Khóa luận tốt nghiệp đại học biểu hiện hệ vector tái lập trình trên tế bào gốc tạo máu của người nhằm tạo tế bào gốc vạn năng cảm ứng (ipsc)

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NGUYỄN THÙY LINH Tên đề tài: BIỂU HIỆN HỆ VECTOR TÁI LẬP TRÌNH TRÊN TẾ BÀO GỐC TẠO MÁU CỦA NGƯỜI NHẰM TẠO TẾ BÀO GỐC VẠN NĂNG CẢM ỨNG (iPSC) KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo: Chính quy Ngành: Công nghệ Sinh học Chuyên ngành: CNSH - CNTP Khóa học: 2015 – 2019 THÁI NGUYÊN, 2019 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NGUYỄN THÙY LINH Tên đề tài: BIỂU HIỆN HỆ VECTOR TÁI LẬP TRÌNH TRÊN TẾ BÀO GỐC TẠO MÁU CỦA NGƯỜI NHẰM TẠO TẾ BÀO GỐC VẠN NĂNG CẢM ỨNG (iPSC) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo: Chính quy Ngành: Công nghệ Sinh học Lớp: K47 – CNSH Chuyên ngành: CNSH - CNTP Khóa học: 2015 – 2019 Giảng viên hướng dẫn: TS Nguyễn Xuân Hưng PGS.TS Dương Văn Cường THÁI NGUYÊN, 2019 i LỜI CẢM ƠN Trước hết tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới TS Nguyễn Xuân Hưng – Phó viện trưởng kiêm Trưởng phòng Nghiên cứu khoa học Viện Nghiên cứu Tế bào gốc công nghệ gen Vinmec PGS.TS Dương Văn Cường – giảng viên Khoa Công nghệ sinh học Công nghệ thực phẩm, Trường Đại học Nông Lâm Thái Ngun tận tình hướng dẫn tơi suốt q trình thực đề tài Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới Ths Trần Thị Tuyết Trinh – kỹ thuật viên Viện Nghiên cứu Tế bào gốc công nghệ gen Vinmec, người trực tiếp hướng dẫn thực đề tài nghiên cứu Tôi cũng xin gửi lời cảm ơn đến cán Viện nghiên cứu Tế bào gốc Công nghệ gen TS Nguyễn Hồng Thanh, TS Đào Thị Mai Lan… hỗ trợ nhiệt tình cho tơi q trình hồn thành khóa luận tốt nghiệp Tơi cũng xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô giáo Khoa Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm, thầy cô, cán trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên đồng hành suốt thời gian học tập nghiên cứu Cuối cùng, cũng xin chân thành cám ơn bạn bè, gia đình, người giúp đỡ, động viên chỗ dựa tinh thần vững cho suốt thời gian qua Thái Nguyên, ngày 27 tháng 05 năm 2019 Sinh viên Nguyễn Thùy Linh ii DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1: So sánh tế bào gốc phôi tế bào gốc vạn cảm ứng 10 Bảng 2.1: Phân loại tế bào gốc theo tiềm biệt hóa 11 Bảng 3.1: Hóa chất sử dụng thí nghiệm 21 Bảng 3.2: Thiết bị sử dụng thí nghiệm 23 Bảng 3.3: Dụng cụ vật tư dùng thí nghiệm 24 Bảng 3.4: Thiết kế thí nghiệm Flow cytometry 28 Bảng 3.5: Thành phần vector tái lập trình pCEB-hUL-G pCEB-hSK-O 29 Bảng 3.6: Thành phần phản ứng PCR 35 Bảng 3.7: Thành phần phản ứng tổng hợp cDNA 35 Bảng 3.8: Trình tự mồi sử dụng thí nghiệm 37 Bảng 3.9 Thành phần phản ứng Real time PCR 37 Bảng 4.1: Kết thu độ tinh nồng độ DNA plasmid mini 39 