Đang tải... (xem toàn văn)
Giải thưởng Sinh viên nghiên cứu khoa học Euréka lần thứ 21 năm 2019 Kỷ yếu khoa học 74 KHẢO SÁT SỰ TỒN TẠI CỦA GEN KHÁNG KHÁNG SINH TRONG NƯỚC THẢI Ở MỘT SỐ BỆNH VIỆN TẠI THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH Hoàng[.]
Giải thưởng Sinh viên nghiên cứu khoa học Euréka lần thứ 21 năm 2019 Kỷ yếu khoa học KHẢO SÁT SỰ TỒN TẠI CỦA GEN KHÁNG KHÁNG SINH TRONG NƯỚC THẢI Ở MỘT SỐ BỆNH VIỆN TẠI THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH Hồng Ngọc Hiếu*, Phan Thị Thanh Tuyền, Lương Thị Kiều Hải Trường Đại học Công nghệ Thành phố Hồ Chí Minh *Tác giả liên hệ: hoangngochieu14.2.1998@gmail.com TĨM TẮT Mục tiêu nghiên cứu khảo sát tồn gen đề kháng kháng sinh nước thải mẫu E coli phân lập từ nước thải đầu vào số bệnh viện TP.HCM Mẫu nước thải lấy từ bệnh viện TP.HCM, bệnh viện tiến hành lấy mẫu ngày, ngày lấy mẫu đầu vào chưa xử lý mẫu đầu xử lý Các gen đề kháng kháng sinh (aadA1, aac(3)-IV, sul1, dfrA1, ere(A), qnrA, blaSHV, blaCMY, blaCTX-M-group1, blaTEM, blaVIM, blaOXA-48, blaNDM, blaKPC) kiểm tra theo hướng: cô lập trực tiếp DNA từ mẫu nước thải từ chủng E coli phân lập từ mẫu nước thải đầu vào phương pháp CTAB, sau tiến hành PCR mẫu DNA cô lập để kiểm tra tồn gen đề kháng kháng sinh Với mẫu nước thải, bệnh viện A xuất gen (100% sul1, 67% dfrA1, 8% blaSHV, 50% blaCTX-M, 33% blaKPC, 8% blaVIM), bệnh viện B xuất gen (100% sul1, 33% dfrA1, 8% blaCMY), bệnh viện D xuất gen (75% sul1, 17% dfrA1, 25% blaCMY) bệnh viện C xuất gen (75% sul1, 33% dfrA1) Với chủng E coli phân lập từ mẫu nước thải đầu vào, bệnh viện D xuất gen (28% sul1, 11% dfrA1, 17% blaCTX-M, 17% blaCMY), bệnh viện B xuất gen (39% sul1, 17% blaCTX-M, 50% blaCMY), bệnh viện A xuất gen (17% sul1, 6% blaKPC), bệnh viện C xuất gen (28% sul1, 6% blaCTX-M) Từ khóa: Đề kháng kháng sinh, E Coli, gen kháng kháng sinh, nước thải bệnh viện SURVEY OF THE GENE OF RESISTANCE GENE WASTEWATER IN SOME HOSPITALS IN HO CHI MINH CITY Hoang Ngoc Hieu*, Phan Thi Thanh Tuyen, Luong Thi Kieu Hai Ho Chi Minh City University of Technology *Corresponding Author: hoangngochieu14.2.1998@gmail.com ABSTRACT The objective of the study was to investigate the existence of antibiotic resistance genes in wastewater and in samples of E coli isolated from waste water in some hospitals in Ho Chi Minh City Samples were collected from hospitals in the city In Ho Chi Minh City, each hospital took a sample for days, each day took a sample of untreated input and a sample of processed output Antibiotic-resistance genes (aadA1, aac (3) -IV, sul1, dfrA1, ere (A), qnrA, blaSHV, blaCMY, blaCTX-M-group1, blaTEM, blaVIM, blaOXA-48, blaNDM, and blaKPC) tested in the direction of: direct DNA isolation from wastewater samples and from E coli strains isolated