1 Cần Thơ, 2021 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG KHẢO SÁT KHẢ NĂNG TIẾT ENZYME CELLULASE CỦA CÁC CHỦNG NẤM TRICHODERMA SPP Luận văn tốt nghiệp Ngành NÔNG HỌC i Cần Thơ, 2021[.]
TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG KHẢO SÁT KHẢ NĂNG TIẾT ENZYME CELLULASE CỦA CÁC CHỦNG NẤM TRICHODERMA SPP Luận văn tốt nghiệp Ngành: NÔNG HỌC Cần Thơ, 2021 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG Luận văn tốt nghiệp Ngành: NÔNG HỌC Tên đề tài: KHẢO SÁT KHẢ NĂNG TIẾT ENZYME CELLULASE CỦA CÁC CHỦNG NẤM TRICHODERMA SPP Giáo viên hướng dẫn: Sinh viên thực hiện: Cần Thơ, 2021 i TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN BẢO VỆ THỰC VẬT Chứng nhận chấp thuận luận văn với đề tài: “KHẢO SÁT KHẢ NĂNG TIẾT ENZYME CELLULASE CỦA CÁC CHỦNG NẤM TRICHODERMA SPP.” Do sinh viên thực đề nạp Kính trình hội đồng chấm luận văn tốt nghiệp xem xét Cần Thơ, ngày … tháng .năm Cán hướng dẫn ii TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN BẢO VỆ THỰC VẬT Hội đồng chấm luận văn tốt nghiệp chấp thuận luận văn với đề tài: “KHẢO SÁT KHẢ NĂNG TIẾT ENZYME CELLULASE CỦA CÁC CHỦNG NẤM TRICHODERMA SPP.” Do sinh viên: thực bảo vệ trước hội đồng ngày… tháng… năm Luận văn hội đồng chấp thuận đánh giá mức:…………………… Ý kiến hội đồng: ……………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… Cần Thơ, ngày … tháng năm DUYỆT KHOA Chủ tịch hội đồng Trưởng khoa Nông Nghiệp Sinh Học Ứng Dụng ii LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu thân Các số liệu, kết trình bày luận văn trung thực chưa cơng bố luận văn trước Tác giả luận văn iii LÝ LỊCH CÁ NHÂN Sinh viên: iv LỜI CẢM TẠ Kính dâng ba mẹ người suốt đời tận tụy con, xin cảm ơn người thân giúp đỡ, động viên suốt thời gian qua Thành thật biết ơn thầy, KS., KS tận tình hướng dẫn, giúp đỡ động viên em suốt thời gian làm hoàn thành luận văn tốt nghiệp Chân thành cảm tạ thầy cố vấn học tập và, tồn thể q thầy khoa Nơng Nghiệp Sinh học ứng dụng kiến thức mà quý thầy cô truyền dạy cho em suốt thời gian học tập trường Đây hành trang vững giúp em bước vào đời Gởi lời cảm ơn đến anh chị bạn sinh viên làm đề tài Bộ môn Bảo vệ Thực vật, bạn đóng góp, động viên giúp đỡ suốt thời gian học tập thực đề tài v MỤC LỤC Lý lịch cá nhân Lời cảm tạ Mục lục Danh sách bảng Danh sách hình Tóm lược MỞ ĐẦU Chương 1: LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 1.1 Khái quát đặc điểm chung nấm Trichoderma 1.1.1 Đặc điểm phân loại 1.1.2 Đặc điểm sinh thái 1.2 Khả tiết enzyme tác dụng đối kháng nấm Trichoderma 1.3 Khả phân hủy chất hữu nấm Trichoderma 1.4 Những yếu tố ảnh hưởng đến phát triển hoạt động đối kháng nấm Trichoderma 1.4.1 Nhiệt độ 1.4.2 Ẩm độ 1.4.3 Ảnh hưởng pH môi trường 1.4.4 Ảnh hưởng nguồn carbon đạm 1.4.5 Các yếu tố ảnh hưởngkhác 1.5 Khả kích thích phát triển trồng Trichoderma 1.6 Phân loại Enzyme cellulase Chương 2: PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP 2.1 Phương tiện 2.2 Phương pháp thí nghiệm 2.2.1 Ước lượng hàm lượng protein mẫu dịch trích 2.2.2 Khảo sát hoạt tính enzyme cellulase Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Ghi nhận tổng quát 3.1.2 Kết thí nghiệm 3.1.2.1 Sinh khối chủng nấm Trichoderma 3.1.2.3 Ước lượng protein dịch trích chủng nấm Trichoderma 3.1.2.4 Khả tiết enzyme cellulase chủng nấm Trichoderma KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ vi Trang iv v vi vii vii viii 2 2 5 6 7 9 11 11 12 14 14 14 14 15 16 19 DANH SÁCH BẢNG Bảng Tên bảng Trang 3.1 Sinh khối khơ (g/lít mơi trường) chủng nấm Trichoderma khác sau 10 ngày nuôi lắc (Bộ môn Bảo Vệ Thực Vật, 2008 - 2009) 15 3.2 Độ hấp thu (ODabs) protein dịch trích chủng nấm Trichoderma khác môi trường TSM lỏng sau ngày 10 ngày nuôi lắc (Bộ môn Bảo Vệ Thực Vật, 2008 - 2009) 15 3.3 Độ hấp thu (ODabs) enzyme