Nghiên cứu tính đa hình di truyền và vai trò truyền bệnh của các thành viên trong nhóm loài Anopheles maculatus ở Việt Nam

Nghiên cứu tính đa hình di truyền và vai trò truyền bệnh của các thành viên trong nhóm loài Anopheles maculatus ở Việt Nam

Đại học quốc gia H Nội Trờng Đại học khoa học tự nhiên Nguyễn Thị Hơng Bình Nghiên cứu tính đa hình di truyền v vai trò truyền bệnh của các thnh viên trong nhóm loi Anopheles maculatus ở việt Nam Chuyên ngành: Di truyền học Mã số: 62.42.70.01 Tóm tắt Luận án tiến sỹ sinh học Hà Nội 2009 - 0 - Công trình đợc hoàn thành tại: Bộ môn Di truyền học, khoa Sinh học Trờng Đại học khoa học Tự nhiên, Đại học quốc gia Hà Nội Ngời hớng dẫn khoa học: PGS.TS. Trịnh Đình Đạt TS. Trần Đức Hinh Phản biện 1: GS.TSKH. Vũ Quang Côn Phản biện 2: PGS.TS. Phan Văn Chi Phản biện 3: PGS.TS. Lê Khánh Thuận Lụân án sẽ đợc bảo vệ trớc Hội đồng chấm luận án cấp Nhà nớc họp tại Trờng Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học quốc gia Hà Nội. Vào hồi 9 giờ 00 ngày 17 tháng 8 năm 2009 Có thể tìm hiểu luận án tại: - Th viện Quốc gia - Th viện Trờng Đại học khoa học Tự nhiên - Trung tâm thông tin - th viện Đại học Quốc gia Hà Nội - Th viện Viện Sốt rét-Ký sinh trùng-Côn trùng-Trung ơng -1 - Đặt vấn đề Những nghiên cứu về các côn trùng truyền bệnh, trong đó có muỗi Anopheles, trung gian truyền bệnh sốt rét ngày càng đợc đẩy mạnh trên mọi phơng diện: phân loại, phân bố, vai trò truyền bệnh, sinh học, tập tính và biện pháp phòng chống. Nhiều phơng pháp kỹ thuật, nghiên cứu mới nhằm phân loại và xác định nguồn gốc phát sinh đợc ứng dụng rất mạnh. Việc kết hợp giữa các phơng pháp nghiên cứu truyền thống với những phơng pháp sinh học phân tử là rất cần thiết để nghiên cứu các quần thể muỗi truyền bệnh. Nhiều loài muỗi lúc đầu đợc xác định nh một loài đơn, nhng trong quá trình nghiên cứu sâu về vai trò dịch tễ, đặc tính sinh học và bằng việc sử dụng các kỹ thuật mới, áp dụng các dấu hiệu nhận biết về di truyền, hoá sinh đã xác định chúng là những nhóm loài đồng hình (sibling species complex, cryptic species complex), v chúng có thể có vai trò truyền bệnh khác nhau. Loài muỗi Anopheles (Cellia) maculatus đợc Theobald phát hiện ở Hồng Kông, Trung Quốc vào năm 1901. Đây là loài muỗi phân bố rộng rãi ở vùng Đông phơng. Cho đến nay, phức hợp An. maculatus gồm ít nhất 12 loài thành viên. Nhiều thành viên trong nhóm này đã đợc xác định có vai trò truyền bệnh ở Malaysia, Thái Lan, Nepal, Trung Quốc, Singapore. ở Việt Nam, trớc đây, muỗi Anopheles maculatus đợc xác định là một loài đơn, phân bố rộng rãi ở vùng rừng núi toàn quốc. Những nghiên cứu gần đây về hình thái, tế bào cho thấy phức hợp loài này gồm ít nhất 6 loài đã đợc định tên và một số dạng cha xác định rõ vị trí phân loại. Đến nay loài An. maculatus vẫn đợc coi là vectơ truyền bệnh thứ yếu ở nớc ta. Nhiều vấn đề mang tính hệ thống liên quan đến phân loại, vai trò truyền