from input wastewater samples by CTAB method, then conducting PCR on isolated DNA samples to check the existence of antibiotic resistance genes In wastewater samples, Hospital A had genes (100% sul1, 67% dfrA1, 8% blaSHV, 50% blCTX-M, 33% blaKPC, 8% blaVIM), Hospital B had genes (100 % sul1, 33% dfrA1, 8% blaCMY), hospital D has genes (75% sul1, 17% dfrA1, 25% blaCMY) and hospital C has genes (75% sul1, 33% dfrA1) For E coli strains isolated from the input wastewater samples, hospital D had genes (28% sul1, 11% dfrA1, 17% blaCTX-M, 17% blaCMY), hospital B had genes (39% sul1, 17% blaCTX-M, 50% blaCMY), hospital A has genes (17% sul1, 6% blaKPC), hospital C has genes (28% sul1, 6% blaCTX-M) Keywords: Antibiotic resistance, E Coli, antibiotic resistance gene, hospital wastewater 74 Giải thưởng Sinh viên nghiên cứu khoa học Euréka lần thứ 21 năm 2019 Kỷ yếu khoa học chưa có nghiên cứu đề cập đến liên hệ vi khuẩn đề kháng lâm sàng vi khuẩn đề kháng ngồi mơi trường – mà hệ thống nước thải bệnh viện bể chứa trung gian quan trọng Xuất phát từ lý đó, đề tài “Khảo sát tồn gen kháng kháng sinh nước thải số bệnh viện TP Hồ Chí Minh” thực để khảo sát mức độ tồn gen kháng thuốc hệ thống nước thải số bệnh viện TP HCM, từ bổ sung thêm liệu cho tình hình đề kháng kháng sinh gợi ý mối liên hệ vi khuẩn đề kháng lâm sàng ngồi mơi trường, góp phần hợp lý hóa việc sử dụng kháng sinh, làm chậm lại phát triển vi khuẩn kháng thuốc, bảo vệ hiệu lực kháng sinh dự trữ ĐẶT VẤN ĐỀ Theo báo cáo tổ chức Y tế giới WHO (2014) giám sát đề kháng kháng sinh toàn cầu, đề kháng kháng sinh mối đe dọa lớn đến sức khỏe cộng đồng liên quan sâu rộng đến nhiều quốc gia vùng lãnh thổ giới.Việt Nam CDDEP (The Center for Disease Dynamics, Economics & Policy) xếp vào nhóm nước có tỷ lệ kháng kháng sinh cao giới Trong vòng khoảng thập kỉ trở lại đây, nhà nghiên cứu giới bắt đầu mở rộng trọng tâm nghiên cứu đề kháng kháng sinh môi trường bên ngồi thay tập trung vào yếu tố lâm sàng Tuy nhiên, nghiên cứu đề kháng kháng sinh Việt Nam chủ yếu tiếp cận theo góc nhìn lâm sàng, đánh giá tình hình đề kháng hệ vi khuẩn bệnh viện bệnh nhân, chưa có nhiều nghiên cứu đánh giá mức độ môi trường cộng đồng, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Hình Sơ đồ thực nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu Tách chiết DNA Mẫu nước thải bệnh viện TP.HCM DNA nước thải bệnh viện tách Vì lý bảo mật thông tin theo yêu cầu chiết theo phương pháp Phenol/Chloroform ban giám đốc bệnh viện, tên bệnh viện tham khảo từ nghiên cứu Chomczynski giữ kín mã hóa là: bệnh viện A, Sacchi (1987) Mẫu nước thải lọc lấy bệnh viện B, bệnh viện C, bệnh viện D (2 bệnh cắn, đem ly giải tế bào 60oC viện trực thuộc Bộ Y tế, bệnh viện trực thuộc CTAB buffer, loại bỏ protein Sở Y tế