Bảng 4.2: Kết thu độ tinh nồng độ DNA plasmid maxi 40 Bảng 4.3: Kết đo OD sau lần tách RNA 50 iii DANH MỤC HÌNH Hình 2.1: Định nghĩa tế bào gốc Hình 2.2: Lịch sử đời tế bào gốc vạn cảm ứng Hình 2.3: Ứng dụng iPSC lĩnh vực trị liệu gen, mơ hình bệnh khám phá thuốc Hình 2.4: Cấu trúc miền protein OCT4 12 Hình 2.5: Cấu trúc miền protein SOX2 .13 Hình 2.6: Cấu trúc miền protein KLF4 14 Hình 2.7: Cấu trúc miền protein MYC .15 Hình 2.8: Cấu trúc miền protein LIN28 .16 Hình 2.9: Cấu trúc miền protein GLIS1 .17 Hình 2.10: Một số loại tế bào dùng để tạo iPSC 18 Hình 2.11: So sánh phương pháp biểu gene tái lập trình 20 Hình 3.1: Sơ đồ bố trí thí nghiệm đề tài 25 Hình 3.2: DNA Plasmid dùng để tái lập trình 28 Hình 3.3: Chu trình nhiệt PCR cDNA 36 Hình 3.4: Chu trình nhiệt cài đặt cho máy Real-time PCR .37 Hình 4.1: Kết tách chiết DNA plasmid mini 39 Hình 4.2: Kết tách chiết DNA plasmid maxi .40 Hình 4.3: Tế bào CD34+ sau rã đông 41 Hình 4.4: Tế bào CD34+ sau ngày nuôi tăng sinh 42 Hình 4.5: Tế bào CD34+ sau ngày nuôi tăng sinh 43 Hình 4.6: Tế bào CD34+ sau ngày nuôi tăng sinh 43 Hình 4.7 Sự biểu tế bào CD34 bề mặt quần thể tế bào nuôi tăng sinh 45 Hình 4.8: Tế bào sau ngày xung điện 47 Hình 4.9: Quần thể tế bào sau ngày chuyển gen (A), sau ngày chuyển gen (B) sau ngày chuyển gen (C) 48 iv Hình 4.10: Tế bào sau ngày xung điện 49 Hình 4.11: Quần thể tế bào sau ngày chuyển gen (A), sau ngày chuyển gen (B), sau ngày chuyển gen (C) 49 Hình 4.12: (A)Biểu gen SOX2-KLF4 LMYC- LIN28 (B) Cấu trúc vector pCEB-hSK-O pCEB-hUL-G 51 v DANH MỤC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT Từ đầy đủ Từ viết tắt BSA Bovine serum albumin cDNA complementary DNA DMSO dimethylsulfoxide DNA Deoxyribonucleic acid E coli Escherichia coli ESC Embryonic stem cell hiPSC Human induced pluripotent stem cell HMG High mobility group HSC Hematopoietic stem cell ICM Inner cell mass iPSC Induced pluripotent stem cell LB Laria Broth mESC Mouse embryonic stem cell PBMC Peripheral blood mononuclear cell PCR Polymerase chain reaction qRT-PCR Quantitative polymerase chain reaction Ref Reference RNA Ribonucleic acid RT Reverse transcription Tg Target vi MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i DANH MỤC BẢNG ii DANH MỤC HÌNH iii DANH MỤC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT v Phần MỞ ĐẦU 1.1.Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu đề tài 1.2.1 Mục tiêu tổng quát 1.2.2 Mục tiêu cụ thể 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn 1.3.1.Ý nghĩa khoa học đề tài 1.3.2.