Untitled Science & Technology Development, Vol 19, No T5 2016 Trang 84 Nghiên cứu hoạt tính kháng Staphylococcus aureus và Klebsiella pneumoniae của cao chiết lá dâm bụt (Hibiscus rosa sinensis L ) [.]
Science & Technology Development, Vol 19, No.T5-2016 Nghiên cứu hoạt tính kháng Staphylococcus aureus Klebsiella pneumoniae cao chiết dâm bụt (Hibiscus rosa-sinensis L.) Lương Thị Mỹ Ngân Nguyễn Thị Thùy Linh Nguyễn Ngọc Quý Phạm Thị Ngọc Huyền Trương Thị Huỳnh Hoa Trần Trung Hiếu Phạm Thành Hổ Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQG-HCM (Bài nhận ngày 30 tháng 05 năm 2016, nhận đăng ngày 02 tháng 12 năm 2016) TÓM TẮT hexane 25 cao tiểu phân đoạn EtOAc Cây dâm bụt Hibiscus rosa-sinensis thu nhận Tất cao tiểu phân đoạn không sử dụng cho việc kháng viêm kháng nhiễm có có hoạt tính yếu lên K pneumoniae khuẩn dân gian từ lâu đời Nghiên cứu Các cao tiểu phân đoạn có hoạt tính mạnh đối nhằm khảo sát hoạt tính kháng khuẩn với S aureus ghi nhận, như: H4, H14– cao chiết dâm bụt lên Staphylococcus H16, E1, E7, E17–E19 Đặc biệt E7 có hoạt aureus Klebsiella pneumoniae, hai số tính mạnh lên S aureus với nồng độ MIC tác nhân quan trọng hàng đầu gây nhiễm MBC 0,1 0,2 mg/mL Dữ liệu GCkhuẩn bệnh viện Kết nghiên cứu cho thấy MS cho thấy thành phần tiểu phân cao phân đoạn EtOAc cao phân đoạn hexane đoạn E7 neophytadiene, trans-phytol có hoạt tính kháng lên S aureus, 3,7,11,15-tetramethyl-2-hexadecen-1-ol kháng yếu lên K pneumoniae Bằng phương pháp sắc ký cột, 24 cao tiểu phân đoạn Từ khóa: Dâm bụt, Hibiscus rosa-sinensis, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, kháng khuẩn, cao chiết MỞ ĐẦU Sự kháng lại loại thuốc kháng sinh nhiều dòng vi khuẩn gây bệnh gây nên mối quan ngại sâu sắc cho việc chăm sóc sức khỏe y tế cộng đồng tồn giới Thực vật xem nguồn thay lý tưởng mức độ an tồn, khơng phản ứng phụ, có nhiều đích tác động khác lên tế bào vi khuẩn nên có nguy gây kháng thuốc [1] Staphylococcus aureus vi khuẩn gây bệnh thường gặp có khả gây nhiều loại bệnh khác nhau, chúng thường trú da Trang 84 đường hô hấp người động vật [2] Klebsiella pneumoniae thường gây nhiễm trùng đường hô hấp viêm phổi, viêm phế quản phổi thứ phát bệnh nhân sau bị cúm, sởi, ho gà bệnh nhân hồi sức hô hấp S aureus K pneumoniae hai số tác nhân quan trọng hàng đầu gây nhiễm khuẩn bệnh viện ngày xuất nhiều chủng kháng lại nhiều loại thuốc kháng sinh làm cho tình trạng nhiễm khuẩn ngày trầm trọng [2, 3] Trong nghiên cứu TẠP CHÍ PHÁT TRIỂN KH&CN, TẬP 19, SỐ T5- 2016 trước chúng tôi, nhiều loại tinh dầu thực vật chứng minh có khả kháng lại K pneumoniae, tinh dầu nụ hoa Đinh hương tinh dầu tiêu có hoạt tính ức chế mạnh lên tăng trưởng với giá trị MIC 1,5 2,5 mg/mL Việc nghiên cứu tìm hợp chất tự nhiên chế phẩm thực vật có chứa hoạt chất chống lại tăng trưởng chủng vi khuẩn mang ý nghĩa khoa học thực tiễn quan trọng việc kiểm soát chủng vi khuẩn gây nhiễm trùng bệnh viện [4] Cây dâm bụt (cây bụp) (Hibiscus rosasinensis L.) thuộc họ Bông (Malvaceae) tiểu mộc