Đang tải... (xem toàn văn)
1 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN NGUYỄN THỊ QUỲNH HOA NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP CÁC HỢP CHẤT PHENOLIC TỪ MỘT SỐ THỰC VẬT VIỆT NAM LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội 2012 Nguyễn Thị Q[.]
ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - NGUYỄN THỊ QUỲNH HOA NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP CÁC HỢP CHẤT PHENOLIC TỪ MỘT SỐ THỰC VẬT VIỆT NAM LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội - 2012 Nguyễn Thị Quỳnh Hoa Luận văn thạc sĩ khoa học MỤC LỤC Trang MỞ ĐẦU………………………………………………………………………………1 Chƣơng 1: TỔNG QUAN…………………………………………………………….3 1.1 Các hợp chất phenolic thực vật ……………………………………………… 1.1.1 Giới thiệu hợp chất phenolic thực vật………………………………3 1.1.2 Phân loại hợp chất phenolic…………………………………………….3 1.1.3 Hoạt tính sinh học hợp chất phenolic…………………………….9 1.1.4 Phƣơng pháp chiết phân lập hợp chất phenolic………………….10 1.1.4.1 Phƣơng pháp chiết…………………………………………………….11 1.1.4.2 Phƣơng pháp phân lập tinh định cấu chế………………………………… 14 1.1.4.3 Định tính xác trúc………………………………………16 1.2 Giới thiệu Chẹo phong (Engelhardtia spicata Lesh ex Blume)… 19 1.2.1 Đặc điểm học…………………………………………………….19 thực vật Nguyễn Thị Quỳnh Hoa Luận văn thạc sĩ khoa học 1.2.2 Nơi sống hái……………………………………………………… 19 1.2.3 Công dụng thu Chẹo phong…………………………………… 19 1.1.4 Một số nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học chi Engelhardtia (Juglandaceae)……………………………………………………….21 Ch-¬ng : NHIỆM VỤ VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU…………………23 2.1 NhiƯm vơ Luận văn 23 2.2 Ph-ơng pháp nghiên cứu.24 2.2.1 Các ph-ơng pháp phân tích, phân tách hỗn hợp phân lập hợp chất 24 2.2.2 Các ph-ơng pháp xác định cấu trúc 24 Chng : KT QUẢ VÀ THẢO LUẬN……………………………………… 26 3.1 Đối tƣợng nghiên cứu………………………………………………………… 26 3.2 Quy trình chiết phong…………………… 26 phần chiết 3.3 Phân tách phần (EG3)……………………………………….29 chiết 3.4 Phân tách phần (EG4)…………………………………………… 31 từ etyl chiết Chẹo axetat nƣớc Nguyễn Thị Quỳnh Hoa Luận văn thạc sĩ khoa học 3.5 Cấu trúc hợp chất đƣợc phân lập………………………………………….33 Chƣơng 4: THỰC NGHIỆM……………………………………………………….38 4.1 Thiết bị hóa chất…………………………………………………………… 38 4.2 Nguyên liệu thực vật…………………………………………………………….39 4.3 Điều chế phần phong……………………………… 39 4.4 Phân tích phân (EG3)……………………… 40 4.4.1 Phân tích sắc (EG3)……………… 40 ký chiết tách lớp phần mỏng 4.4.2 Phân tách phần (EG3)………………………………….40 4.5 Phân tách sắc kí (EG4)………………………………… 41 4.5.1 Phân tích sắc (EG4)…………………… 41 ký từ lớp chiết phần mỏng 4.5.2 Phân tách phần (EG4)……………………………………… 42 etyl chiết chiết cột Chẹo etyl etyl phần chiết phần chiết chiết axetat axetat axetat nƣớc nƣớc nƣớc 4.6 Hằng số vật lý kiện phổ hợp chất đƣợc phân lập…………… 43 KẾT LUẬN………………………………………………………………………….46 TÀI LIỆU THAM KHẢO………………………………………………………….47 Nguyễn Thị Quỳnh Hoa Luận văn thạc sĩ khoa học CÁC CHỮ VIẾT TẮT DÙNG TRONG LUẬN VĂN CC (Column Chromatography): Sắc ký cột thường trọng lực dung môi 13 