bệnh của loài muỗi này ở Việt Nam cần đợc giải quyết. Với những lý do nêu trên chúng tôi tiến hành đề tài :Nghiên cứu tính đa hình di truyền và vai trò truyền bệnh của các thành viên trong nhóm loài Anopheles maculatus ở Việt Nam nhằm mục đích : 1. Xác định thành phần loài và phân bố của các thành viên trong phức hợp loài An. maculatus ở Việt Nam. 2. Xác định tính đa hình di truyền và mối quan hệ di truyền của các thành viên trong phức hợp loài. 3. Xác định vai trò truyền bệnh của chúng nhằm góp phần vào việc phòng chống vectơ sốt rét ở n ớc ta. -2 - Những đóng góp mới về mặt khoa học v ý nghĩa thực tiễn của luận án 1 - Lần đầu tiên đã phối hợp nhiều kiểu dấu hiệu từ dấu hiệu hình thái kiểu hình đến dấu hiệu di truyền tế bào, điện di enzym và phân tích phân tử ADN để nghiên cứu một nhóm loài đồng hình có vai trò truyền sốt rét ở Việt Nam và xác định mối quan hệ di truyền của các thành viên trong nhóm loài An. maculatus. 2- Lần đầu tiên đã xây dựng đợc bảng định loại hình thái đầy đủ các pha phát triển của các thành viên, đã định tên trong nhóm loài An. maculatus và lập bản đồ phân bố của chúng ở Việt Nam. 3- Đã bổ sung thêm về những đặc điểm đa hình sinh học, sinh thái học của muỗi và bọ gậy các thành viên trong nhóm loài An. maculatus ở Việt Nam 4- Đã xác định đợc khả năng truyền cả hai loài KST P.falciparum và P.vivax của muỗi An. maculatus. Cấu trúc của luận án Luận án có 188 trang (không kể phụ lục) bao gồm các phần: Đặt vấn đề (3 trang); chơng 1: Tổng quan tài liệu (40 trang); chơng 2: Đối tợng và phơng pháp nghiên cứu (17 trang); chơng 3: Kết quả nghiên cứu (83 trang); chơng 4: Bàn luận (20 trang); Kết luận và đề nghị (3 trang); các công trình đã công bố của tác giả có liên quan đến nội dung luận án (1 trang); những đóng góp mới của luận án (1 trang); tài liệu tham khảo (20 trang, gồm 27 tài liệu tiếng việt, 192 tài liệu tiếng Anh, 2 tài liệu tiếng Pháp) và phụ lục (32 trang). Luận án đợc trình bày với 33 bảng, 72 hình. Chơng 1 (3 hình), chơng 2 (8 bảng, 6 hình), chơng 3 (25 bảng, 63 hình). Phụ lục (10 bảng). Chơng 1: tổng quan ti liệu 1.1. Đại cơng về vấn đề nghiên cứu các loài đồng hình Nhiều loài muỗi là vectơ truyền bệnh sốt rét tồn tại nh thành viên của các phức hợp loài, trong đó có những loài truyền bệnh và những loài không có vai trò này (Torres và cs, 2000; Van Bostel và cs, 2001). Để nghiên cứu các phức hợp loài đồng hình đòi hỏi phải áp dụng nhiều phơng pháp khác nhau từ đơn giản đến phức tạp để kết hợp đợc u điểm của từng phơng pháp (Cockburn, 1997). 