Nghiên cứu tác dụng của cao chiết rễ cam thảo trên đặc điểm hình thái, chức năng chuyển hóa, sinh tinh trên chuột nhắt trắng béo phì thực nghiệm

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ NGUYỄN HỒNG TÍN NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CỦA CAO CHIẾT RỄ CAM THẢO TRÊN ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI, CHỨC NĂNG CHUYỂN HĨA, SINH TINH TRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG BÉO PHÌ THỰC NGHIỆM Chuyên ngành: Khoa học Y sinh (Y học Chức năng) Mã số: 8720101 LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS BS TRẦN THÁI THANH TÂM Cần Thơ - Năm 2022 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, kết nghiên cứu trình bày luận văn trung thực, khách quan chưa công bố nơi Tác giả luận văn Nguyễn Hồng Tín LỜI CẢM ƠN Để hồn thành luận văn này, tơi xin bày tỏ kính trọng gửi lời cảm ơn chân thành, sâu sắc đến: Ban Giám hiệu, Phòng Đào tạo Sau Đại học, Khoa Y, Bộ môn Sinh lý Trường Đại học Y Dược Cần Thơ quan tâm, hỗ trợ tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình học tập hồn thành luận văn Ban Giám đốc, Phịng Kế hoạch Tổng hợp, Khoa Xét nghiệm, Phịng Cơng nghệ Thơng tin Bệnh viện Trường Đại học Y Dược Cần Thơ tạo điều kiện thuận lợi cho gửi mẫu thu thập số liệu xét nghiệm TS.BS Trần Thái Thanh Tâm người Thầy trực tiếp hướng dẫn, hết lòng giảng dạy, theo dõi, giúp đỡ hỗ trợ cho tơi q trình học tập hồn thành luận văn Các Thầy, Cô giảng viên, kỹ thuật viên Bộ mơn Mơ Phơi, Bộ mơn Sinh hóa, Bộ mơn Giải phẫu bệnh - Pháp Y, Bộ môn Sinh lý bệnh - Miễn dịch, Liên Bộ môn Dược lý - Dược lâm sàng, Liên Bộ môn Dược liệu - Dược cổ truyền - Thực vật giúp học tập nhiều kinh nghiệm quý báu để tiến hành nghiên cứu thực nghiệm động vật, bào chế cao chiết thực xét nghiệm để có số liệu quan trọng cho luận văn Các Thầy, Cô giảng viên Bộ môn Sư phạm Sinh học - Khoa Sư phạm Bộ môn CNSH phân tử - Viện Nghiên cứu Phát triển CNSH, Đại học Cần Thơ giúp đỡ tơi q trình nghiên cứu định danh dược liệu Nguyễn Hồng Tín MỤC LỤC Trang Trang phụ bìa Lời cam đoan Lời cảm ơn Mục lục Danh mục chữ viết tắt Danh mục bảng Danh mục hình sơ đồ MỞ ĐẦU 01 Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 03 1.1 Đại cương rễ Cam thảo 03 1.2 Đặc tính sinh học chuột nhắt trắng đực 12 1.3 Béo phì, hội chứng chuyển hóa chức sinh tinh 15 1.4 Tình hình nghiên cứu ngồi nước 22 Chương 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 2.1 Đối tượng nghiên cứu 25 2.2 Dụng cụ, hóa chất, thiết bị nghiên cứu 26 2.3 Phương pháp nghiên cứu 28 2.4 Đạo đức nghiên cứu 44 Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 45 3.1 Đặc điểm chung động vật nghiên cứu 45 3.2 Đặc điểm hình thái, chức chuyển hóa glucose-lipid huyết chức sinh tinh chuột béo phì 45 3.3 Đặc điểm hình thái, chức chuyển hóa glucose-lipid