C-NMR (Carbon 13 Nuclear Magnetic Resonance): Phổ cộng hưởng từ hạt nhân cacbon 13 DEPT (Distortionless Enhancement by Polarition Tranfer): Phổ DEPT ESI-MS (Electrospray Ionization-Mass Spectrometry): Phổ khối lượng phun bụi điện tử FC (Flash Chromatography): Sắc kí cột nhanh H-NMR (Proton Nuclear Magnetic Resonance): Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton LC (Liquid Chromatography): Sắc ký lỏng Mini-C (Mini-column Chromatography): Sắc kí cột tinh chế TLC (Thin-Layer Chromatography): Sắc kí lớp mỏng Nguyễn Thị Quỳnh Hoa Luận văn thạc sĩ khoa học MỤC LỤC CÁC HÌNH, CÁC BẢNG VÀ CÁC SƠ ĐỒ H×nh 1.1: Cấu trúc minh häa stilben lignin H×nh 1.2: Cấu trúc minh häa flavonoid, axit phenolic v tannin Hình 1.3: Cõy Cho phong ( Engelhardtia spicata Lesh ex Blume, Juglandaceae ) B¶ng 1.1: Phân loại hợp chất phenolic thiên nhiên Bảng 4.1: Hiệu suất điều chế phần chiết từ Chẹo phong Bảng 4.2: Phân tích phần chiết etyl axetat (EG3) TLC Bảng 4.3: Phân tích phần chiết nước (EG4) TLC Sơ đồ 1.1: Quy trình chung phân lập hợp chất phenolic Sơ đồ 3.1: Điều chế phần chiết hữu từ nguyên liệu thực vật Sơ đồ 3.2: Phân tách sắc kí phần chiết etyl axetat (EG3) Sơ đồ 3.3: Phân tách sắc kí phần chiết nước (EG4) Nguyễn Thị Quỳnh Hoa Luận văn thạc sĩ khoa học MỞ ĐẦU Các hợp chất phenolic thực vật axit phenolic, flavonoid flavonoid polyme ngày thu hút nhiều quan tâm tính chất chống oxi hóa, tác dụng phòng ngừa ung thư bệnh liên quan đến tim mạch hợp chất phenolic Các nghiên cứu (hóa học, dược lý học, lâm sàng) phần lý giải mối liên quan sức khỏe người việc tiêu thụ sản phẩm thực phẩm giàu hoạt chất phenolic thiên nhiên Các nghiên cứu theo hướng phát hợp chất có tác dụng dự phòng ung thư (cancer chemoprevention) thiết lập hướng ứng dụng hợp chất phenolic Các hợp chất phân tử nhỏ thường chất chống oxi hóa làm giảm phát triển bệnh ung thư cách ngăn chặn phát triển tế bào ung thư qua chế ngăn chặn hư hại ADN ức chế đảo ngược trình phát triển tế bào tiền ác tính có hư hại ADN Một chương trình nghiên cứu tác nhân dự phòng chống ung thư từ nguồn thực vật Việt Nam xây dựng sở lựa chọn nhóm hợp chất có cấu trúc tiềm năng; chương trình hợp chất phenolic có tác dụng dự phịng ung thư phát với tỷ lệ cao Chương trình nghiên cứu xác định thách thức đặt cho nhà hóa học hợp chất thiên nhiên cần có qui trình phân lập hiệu nhóm cấu trúc cần thiết từ nguồn nguyên liệu thực vật, qui trình phải dễ triển khai tiếp cho qui mô công nghệ phân lập lượng lớn hoạt chất hoạt chất hữu ích phát Các hợp chất phenolic chiếm vị trí đáng kể số nhóm hợp chất thiên nhiên có tác dụng dự phịng ung thư; chúng có cấu trúc đa dạng xuất phổ biến giới thực vật Việc phân lập hợp chất cho thử nghiệm hoạt tính sinh học thực phương pháp chiết sắc ký điều chế; nhiên phổ rộng độ tan hợp chất cho thấy qui trình phân lập nên giới hạn vào nhóm hợp chất phenolic Các sàng lọc sắc ký lớp mỏng Nguyễn Thị Quỳnh Hoa Luận văn thạc sĩ khoa học sơ xác định nhóm hợp chất phenolic phần chiết từ loài cây: Alnus nepalensis