trồng rộng rãi làm hàng rào nhiều nơi thành phố tỉnh thuộc khu vực phía nam [5] Theo y học cổ truyền, dược liệu gọi xun can bì, có vị ngọt, tính bình, khơng độc, có tác dụng nhiệt, lợi tiểu, giải độc, tiêu sưng Cả lá, vỏ thân, rễ hoa dâm bụt sử dụng chữa bệnh Hoa dâm bụt chữa mụn nhọt, nhức đầu, chóng mặt, khó ngủ, hồi hộp; chữa bệnh quai bị, kiết lỵ, mẫn ngứa, tiêu độc; vỏ thân sử dụng để chữa khí hư, chàm mặt, kiết lỵ; rễ giúp điều hòa kinh nguyệt [6, 7] Trong nghiên cứu này, sử dụng cao chiết từ dâm bụt, đối tượng dân gian sử dụng chữa bệnh viêm nhiễm trồng tương đối phổ biến thành phố Hồ Chí Minh để khảo sát hoạt tính kháng S aureus K pneumoniae Thành phần hóa học cao tiểu phân đoạn có hoạt tính ghi nhận báo VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP Vật liệu Lá dâm bụt thu hái quận Thủ Đức, thành phố Hồ Chi Minh vào tháng 4/2015 Chủng bệnh phẩm vi khuẩn Staphylococcus aureus cung cấp từ bệnh viện Đại học Y Dược TP HCM chủng chuẩn Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 cung cấp từ Đơn vị Nghiên cứu Lâm Sàng Đại học Oxford Việt Nam giữ giống Phịng thí nghiệm Chuyển hóa Sinh học, Bộ mơn Cơng nghệ Sinh học Thực vật Chuyển hóa Sinh học, Khoa Sinh học – Công nghệ Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQG-HCM Phương pháp Phương pháp thu nhận cao tổng Bột dâm bụt khô (3,8 kg) ngâm 12,5 lít ethanol tuyệt đối (EtOH) Sau ngày, lọc thu dịch chiết Phần bột lại tiếp tục ngâm EtOH (2 lần, ngày/lần) Tất dịch chiết cô quay chân không 44 oC để loại bỏ hết EtOH thu cao tổng EtOH Phương pháp tách cao phân đoạn Cao tổng EtOH (100 g) ngâm dầm lít hexane Sau giờ, thu phần hịa tan dung mơi Phần cao cịn lại tiếp tục ngâm hexane (2 lần, giờ/lần) Tất phần hịa tan hexane quay chân khơng 44 oC để loại bỏ hết hexane thu cao phân đoạn hexane (Hình 2) Tương tự, phần cao cịn lại tiếp tục ngâm lít ethyl acetate (EtOAc), thực lần, giờ/lần để thu cao phân đoạn EtOAc Phương pháp tách cao tiểu phân đoạn Từ cao phân đoạn hexane cao phân đoạn EtOAC, sắc ký cột silica gel (đường kính cột: cm, chiều dài cột: 55 cm) sử dụng để thu nhận cao tiểu phân đoạn Rf tiểu phân đoạn xác định sắc ký mỏng (Merck, Kieselgel 60 F254) Các tiểu phân đoạn có Rf giống gộp chung với sử dụng để thử hoạt tính kháng khuẩn Phương pháp Sắc ký khí ghép khối phổ (GC–MS) Cao tiểu phân đoạn E7 (2 mg) có hoạt tính kháng khuẩn, hịa tan mL ethyl acetate Sau đó, phân tích sắc ký khí (Trace GC-Ultra, Thermo Scientific) ghép khối Trang 85 Science & Technology Development, Vol 19, No.T5-2016 phổ (Single quadrupole, Thermo Scientific) với cột DB-5MS (30 m x 0,25 mm x 0,25 µm) (Agilent Technologies) sử dụng helium làm khí mang áp suất 13.209 psi nhiệt độ buồng tiêm 280 oC thể tích mẫu tiêm µL Chương trình nhiệt thực nhiệt độ đầu 70 oC (trong phút), sau tăng 15 oC/phút 300 oC giữ 15 phút Các hợp chất cao tiểu phân đoạn E7 xác định cách so sánh khối phổ với ngân hàng liệu NIST (National Institute of Standard and Technology (NIST), USA/Wiley, 2011) Các phương pháp