Ý nghĩa thực tiễn đề tài Phần TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan đối tượng nghiên cứu 2.1.1 Tế bào gốc 2.1.2 Lịch sử đời tế bào gốc vạn cảm ứng 2.1.3 Phân loại tế bào gốc 2.2 Các nhân tố tái lập trình 12 2.2.1 OCT4 12 2.2.2 SOX2 13 2.2.3 KLF4 14 2.2.4 MYC 15 2.2.5 LIN28 16 2.2.6 GLIS1 17 2.3 Tế bào nguồn dùng để tạo iPSC 18 Phần ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 3.1 Đối tượng nghiên cứu phạm vi nghiên cứu 21 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu 21 vii 3.1.2 Địa điểm thời gian 21 3.2 Nội dung nghiên cứu 21 3.3 Vật liệu phương pháp nghiên cứu 21 3.3.1 Vật liệu 21 3.3.2 Phương pháp nghiên cứu .25 Phần KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU .39 4.1 Kết nhân plasmid lần 39 4.2 Kết nhân plasmid lần .40 4.3 Kết nuôi tăng sinh tế bào gốc tạo máu lần 41 4.4 Kết nuôi tăng sinh tế bào gốc tạo máu lần 43 4.5 Hình thái chất lượng tế bào sau chuyển gen lần .46 4.6 Hình thái chất lượng tế bào sau chuyển gen lần .48 4.7 Kết kiểm tra biểu gen 50 Phần KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 53 5.1 Kết luận 53 5.2 Kiến nghị 53 TÀI LIỆU THAM KHẢO Phần MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Tế bào gốc phôi (Embryonic stem cell - ESC) tế bào vạn năng, có khả tự làm có nguồn gốc từ khối tế bào bên (inner cell mass – ICM) phôi nang phát triển [44] Tế bào gốc phơi nuôi cấy vô thời hạn trì khả tạo loại tế bào thể, đó cung cấp cơng cụ mạnh mẽ để mơ hình hóa bệnh người [8] nhiên tế bào gốc phôi vướng phải nhiều tranh cãi đạo đức sử dụng trực tiếp nguồn phôi người [3] Việc Yamanaka khám phá tế bào trưởng thành nguyên vẹn có thể tái lập trình để trở thành tế bào gốc vạn coi bước đột phá lớn Các tế bào gốc vạn cảm ứng (induced pluripotent stem cell iPSC) đại diện thay cho nguồn tế bào gốc phôi, không gây tranh cãi đạo đức mang đầy đủ đặc tính tế bào gốc phơi Một lợi quan trọng iPSC khả tương thích miễn dịch sử dụng liệu pháp tế bào tự thân [30] Tế bào gốc vạn cảm ứng tạo từ nhiều loại tế bào sinh dưỡng khác có tương đồng cao với tế bào gốc phôi Với nguồn tế bào sinh dưỡng dễ tiếp cận, iPSC từ người không loại bỏ vấn đề đạo đức vướng phải sử dụng ESC mà cho phép tạo nguồn tế bào gốc vạn đơn giản hơn, cũng biệt hóa thành nhiều loại tế bào chuyên biệt cho bệnh nhân Tương tự ESC, iPSC người có khả tăng sinh mạnh mẽ ống nghiệm giữ tiềm phát triển biệt hóa thành tế bào thể Do đó, tế bào cung cấp số lượng khơng giới hạn nguồn tế bào biệt hóa dành riêng cho bệnh nhân để tạo mơ hình nghiên cứu bệnh, xét nghiệm độc tính, sàng lọc thuốc sử dụng cho liệu pháp cấy ghép Việc tạo tế bào gốc vạn cảm ứng cách đưa yếu tố tái lập trình vào tế bào sinh dưỡng phương pháp đầy hứa hẹn cho liệu pháp tế bào y học tái tạo 2 Các dòng iPSC từ người bắt đầu phát triển, quan tâm nghiên cứu nhiều giới, nhiên chủ yếu dòng phát triển từ tế bào sinh dưỡng có hệ gen người da trắng, tính đến chưa có dịng iPSC người Việt Nam Hệ gene người Việt Nam khác với nước giới vị trí