D Don (Betulaceae), Betula alnoides Buch Ham ex D Don (Betulaceae) Engelhardtia spicata Lesch ex Blume (Juglandaceae) Mục tiêu nghiên cứu luận văn xây dựng qui trình chiết phần chiết giàu hợp chất phenolic phân lập sắc ký hợp chất phenolic, sau cấu trúc xác các hợp chất phân lập xác định phương pháp phổ đại Qui trình áp dụng thành cơng để phân lập hợp chất phenolic thành phần từ Chẹo phong (E spicata Lesch ex Blume) Nguyễn Thị Quỳnh Hoa Luận văn thạc sĩ khoa học Chương TỔNG QUAN 1.1 Các hợp chất phenolic thực vật 1.1.1 Giới thiệu hợp chất phenolic thực vật [6] Các hợp chất phenolic hợp chất có nhiều vịng thơm với nhiều nhóm hydroxy Chúng phân bố rộng rãi giới thực vật sản phẩm trao đổi chất phong phú thực vật Hơn 8.000 cấu trúc phenolic tìm thấy, từ phân tử đơn giản axit phenolic đến chất polyme tannin Các hợp chất phenolic thực vật có tác dụng chống lại xạ tia cực tím ngăn chặn tác nhân gây bệnh, ký sinh trùng động vật ăn thịt, làm tăng màu sắc thực vật Chúng có khắp phận vậy, chúng phần thiếu chế độ ăn uống người Các hợp chất phenolic thành phần phổ biến thức ăn thực vật (trái cây, rau, ngũ cốc, ô liu, loại đậu, sô-cô-la, vv) đồ uống (trà, cà phê, bia, rượu, vv), góp phần tạo nên đặc tính cảm quan chung thức ăn thực vật Ví dụ, hợp chất phenolic làm tăng vị đắng, se trái nước trái cây, tương tác hợp chất phenolic, chủ yếu procyanidin glycoprotein nước bọt Các anthocyanin, sáu phân nhóm nhóm polyphenol thực vật lớn gọi flavonoid, tạo màu da cam, đỏ, xanh màu tím nhiều loại trái rau táo, quả, củ cải hành tây Các hợp chất phenolic biết đến hợp chất quan trọng ảnh hưởng đến hương vị khác biệt màu sắc loại rượu vang trắng, hồng đỏ, hợp chất phản ứng với oxy có ảnh hưởng đến việc bảo quản, lên men cất giữu rượu vang 1.1.2 Phân loại hợp chất phenolic [6, 10] Nguyễn Thị Quỳnh Hoa Luận văn thạc sĩ khoa học Các hợp chất phenolic có cấu trúc đa dạng chia thành 10 nhóm đưa Bảng 1.1 B¶ng 1.1: Phân loại hợp chất phenolic thiên nhiên Số nguyên tử cacbon C6 Phenol đơn giản Benzoquinon C6-C1 C6-C2 Nguồn gốc thực vật Cấu trúc Nhóm OH O O Axit benzoic Acetophenon COOH Cranberry, ngũ cốc CH3 Táo, mơ, chuối, súp lơ O Axit phenylaxetic COOH C6-C3 Axit cinnamic COOH CH2 Phenylpropen Cà rốt, cam, quýt,cà chua, rau bina, đào, ngũ cốc, lê, cà tím Cà rốt, cần tây, cam chanh, rau mùi tây O Coumarin O Nguyễn Thị Quỳnh Hoa Số nguyên tử Cacbon C6-C3 Nhóm Luận văn thạc sĩ khoa học Cấu trúc Nguồn gốc thực vật O Chromon O O C6-C4 Các loại hạt Naphthoquinon O C6-C1-C6 O Xanthon Xoài, măng cụt O C6-C2-C6 Stilben Nho O Anthraquinon O C6-C3-C6 Flavonoid O (C6-C3)2 Lignan, Neolignan Phân bố rộng Mè, lúa mạch đen, lúa mì, lanh 10 Nguyễn Thị Quỳnh Hoa Luận văn thạc sĩ khoa học Số nguyên tử Cacbon Nhóm Cấu trúc Nguồn gốc thực vật (C6-C1)n Tannin thủy phân Polyme không đồng Lựu, tạo thành từ axit phenolic mâm xôi đường đơn (C6-C3)n Lignin Các polime thơm liên kết Các hợp chất phenolic thực vật bao gồm stilben, lignan (Hình 1.1), axit phenolic, flavonoid tannin (Hình 1.2) Hình 1.1: Cấu trúc minh họa stilben lignan 11 Nguyễn Thị Quỳnh Hoa Luận văn thạc sĩ khoa học H×nh 1.2: Cấu trúc minh häa flavonoid, axit phenolic tannin Nguyễn Thị Quỳnh Hoa Luận văn thạc sĩ khoa học Các flavonoid polyphenol có nhiều thức ăn Một cấu trúc flavonoid nhân flavan, chứa 15 nguyên tử cacbon xếp theo ba vòng (C6-C3-C6), kí hiệu A, B C Các flavonoid chia thành sáu phân nhóm: flavon, flavonol, flavanol, falavanon, isoflavon anthocyanin theo trạng thái oxy hóa vịng C trung tâm Sự thay đổi cấu trúc chúng nhóm phần mức độ mơ hình hydroxyl hóa, methoxyl hóa, prenyl hóa, glycosyl hóa Một số chất flavonoid phổ biến bao gồm quercetin, flavonol có nhiều hành tây, bơng cải xanh, táo; catechin, flavonol tìm thấy trà số loại trái cây; naringenin, flavonol có bưởi; cyaniding glycoside, anthocyanin có nhiều loại trái mọng (nho đen, mâm xôi, blackberry, …) daidzein, genistein glycitein, isoflavon đậu tương Các axit phenolic chia thành hai nhóm: nhóm dẫn xuất axit benzoic chẳng hạn axit gallic nhóm dẫn xuất axit cinnamic axit coumaric, axit caffeic axit ferulic Axit caffeic axit phenolic phổ biến nhất, chứa nhiều loại trái rau quả, thường este hóa với axit quinic axit chlorogenic, hợp chất phenolic chủ yếu cà phê Một axit phenolic phổ biến khác axit ferulic, chất có ngũ cốc este hóa tạo thành hemicelluose có thành tế bào Các tannin nhóm lớn polyphenol phần ăn thường chia thành hai nhóm: nhóm tannin thủy phân nhóm tannin ngưng tụ Các tannin thủy phân hợp chất có chứa nhân glucose polyol khác, este hóa với axit galic tạo thành gallotannin, với axit hexahydroxydiphenic tạo thành gellagitannin Sự đa dạng cấu trúc hợp chất khả hình thành liên kết oxy Phản ứng oxy hóa phân tử tạo thành nhiều hợp chất oligomeric có khối lượng phân tử khoảng 2.000 đến 5.000 dalton Các tannin ngưng tụ oligome polymer flavan-3-ol liên kết 35 Nguyễn Thị Quỳnh Hoa Luận văn thạc sĩ khoa học với liên kết cacbon flavan Chúng coi proanthocyanidin chúng bị phân hủy thành anthocyanidin thơng qua phản ứng oxy hóa, điều kiện xúc tác axit, nhiệt độ với dung dịch rượu Sự đa dạng cấu trúc tannin kết biến đổi mơ hình thủy phân, lập thể ba trung tâm lập thể, vị trí loại liên kết flavan, mức độ mô hình glycosyl hóa, methoxyl hóa galloyl hóa 1.1.3 Hoạt tính sinh học hợp chất phenolic Do phân bố rộng rãi, polyphenol có vai trò sức khỏe người nên chế độ ăn uống dinh dưỡng ý năm gần Các nhà nghiên cứu nhà sản xuất thực phẩm tập trung vào polyphenol có đặc tính chống oxy hóa mạnh chế độ ăn uống, hiệu ứng đáng tin cậy chúng việc phòng ngừa chứng bệnh căng thẳng oxy hóa liên quan.Theo nghiên cứu dịch tễ học, hấp thụ hợp chất phenolic giảm nguy mắc bệnh tim mạch ngăn ngừa bệnh ung thư Hơn polyphenol cịn có tác dụng sinh lý học cụ thể việc ngăn ngừa điều trị bệnh [6] Các catechin tìm thấy nhiều hạt nho, trà, ca cao, có tác dụng chống oxy hóa có hiệu ngăn ngừa ung thư [30] Các tannin có nhiều rượu vang đỏ, trà loại hạt làm phát huy tác dụng sinh lý, chúng làm giảm áp lực máu, thúc đẩy đông máu, giảm nồng độ lipit huyết thanh, điều chỉnh đáp ứng miễn dịch ngăn ngừa hoại tử gan [10, 30] Các isoflavon, genistein daidzein (được tìm thấy đậu nành có ảnh hưởng tốt đến xương phụ nữ mãn kinh, với số tác dụng nội tiết tốt [30] Các procyanidin có nồng độ cao rượu vang đỏ, nho hạt nho, ca cao, nam việt quất, táo, có tác dụng chống viêm có ảnh hưởng tốt đến hệ thống mạch máu Chất sử dụng làm chất phụ gia thực phẩm để ngăn chặn q trình oxy hóa thành phần thực phẩm [30] 35 Nguyễn Thị Quỳnh Hoa Luận văn thạc sĩ khoa học Một stilben, resveratrol polyphenol đặc biệt, có tiềm chống ung thư chống lão hóa [30] Các quercetin (đại diện lớp flavonol, chứa nhiều hành tây, táo, rượu vang đỏ, cải xanh, trà) ức chế chất sinh ung thư có tác dụng chống oxy hóa huyết tương thể [30] 1.1.4 Phƣơng pháp chiết phân lập hợp chất phenolic 1.1.4.1 Phƣơng pháp chiết Chiết bước quan trọng tiền xử lý mẫu nghiên cứu, quy trình sử dụng nhiều dễ sử dụng, hiệu khả áp dụng rộng [8] Nói chung, hiệu suất chiết phụ thuộc vào dạng dung môi với độ phân cực khác nhau, thời gian chiết nhiệt độ, tỷ lệ mẫu dung môi thành phần hóa học đặc tính vật lý mẫu Độ tan phenolic định chất hóa học mẫu thực vật, độ phân cực dung môi sử dụng Các nguyên liệu thực vật chứa hợp chất phenolic từ hợp chất đơn giản (ví dụ: axit phenolic, anthocyanin) đến chất polymer hóa cao (ví dụ: tannin lượng khác nhau) Hơn hợp chất phenolic liên kết với thành phần thực vật khác cacbohydrat protein Do phụ thuộc vào hệ dung môi sử dụng chiết, hỗn hợp hợp chất phenolic tan dung môi chiết khỏi nguyên liệu thực vật Hỗn hợp chứa chất phi phenolic như: đường, tecpen, chlorophyll, axit hữu chất béo [11, 25] 1.1.4.1.1 Chiết dung môi Các phương pháp chiết hợp chất phenolic đơn giản (axit benzoic, andehit bezoic, axit cinnamic catechin) từ nguyên liệu rắn chủ yếu ngâm chiết với dung môi hữu Hiệu suất chiết phụ thuộc vào dạng dung môi với độ phân cực khác nhau, thời gian chiết đặc trưng vật lý mẫu chiết Ánh sáng, khơng khí nhiệt độ yếu tố thúc đẩy phản ứng thoái biến 35 Nguyễn Thị Quỳnh Hoa Các dung Luận văn thạc sĩ khoa học môi như: etanol, metanol, propanol, aceton, etyl acetat, kết hợp dung môi với tỷ lệ khác nước sử dụng để chiết hợp chất phenolic Nói chung, chiết dung mơi sử dụng độ phịng để tránh thoái biến hợp chất phenolic; nhiều nghiên cứu sử dụng nhiệt độ khoảng 2040oC Các hợp chất phenolic bị thủy phân nhiệt độ 80-95ºC (sự thủy phân axit) 45ºC (sự thủy phân bazơ) Các anthocyanin thường chiết từ nguyên liệu thực vật với dung mơi hữu axit hóa, phổ biến metanol Hệ dung môi phá hủy màng tế bào, hòa tan đồng thời anthocyanin ổn định chúng Tuy nhiên, axit đem lại thay đổi dạng gốc anthocyanin cách phá vỡ phức chúng với kim loại sắc tố [31] Việc thu hồi hợp chất phenolic từ nguyên liệu thực vật bị ảnh hưởng thời gian chiết nhiệt độ, thể tác dụng hịa tan thối hóa chất phân tích q trình oxy hóa Tăng nhiệt độ chiết thúc đẩy q trình hịa tan chất phân tích cách tăng độ tan tốc độ truyền khối Ngoài ra, độ nhớt sức căng bề mặt dung môi giảm xuống