thử nghiệm hoạt tính kháng khuẩn Phương pháp đĩa giấy khuếch tán môi trường thạch (paper disc diffusion) sử dụng để xác định đường kính vịng kháng khuẩn [8] Các cao chiết hòa tan ethanol nồng độ 200 mg/mL Mỗi dịch cao chiết thấm A) B) C) D) vào đĩa giấy (đường kính mm, dày mm) cho khối lượng cao chiết đĩa giấy 10 mg/đĩa giấy Các đĩa giấy đặt tủ cấy vô trùng với quạt thổi 15 phút nhằm làm bay ethanol cao chiết phân tán đĩa giấy Sau đó, đặt đĩa giấy thử nghiệm đĩa môi trường thạch LB cấy trải 100 l dịch vi khuẩn nồng độ 108 CFU/mL (độ đục McFarland 0,5) mật độ vi khuẩn ban đầu xác định lại phương pháp đếm khuẩn lạc Các đĩa vi khuẩn thử nghiệm sau ủ 37 oC Sau 24 giờ, đường kính vịng kháng khuẩn xuất xung quanh đĩa giấy ghi nhận (Hình 1A) Các đĩa giấy đối chứng âm chứa 50 l ethanol/đĩa giấy Các đĩa giấy đối chứng dương có chứa 30 g tetracycline/đĩa giấy Thí nghiệm thực lần thời điểm khác Hình Phương pháp đĩa giấy khuếch tán mơi trường thạch vịng kháng khuẩn (A) Nồng độ ức chế tối thiểu MIC chế phẩm thực vật xác định phương pháp pha loãng đĩa 96 giếng với đổi màu resazurin (B) Giá trị MIC nồng độ thấp dãy nồng độ thử nghiệm không làm đổi màu xanh resazurin Nồng độ diệt khuẩn tối thiểu MBC xác định phương pháp trải đĩa Giá trị MBC nồng độ thấp dãy nồng độ giếng thử nghiệm (B) cho thấy khuẩn lạc vi khuẩn mọc đĩa môi trường thạch LB (C), đĩa đối chứng có mọc khuẩn lạc vi khuẩn (D) Trang 86 TẠP CHÍ PHÁT TRIỂN KH&CN, TẬP 19, SỐ T5- 2016 Phương pháp pha loãng cao chiết thực vật (broth dilution) đĩa 96 giếng chất thị màu resazurin sử dụng để xác định nồng độ ức chế tối thiểu MIC (Minimum Inhibitory Concentration) nồng độ diệt khuẩn tối thiểu MBC (Minimum Bactericidal Concentration) [9, 10] Chế phẩm thực vật (gồm cao tổng cao phân đoạn) pha loãng dạng stock DMSO với nồng độ tương ứng 200 mg/mL 100 mg/mL Để khảo sát hoạt tính kháng khuẩn, dung dịch stock pha loãng thành nồng độ khảo sát từ 0–10 mg/mL cao tổng 0–5 mg/mL cao phân đoạn Dịch vi khuẩn ni cấy qua đêm pha lỗng cho mật độ đạt 105–106 CFU/mL Mỗi giếng gồm 50 l dịch vi khuẩn 50 l chế phẩm thực vật nồng độ pha lỗng khác (Hình 1B) Các giếng đối chứng chứa dịch vi khuẩn, môi trường DMSO Mỗi nghiệm thức lặp lại lần Các đĩa thử nghiệm đối chứng sau ủ 37 oC Sau 24 giờ, 20 µL thuốc thử resazurin 0,01 % cho vào giếng Quan sát thay đổi màu, ghi nhận giá trị MIC Các giếng có đổi màu dung dịch resazurin từ màu xanh sang màu hồng cho thấy có tăng trưởng vi khuẩn giếng Nồng độ ức chế tối thiểu MIC định nghĩa nồng độ thấp dãy nồng độ thử nghiệm chế phẩm thực vật ức chế tăng trưởng vi khuẩn (khơng làm đổi màu resazurin) (Hình 1B) Nồng độ diệt khuẩn tối thiểu MBC đươc xác định phương pháp trải đĩa: 100 µL dịch thử nghiệm giếng khơng có đổi màu resazurin trải lên đĩa môi trường thạch LB ủ 37 oC, sau 24 quan sát sống sót vi khuẩn Giá trị MBC nồng độ thấp dãy nồng độ chế phẩm thực vật tiêu diệt tồn vi khuẩn giếng (Hình 1C), khơng có khuẩn lạc xuất đĩa môi trường thạch LB, đĩa mơi trường đối chứng có khuẩn