TP.HCM bệnh viện quốc tế) Ở Phenol:Choloroform:Isoamylalcohol tỷ lệ bệnh viện tiến hành lấy mẫu ngày, 25:24:1 tủa DNA Ethanol 99% ngày lấy mẫu gồm: mẫu đầu vào (chưa PCR nhân theo gen mục tiêu xử lý) mẫu đầu (đã xử lý) Các mẫu nước Các gen aadA1, aac(3)-IV, sul1, dfrA1, thải được chứa chai nhựa có ere(A), qnrA, blaSHV, blaCMY tham dung tích 500ml bảo quản điều khảo từ nghiên cứu Momtaz (2012) Các kiện lạnh 4oC gen blaVIM, blaOXA-48, blaNDM, blaKPC 75 Giải thưởng Sinh viên nghiên cứu khoa học Euréka lần thứ 21 năm 2019 Kỷ yếu khoa học Reagents Ltd với nhiệt độ bắt mồi tham khảo từ tài liệu Sản phẩm PCR sau kiểm tra gel agarose 1.5% nhuộm DNA GelRed tham khảo từ nghiên cứu Poirel (2011) Gen blaCTX-M- group tham khảo từ nghiên cứu Pitout (2004) gen blaTEM tham khảo từ nghiên cứu Sharma (2010) Phản ứng PCR thiết kế với chu trình luân nhiệt dựa chu trình đề nghị kit Mytaq Mix 2X Bioline KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Hình Biểu đồ tỷ lệ phần trăm mẫu nước thải dương tính với gen đề kháng kháng sinh Hình Biểu đồ tỷ lệ phần trăm mẫu E coli dương tính với gen đề kháng kháng sinh Đề tài khảo sát tồn gen kháng kháng sinh mẫu nước thải số chủng E coli phân lập từ mẫu nước thải bệnh viện TP.HCM: Trong nước thải (Hình 2): Bệnh viện A xuất xuất gen: 100% sul1, 67% dfrA1, 8% blaSHV, 50% blaCTXM, 33% blaKPC, 8% blaVIM Bệnh viện B xuất gen: 100% sul1, 33% dfrA1, 8% blaCMY Bệnh viện C xuất gen: 75% sul1, 33% dfrA1 Bệnh viện D xuất gen: 75% sul1, 17% dfrA1, 25% blaCMY Trong E coli phân lập từ nước thải (Hình 3): Bệnh viện A xuất gen: 17% sul1, 6% blaKPC Bệnh viện B xuất gen: 39% sul1, 17% blaCTX-M, 50% blaCMY Bệnh viện C xuất gen: 28% sul1, 6% blaCTX-M Bệnh viện D xuất gen: 28% sul1, 11% dfrA1, 17% blaCTX-M, 17% blaCMY 76 Giải thưởng Sinh viên nghiên cứu khoa học Euréka lần thứ 21 năm 2019 Kỷ yếu khoa học trường bên ngoài, đặc biệt hệ thống xử lý nước thải bệnh viện A Kết hiểu với tình hình thực tế quy định (2010) Quy chuẩn kỹ thuật quốc gia nước thải y tế (QCVN 28:2010/BTNMT) , nước thải sở y tế thải nguồn tiếp nhận cần đạt tiêu nồng độ tối đa thông số chất gây ô nhiễm sulfua, amoni, nitrat, phosphat, dầu mỡ động thực vật, hoạt độ phóng xạ, vi khuẩn (Coliforms, Salmonella, Shigella, Vibrio cholerae) chưa có tiêu đề cập đến việc kiểm soát yếu tố đề kháng kháng sinh Các liệu phát tán gen đề kháng kháng sinh từ hệ thống xử lý nước thải bệnh viện môi trường cần tiếp tục mở rộng hồn thiện để đưa kết luận cuối cùng, nhiên với kết tại, ý tưởng cho việc xây dựng tiêu chuẩn để kiểm soát yếu tố đề kháng kháng sinh nước thải đầu sở y tế bắt đầu cân nhắc xem xét cho tương lai Kiến nghị Kết nghiên cứu báo cáo lại cho phận quản lý nhiễm khuẩn bệnh viện để ghi nhận mức độ xuất gen đề kháng nước thải, bệnh viện sử dụng liệu