huyết chức sinh tinh chuột béo phì uống cao chiết từ rễ Cam thảo 53 Chương 4: BÀN LUẬN 67 4.1 Đặc điểm chung động vật nghiên cứu 67 4.2 Đặc điểm hình thái, chức chuyển hóa glucose-lipid huyết chức sinh tinh chuột béo phì 68 4.3 Đặc điểm hình thái, chức chuyển hóa glucose-lipid huyết chức sinh tinh chuột béo phì uống cao chiết từ rễ Cam thảo 76 KẾT LUẬN 89 KIẾN NGHỊ 91 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC 1a: Phiếu thu thập số liệu PHỤ LỤC 1b: Hình ảnh nghiên cứu thực nghiệm PHỤ LỤC 2: Danh sách lô chuột sử dụng nghiên cứu DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT STT Chữ Angiotensin-converting ACE2 DNA Deoxyribonucleic acid BMI Body Mass Index CPT-11 ER Estrogen receptor GC Glycyrrhiza glabra HDL-c HFD IC50 10 IL 11 12 IVAC LDL-c Ý nghĩa Từ gốc viết tắt enzyme Men chuyển angiotensin Chỉ số khối thể Irinotecan Thụ thể estrogen High density lipoprotein- Cholesterol lipoprotein cholesterol tỷ trọng cao High-fat diet Chế độ ăn giàu chất béo Inhibitory concentration Nồng độ ức chế 50% 50% đối tượng thử nghiệm Interleukin The institute of Vaccines Viện vắc-xin sinh phẩm and Biological Medical Y tế Low density lipoprotein- Cholesterol lipoprotein cholesterol tỷ trọng thấp 13 LFO Licorice flavonoid oil 14 LPS Lipopolysaccharide 15 MetS Metabolic syndrome 16 NFD Normal-fat diet Tinh dầu flavonoid rễ Cam thảo Hội chứng chuyển hóa Chế độ ăn chất béo bình thường 17 NO Nitric oxide Organization for Economic 18 OECD Cooperation and Development triển Kinh tế Nghiệm pháp dung nạp 19 OGTT 20 PS 21 ROS Reactive oxygen species Các phản ứng oxy hóa SARS- Severe acute respiratory Virus corona gây hội chứng CoV-2 syndrome coronavirus hơ hấp cấp tính nặng Total flavonoid of Flavonoid tổng rễ Cam Glycyrrhiza uralensis thảo 22 Oral glucose tolerance test Tổ chức Hợp tác Phát glucose đường uống Polysaccharide 23 TFGU 24 TFNα Tumor necrosis factor α Yếu tố hoại tử khối u α 25 WHO World Health Organization Tổ chức Y tế Thế giới DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1: Tên, công thức tác dụng hợp chất hóa học phân lập từ Glycyrrhiza Bảng 1.2: Giá trị IC50 hợp chất từ Glycyrrhiza uralensis thông qua hoạt động ức chế sản xuất NO tế bào BV-2 Bảng 1.3: Một số quy trình bào chế cao chiết rễ Cam thảo Bảng 1.4: Thơng số sinh học chuột nhắt trắng 12 113 Bảng 1.5: Một số số sinh hóa máu chuột nhắt trắng đực 14 Bảng 1.6: Một số mơ hình gây suy giảm sinh sản thực nghiệm 21 Bảng 2.1: Thành phần dinh dưỡng thức ăn NFD HFD 31 Bảng 2.2: Các bước nhuộm Papanicolaou theo WHO 2021 41 Bảng 3.1: Đặc điểm hình thái chuột lúc bắt đầu nghiên cứu 45 Bảng 3.2: Cân nặng chuột lô sinh lý lơ mơ hình 45 Bảng 3.3: Tăng cân tuần chuột lô sinh lý lơ mơ hình 46 Bảng 3.4: Tỷ lệ tăng cân tuần chuột lô sinh lý lô mơ hình 46 Bảng 3.5: Chiều dài chuột lơ sinh