lạc vi khuẩn xuất (Hình 1D) Mỗi thí nghiệm thực lần vào thời điểm khác để xác định kết KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Tách chiết thu nhận cao tổng cao tiểu phân đoạn Quy trình thu nhận cao tổng EtOH cao phân đoạn hexane EtOAc tóm tắt Hình Hiệu suất chiết cao tổng EtOH 11,9 % so với trọng lượng khô dâm bụt Tỉ lệ phần trăm cao phân đoạn hexane cao phân đoạn EtOAc cao tổng EtOH 53,0 % 10,7 % Cao phân đoạn hexane (20 g) EtOAc (16 g) tiếp tục phân tách sắc ký cột silica gel, với pha động hexane (100–0 %) ethyl acetate (0–100 %), sau methanol (MeOH) 100 % Hàm lượng tỉ lệ % tiểu phân đoạn qua sắc ký cột ghi Bảng Bảng Kết cho thấy rằng, cao tiểu phân đoạn H24 (7,7 g), E24 (4,5 g) E25 (3,8 g) chiếm hàm lượng lớn chứa hợp chất có độ phân cực mạnh cao tiểu phân đoạn khác, H24, E24 E25 thuộc hệ ly giải hexane:ethyl acetate (H:EtOAc) 0:100 MeOH 100 % Các cao tiểu phân đoạn lại chiếm hàm lượng thấp chứa hợp chất khơng phân cực có độ phân cực nhỏ Trang 87 Science & Technology Development, Vol 19, No.T5-2016 Hình Quy trình thu nhận cao chiết thực vật phương pháp ngâm dầm dung môi Cao tổng EtOH, cao phân đoạn hexane, cao phân đoạn EtOAc, cao EtOH cịn lại Hoạt tính kháng khuẩn cao chiết dâm bụt Hoạt tính kháng khuẩn cao chiết lên S aureus K pneumoniae xác định phương pháp đĩa giấy phương pháp pha loãng đĩa 96 giếng Kết cho thấy đường kính vịng kháng khuẩn cao tổng cao phân đoạn tạo thay đổi từ 9–15 mm S aureus, 9–11 mm K pneumoniae (Bảng 3) Qua kết Bảng 4, cao chiết dâm bụt có tính kháng mạnh S aureus K pneumoniae Hoạt tính kháng S aureus cao phân đoạn hexane EtOAc tương tự với MIC 2,5 mg/mL MBC 7,5 mg/mL, mạnh so với cao tổng ETOH Vì vậy, hai cao phân đoạn tiếp tục phân tách sắc ký cột để thu nhận tiểu phân đoạn kiểm tra hoạt tính kháng khuẩn Bảng Hàm lượng tỉ lệ thu nhận cao tiểu phân đoạn từ cao phân đoạn hexane Cao tiểu phân đoạn H1 H2 H3 H4* H5 – H8 H9 – H13 H14* H15* H16* H17 – H23 H24 Pha động (H:EtOAc) 95:5 90:10 85:15 85:15 80:20 70:30 70:30 70:30 70:30 70:30 0:100 MeOH 100 % Tổng *phân đoạn có hoạt tính kháng khuẩn Trang 88 Hàm lượng (g) 0,03 0,01 5,10 0,22 0,86 2,19 0,47 0,26 0,40 2,76 7,70 19,97 Tỉ lệ (%) 0,14 0,05 25,5 1,08 4,26 10,93 2,34 1,29 2,00 13,76 38,50 99,89 TẠP CHÍ PHÁT TRIỂN KH&CN, TẬP 19, SOÁ T5- 2016 Kết kháng khuẩn cao tiểu phân đoạn phương pháp pha loãng đĩa 96 giếng với thuốc thử resazurin phương pháp trải đĩa ghi nhận Bảng Nghiên cứu cho thấy, số 24 tiểu phân đoạn thu nhận từ cao phân đoạn hexane, cao tiểu phân đoạn H4 H14–H16 có hoạt tính kháng S aureus, có H4 kháng K pneumoniae Trong đó, cao tiểu phân đoạn H4 cho giá trị MIC = 1,25 MBC = 2,5 mg/mL S aureus; MIC = MBC = 10 mg/mL K pneumoniae; mạnh so với cao tiểu phân đoạn H14–H16 Trong số 25 tiểu phân đoạn thu nhận từ cao phân đoạn EtOAc, tiểu phân đoạn E1, E7 E17–E19 có hoạt tính kháng lại S aureus, có E7 kháng lại K pneumoniae Trong đó, E7 có hoạt tính kháng mạnh S aureus (MIC = 0,1 MBC = 0,2 mg/mL) với K pneumoniae (MIC = 7,5 MBC = 10 