địa lý, khí hậu, phong tục tập qn, chúng tơi tiến hành tạo dịng iPSC phù hợp với hệ gene người Việt Nam, làm công cụ hữu ích để nghiên cứu chế bệnh, khám phá sàng lọc độc tính loại thuốc đặc biệt trở thành nguồn tế bào vô hạn sử dụng cho cấy ghép y học tái tạo Mặc dù tiến nhanh chóng, nghiên cứu ứng dụng tế bào gốc Việt Nam giới hạn việc sử dụng tế bào gốc đa với khả biệt hoá thành số hữu hạn dòng tế bào, nghiên cứu iPSC bắt đầu chuột từ năm 2016 Từ sở khoa học nêu trên, lựa chọn đề tài: “Biểu hệ vector tái lập trình tế bào gốc tạo máu người nhằm tạo tế bào gốc vạn cảm ứng (iPSC)” 1.2 Mục tiêu đề tài 1.2.1 Mục tiêu tổng quát Biểu thành cơng hệ vector tái lập trình tế bào gốc tạo máu người 1.2.2 Mục tiêu cụ thể - Nuôi cấy tăng sinh tế bào gốc tạo máu người - Điện biến nạp hệ vector tái lập trình mã hóa protein OCT4, SOX2, KLF4, L-MYC, LIN28, GLIS1 vào quần thể tế bào gốc tạo máu người - Kiểm tra biểu gen yếu tố tái lập trình tế bào gốc tạo máu sau điện biến nạp 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn 1.3.1 Ý nghĩa khoa học đề tài - Là tiền đề để tạo thành cơng dịng tế bào gốc vạn cảm ứng từ tế bào có hệ gen người Việt Nam, đánh dấu bước phát triển quan trọng lĩnh vực Việt Nam 3 - Tạo dòng iPSC người Việt Nam để cung cấp khối lượng lớn tế bào làm mơ hình cho nghiên cứu biệt hóa, nghiên cứu sàng lọc thuốc 1.3.2 Ý nghĩa thực tiễn đề tài - Chuyển gen thành công bước đầu quan trọng cần thiết quy trình tạo dịng tế bào gốc vạn cảm ứng 4 Phần TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan đối tượng nghiên cứu 2.1.1 Tế bào gốc Tế bào gốc loại tế bào đặc biệt thể Hai đặc điểm đặc trưng tế bào khả nhân đôi vô hạn khả biệt hóa thành nhiều loại tế bào sinh dưỡng khác [43] Nhờ chúng có khả tái tạo, sửa chữa thay tế bào chết, tổn thương thể Tên gọi tế bào gốc hình thành cũng khả biệt hóa thành loại tế bào khác khiến người ta liên tưởng đến hình ảnh gốc phân nhánh, nhánh hình thành cành, lá, Hình 2.1: Định nghĩa tế bào gốc 2.1.2 Lịch sử đời tế bào gốc vạn cảm ứng - Năm 1962, John B Gurdon phát DNA tế bào trưởng thành ếch có lưu thông tin để phát triển thành tế bào thể ếch điều có nghĩa tế bào người trưởng thành cũng có thể tái lập trình [3] - Năm 1981, Martin Evans Martin Kaufman, Gail Martin phân lập tế bào gốc phôi từ phôi chuột [3] 5 - Năm 1997, Sir Ian Wilmut cộng chuyển nhân vào tế bào sinh dưỡng để lập trình lại tế bào nhằm nhân cừu Dolly, loại động vật có vú tạo nhân tế bào sinh dưỡng [3] - Năm 1998, James Thomson phân lập tế bào gốc phôi người [3] - Năm 2001, Tada cộng dung hợp tế bào sinh dưỡng với tế bào gốc phôi để tạo tế bào có khả biểu gen liên quan đến tế bào đa cho thấy ESC có chứa số yếu tố lập trình lại tế bào sinh dưỡng [3] - Năm 2006, nhà khoa học Nhật Bản Mỹ tạo tế