ Thu Phúc 111 18 Nghiên cứu phương pháp chiết xuất nhóm acid phenolic flavonoid Lá mắm đen (Avicennia officinalis) Nguyễn Văn Cường Nguyễn Thị Ngọc Vân 118 19 Tình hình đề kháng kháng sinh Staphylococcus aureus kết điều trị bệnh nhân chốc Bệnh viện Da liễu thành phố Cần Thơ năm 2020-2022 126 20 Nghiên cứu đặc điểm thăm dò điện sinh lý tim kết điều trị sóng cao tần qua catheter bệnh nhân nhịp nhanh kịch phát thất phụ thuộc nút nhĩ-thất Bệnh viện Tim mạch An Giang năm 2021-2022 Trần Nguyễn Anh Thư Huỳnh Văn Bá Nguyễn Thị Thùy Trang Lạc Thị Kim Ngân Phạm Thanh Thảo Trương Hữu Có Lê Trương Hải 21 Mơ tả đặc điểm vi khuẩn tình hình đề kháng kháng sinh vi khuẩn bệnh nhân viêm phổi bệnh viện Bệnh viện Đa khoa thành phố Cần Thơ Nguyễn Thành Nghiêm Phạm Thành Suôl 140 22 Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng kết điều trị bước đầu hội chứng HELLP thai phụ tiền sản giật Bệnh viện Đa khoa Trung ương Cần Thơ năm 2020-2021 Bành Dương Yến Nhi Đàm Văn Cương Ngũ Quốc Vĩ Chung Cẩm Ngọc 148 23 Giá trị tầm soát ung thư cổ tử cung phối hợp phương pháp Cyprep Pap test xét nghiệm HPV realtime PCR phụ nữ khám phụ khoa Bệnh viện Quốc tế Phương Châu năm 2021-2022 Lê Trung Tín Nguyễn Hồng Phong 155 24 Đánh giá kết phẫu thuật điều trị lún đốt sống loãng xương phương pháp bơm xi măng sinh học khơng bóng Bệnh viện Đa khoa Trung ương Cần Thơ năm 2021-2022 Hà Thoại Kỳ Phạm Văn Năng Nguyễn Duy Linh Nguyễn Hữu Tài Trịnh Đình Thảo Lê Thị Thảo Vy Hà Thoại Lâm Chương Chấn Phước Trần Văn Minh 163 iii 133 ẠP CHÍ Y DƯỢ Ọ ẦN THƠ – Ố Hypertension and the Kidney working group of the European Society of Hypertension (ESH)*”, Nephrology Dialysis Transplantation, 32(4), pp.620-640 12.Pugh D, Gallacher PJ, Dhaun N (2019), “Management of Hypertension in Chronic Kidney Disease”, Drugs, 79(4), pp.365-379 13.Subeesh VK, et al (2020), “Evaluation of prescribing practices and drug-related problems in chronic kidney disease patients: A cross-sectional study”, Perspect Clin Res, 11, pp.70-74 14.Tadvi NA, Hussain S (2020), “Analysis of prescription pattern in patients on maintenance hemodialysis”, Indian Journal of Pharmacy and Pharmacology, 7(2), pp.125-129 (Ngày nhận bài: 21/7/2022 – Ngày duyệt đăng: 09/9/2022) KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG IN VITRO CỦA NANO BERBERINE LÊN MỘT SỐ ĐẶC TÍNH SINH HỌC CỦA NGUYÊN BÀO SỢI NƯỚU NGƯỜI Trần Văn Vui1*, Nguyễn Quang Tâm2 Đại học Y Dược Cần Thơ Bệnh viện Răng Hàm Mặt thành phố Hồ Chí Minh * Email: vuidentist@gmail.com TĨM TẮT Đặt vấn đề: Berberine (BBr) alkaloid thuộc nhóm isoquinoline, sử dụng y học cổ truyền để trị bệnh đường ruột, gan mật, da…Gần đây, BBr đưa vào sản phẩm chăm sóc miệng nhằm thúc đẩy trình lành thương Nguyên bào sợi nướu người (NBSNN) thành phần mơ nướu, đóng vai trị lành thương nướu Mục tiêu nghiên cứu: Đánh giá ảnh hưởng in vitro Nano BBr lên số đặc tính sinh học (tăng sinh, di cư) NBSNN Đối tượng phương pháp nghiên cứu: Nano Berberine 2% pha loãng 1, 1/10, 1/102, 1/103, 1/104 vào đĩa nuôi NBSNN hệ P3 (nuôi cấy đến lần chuyền thứ 3) ni cấy mơi trường DMEM/F12 có chứa 10% FBS ủ qua 24 Dùng phương pháp MTT để thử nghiệm độc tính Nano BBr từ xác định nồng độ khơng gây độc cho tế bào Sử dụng Nano BBr với nồng độ chứng minh khơng gây độc tính để đánh gía đặc tính sinh học NBSNN (tăng sinh, di cư co collagen) Nuôi cấy tế bào thử nghiệm thực phịng thí nghiệm kỹ nghệ mô vật liệu Y sinh, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia thành phố Hồ Chí Minh Kết quả: Với nồng độ pha lỗng 1/103 1/104 NBSNN sống sót 70%, với nồng độ Nano BBr 1/104 có tăng sinh di cư NBSNN Kết luận: Nano BBr 2% pha lỗng 1/104 có ảnh hưởng lên đặc tính sinh học NBSNN xu hướng tăng sinh liên tục mơi trường CM10 Từ khóa: Nano Berberine, ngun bào sợi nướu, đặc tính sinh học 63 ẠP CHÍ Y DƯỢ Ọ ẦN THƠ – Ố ABSTRACT EVALUATION THE IN VITRO EFFECT OF NANO BERBERINE ON SOME BIOLOGICAL PROPERTIES OF HUMAN GINGIVAL FIBROBLATS Tran Van Vui1*, Nguyen Quang Tam2 Can Tho University of Medicine and Pharmacy Odonto Maxillo Facial Hospital of Ho Chi Minh City Background: Berberine (BBr) is an alkaloid belonging