lý lơ mơ hình 47 Bảng 3.6: BMI chuột lô sinh lý lô mô hình 47 Bảng 3.7: Vịng ngực chuột lơ sinh lý lơ mơ hình 48 Bảng 3.8: Vịng bụng chuột lô sinh lý lô mô hình 49 Bảng 3.9: Đường huyết chuột trước sau thực OGTT 49 Bảng 3.10: Khối lượng mỡ nội tạng chuột lô sinh lý lơ mơ hình 50 Bảng 3.11: Các số lipid máu chuột lô sinh lý lô mô hình 50 Bảng 3.12: Khối lượng quan sinh dục chuột lơ sinh lý lơ mơ hình Bảng 3.13: Các thông số tinh trùng chuột lơ sinh lý lơ mơ hình 50 51 Bảng 3.14: Sự tương quan BMI, lipid máu thông số tinh trùng Bảng 3.15: Nồng độ testosteron chuột lơ sinh lý lơ mơ hình 51 52 Bảng 3.16: Đường kính ống sinh tinh chuột lơ sinh lý lơ mơ hình 52 Bảng 3.17: Cân nặng chuột sau can thiệp 54 Bảng 3.18: Tăng cân tuần chuột sau can thiệp 55 Bảng 3.19: Tỷ lệ tăng cân tuần chuột sau can thiệp 55 Bảng 3.20: Chiều dài chuột sau can thiệp 56 Bảng 3.21: BMI chuột sau can thiệp 57 Bảng 3.22: Vòng ngực chuột sau can thiệp 57 Bảng 3.23: Vòng bụng chuột sau can thiệp 58 Bảng 3.24: Đường huyết chuột thực OGTT sau can thiệp 59 Bảng 3.25: Khối lượng mỡ nội tạng chuột sau can thiệp 59 Bảng 3.26: Các số lipid máu chuột sau can thiệp 61 Bảng 3.27: Nồng độ testosteron huyết chuột sau can thiệp 62 Bảng 3.28: Khối lượng quan sinh dục chuột 62 Bảng 3.29: Tỷ lệ tinh trùng di động tiến tới di động không tiến tới chuột sau can thiệp 64 Bảng 3.30: Tỷ lệ tinh trùng bất động, nồng độ tinh trùng tỷ lệ tinh trùng dị dạng chuột sau can thiệp Bảng 3.31: Đường kính ống sinh tinh chuột sau can thiệp 64 66 DANH MỤC CÁC HÌNH VÀ SƠ ĐỒ Trang Sơ đồ 1.1: Danh sách hợp chất có rễ Cam thảo vai trò chúng việc cải thiện bệnh lý Sơ đồ 2.1: Sơ đồ nghiên cứu 30 Sơ đồ 2.2: Quy trình bào chế cao chiết rễ Cam thảo 34 Hình 3.1: Hình thái đại thể sau can thiệp chuột số 112 (lô 1), chuột số 28 (lô 2), chuột số 100 (lô 3) chuột số 20 (lơ 4) 53 Hình 3.2: Mỡ thận phải sau can thiệp chuột 112 (lô 1), chuột 28 (lô 2), chuột 100 (lô 3) chuột 20 (lơ 4) 60 Hình 3.3: Mỡ thận trái sau can thiệp chuột 112 (lô 1), chuột 28 (lô 2), chuột 100 (lô 3) chuột 20 (lô 4) 60 Hình 3.4: Mỡ màng bụng sau can thiệp chuột 112 (lô 1), chuột 28 (lô 2), chuột 100 (lô 3) chuột 20 (lơ 4) 61 Hình 3.5: Hình ảnh đại thể quan sinh dục chuột sau can thiệp, chuột 112 (lô 1), chuột 28 (lô 2), chuột 100 (lô 3) chuột 20 (lô 4) 63 Hình 3.6: Mơ học tinh hồn chuột sau can thiệp, chuột lô (112), chuột lô (28), chuột lô (100), chuột lơ (20) 65 Hình 4.1: Hình thái chuột C57BL/6 sau 12 tuần can thiệp Licochalcon A (một chalcon phân lập từ Glycyrrhiza uralensis) 79 PHỤ LỤC 1b HÌNH ẢNH NGHIÊN CỨU THỰC NGHIỆM a b Hình 1: Quần thể chuột nhắt trắng đực cung cấp IVAC (hình a); Chuột sau nuôi ổn định chia lô nuôi lồng khác (hình b) a Hình 2: Rễ khơ Cam thảo lúc ban đầu (hình a) sau cắt thành lát mỏng (hình b) b c a b Hình 3: Bình chiết với