1.2. Đa hình di truyền và nghiên cứu đa hình di truyền ở muỗi Tính đa hình di truyền có thể đợc xác định tại mọi cấp độ tổ chức bao gồm từ số lợng nucleotit đến cấu trúc của ADN trong mỗi tế bào cũng nh số lợng, cấu trúc của nhiễm sắc thể, protein, hay hình thái cơ thể của mỗi loài trong các điều kiện tự nhiên khác nhau -3 - 1.2.1. Đa hình enzym và ứng dụng để nghiên cứu đa hình di truyền ở muỗi: Hiện tợng đa hình izozym trong tự nhiên là kết quả của đột biến gen cấu trúc của các locut kiểm soát việc tổng hợp các sản phẩm của gen, có tính ứng dụng cao, cung cấp những số liệu có giá trị cho những nghiên cứu về Anopheles. Những dấu hiệu về sự đa hình di truyền đã đợc phát hiện ở hầu hết các loài Anopheles nhất là ở các loài đồng hình. Có nhiều nhóm loài, phức hợp loài đã đợc nghiên cứu bằng phơng pháp này nh: An. minimus, An. dirus ở Châu á, An. quandrimaculatus ở Nam Mỹ, An. gambiae, An. funestus ở châu Phi( Coluzzi và cs, 1977; Narang và cs, 1989; Sylvie Marguin và cs, 1998) 1.2.2. Di truyền tế bào và ứng dụng trong nghiên cứu đa hình di truyền: Phơng pháp di truyền tế bào tập trung vào nghiên cứu nhiễm sắc thể của tế bào: nhiễm sắc thể khổng lồ (polytene chromosome) và bộ nhiễm sắc thể ở kỳ giữa nguyên phân (karyotype). Di truyền tế bào rất hữu ích trong việc phân biệt các loài đồng hình trong phức hợp loài An. gambiae (Coluzzi 1968, Green 1972), An. culicifacies (Green & Miles 1980; Subbarao và cs 1983) và An. maculatus (Green và cs 1985). Tần số của những đảo đoạn nhiễm sắc thể đợc sử dụng để nghiên cứu cấu trúc quần thể (Taylor và cs., 1993; Petrarca và cs, 2000; Kamau và cs, 2002). 1.2.3. Đại cơng về PCR và ứng dụng trong nghiên cứu đa hình di truyền ở muỗi. - Phản ứng PCR: Phản ứng PCR có ứng dụng rất hiệu quả để nghiên cứu sự khác nhau ở mức độ phân tử, xác định chính xác quan hệ tiến hoá của các loài. Các nhóm loài muỗi truyền bệnh quan trọng đều đã đợc sử dụng phản ứng PCR để định loại nh: An. gambiae (Scott, 1993); An. quandrimaculatus (Collins và cs 1996), An. dirus (Jian và Feng, 1997); An. sinensis (Ma Yajunvà cs, 1998), An. funestus (Kaumau, 2002; Anna Cohuet và cs, 2003). - Kỹ thuật RAPD-PCR và ứng dụng RAPD- PCR trong nghiên cứu đa hình ở muỗi : Kỹ thuật RAPD sử dụng mồi ngẫu nhiên tạo ra các đoạn nhân bản đa hình. Chỉ thị RAPD đợc dùng để phân tích và xác định mối quan hệ giữa các quần thể, loài sinh vật. Wilkerson và cs (1993) đã sử dụng RAPD-PCR để phân biệt 2 loài muỗi trong phức hợp Anopheles gambiae là An. gambiae và An. arabiensis. Phức hợp loài An. dirus cũng đợc Sylvie Manguin và cs (2002) phân biệt nhờ sử dụng kỹ thuật RAPD. -4 - - Đại cơng về PCR- RFLP vàứng dụng PCR- RFLP trong nghiên cứu đa hình muỗi:Phân tích PCR- RFLP dựa trên nguyên tắc là sự khác nhau về kích thớc của các phân đoạn đợc tạo ra do xử lý enzym giới hạn đối với các đoạn ADN đích đã đợc nhân bản. RFLP-PCR đợc sử dụng để phân biệt 2 loài trong phức hợp An.maculipennis ở Anh. An. maculatus có thể nhận biết đợc khi dùng enzym HaeII cắt đoạn ITS2 (Torress và cs, 2000). Favia và cs (1997) phân biệt 3 dạng An. gambiae bằng PCR-RFLP. - Kỹ thuật sử dụng mẫu dò ADN (DNA - probe): Sử dụng mẫu dò ADN dùng phân loại các loài vectơ sốt rét dựa trên đặc tính bắt cặp bổ sung của nucleotit. Các dòng mẫu dò ADN để có thể phân