để hỗ trợ việc quản lý nhiễm khuẩn cảnh báo chung mức độ đề kháng kháng sinh bệnh viện, từ tăng cường ý thức việc sử dụng bảo tồn kháng sinh, nâng cao hiệu điều trị hạn chế phát sinh đề kháng Bên cạnh nhóm nghiên cứu đề xuất đưa kết xác định gen đề kháng kháng sinh thành tiêu để đánh giá hệ thống xử lý nước thải bệnh viện Trên tổng số 14 gen kiểm tra, gen sul1 xuất bật với tỷ lệ lớn nhất, có mặt nước thải bệnh viện khảo sát Gen sul1 xuất toàn 24 mẫu nước thải đầu vào xuất 18/24 (75%) mẫu nước thải đầu ra, mẫu nước thải đầu âm tính với sul1 thuộc bệnh viện C bệnh viện D Bệnh viện A bệnh viện B sơ cho thấy khả phát tán gen sul1 từ hệ thống xử lý nước thải môi trường cao so với bệnh viện C bệnh viện D Tương tự kết mẫu nước thải, sul1 gen xuất nhiều chủng E coli phân lập so với 13 gen lại, bệnh viện A bệnh viện B có mức độ tồn gen sul1 cao so với bệnh viện C bệnh viện D Kết nhấn mạnh phổ biến gen đề kháng sulfonamide hệ thống nước thải bệnh viện khảo sát khả phát tán cao từ hệ thống nước thải y tế ngồi mơi trường DfrA1 gen xuất phổ biến thứ hai 48 mẫu nước thải từ bệnh viện Có mẫu đầu dương tính tổng số 18 mẫu dương tính với dfrA1 (44.4%), bệnh viện A có mẫu, bệnh viện B có mẫu bệnh viện D có mẫu Điều cho thấy tỷ lệ đáng kể gen dfrA1 có khả phát tán mơi trường bên ngồi thông qua hệ thống xử lý nước thải bệnh viện A, bệnh viện B bệnh viện D KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Hệ thống xử lý nước thải bệnh viện nghiên cứu chưa ngăn phát tán gen đề kháng kháng sinh môi TÀI LIỆU THAM KHẢO CAO MINH NGA (2013), "Sự đề kháng kháng sinh vi khuẩn klebsiella spp Và E Coli sinh ESBL phân lập bệnh viện 175", Y Học TP Hồ Chí Minh 17 (1), pp 280-285 NGUYỄN PHÚ HƯƠNG LAN (2012), "Khảo sát mức độ đề kháng kháng sinh Acinetobacter Pseudomonas phân lập bệnh viện bệnh Nhiệt đới năm 2010", Thời y học 68 PHẠM HÙNG VÂN (2010), "Nghiên cứu đa trung tâm tình hình đề kháng imipenem meropenem trực k������ã dễ mọc kết 16 bệnh viện Việt Nam" Bộ Y Tế (2009), Báo cáo sử dụng kháng sinh kháng kháng sinh 15 bệnh viện Việt Nam năm 2008-2009, Dự án Hợp tác toàn cầu kháng kháng sinh GARP Việt Nam Đơn vị Nghiên cứu Lâm sàng ĐH Oxford 77 ... thống nước thải bệnh viện bể chứa trung gian quan trọng Xuất phát từ lý đó, đề tài ? ?Khảo sát tồn gen kháng kháng sinh nước thải số bệnh viện TP Hồ Chí Minh? ?? thực để khảo sát mức độ tồn gen kháng thuốc... mẫu nước thải dương tính với gen đề kháng kháng sinh Hình Biểu đồ tỷ lệ phần trăm mẫu E coli dương tính với gen đề kháng kháng sinh Đề tài khảo sát tồn gen kháng kháng sinh mẫu nước thải số chủng... mặt nước thải bệnh viện khảo sát Gen sul1 xuất toàn 24 mẫu nước thải đầu vào xuất 18/24 (75%) mẫu nước thải đầu ra, mẫu nước thải đầu âm tính với sul1 thuộc bệnh viện C bệnh viện D Bệnh viện A bệnh