to the isoquinoline group, which has been widely used in traditional medicine, often used to treat intestinal diseases, hepatobiliary diseases, skin diseases Recently BBr has also been included in products oral care products to help promote healing Human gingival fibroblast (hGF) is a major component of gingival tissue, playing a key role in gingival healing Objectives: In order to provide a scientific basis for the application of BBr in the healing of gingival-oral tissues, we carried out a research survey with the aim of evaluating the in vitro effects of Nano BBr on some biological properties (proliferation, migration) of hGF Materials and methods: P3 generation human NBSN cells (cultured to the third pass) cultured in DMEM/F12 medium containing 10% FBS were used to evaluate the cytotoxicity of Nano Berberine on cell survival Nano Berberine 2% was diluted 1, 1/10, 1/102, 1/103, 1/104 to the hGF culture plates that had been incubated for 24h Using MTT method to test the toxicity of Nano BBr at original concentrations and diluting on hGF to determine the concentration that is not cytotoxic Use Nano BBr at a proven non-toxic concentration to evaluate the biological properties of hGF (proliferation, migration and collagen contraction) in cultures containing Nano BBr Cell culture and tests were carried out at the Laboratory of Biomedical Materials and Tissue Engineering, University of Natural Sciences, Viet Nam National University, Ho Chi Minh City Results: With a dilution of 1/103 and 1/104 of hGF over 70%, and also with a concentration of Nano BBr 1/104, the following experiments were performed, there was proliferation and migration of hGF Conclusions: Nano BBr 2% diluted 1/104 has a positive effect on the biological properties of hGF Keywords: Nano Berberine, human gingival fibroblasts, biological properties I ĐẶT VẤN ĐỀ Berberin (BBr) alkaloid thuộc nhóm isoquinoline gần có ý năm gần có tác dụng dược lý chống ung thư, kháng virus, kháng khuẩn kháng viêm Berberine đưa vào ứng dụng sản phẩm chăm sóc miệng hỗ trợ thay dần cho kháng sinh, sử dụng trường hợp vết thương hở [2], [7] Berberine sử dụng Y học Trung Quốc để phòng ngừa điều trị bệnh miệng Berberine chứng minh có tác dụng tăng sinh nguyên bào sợi có nguồn gốc từ dây chằng nha chu người (tế bào hPDL) [1] Nguyên bào sợi kiểu tế bào đặc biệt mô liên kết loại tế bào thường gặp mơ liên kết, có nguồn gốc từ tế bào trung mô phôi thai tế bào nguyên bào sợi phân chia thể trưởng thành [4] Collagen thành phần nướu nguyên bào sợi tế bào sản xuất collagen nướu [6] Với xu hướng phát triển nha khoa thẩm mỹ nha khoa phục hình thời gian gần đây, số tổn thương vùng miệng gây nên vật thể lạ như: trụ cấy ghép, vật thể dùng chỉnh hình nha… Với mục tiêu: Đánh giá ảnh hưởng Nano Berberine lên tăng sinh di cư nguyên bào sợi nướu người 64 ẠP CHÍ Y DƯỢ Ọ ẦN THƠ – Ố II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu Tế bào nguyên bào sợi nướu người (hGF) hệ P3 (tế bào nuôi cấy đến lần chuyền thứ 3) Nghiên cứu thực Phịng thí nghiệm kỹ nghệ mơ vật liệu Y sinh, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên - Đại học Quốc gia thành phố Hồ Chí Minh Từ tháng 6/2021- 12/2021 - Thiết kế nghiên cứu: Nghiên cứu thử nghiệm in vitro - Cỡ mẫu: Nghiên cứu thăm dò, thí nghiệm lặp lại lần - Chọn mẫu: Nguyên bào sợi nướu người hGF cung cấp Phịng thí nghiệm kỹ nghệ mơ vật liệu Y sinh, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh 2.2 Phương pháp nghiên cứu Nguyên bào sợi nướu người hGF cung cấp Phịng thí nghiệm kỹ nghệ mơ vật liệu Y sinh, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia thành phố Hồ Chí Minh Tế bào sau giải đông huyền phù môi trường dinh dưỡng DMEM/F12 bổ sung 10% FBS trải vào flask (bình ni cấy) Đặt flask tủ nuôi điều kiện 370C, 5% CO2 Môi trường thay ngày Tiến hành cấy chuyền đạt số lượng tế bào đạt 70- 80% diện tích bề mặt ni - Phân tích xử lý số liệu nghiên cứu: Sử dụng phần mềm GraphPad Prism version 7.0 (GraphPad Software, CA, USA) cho phân tích thông kê Sử dụng kiểm định t-test cho việc phân tích nhóm thí nghiệm khác nhau, với mức ý nghĩa thống kê p