biệt đợc 5 trong 6 loài thuộc phức hợp Anopheles gambiae (Collins và cs, 1987). - Kỹ thuật đa hình cấu tạo sợi đơn (Single strand conformational polymorphism-SSCP): Kỹ thuật này phát hiện điểm đột biến trong các sản phẩm của phản ứng PCR. Sharpe và cs (1999) dùng SSCP để phân loại các loài thuộc series Myzomyia là An. aconitus, An. varuna và An. minimus. - Kỹ thuật khuếch đại một allen đặc biệt (Allene-specific amplification- ASA) Dựa vào thiết kế những mồi chỉ bắt cặp với một allen nhất định và allen đó đặc trng cho loài. Walton và cs (1999), Manguin và cs (2002) nghiên cứu phức hợp loài An. dirus bằng ASA. Năm 1999, Sharp và cs đã phân biệt các loài trong series Myzomyia bằng ASA. - Microsattellite ADN-SSR: Microsattellite đã đợc chứng minh là đặc biệt hữu ích cho việc nghiên cứu di truyền quần thể và lập bản đồ di truyền. ở châu á , Rongnoparus và cs (1996, 1999) đã phân tích các locut ở An. maculatus. ở Nam Mỹ, Conn và cs (2001) đã mô tả tính chất của 8 locut đa hình ở muỗi An.darlingi và ở châu Phi, Sharakhov và cs (2001) đã mô tả tính chất của 31 locut ở An.funestus. - Phơng pháp giải trình tự: Giải trình tự ADN là quá trình xác định trật tự nucleotit của một đoạn ADN nhất định. Các đoạn gen đợc giải trình tự nhiều ở muỗi là IST1, IST2, COI và COII cũng nh D3. Việc giải mã toàn bộ hệ gen An. gambiae, vectơ truyền bệnh sốt rét chính ở Châu Phi đã đợc bắt đầu vào năm 2001. Tháng 5/2007 các nhà khoa học đã phác thảo xong trình tự bộ gen của muỗi Aedes aegypti, vectơ truyền bệnh sốt dengue, dengue xuất huyết, sốt vàng. 1.3. Những nghiên cứu về vai trò truyền bệnh và tính a vật chủ của các vectơ 1.3.1. Những nghiên cứu về vai trò truyền bệnh sốt rét của muỗi Để chứng minh vai trò truyền bệnh của một vectơ ngời ta phải chứng minh đợc chúng có mang vật gây bệnh. Có nhiều phơng pháp để chứng minh điều này nh: mổ muỗi phát hiện thoa trùng (Ronal Ross, 1901). Kỹ thuật miễn dịch liên kết enzym (ELISA) và kỹ thuật PCR. -5 - 1.3.2. Xác định tính a vật chủ của vectơ Một biện pháp cơ bản để chứng minh đợc một loài muỗi có truyền bệnh hay không là xem muỗi có hút máu ngời hay không. Nếu xác định đợc một loài muỗi có tính a thích vật chủ là con ngời thì chúng ta có bằng chứng để nghĩ tới loài muỗi này có khả năng truyền bệnh cho ngời nhiều hơn loài khác không thích đốt máu ngời. Phơng pháp miễn dịch, xác định máu vật chủ trên thạch; năm 1986, Bukort và cs, đã áp dụng phơng pháp ELISA; và gần đây là sử dụng kỹ thuật PCR để xác định máu vật chủ. 1.4. Những nghiên cứu về nhóm loài An. maculatus 1.4.1. Nghiên cứu về An. maculatus ngoài nớc - Từ loài muỗi Anopheles maculatus đến nhóm loài An. maculatus: Loài muỗi Anopheles maculatus đợc Theobald phát hiện năm 1901 tại Hồng Kông. Hiện nay, tổng số loài đã đợc định tên là 12 loài, ngoài ra còn có một số dạng cha đợc định tên. - Vấn đề xác định các thành viên trong nhóm loài An. maculatus Các thành viên