mg/mL) Tiếp theo E1 cho giá trị MIC = 0,25 MBC = 0,5 mg/mL S aureus, có hoạt tính kháng yếu K pneumoniae Các tiểu phân đoạn H4, E1 E7 có hoạt tính kháng khuẩn mạnh so với tất tiểu phân đoạn lại, chúng chiếm tỉ lệ nhỏ, H4 chiếm 1,08 % cao phân đoạn hexane (Bảng 1), E1 chiếm 0,14 %, E7 chiếm 1,11 % cao phân đoạn EtOAc (Bảng 2) Hoạt tính kháng khuẩn gây bệnh cao chiết hoa dâm bụt nghiên cứu số tác giả giới Arullappan cs (2009) nghiên cứu hoạt tính kháng khuẩn cao chiết MeOH, EtOAc petroleum ether từ thân, lá, hoa dâm bụt phương pháp đĩa giấy khuếch tán môi trường thạch Các cao chiết khơng có khả kháng E coli, P aeruginosa, K pneumoniae, cao chiết petroleum ether có khả kháng mạnh chủng vi khuẩn MRSA (methicillin-resistant S aureus) [11] Theo Uddin cs (2010), cao chiết MeOH từ có hoạt tính kháng S aureus khơng có khả kháng K pneumoniae [12] Nghiên cứu Seyyedneja (2010) cho thấy cao chiết EtOH dâm bụt 20 mg/đĩa giấy ( mm) kháng K pneumoniae tạo vòng kháng khuẩn mm, với 2,5 mg/đĩa giấy ( mm) kháng S aureus tạo vịng kháng khuẩn mm [13] Điều cho thấy rằng, cao dâm bụt có chứa hoạt chất kháng S aureus K pneumoniae Tuy nhiên, hoạt chất kháng K pneumoniae có lẽ chiếm tỉ lệ thấp K pneumoniae nhạy với hoạt chất Bảng Hàm lượng tỉ lệ thu nhận cao tiểu phân đoạn từ cao phân đoạn EtOAc Cao tiểu phân đoạn E1* E2 E3 – E6 E7* E8 – E15 E16 E17* E18* E19* E20 E21 E22 E23 E24 E25 Pha động (H: EtOAc) 95:5 90:10 80:20 70:30 70:30 70:30 70:30 60:40 60:40 50:50 50:50 40:60 40:60 40:60 20:80 20:80 100:0 0: 100 0: 100 100 % MeOH 100 % MeOH 100 % MeOH Tổng * phân đoạn có hoạt tính kháng khuẩn Hàm lượng (g) 0,39 0,05 0,81 0,11 2,14 0,36 0,34 0,17 0,17 0,65 0,27 0,85 0,24 4,52 3,84 14,91 Tỉ lệ (%) 0,14 0,05 28,50 1,11 15,79 2,0 5,00 1,05 2,23 0,84 2,25 0,55 1,84 38,50 24,0 93,19 Trang 89 Science & Technology Development, Vol 19, No.T5-2016 Bảng Vòng kháng khuẩn cao tổng EtOH cao phân đoạn lên S aureus K pneumoniae Mẫu (10 mg/đĩa giấy) Đường kính vịng kháng khuẩn (mm) S aureus K pneumoniae Cao tổng EtOH 9,2 0,3 8,8 0,2 Cao phân đoạn hexane 15.4 0,8 10,8 0,4 Cao phân đoạn EtOAc 14,8 0,4 - 10,7 0,3 - 29,7 1,45 - Cao EtOH cịn lại Tetracycline (0,03 mg/đĩa giấy) - khơng hoạt tính Thành phần tiểu phân đoạn E7 xác định GC-MS Thành phần tiểu phân đoạn E7 có hoạt tính kháng mạnh với S aureus phân tích GC-MS (Hình 3) Kết cho thấy thành phần tiểu phân đoạn neophytadiene (C30H38), (2E)-3,7,11,15tetramethyl-2-hexadecen-1-ol (trans-phytol, C20H40O) 3,7,11,15-tetramethyl-2-hexadecen1-ol (C20H40O, dạng stereoisomer transphytol) Neophytadiene chứng minh nhiều tác giả chất có hoạt tính kháng khuẩn mạnh, có nhiều loại vi tảo Dunaliella salina [14], Navicula delognei [15], Chaetoceros muelleri [16], nhiều loài thực vật Bursera simaruba [17], Turnera ulmifolia [18], Urtica dioica [19], Hugonia mystax [20] Trans-phytol, hợp chất diterpene alcohol, chứng minh có hoạt tính kháng oxy hóa, kháng khuẩn kháng nấm mạnh Theo nghiên cứu Pejin cs (2014), trans-phytol có khả