nhiệt độ cao hơn, giúp dung môi tiếp cận mẫu chiết, cải thiện tỷ lệ chiết Tuy nhiên, hợp chất phenolic dễ dàng bị thủy phân oxy hóa Thời gian chiết lâu dài nhiệt độ cao làm tăng khả trình oxy hóa hợp chất phenolic, giảm sản lượng phenol chất chiết xuất Ví dụ, thơng thường chiết cô đặc anthocyanin thường tiến hành nhiệt độ 20-50°C, nhiệt độ cao 70oC chứng minh gây thoái biến nhanh anthocyanin Vì vậy, yếu tố đóng vai trò quan trọng để lựa chọn phương pháp chiết hiệu trì ổn định hợp chất phenolic [11] 1.1.4.1.2 Chiết pha rắn (SPE) [11, 26] Chiết pha rắn (SPE) kỹ thuật chuẩn bị mẫu phân tích ngày hữu ích Với SPE, vấn đề liên quan đến chiết hai pha lỏng (LLE), chẳng hạn 35 Nguyễn Thị Quỳnh Hoa Luận văn thạc sĩ khoa học phân tách khơng hồn toàn, độ thu hồi thấp, sử dụng loại bỏ lượng lớn, dung mơi hữu đắt tiền tránh được, chi phí thiết bị cần thiết cho SPE cao so với LLE Kỹ thuật thường sử dụng để chuẩn bị mẫu lỏng chất phân tích bay khơng bay hơi, sử dụng với chất rắn chiết trước vào dung môi Các kỹ thuật SPE đa dạng với nhiều loại chất hóa học, chất hấp phụ, kích thước, cần thiết để lựa chọn sản phẩm SPE phù hợp cho ứng dụng mẫu chiết Phân tích SPE thử nghiệm để xác định hợp chất phenolic nho, rượu vang đồ uống Trường hợp chiết hợp chất phenolic từ mẫu dầu ô-liu nghiên cứu rộng rãi 1.1.4.1.3 Chiết chất lỏng siêu tới hạn (SFE) [4, 19, 24] Thông thường, hợp chất phenolic chiết từ mẫu thực vật phương pháp SPE kết hợp kỹ thuật khác, chẳng hạn chiết chất lỏng siêu tới hạn (SFE) SFE kỹ thuật cho ưu điểm so với phương pháp truyền thống, sử dụng nhiệt độ thấp, giảm tiêu thụ lượng cho chất lượng sản phẩm cao không dùng dung mơi pha hịa tan.Tuy nhiên, kỹ thuật áp dụng cho hợp chất phân cực thấp trung bình SFE thường mơ tả để chiết polyphenol, đặc điểm phương pháp cần tỷ lệ phần trăm cao chất biến cải hữu cơ, điều có nghĩa trình xảy điều kiện tới hạn Cacbon đioxit siêu tới hạn (SC-CO2) dung môi sử dụng rộng rãi cho SFE đặc điểm đặc biệt nó, điều kiện tới hạn (31,1ºC 73,8 MPa) sẵn có Đây phương pháp không độc hại, không dễ cháy nổ bền hóa học Tuy nhiên, SFE sử dụng CO2 làm dung môi chiết không áp dụng cho hợp chất phenolic CO2 phân cực thấp so với hầu hết phenol Thơng thường, q trình chiết có bước sau: mẫu nạp lên chất hấp phụ cột SPE cột lắp vào phận chiết SPE/SFE Các 35 Nguyễn Thị Quỳnh Hoa Luận văn thạc sĩ khoa học chất lỏng siêu tới hạn sử dụng, cacbon dioxit, phải qua cột SPE đổ đầy mẫu thủy phân Do đó, chất phân tích (các hợp chất phenolic) bị giữ lại tồn lượng dung mơi bẫy (ví dụ: metanol) nhiệt độ phịng thí nghiệm (các dung mơi bẫy làm lạnh tự nhiên suốt trình chiết giãn nở CO2) Cuối cùng, dịch chiết quay kiệt, hịa tan pha động, bơm trực tiếp vào hệ thống HPLC/ESI-MS 1.1.4.1.4 Chiết lỏng áp suất nén (PLE) [15,18] Chiết lỏng áp suất nén (PLE) sử dụng dung môi hữu áp suất cao nhiệt độ điểm sơi bình thường chúng Đây phương pháp đại để phân lập riêng chất phân tích từ mẫu rắn Nói chung, với LLE, mẫu rắn nạp vào phận chiết thép khơng gỉ chiết với dung