trong nhóm loài An. maculatus đợc định loại bằng nhiều phơng pháp nh: hình thái (thờng chỉ dựa vào dấu hiệu muỗi trởng thành, Rattanarithikul và Green [1986] cũng chỉ mô tả muỗi trởng thành và trứng của An. notanandai và An. sawadwongporni. Hai loài mới An. dispar và An. greeni ở Philippine của Rattanarithikul và Harbach (1990) có thể nói là bản mô tả đầy đủ nhất); dấu hiệu di truyền tế bào (Năm 1993, Baimai và cs đã mô tả bộ NST (Karyotype) của các thành viên trong nhóm loài An. maculatus ở vùng Đông Nam á, điện di enzym và phân tích ADN (những nghiên cứu điển hình là của Torres, 1999; C.Walton, 2007 và Ma Ya Jun 2002, 2006). - Phân bố: Nhóm loài An. maculatus phân bố rộng trong vùng Đông Phơng từ ấ n Độ, qua Miến Điện, Thái Lan, Lào, Campuchia, Việt Nam, Nam Trung Quốc; phía Đông Bắc đến Đài Loan, Trung Quốc; phía Tây Nam đến bán đảo Mã Lai, phía Đông đến quần đảo Philippine. - Đặc điểm sinh học: Tuỳ từng vùng phân bố, các thành viên trong nhóm loài có đặc điểm sinh học và sinh thái học khác nhau. Bọ gậy của chúng thờng thấy ở các mạch nớc, suối nhỏ có ánh sáng rọi trực tiếp hoặc không trực tiếp. Muỗi thích sống gần chuồng gia súc, ở những vùng muỗi a đốt máu ngời và là vectơ truyền bệnh chính, còn đại đa số các thành viên trong nhóm loài a đốt máu súc vật hơn và không có vai trò truyền bệnh. -6 - -Vai trò truyền bệnh: Anopheles maculatus s.l đợc coi là vectơ sốt rét quan trọng ở bán đảo Malaysia, Thái Lan, ấn Độ, Nepal, Miến Điện (Rao, 1984). 1.4.2. Nghiên cứu về An. maculatus trong nớc - Những nghiên cứu về sinh học, sinh thái học của muỗi An. maculatus: An. maculatus là loài muỗi hoang dại phân bố khá rộng, trú ẩn tiêu máu ngoài nhà là chủ yếu. An. maculatus phát triển mạnh vào mùa ma. Bọ gậy bắt đợc ở các suối ven rừng, có ánh sáng nhiều, đôi khi bắt đợc ở các ruộng lúa, giếng, vũng nớc ven suối. - Về vai trò truyền bệnh của An. maculatus: An. maculatus s.l đợc xác định là một vectơ truyền sốt rét thứ yếu ở Việt Nam, Toumanoff (1936) đã mổ thấy loài muỗi này mang thoa trùng và oocysts, Đặng Văn Ngữ (1966) cũng xác định tỷ lệ mang KST của loài muỗi này khoảng 1,9%. Chơng 2: Đối tợng v phơng pháp nghiên cứu 2.1. Đối tợng nghiên cứu: Các loài muỗi thuộc nhóm loài Anopheles maculatus ở Việt Nam. 2.2. Thời gian nghiên cứu, địa điểm nghiên cứu - Tháng 10-2001 đến tháng 12-2006 - Địa điểm thu mẫu trên toàn quốc 2.3. Phơng pháp nghiên cứu: Mô tả thực địa và phòng thí nghiệm. 2.3.1. Phơng pháp thu thập và xử lý mẫu vật tại thực địa Muỗi đợc thu thập và bảo quản theo phơng pháp chuẩn của Tổ chức Y tế Thế giới và Viện Sốt rét, Ký sinh trùng, Côn trùng (1975, 1987). 