kháng Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, Micrococcus flavus, Listeria monocytogenes, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium, Escherichia coli, Enterobacter cloacae với MIC 0,003–0,038 mg/mL MBC 0,013–0,052 mg/mL; kháng nấm Aspergillus spp., Penicillium spp Trichoderma spp với MIC 0,008–0,016 mg/mL MFC (Minimum Fungicidal Concentration) 0,090–0,520 mg/mL [21] 3,7,11,15-tetramethyl2-hexadecen-1-ol có thuộc tính kháng ung thư, kháng oxy hóa kháng khuẩn [22] Hoạt tính kháng khuẩn neophytadien, trans-phytol 3,7,11,15-tetramethyl-2-hexadecen-1-ol có E7 có lẽ định tính kháng khuẩn mạnh tiểu phân đoạn lên S aureus Bảng Nồng độ ức chế tối thiểu MIC diệt khuẩn tối thiểu MBC cao chiết lên S aureus K pneumoniae phương pháp pha loãng đĩa 96 giếng với thuốc thử resazurin phương pháp trải đĩa Mẫu Cao tổng EtOH Cao phân đoạn hexane Cao phân đoạn EtOAc Cao EtOH cịn lại - khơng hoạt tính Trang 90 S aureus MIC (mg/mL) MBC (mg/mL) 5,0 >10,0 2,5 7,5 2,5 7,5 - K pneumoniae MIC (mg/mL) MBC (mg/mL) 10 15,0 10 15,0 10 12,5 - TẠP CHÍ PHÁT TRIỂN KH&CN, TẬP 19, SỐ T5- 2016 Bảng Nồng độ ức chế tối thiểu MIC diệt khuẩn tối thiểu MBC tiểu phân đoạn hexane (H) EtOAc (E) lên S aureus K pneumoniae phương pháp pha loãng đĩa 96 giếng với thuốc thử resazurin phương pháp trải đĩa Mẫu* S aureus K pneumoniae MIC (mg/mL) MBC (mg/mL) MIC (mg/mL) MBC (mg/mL) H4 1,25 2,5 10 H14 2,5 - >10 H15 2,5 - >10 H16 2,5 7,5 - >10 E1 0,25 0,5 > 7,5 >10 E7 0,1 0,2 7, 10 E17 > 7,5 >10 E18 > 7,5 >10 E19 0,5 > 7,5 >10 *Các tiểu phân đoạn cịn lại khơng có hoạt tính có hoạt tính thấp Hình Thành phần tiểu phân đoạn E7 xác định GC-MS KẾT LUẬN Lá dâm bụt Hisbicus rosa-sinensis có chứa hoạt chất có tính kháng mạnh lên Staphylococcua aureus Vi khuẩn Klebsiella pneumoniae nhạy với cao phân đoạn hexane EtOAc cao tiểu phân đoạn từ cao tổng EtOH dâm bụt Trong số tiểu phân đoạn tách chiết từ cao phân đoạn EtOAc, E7 có hoạt tính kháng khuẩn mạnh Các thành phần E7 neophytadiene, trans-phytol 3,7,11,15- tetramethyl-2hexadecen-1-ol Lời cảm ơn : Nghiên cứu tài trợ Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh (ĐHQGHCM) khuôn khổ Đề tài mã số C2015-1825 Trang 91 Science & Technology Development, Vol 19, No.T5-2016 Study on the antibacterial activities of Hibiscus rosa-sinensis leaf extracts against Staphylococcus aureus and Klebsiella pneumoniae Luong Thi My Ngan Nguyen Thi Thuy Linh Nguyen Ngoc Quy Pham Thi Ngoc Huyen Truong Thi Huynh Hoa Tran Trung Hieu Pham Thanh Ho University of Science,VNU-HCM ABSTRACT Hibiscus rosa-sinensis has been used in folk acetate, and yielded 24 hexane subfractions (H1– medicine to treat inflammation and bacterial H24) and 25 ethyl acetate subfractions (E1–E25) infections for a long time This study aims to All subfractions had no or little activities to K evaluate the antibacterial activity of H rosapneumoniae Subfractions as H4, H14–H16, and sinensis leaf extracts against Staphylococcus E1, E7, E17–E19 had strong activities against S aureus and