bào gốc phơi hồn tồn từ tế bào trưởng thành Tế bào gốc vạn cảm ứng tạo nhờ chuyển bốn gen kích hoạt tái lập trình để tạo tế bào có đặc tính giống tế bào gốc thu nhận phơi [3] Hình 2.2: Lịch sử đời tế bào gốc vạn cảm ứng 2.1.3 Phân loại tế bào gốc Có thể phân loại tế bào gốc theo tiềm biệt hóa phân loại theo nguồn gốc [48] Theo tiềm biệt hóa (differentiation potency) đa dạng tế bào, nhà nghiên cứu chia tế bào gốc thành loại khác [8]: tế bào gốc toàn (Totipotent), tế bào gốc vạn (Pluripotent), tế bào gốc đa (Multipotent) tế bào gốc đơn (Unipotent) 6 a Tế bào gốc toàn Các tế bào thuộc giai đoạn từ bốn đến tám tế bào q trình phát triển phơi sau thụ tinh gọi tế bào gốc toàn năng, chúng tồn giai đoạn phát triển phôi sớm Với tế bào gốc toàn năng, tế bào ban đầu hình thành thể hồn chỉnh Chúng có tiềm cao nhiều để trở thành tất tế bào thể Ở động vật có vú trưởng thành (bao gồm người), có khoảng 200 loại tế bào thuộc nhóm tế bào thần kinh, tế bào cơ, tế bào biểu mô, tế bào máu,…Những tế bào khác, chất cũng phát triển từ phôi, không hợp tạo thể gồm: mơ ngồi phơi, thai, dây rốn Các dạng tạo từ tế bào tồn Những tế bào giai đoạn phơi sớm đến giai đoạn phơi nang cũng có tính tồn cũng có thể tạo thể hoàn chỉnh [1] b Tế bào gốc vạn - Tế bào gốc phôi Cuối thập niên 20 đánh dấu bùng nổ hướng nghiên cứu non trẻ đầy tiềm năng, đó công nghệ tế bào gốc, với khởi điểm việc James Thomson phân lập tế bào gốc từ phôi người (1998) [18] Các tế bào gốc phôi tế bào đa có thể phân lập từ khối tế bào bên tiền phôi Tế bào gốc phôi lên ứng cử viên hấp dẫn cho liệu pháp dựa tế bào có khả phục hồi chức tế bào mô bị Những tế bào độc đáo có thể tự làm vơ thời hạn có khả biệt hóa thành ba lớp mầm phơi (lá trong, giữa, ngồi) Ba mầm phơi nguồn gốc tất loại tế bào chuyên biệt khác thể Thử nghiệm lâm sàng tế bào gốc phôi để điều trị chấn thương tủy sống thoái hóa điểm vàng năm 2010 đánh dấu khởi đầu kỷ nguyên y học tái tạo [40] Tuy nhiên nghiên cứu châm ngòi cho tranh luận vấn đề đạo đức nguồn sử dụng phôi người Tế bào gốc phơi tiêm vào vị trí tổn thương có khả hình thành nên khối u quái (teratomas) vị trí tiêm Do đó tế bào gốc cần định hướng biệt hóa thành tế bào mong muốn trước tiêm vào vị trí tổn thương Hiện có số kỹ thuật dùng để kiểm sốt biệt hóa tế bào gốc ni cấy thực nghiệm, ví dụ: thay đổi thành phần hóa học mơi trường ni cấy, tác động vào bề mặt đĩa nuôi cấy (tạo giá thể), hay gài gen đặc hiệu vào tế bào - Tế bào gốc vạn cảm ứng Vào năm 1962, John B Gurdon phát DNA tế bào trưởng thành ếch có lưu thông tin để phát triển thành tế bào thể ếch điều có nghĩa tế bào người trưởng thành cũng có thể tái lập trình Gurdon phát đảo ngược chun mơn hóa tế bào Trong thí nghiệm cổ điển, ơng thay nhân tế bào chưa trưởng thành tế bào trứng ếch