2.3.2. Nghiên cứu trong phòng thí nghiệm -Nuôi muỗi: Theo dòng gia đình để làm tiêu bản đồng bộ và phân tích các dấu hiệu di truyền theo dòng gia đình. - Phân loại muỗi dựa trên các dấu hiệu hình thái: theo R.Rattanarithikul và C. A. Green, 1986, R.Rattanarithikul và R.E. Harbach, 1990, Rattanarithikul và cs, 2006, J. A. Reid, 1968 , Lục Bảo Lân, 1997. - Phân tích đặc điểm di truyền tế bào: Làm tiêu bản bộ NST từ tế bào não bọ gậy tuổi 4 theo 2 phơng pháp: Phơng pháp của V.Baimai (1997) có sửa đổi và phơng pháp của Frank (1962) có cải tiến. Phân tích kết quả theo Baimai và cs (1993), xác định các đặc điểm cấu trúc, cân tâm, lệch tâm, cận tâm mút - Điện di enzym và phân tích kết quả điện di: Điện di trên gel cellullose acetate (Itan II, Helana Laboratories, U.K) theo phơng pháp của Smith và cs, 1996 với 11 hệ enzym: ODH, LDH, MDH, GPI, PGM, MPI, IDH, 6- PGD, -GPD, GOT, HAD. Phân tích kết quả theo Futuyma, D.J. 1986, sử dụng phần mềm TFPGA version 1.3 (Mark P. Miller, 1997): tính tần số alen, tính phù hợp với định -7 - luật cân bằng Hardy Weinberg, hệ số tơng đồng di truyền và khoảng cách di truyền. - Tách chiết ADN của muỗi: theo Collin và cs (1987) tủa ADN bằng ethanol. - Phơng pháp PCR-RFLP : Cắt sản phẩm nhân bản đoạn ITS2 của các loài trong nhóm An. maculatus bằng 10 enzym cắt giới hạn AluI, EcoRI, BamHI, HindIII, XbaI, MspI, Cfr131, HaeII, HindII, HeaIII. - Phơng pháp RAPD-PCR: tiến hành PCR với 7 mồi A1, A5, F2, F4, OPL1, OPA4, OPA10. Phân tích số liệu bằng phần mềm TFPGA 1.3, tính hệ số tơng đồng di truyền, khoảng cách di truyền và lập cây chủng loại phát sinh. - Phơng pháp giải trình tự: giải trình tự đoạn ITS2 trên máy AB3730. Xử lý và phân tích kết quả bằng phần mềm MEGA version 3.1. - Xác định ký sinh trùng trong muỗi bằng phơng pháp ELISA: Theo phơng pháp của Wirtz và cs (1987) với 3 loại kháng thể đơn dòng là P.falciparum, P.vivax 210 và P.vivax 247. - Kiểm tra lại mẫu ELISA dơng tính: bằng phơng pháp PCR lồng theo G.Snounou và cs (1992). Chơng 3: Kết quả nghiên cứu 3.1. Đa hình dấu hiệu kiểu hình của các thành viên trong nhóm loài An. maculatus 3.1.1. Đa hình các dấu hiệu hình thái của các thành viên trong nhóm loài An. maculatus Tổng số mẫu vật có thể sử dụng để nghiên cứu là 9583 mẫu bao gồm các mẫu vật nuôi theo dòng gia đình, muỗi trởng thành và bọ gậy thu thập từ tự nhiên (bảng 3.2). Bảng 3.1: Số lợng mẫu vật đã thu thập trong giai đoạn 2001-2005 Stt Tên muỗi Muỗi bắt TN Muỗi nuôi theo GĐ Bọ gậy Tổng cộng 1 An. maculatus 1161 483 1450 3544 2 An. dravidicus 18 26 19 63 3 An. notanandai 28 52 595 675 4 An. pseudowillmori 104 247 247 598 5 An. sawadwongporni 1950 386 1187 3523 6 An. willmori 36 104 249 389 7 Các dạng khác 324 189 278 791 Tổng cộng 4071 1487 4025 9583 Ghi chú: TN: tự nhiên GĐ: gia đình -8 - - Đa hình hình thái muỗi trởng thành của các thành viên trong nhóm loài An. maculatus Các thành viên của nhóm loài An. maculatus ở Việt Nam rất đa dạng về dẫn liệu hình thái. - An. maculatus: Tấm lng các đốt bụng II-IV không có vẩy trắng. Đốt bụng V-VIII đặc biệt là các đốt bụng VII-VIII tập trung nhiều vẩy trắng hình thìa. Không có vẩy đen chỗ chia nhánh gân cánh L 2 . Gân L 3 không có điểm đen