Klebsiella pneumoniae Both are the aureus Especially, E7 subfraction exhibited the major causes of hospital acquired infections The strongest activity with MIC and MBC values of results showed that the hexane and ethyl acetate 0.1 and 0.2 mg/mL, respectively GC-MS data fractions were similarly active to S aureus but showed that the main constituents of the E7 very weak active to K pneumoniae Both of these subfraction were neophytadiene, trans-phytol and fractions were subjected to chromatograph using 3,7,11,15-tetramethyl-2-hexadecen-1-ol silica gel column eluted with hexane and ethyl Key words: Hibiscus rosa- sinensis, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, antibacterial activity, extracts TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] I Raskin, D.M Ribnicky, S Komarnytsky, N Ilic, A Poulev, N Borisjuk, A Brinker, D.A Moreno, C Ripoll, N Yakoby, J.M O‘Neal, T Cornwell, I Pastor, B Fridlender, Plants and human health in the twenty-first century, Trends Biotechnol, 20, 12, 522– 531 (2002) [2] N.S.M Tuyết, V.T.C Hải, T.A Dũng, L.T.T Nga, Khảo sát vi khuẩn gây nhiễm Trang 92 khuẩn bệnh viện bệnh viện nhân dân Gia Định, Tạp chí Y Học TP Hồ Chí Minh, 13, 6, 295–300 (2009) [3] Đ.M Phương, N.Q Anh, Căn nguyên vi sinh vật gây nhiễm trùng bệnh viện thường gặp, theo Tạp chí Y học lâm sàng, http://thaythuocvietnam.vn/Can-nguyenvi-sinh-vat-gay-nhiem-trung-benh-vienthuong-gap-di1246 n5333 (2012) TẠP CHÍ PHÁT TRIỂN KH&CN, TẬP 19, SOÁ T5- 2016 [4] T.T Hiếu, N.T Hằng, L.T.T Loan, H Việt, L.T.M Ngân, Hoạt tính loại tinh dầu thực vật kháng phế trực khuẩn Klebsiella pneumoniae, Toàn văn kỷ yếu Hội nghị Khoa học lần IX, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQG TP HCM, 158–167 (2014) [5] P.H Hộ, Cây cỏ Việt Nam, Quyển I, tập 2, Nxb MeKong, 661 (1991) [6] P.X Trung, Chữa bệnh dâm bụt, Nông Nghiệp Việt Nam (theo Nam dược thần hiệu), http://www.ykhoa.net/ yhoccotruyen/baiviet/29_010.htm (2000) [7] L.T.M Ngan, J.K Moon, J.H Kim, T Shibamoto, Y.J Ahn, Growth-inhibiting effects of Paeonia lactiflora root steam distillate constituents and structurally related compounds on human intestinal bacteria, World J Microbiol Biotechnol, 28, 4, 1575–1583 (2012) [8] Y.J Ahn, J.H Kwon, S.H Chae, J.H Park, J.Y Yoo, Growth-inhibitory responses of human intestinal bacteria to extracts of oriental medicinal plants, Microb Ecol Health Dis, 7, 5, 257–261 (1994) [9] L.T.M Ngan, J.K Moon, T Shibamoto, Y.J Ahn, Growth-inhibiting, bactericidal, and urease inhibitory effects of Paeonia lactiflora root constituents and related compounds on antibiotic-susceptible and resistant strains of Helicobacter pylori, J Agric Food Chem, 60, 9062–9073 (2012) [10] Y.W Mak, L.O Chuah, R Ahmad, R Bhat, Antioxidant and antibacterial activities of Hibiscus (Hibiscus rosasinensis L.) and Cassia (Senna bicapsularis L.) flower extracts, J King Saud Univ Sci, 25, 4, 275–282 (2013) [11] S Arullappan, Z Zakaria, D.F Basri, Preliminary screening of antibacterial activity