nhân từ tế bào ruột trưởng thành Tế bào trứng biến đổi phát triển thành nịng nọc bình thường Kết thí nghiệm chứng minh DNA tế bào trưởng thành mang thông tin cần thiết để phát triển thành tất tế bào ếch nguyên sinh chất tế bào trứng chứa tác nhân cảm ứng trình phát triển đảo ngược từ tế bào trưởng thành [19] Phát mang tính bước ngoặt Gurdon ban đầu bị hoài nghi chấp nhận nhà khoa học khác xác nhận, dẫn tới khởi xướng nghiên cứu mạnh mẽ kỹ thuật phát triển nữa, cuối dẫn đến việc nhân động vật có vú Nghiên cứu Gurdon cho thấy hạt nhân tế bào trưởng thành, chuyên biệt có thể đưa trở lại trạng thái đa năng, chưa trưởng thành Nhưng thí nghiệm ông liên quan đến việc loại bỏ nhân tế bào, sau đó việc đưa chúng vào tế bào khác Liệu có thể biến tế bào nguyên vẹn trở lại thành tế bào gốc đa không? Shinya Yamanaka trả lời câu hỏi bước đột phá khoa học 40 năm sau phát Gurdon Năm 2006 Shinya Yamanaka sử dụng vector retrovirus để biểu nhiều yếu tố phiên mã, đơn lẻ kết hợp, nguyên bào sợi (fibroblasts) chuột điều kiện nuôi cấy Đáng lưu ý ông phát tế bào người chuột lập trình lại trạng thái vạn năng, gọi tế bào gốc vạn cảm ứng, tương tự tế bào gốc phôi, sau xâm nhiễm (transduction) retrovirus mã hóa yếu tố : KLF4, SOX2, OCT4, c-MYC [13] Ngoài ra, James Thomson báo cáo tổ hợp yếu tố khác (OCT4, SOX2, NANOG LIN28) có khả tái lập trình tế bào sinh dưỡng người thành iPSC [28] Các phịng thí nghiệm khắp giới nhanh chóng sử dụng kỹ thuật mang tính cách mạng đến năm 2009, sau năm Yamanaka tạo thành công iPSC, khoảng 300 báo iPSC xuất [15] Giải Nobel Y Sinh học năm 2012 vinh danh nhà khoa học Gurdon Yamanaka với cơng trình tạo iPSC Đến năm 2007, hai nhóm nghiên cứu độc lập tạo iPSC từ nguyên bào sợi người [28], [32] Việc phát công nghệ tế bào gốc vạn cảm ứng mở hội chưa có y học tái tạo, mơ hình bệnh khám phá thuốc [7] Đối với mơ hình bệnh, tế bào sinh dưỡng sở hữu đặc điểm tế bào bị bệnh từ bệnh nhân sử dụng để tạo iPSC tiếp tục sử dụng để nghiên cứu bệnh [7] Các tế bào sinh dưỡng từ bệnh nhân sử dụng để tạo iPSC Tế bào gốc vạn cảm ứng sửa chữa liệu pháp gen tiếp tục sử dụng để tạo tế bào sinh dưỡng khỏe mạnh cấy ghép cho bệnh nhân, chúng sử dụng để tạo tế bào sinh dưỡng chưa chỉnh sửa để mơ hình hóa bệnh sàng lọc thuốc [7] Ví dụ, vào năm 2012, tế bào gốc thần kinh tạo từ người mắc bệnh Familial dysautonomia - rối loạn di truyền gặp, ảnh hưởng đến dòng tế bào thần kinh, phát triển tế bào thần kinh sử dụng để sàng lọc gần 7000 phân tử nhỏ xác định phân tử nhỏ sử dụng mơ hình bệnh dựa iPSC xác định thuốc bổ trợ để can thiệp điều trị bệnh Familial dysautonomia [9] Các nghiên cứu phát triển thuốc đó gồm sàng lọc phân tử nhỏ, kiểm tra độc tính để đánh giá an tồn, khai thác thành công dựa kỹ thuật iPSC [7] Công nghệ mở trang