dài ở giữa. - An. dravidicus: Các đốt bụng II-VIII đều có phủ vẩy trắng hình thìa. Gân L 3 ngoài 2 điểm đen ở gốc và ngọn, ở giữa còn có một băng đen dài hoặc một vài băng đen nhỏ ít nhất là ở một bên cánh. - An. notanandai: Tất cả các tấm lng đốt bụng II- VIII đều phủ vảy trắng, chỗ chia nhánh gân L 2 cánh có đám vảy đen. Phần cuối các tấm lng đốt bụng IV-VII có một hàng vẩy đen. - An. pseudowillmori: Tấm lng đốt bụng II- VII không có vảy trắng, chỉ có vảy trắng ở đốt bụng VIII. Thân L 2 ngắn, ô trớc cánh dài. - An. sawadwongporni: Tấm lng đốt bụng II- VIII phủ đầy vảy trắng hình thìa, đôi khi còn có một vài vảy đen ở 2 bên mép. Chỗ chia nhánh gân L 2 thờng có đám vảy đen ít nhất ở một bên cánh. Cuối các tấm lng đốt bụng chỉ có một chùm vẩy đen ở hai bên. - An. willmori: Các tấm lng trên các đốt đốt bụng II- VII phủ đầy vảy trắng, chỗ chia nhánh gân L 2 không có chùm vẩy đen. An. maculatus An. pseudowillmori An. sawadwongporni An. willmori An. notanandai An. dravidicus Hình 3.1: Đa hình hình thái muỗi trởng thành của các thành viên thuộc nhóm loài An. maculatus [...]... luận 4.1 Đa hình di truyền và mối quan hệ di truyền của các thành viên trong nhóm loài An maculatus - 20 4.1.1 .Đa hình các dấu hiệu kiểu hình của các thành viên trong nhóm loài An maculatus - Đa hình các dấu hiệu hình thái - Đa hình hình thái muỗi trởng thành: Kết quả nghiên cứu của chúng tôi cho thấy tính đa hình dấu hiệu hình thái giai đoạn muỗi trởng thành của các thành viên trong nhóm loài An maculatus. .. đổi trong loài, hoặc giữa các loài với nhau - Đa hình di truyền các dấu hiệu điện di enzym của các thành viên trong nhóm loài An maculatus Kết quả điện di 11 hệ izozym thấy hầu hết các locut gen của các thành viên trong nhóm loài An maculatus là đa hình, có giá trị để phân biệt các thành viên trong nhóm Tuy nhiên, sự đa hình của enzym 6GPD là có giá trị nhất trong việc phân loại các loài đồng hình. .. phân loại các thành viên trong nhóm loài Đa hình di truyền tế bào của nhóm loài An maculatus đợc thể hiện ở sự khác biệt về hình dạng và cấu trúc nhiễm sắc thể, đặc biệt là các nhiễm sắc thể giới tính 2 Các locut của các hệ izozym trong nghiên cứu này thể hiện tính đa hình cao, trong đó hệ enzym 6GPD có giá trị nhất trong việc phân loại các thành viên trong nhóm loài Số liệu điện di isozym của 6 loài đã... ITS2 và tạo các băng đa hình giữa các thành viên trong nhóm loài An maculatus ở các mức độ khác nhau 3.2.4 Kết quả đánh giá sự đa hình di truyền của các thành viên trong nhóm loài An maculatus dựa vào chỉ thị RAPD - Mồi A1: Các băng rõ nét và đa hình cao, tạo ra 26 băng có kích thớc từ 0,15 đến 1,5 kb Vùng có kích thớc là 0, 15 đến 0,4 kb chứa 12 băng đa hình có khả năng phân biệt các loài trong nhóm loài. .. hình di truyền các dấu hiệu kiểu gen của các thành viên trong nhóm loài An maculatus ở Việt nam - Đa hình các dấu hiệu di truyền tế bào ở các thành viên