cellulase dịch trích chủng nấm Trichoderma khác môi trường TSM lỏng sau ngày 10 ngày nuôi lắc (Bộ môn Bảo Vệ Thực Vật, 2008 - 2009) 17 DANH SÁCH HÌNH Hình Tên hình Trang Bố trí thí nghiệm máy lắc ngang 18 Máy đo độ hấp thu quang phổ Spectromerter 18 Chuẩn bị mẫu đo độ hấp thu (ODabs) protein enzyme cellulase Spectrophotometer 18 vii Tô Huỳnh Như, 2009 “Khảo sát khả tiết enzyme cellulase chủng nấm Trichoderma spp.” Luận văn tốt nghiệp kỹ sư Nông Học, khoa Nông Nghiệp & Sinh Học Ứng Dụng, trường Đại học Cần Thơ TÓM LƯỢC Đề tài “Khảo sát khả tiết enzyme cellulase chủng nấm Trichoderma spp.” thực từ tháng 11/2008 đến tháng 5/2009 nhằm chọn lọc chủng nấm Trichoderma spp có khả tiết nhiều enzyme cellulase cao điều kiện phịng thí nghiệm Kết đạt góp phần hữu ích việc phân hủy rơm rạ đồng ruộng, giúp hạn chế ngộ độc hữu cho lúa theo hướng sinh học Thí nghiệm thực phịng thí nghiệm môn Bảo vệ Thực vật, khoa Nông nghiệp & Sinh học ứng dụng, đại học Cần Thơ từ tháng 11/2008 đến tháng 5/2009, bố trí theo thể thức khối hồn tồn ngẫu nhiên, lần lặp lại Thí nghiệm thực bình tam giác (250 ml) môi trường TSM thực môi trường TSM lỏng với chủng nấm Trichoderma TTB4a, T-BM2a, T-CB1b, T-LV1a, T-CB8c, T-OM2a, T-CTTG2e, T-TTAG3b Các chủng nấm Trichoderma spp nuôi môi trường với mật số 10 bào tử/ml, lắc ngày 10 ngày với tốc độ 140 vịng/phút (rpm) Dịch trích mẫu thí nghiệm lọc qua giấy Whatman N o5, trữ 40C, xác định hoạt tính enzyme cellulase theo phương pháp Ghose (1987) hàm lượng protein theo phương pháp Bradford (1976) Kết thí nghiệm cho thấy: - Sinh khối khơ chủng nấm Trichoderma T-CB1b (0,61 g/lít), T-LV1a (0,365 g/lít) đạt cao ni mơi trường TSM lỏng sau 10 ngày lắc, chủng T-TTAG3b (0,350 g/lít) - Hai chủng nấm T-TTAG3b T-CB8c cho hàm lượng protein hoạt tính enzyme cellulase cao sau ngày 10 ngày nuôi lắc - Hàm lượng protein dịch trích hoạt tính enzyme cellulase thời điểm ngày thấp 10 ngày sau nuôi lắc Hai chủng nấm chọn T-TTAG3b T-CB8c tiết nhiều enzyme cellulase tiếp tục thử nghiệm điều kiện thực tế để đánh giá khả phân hủy cellulose chọn lọc chủng nấm có hiệu phục vụ việc phân hủy chất hữu viii 2.1.2.4 Nguồn nấm: nhận từ môn Bảo Vệ Thực Vật, khoa Nông Nghiệp & Sinh Học Ứng Dụng, trường Đại Học Cần Thơ Chủng nấm Trichoderma T - BM 2a; T - LV 1a T - OM 2a T - CB 1b T - CB 8c T - TB 4a T - CTTG 2e T TTAG 3b Địa điểm thu thập Huyện Bình Minh, tỉnh Vĩnh Long Huyện Lai Vung, tỉnh Đồng Tháp Quận Ơ Mơn, thành phố Cần Thơ Huyện Cái Bè, tỉnh Tiền Giang Huyện Cái Bè, tỉnh Tiền Giang Huyện Tam Bình, tỉnh Vĩnh Long Huyện Châu Thành, tỉnh Tiền Giang Huyện Tri Tôn, tỉnh An Giang 2.1.2.5 Môi trường nuôi cấy Môi trường PDA (Potato Dextrose Agar) (Shurfleff and Averre III, 1997) Khoai tây Dextrose Agar Nước cất vừa đủ pH 200 g 20 g 20 g 1000 ml 6,5 - 6,8 Môi trường TSM lỏng (Trichoderma Selective Medium Broth) (Elad & Chet, 1983) MgSO4.7H2O K2HPO4 KCl NH4NO3 Glucose Nước cất vừa đủ pH CMC (Carboxyl Methyl Cellulose) 0,2 g 0,9 g 0,15 g 1g 1g 1000 ml 6,5 5g Chuẩn bị hoá chất - Chất nền: 15 mM cellobiose 0,05M citrate buffer, pH 4,8 - Citrate buffer 1M Citric Acid Monohydrate Nước cất Thêm NaOH pH = 4,3 Luanvan24 10 210 g 750 ml ... chấm luận văn tốt nghiệp chấp thuận luận văn với đề tài: “KHẢO SÁT KHẢ NĂNG TIẾT ENZYME CELLULASE CỦA CÁC CHỦNG NẤM TRICHODERMA SPP.” Do sinh viên: thực bảo vệ trước hội đồng ngày… tháng… năm Luận. .. Chứng nhận chấp thuận luận văn với đề tài: “KHẢO SÁT KHẢ NĂNG TIẾT ENZYME CELLULASE CỦA CÁC CHỦNG NẤM TRICHODERMA SPP.” Do sinh viên thực đề nạp Kính trình hội đồng chấm luận văn tốt nghiệp xem... LƯỢC Đề tài ? ?Khảo sát khả tiết enzyme cellulase chủng nấm Trichoderma spp.” thực từ tháng 11/2008 đến tháng 5/2009 nhằm chọn lọc chủng nấm Trichoderma spp có khả tiết nhiều enzyme cellulase cao