ethanol 80% (hình a), quay máy Heidolph (hình b); cao đặc thành phẩm (hình c); đo độ ẩm (hình d) Hình 4: Dung dịch cao chiết rễ Cam thảo nồng độ 10% 20% d b a Hình 5: Thức ăn AniFood IVAC (hình a) mỡ heo (hình b) b a Hình 6: Cân điện tử (hình a) thước dây (hình b) a Hình 7: Kim lancet que thử đường huyết Precichek (hình a); Dung dịch Dextrose nồng độ 30% (hình b) b b a Hình 8: Thao tác cho chuột uống dung dịch glucose ưu trương (hình a) định lượng glucose máu tĩnh mạch chuột (hình b) a b Hình 9: Chuột cố định tư ngửa bàn mổ (hình a) bộc lộ trung thất trước lấy máu (hình b c) Hình 10: Thao tác lấy máu tim chuột c b a Hình 11: Bộc lộ quan (hình a) xác định cân nặng (hình b) MỠ MÀNG BỤNG MỠ THẬN PHẢI MỠ THẬN TRÁI Hình 12: Mỡ nội tạng chuột số 10 (lơ mơ hình) cuối tuần DƯƠNG VẬT MÀO TINH TÚI TINH TINH HOÀN Hình 13: Cơ quan sinh dục chuột số 10 (lơ mơ hình) cuối tuần a Hình 14: Máy Cobas C311 (hình a) máy Abbott Architect (hình b) b a b c Hình 15: Lọ chứa tinh hồn ngâm formal (hình a), kính hiển vi gắn máy ảnh (hình b) thước đo đường kính hình vi tính (hình c) a b Hình 16: Tinh trùng chuột ô vuông trung tâm buồng đếm Neubauer, vật kính X40 (hình a) sau nhuộm Papanicolaou, vật kính X100 (hình b) a b Hình 17: Dung dịch môi trường dinh dưỡng (a), ống Eppendorf đựng mẫu tinh dịch (b), tủ ấm Memmert (c) c a b c d Hình 18: Micropipette 10-100µl (a), Microtip Eppendorf 5-200μl (b), tiêu tươi vật kính X40 (c), nguyên tắc đếm để đánh giá độ di động (d) (Nguồn: WHO (2010) [81]) a b Hình 19: Dung dịch NaHCO3 5% (a), buồng đếm Neubauer cải tiến (b) (Nguồn: WHO (2010) [81]) Hình 20: Nguyên tắc đếm tinh trùng ô lưới (Nguồn: WHO (2010) [81]) a b c e d f g Hình 21: Các dụng cụ, hóa chất dùng để pha chế cồn (a: bình định mức, b: cồn kế, c: ống đong, d: pipet xác, e: ethanol 99,5%, f: becher, g: nước cất) a b c d e Hình 22: Thuốc nhuộm Papanicolaou: Harris’s hematoxylin (a), G-6 Orange (b), EA-50 Green (c), Xylene (d), Acid hydrochloric đậm đặc (e) a b Hình 23: Tiêu nhuộm (a) hình ảnh tinh trùng kính hiển vi (b) Hình 24: Hình thái tinh trùng (a: bình thường, b: khơng có móc đầu, c: đầu ghim, d: đầu cong, e: cuộn, f: kẹp tóc, g: đuôi uống cong) (Nguồn: Musa N H C cộng (2019) [61]) ... hành thực đề tài: Nghiên cứu tác dụng cao chiết rễ Cam thảo đặc điểm hình thái, chức chuyển hóa, sinh tinh chuột nhắt trắng béo phì thực nghiệm Đề tài thực với mục tiêu: Đánh giá thay đổi đặc điểm. .. đổi đặc điểm hình thái, chuyển hóa glucose-lipid huyết chức sinh tinh chuột nhắt trắng béo phì thực nghiệm Khảo sát tác dụng cao chiết rễ Cam thảo dựa thay đổi đặc điểm hình thái, chuyển hóa glucose-lipid... glucose-lipid huyết chức sinh tinh chuột béo phì 45 3.3 Đặc điểm hình thái, chức chuyển hóa glucose-lipid huyết chức sinh tinh chuột béo phì uống cao chiết từ rễ Cam thảo 53 Chương