trong nhóm loài An maculatus Có thể dựa trên sự sai khác về cấu trúc phần nguyên nhiễm và dị nhiễm trên NST giới tính để phân biệt giữa các loài giữa các dạng An maculatus với nhau, có sự khác biệt về tổ hợp NST giới tính X và Y Sự khác biệt giữ các. .. tích đa hình dựa vào chỉ thị PCR-RFLP Mời enzym giới hạn đợc sử dụng cắt đoạn ITS2 của các thành viên trong nhóm loài An maculatus ở Việt Nam, hai enzym EcoRI và BamHI không cắt Các enzym Cfr131, MspI, AluI, HindI, HindIII, HeaII, HeaIII và XbaI đều có khả năng cắt đoạn ITS2 và tạo ra các băng đa hình khác biệt giữa các thành viên trong nhóm loài ở các mức độ khác nhau - Phân tích đa hình di truyền. .. thành viên trong nhóm loài rất đa hình và có nhiều dấu hiệu gối nhau Một số dấu hiệu thờng dùng để phân tích đa hình hình thái giai đoạn bọ gậy là: cấu trúc lông lá cọ (lông số 1) và hình thể các tấm kitin của các đốt bụng, số lợng các nhánh của lông số 4 đốt ngực giữa. (Hình 3.4) - 10 - Đa hình hình thái trứng Các dấu hiệu dễ nhận biết tính đa hình hình thái của pha trứng các thành viên trong nhóm loài. .. (mồi ngời trong nhà 0,7 1,32%; mồi ngời ngoài nhà 0,94- 4,49%) Nh vậy, muỗi An maculatus chủ yếu trú ẩn ngoài nhà và a đốt máu súc vật 3.2 Đa hình kiểu gen của các thành viên trong nhóm loài An maculatus 3.2.1 Đa hình di truyền các dấu hiệu di truyền tế bào của các thành viên trong nhóm loài An maculatus: Bộ NST 2n = 6, NST giới tính X, Y có hình thái khác nhau (Hình 3.30) - An maculatus: Các dạng có... trong nhóm loài An maculatus ở Việt Nam có nhiều điểm giống với muỗi ở Thái Lan - Về hình thái cơ quan sinh dục đực của các thành viên trong nhóm loài An maculatus: cơ quan sinh dục đực của các thành viên trong nhóm loài An maculatus rất đa hình và có những dấu hiệu gối nhau nhng vẫn đợc di truyền và có thể tách biệt giữa các loài với nhau dựa vào phân tích chi tiết các cấu tạo của nắp gai giao cấu (cấu... của nhóm loài qua dấu hiệu của các giai đoạn phát triển - Tính đa dạng các dấu hiệu sinh học, sinh thái học của các thành viên trong nhóm loài An maculatus - Đa dạng các kiểu ổ bọ gậy: Các kiểu ổ bọ gậy của các thành viên trong nhóm loài này đều có những đặc điểm chung: nguồn nớc thờng trong, có ánh sáng, các ổ nớc ngầm, đứng nhng có lu thông phù hợp cho tất cả các loài giống nh các nghiên cứu của Rattanarithikul . ITS2 và tạo các băng đa hình giữa các thành viên trong nhóm loài An. maculatus ở các mức độ khác nhau. 3.2.4. Kết quả đánh giá sự đa hình di truyền của các thành viên trong nhóm loài An. maculatus. và cs (1992). Chơng 3: Kết quả nghiên cứu 3.1. Đa hình dấu hiệu kiểu hình của các thành viên trong nhóm loài An. maculatus 3.1.1. Đa hình các dấu hiệu hình thái của các thành viên trong nhóm. thành viên trong nhóm loài Anopheles maculatus ở Việt Nam nhằm mục đích : 1. Xác định thành phần loài và phân bố của các thành viên trong phức hợp loài An. maculatus ở Việt Nam. 2. Xác định tính