mơi thích hợp nhiệt độ cao (40-200ºC) áp lực (5-300 psi) thời gian ngắn (5-15 phút) Các dịch chiết gộp vào bình thu mẫu loại khí nén Qui trình mơ tả Alonso-Salces cộng sự, dựa chiết polyphenol từ mẫu táo PLE chứng minh phương pháp chiết hiệu để phân lập polyphenol nhiệt độ cao sử dụng để đẩy nhanh q trình chiết 1.1.4.1.5 Chiết vi sóng (MAE) [5, 27] Cơng nghệ vi sóng thường biết đến với việc sử dụng để xử lý nhiệt Ví dụ, sử dụng trình nhiệt cho sản phẩm trái thương phẩm để đạt khử trùng nhanh êm dịu sản phẩm Đồng thời, vi sóng sử dụng để xác định độ ổn định hàm lượng polyphenol sau xử lý Công nghệ sử dụng để tăng q trình làm khơ rượu vang mẫu nho tươi, cải thiện tiền xử lý qui trình hữu ích để kiểm tra hợp chất phenolic Gần đây, phương pháp chiết vi sóng (MAE), cịn gọi q trình vi sóng hỗ trợ (MAP), áp dụng việc phát triển phương pháp chiết 35 Nguyễn Thị Quỳnh Hoa Luận văn thạc sĩ khoa học hợp chất hữu từ đất, trầm tích, hạt giống, mẫu thực phẩm Các nghiên cứu cho thấy chiết hiệu lượng lị vi sóng sử dụng Nghiên cứu Sutivisedsak cộng sự, chứng minh tiện ích vi sóng xác định hàm lượng phenolic tám loại đậu thông thường, sử dụng phương pháp đo màu FolinCiocalteau 1.1.4.1.6 Chiết siêu âm (UAE) [8, 18, 32] Bức xạ siêu âm trợ giúp mạnh mẽ bước khác q trình phân tích Năng lượng giúp nhiều việc xử lí mẫu rắn làm dễ dàng tăng tốc độ trình chiết hợp chất hữu vô cơ, đồng nhiều ứng dụng khác Ví dụ, hệ thống chiết siêu âm sử dụng rộng rãi để chiết xuất capsaicinoid ớt nóng Chiết siêu âm (UAE) cho kỹ thuật chiết đơn giản dễ thực thiết bị thông thường phịng thí nghiệm Trong phương pháp này, mẫu nghiền nát trộn với dung mơi thích hợp đặt vào bể siêu âm, nơi mà nhiệt độ thời gian chiết định Các ứng dụng chiết siêu âm (UAE) công nghệ chế biến thực phẩm dễ cho việc chiết thành phần từ nguyên liệu thực vật Hiệu suất cao đạt qui trình UAE quan tâm lớn từ khía cạnh cơng nghiệp, công nghệ UAE bước thêm vào qui trình có với thay đổi tối thiểu, sử dụng chiết nước, giảm lượng dung môi sử dụng rút ngắn thời gian chiết Sử dụng siêu âm cho nguyên liệu chiết thô đắt tiền thay kinh tế phương pháp chiết truyền thống, yêu cầu phát triển công nghiệp Siêu âm tăng cường q trình chiết có cho phép chiết polyphenol carotenoid hai hệ thống chiết dịch nước dung môi Các thử nghiệm chiết hỗ trợ siêu âm chứng minh cải tiến hiệu suất chiết từ đến 35% 1.1.4.2 Phƣơng pháp phân lập tinh chế 35 ... công để phân lập hợp chất phenolic thành phần từ Chẹo phong (E spicata Lesch ex Blume) Nguyễn Thị Quỳnh Hoa Luận văn thạc sĩ khoa học Chương TỔNG QUAN 1.1 Các hợp chất phenolic thực vật 1.1.1... (Juglandaceae) Mục tiêu nghiên cứu luận văn xây dựng qui trình chiết phần chiết giàu hợp chất phenolic phân lập sắc ký hợp chất phenolic, sau cấu trúc xác các hợp chất phân lập xác định phương pháp... thiệu hợp chất phenolic thực vật? ??……………………………3 1.1.2 Phân loại hợp chất phenolic? ??………………………………………….3 1.1.3 Hoạt tính sinh học hợp chất phenolic? ??………………………….9 1.1.4 Phƣơng pháp chiết phân lập hợp chất