using crude extracts of Hibiscus rosa sinensis, Trop Life Sci Res, 20, 2, 109–118 (2009) [12] B Uddin, T Hossan, S Paul, T Ahmed, T Nahar, S Ahmed, Antibacterial activity of the ethanol extracts of Hibiscus rosasinensis leaves and flowers against clinical isolates of bacteria, Bangladesh J Life Sci, 22, 65–73 (2010) [13] S.M Seyyednejad, H Koochak, E Darabpour, H Motamedi, A survey on Hibiscus rosa-sinensis, Alcea rosea L and Malva neglecta Wallr as antibacterial agents, APJTM, 3, 5, 351–355 (2010) [14] J.A Mendiola, S Santoyo, A Cifuentes, G Reglero, E Ibáñez, F.J Señoráns, Antimicrobial activity of sub- and supercritical CO2 extracts of the green alga Dunaliella salina, J Food Prot, 71, 10, 2138–2143 (2008) [15] J.A Findlay, A.D Patil, Antibacterial constituents of the diatom Navicula delognei, J Nat Prod, 47, 815–818 (1984) [16] J.A Mendiola, C.F Torres, P.J MartínAlvarez, S Santoyo, A Toré, B.O Arredondo, F.J Señoráns, A Cifuentes, E Ibáñez, Use of supercritical CO2 to obtain extracts with antimicrobial activity from Chaetoceros muelleri microalga A correlation with their lipidic content, Eur Food Res Technol, 224, 505–510 (2007) [17] M.E Carretero, J.L López-Pérez, M.J Abad, P Bermejo, S Tillet, A Israel, B Noguera-P, Preliminary study of the antiinflammatory activity of hexane extract and fractions from Bursera simaruba (Linneo) Sarg (Burseraceae) leaves, J Ethnopharmacol, 116, 1, 11–15 (2008) [18] K Kalimuthu, R Prabakaran, R Preetha, Phytochemical screening and GC-MS studies on the ethanolic extract of Turnera ulmifolia L., Int J Pharm Phytopharmacol Res, 4, 179–181(2014) Trang 93 Science & Technology Development, Vol 19, No.T5-2016 [19] T.M.B Balkhi, F.A Bhat, Bioactive potential of leaf extracts from Urtica dioica L against fish and human pathogenic bacteria, Afri J Microbiol Res., 6, 6893–6899 (2012) [20] G Rajeswari, M Murugan, V.R Mohan, GC-MS analysis of bioactive components of Hugonia mystax L (Linaceae), Res J Pharm Biomed Sci., 29, 818–824 (2012) Trang 94 [21] B Pejin, A Savic, M Sokovic, J Glamoclija, A Ciric, M Nikolic, K Radotic, M Mojovic, Further in vitro evaluation of antiradical and antimicrobial activities of phytol, Nat Prod Res., 28, 6, 372–376 (2014) [22] M.J.D Mol, P.M Radhamany, GC-MS profiling in the fruits of Tamilnadia uliginosa (Retz.) Tirveng and Sastre (Rubiaceae), WJPPS, 5, 1, 890–896 (2016) ... (Bảng 2) Hoạt tính kháng khuẩn gây bệnh cao chiết hoa dâm bụt nghiên cứu số tác giả giới Arullappan cs (2009) nghiên cứu hoạt tính kháng khuẩn cao chiết MeOH, EtOAc petroleum ether từ thân, lá, hoa... chiết MeOH từ có hoạt tính kháng S aureus khơng có khả kháng K pneumoniae [12] Nghiên cứu Seyyedneja (2010) cho thấy cao chiết EtOH dâm bụt 20 mg/đĩa giấy ( mm) kháng K pneumoniae tạo vòng kháng. .. kháng khuẩn mm, với 2,5 mg/đĩa giấy ( mm) kháng S aureus tạo vòng kháng khuẩn mm [13] Điều cho thấy rằng, cao dâm bụt có chứa hoạt chất kháng S aureus K pneumoniae Tuy nhiên, hoạt chất kháng K pneumoniae