sử liệu pháp tế bào gốc sử dụng tế bào gốc vạn cảm ứng người (human induced pluripotent stem cell- hiPSC) bệnh nhân tránh nguy đào thải miễn dịch cũng vấn đề đạo đức kèm với việc sử dụng tế bào gốc phơi [45] Hình 2.3: Ứng dụng iPSC lĩnh vực trị liệu gen, mơ hình bệnh khám phá thuốc Năm 2014, Nhật Bản lần sử dụng tế bào biểu mô sắc tố võng mạc có nguồn gốc iPSC để điều trị thoái hóa điểm vàng [15] Năm 2019, Nhật Bản thử nghiệm liệu pháp iPSC cho chấn thương tủy sống Liệu pháp thu tế bào biệt hóa từ bệnh nhân tái lập trình chúng thành tế bào thần kinh thông qua tế bào gốc vạn cảm ứng, sau đó bác sĩ lâm sàng tiêm triệu tế bào vào vị trí tổn thương bệnh nhân [53] Hiện tại, có nhu cầu cơng nhận để đảm bảo an tồn cho liệu pháp có nguồn gốc iPSC cần phải xác minh cách có hệ thống đặc điểm an tồn dịng, cách 10 kiểm tra gen biểu gen [54] Ví dụ, nghiên cứu Bhutani cộng năm 2006 lần đánh giá an tồn ba phương pháp tái lập trình phổ biến (retroviral vector, non-integrating Sendai virus, synthetic mRNAs) Ưu điểm quan trọng iPSC so với ESC khả sử dụng tế bào sinh dưỡng trưởng thành từ bệnh nhân mắc bệnh di truyền xác định [23],[6] So sánh tế bào gốc phôi tế bào gốc vạn cảm ứng trình bày bảng 1.1 Bảng 1.1: So sánh tế bào gốc phôi tế bào gốc vạn cảm ứng Tế bào gốc vạn Tế bào gốc phôi Tế bào gốc vạn cảm ứng Nguồn thu nhận Phôi thai Tế bào sinh dưỡng Vấn đề đạo đức Có Khơng Tốc độ tăng sinh Cao Cao Tính tiện dụng Cao Cao Khả tự biệt hóa Có Có Khả tạo dịng tế bào khác Cao Cao Khả gây đào thải miễn dịch Có Khơng c Tế bào gốc đa Tế bào gốc đa (Multipotent) tế bào có khả biệt hóa thành nhiều loại tế bào thể Các tế bào tạo thành nằm hệ tế bào có liên quan mật thiết Ví dụ tế bào gốc trung mơ biệt hóa thành tế bào xương, sụn, mỡ Các tế bào gốc đa có thể thu nhận từ nhiều nguồn khác mô mỡ, cuống rốn, tủy xương, tủy sữa,… Mặc dù có giới hạn khả biệt hóa, gần đây, loại tế bào cũng y sinh học tập trung khai thác, qua đó ứng dụng thành công nhiều liệu pháp dựa vào tế bào gốc (stem cell therapy) Tế bào gốc trưởng thành có khả biệt hóa thành nhiều kiểu tế bào có chức khác bào gan, biểu bì, xương, giác mạc Những tế bào hữu ích ... [23],[6] So sánh tế bào gốc phôi tế bào gốc vạn cảm ứng trình bày bảng 1.1 Bảng 1.1: So sánh tế bào gốc phôi tế bào gốc vạn cảm ứng Tế bào gốc vạn Tế bào gốc phôi Tế bào gốc vạn cảm ứng Nguồn thu...ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NGUYỄN THÙY LINH Tên đề tài: BIỂU HIỆN HỆ VECTOR TÁI LẬP TRÌNH TRÊN TẾ BÀO GỐC TẠO MÁU CỦA NGƯỜI NHẰM TẠO TẾ BÀO GỐC VẠN NĂNG CẢM ỨNG (iPSC) KHĨA LUẬN... học nêu trên, lựa chọn đề tài: ? ?Biểu hệ vector tái lập trình tế bào gốc tạo máu người nhằm tạo tế bào gốc vạn cảm ứng (iPSC)? ?? 1.2 Mục tiêu đề tài 1.2.1 Mục tiêu tổng quát Biểu thành cơng hệ vector