Chuyên đề ứng dụng plasma trong chế biến và bảo quản thực phẩm

MỤC LỤC I TỔNG QUAN VỀ DƢỢC SINH HỌC Lịch sử phát triển dược sinh học Interferon II XU HƢỚNG NGHIÊN CỨU VÀ ỨNG DỤNG DƢỢC SINH HỌC TRONG PHÒNG NGỪA VÀ CHỮA BỆNH CHO GIA CẦM TRÊN CƠ SỞ SỐ LIỆU SÁNG CHẾ QUỐC TẾ Nghiên cứu ứng dụng dược sinh học phòng ngừa chữa bệnh cho gia cầm Nghiên cứu ứng dụng interferon phòng ngừa chữa bệnh cho gia cầm 2.1 Tình hình đăng ký sáng chế theo thời gian .8 2.2 Tình hình đăng ký bảo hộ sáng chế quốc gia .9 2.3 Các hướng nghiên cứu quan tâm nhiều nghiên cứu ứng dụng interferon phòng ngừa chữa bệnh cho gia cầm theo bảng phân loại sáng chế quốc tế IPC 10 III INTERFERON GÀ TRONG CHĂN NUÔI – KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU TẠI TRUNG TÂM CÔNG NGHỆ SINH HỌC TP.HỒ CHÍ MINH 15 Tạo inteferon alpha gamma gà tái tổ hợp hệ thống Pichia pastoris 16 Interferon gà tăng tính kháng virus Gumboro gà 23 Interferon gà làm tăng khả đề kháng vịt lên virus viêm gan vịt 25 TÀI LIỆU THAM KHẢO 28 -2- CHIẾN LƢỢC PHÁT TRIỂN DƢỢC SINH HỌC ỨNG DỤNG VÀO NGỪA VÀ CHỮA BỆNH DO VIRUS GÂY RA TRÊN GIA CẦM ************************** I TỔNG QUAN VỀ DƢỢC SINH HỌC Lịch sử phát triển dƣợc sinh học: Công nghệ sinh học đại cho bắt đầu sau phát minh cấu trúc DNA phát minh enzyme cắt DNA (enzyme cắt giới hạn) vào đầu thập niên 50 - 70 kỷ trước Nhờ vào công cụ mà cơng nghệ tái tổ hợp gen đời Ứng dụng công nghệ tái tổ hợp DNA vào lĩnh vực khác sống cho phát sinh Công nghệ Sinh học theo định nghĩa Cơng nghệ Sinh học hiểu sau: Cơng nghệ Sinh học Công nghệ tái tổ hợp gen (DNA, RNA Protein) kèm theo công nghệ tế bào Vậy Dược sinh học gì: Đó dược chất sinh học Protein (bao gồm kháng thể), Acid Nucleic (DNA, RNA, Oligonucleotid) sử dụng điều trị chẩn đoán sản xuất khơng phải cách ly trích từ nguồn tự nhiên Hoặc nói cách khác: hoạt chất sinh học Protein (bao gồm kháng thể), Acid Nucleic (DNA, RNA, Oligonucleotid) sử dụng điều trị chẩn đốn sản xuất thơng qua đường Công nghệ sinh học Dược sinh học sản xuất vào năm 1972 Peter Lobban công (Stanford University Medical School) Tuy nhiên quyền sản xuất dược sinh học đầu tiên- insulin công ty Genentech sáng chế vào năm 1978, sau chuyển giao cho cơng ty Eli Lilly Tiếp theo insulin hormone tăng trưởng dùng cho trẻ em chậm lớn Chất trước ly trích từ xác chết, sau vào năm 1981 cơng ty Genentech sách chế đường tái tổ hợp thương mại vào năm 1987 Kể từ đến nay, số lượng dược sinh học ngày tăng Những sản phẩm dược sinh học chính:  Blood factors (Factor VIII and Factor IX)  Thrombolytic agents (tissue plasminogen activator)  Hormones (insulin, glucagon, growth hormone, gonadotrophins)  Haematopoietic growth factors (Erythropoietin, colony stimulating factors)  Interferons (Interferons-α, -β, -γ)  Interleukin-based products (Interleukin-2) -3-  Vaccines (Hepatitis B surface antigen)  Monoclonal antibodies (Various)  Additional products (tumour necrosis factor, therapeutic enzymes) Thị trường số chất dược sinh học giới tăng hàng năm: Insulin 12 Tỷ USD Interferon alpha 2b 2.5 Tỷ USD Interleukin 0.5 Tỷ USD Somatropin 3.0 Tỷ USD Human Growth Hormone 3.1 Tỷ USD Tổng trị giá protein dược sinh học ước tính 95 tỷ USD/2010 Interferon: Một dược sinh học sử dụng rộng rãi sau insulin interferon Hàng năm, doanh thu loại interferon vào khoảng 2,5 tỷ USD Interferon xem cứu cánh cho bệnh nan y virus gây Ngày interferon cho chất ngăn ngừa số bệnh ung thư Lịch sử phát interferon cho Yasu-ichi Nagano Yasuhiko Kojima vào năm 1954 Hai tác giả nghiên cứu nhân lên virus thỏ tình cờ phát virus bị ức chế vùng da thỏ tiêm loại virus chết khác trước Giả thuyết có chất ―interfer‖ (can thiệp) lên nhân lên virus Phát minh đăng tạp chí Journal de la Société de Biologie Tuy nhiên biết đến báo đăng tạp chí tiếng Pháp Sau có hai nhóm nghiên cứu độc lập khác Alick Isaacs (người Anh), Jean Lindenmann (người Thụy sĩ) nhóm Monto Ho, in John Ender's năm 1957 làm trứng gà cho kết tương tự đặt tên cho hoạt chất ―Interferon‖ có nghĩa ―Interfering factor‖ Từ chất gây ức chế nhân lên virus gọi ―Interferon‖ Tuy nhiên đến năm 1980, gen mã hóa cho interferon nhân dịng sau năm 1987 sản xuất đại trà Để làm tăng tính bền interferon thể bệnh nhân, năm 2002, PEG-interferon sản xuất F Hoffmann-La Roche đưa thị trường làm giảm đáng kể lần tiêm cho -4- bệnh nhân Hiện công ty Nanogene Việt Nam sản xuất thương mại sản phẩm tương tự Cơ chế hoạt động Interferon cho tác động lên nhiều loại tế bào Có thể tóm tắt hoạt động interferon sau:  Khi tế bào bị chết virus ly giải tế bào, tế bào tiết interferon  Những tế bào lân cận tiếp nhận interferon tiết số lượng lớn enzyme (PKR-protein Kinase R) PKR làm giảm tổng hợp protein, phá hủy ARN virus tế bào, giảm tổng hợp protein giảm ARN  Interferon làm tăng hoạt động genes (ISGs)—gene kháng viruses  Ngồi ra, inteferon cịn làm giảm thiểu lây nhiễm virus cách tăng hoạt tính protein p53 (mã hóa gene tp53: tumor suppressor gene) protein làm tăng apoptosis tế bào bị nhiễm virus  Chức khác interferons tăng diện protein virus lên tế bào T, làm tăng khả miễn dịch toàn thể  Interferons gamma hoạt hóa trực tiếp Immune cells, Macrophages Natural killer cells Dựa chế hoạt động, interferon dược chia làm type Trong type1 cho loại ứng dụng nhiều vào sản xuất -5- II XU HƢỚNG NGHIÊN CỨU VÀ ỨNG DỤNG DƢỢC SINH HỌC TRONG PHÒNG NGỪA VÀ CHỮA BỆNH CHO GIA CẦM TRÊN CƠ SỞ SỐ LIỆU SÁNG CHẾ QUỐC TẾ Nghiên cứu ứng dụng dƣợc sinh học phòng ngừa chữa bệnh cho gia cầm Dược sinh học có nhiều ứng dụng sản phẩm phòng ngừa chữa bệnh cho gia cầm Trong phân tích này, Trung tâm đề cập tới nhóm sản phẩm protein tổng hợp có khả kích thích miễn dịch cho gia cầm: cytokine, interferon, interleukine, lymphokine, chemokine 35 33 28 30 25 25 21 20 10 14 13 15 7 Tình hình đăng ký sáng chế nghiên cứu ứng dụng dược sinh học phòng ngừa chữa bệnh cho gia cầm theo thời gian Theo nguồn thông tin tiếp cận từ sở liệu Wipsglobal, đầu thập niên 90 có sáng chế đăng ký bảo hộ việc nghiên cứu sử dụng dược sinh học phòng ngừa chữa bệnh cho gia cầm Các sáng chế đề cập tới việc sử dụng interleukin để tăng cường phát triển cho loài gia cầm, đặc biệt gà Từ năm 1990-2013: có khoảng 233 sáng chế đăng ký Theo thời gian, tình hình đăng ký sáng chế có nhiều biến động nhìn chung tăng dần theo thời gian, tăng mạnh giai đoạn 2008-2012 Hiện nay, sáng chế nghiên cứu sử dụng dược sinh học phòng ngừa chữa bệnh cho gia cầm đăng ký bảo hộ ở:  Tổ chức châu Âu – EP:11 SC tổ chức giới – WO: 18 SC  11 quốc gia: Trung Quốc (CN): 142 SC, Mỹ (US): 35 SC, Nhật (JP): SC, Hàn Quốc (KR): SC, Canada (CA): SC, Nga (RU): SC, Mexico (MX): SC, Israel (IL): SC, Đài Loan (TW): SC, Ba Lan (PL): SC Úc (AU): SC -6- 160 142 140 120 100 80 60 35 40 20 5 2 1 JP KR CA RU MX IL TW PL AU CN US Tình hình đăng ký sáng chế nghiên cứu ứng dụng dược sinh học phòng ngừa chữa bệnh cho gia cầm quốc gia Trong nhóm protein tổng hợp có khả kích thích miễn dịch cho gia cầm, như: cytokine, interferon, interleukine, lymphokine, chemokine:  Các sáng chế đăng ký nghiên cứu ứng dụng interferon phòng ngừa chữa bệnh cho gia cầm chiếm 66% tổng lượng sáng chế dược sinh học mà phía Trung tâm tiếp cận  Các sáng chế đăng ký nghiên cứu ứng dụng protein tổng hợp khác như: cytokine, interleukine, lymphokine, chemokine phòng ngừa chữa bệnh cho gia cầm chiếm 34% tổng lượng sáng chế dược sinh học mà phía Trung tâm tiếp cận Interferon Protein tổng hợp khác (cytokine, lymphokine, interleukine, chemokine) Protein tổng hợp khác 34% Interferon 66% -7- Nghiên cứu ứng dụng interferon phòng ngừa chữa bệnh cho gia cầm 2.1 Tình hình đăng ký sáng chế theo thời gian: Theo nguồn thông tin tiếp cận từ sở liệu Wipsglobal, từ năm 1993 có sáng chế đăng ký nghiên cứu interferon phòng ngữa chữa bệnh cho gia cầm Từ đến nay, có khoảng 154 sáng chế đă đăng ký 28 30 26 25 20 15 15 15 10 Tình hình đăng ký sáng chế nghiên cứu ứng dụng interferon phòng ngừa chữa bệnh cho gia cầm theo thời gian Sáng chế đăng ký bảo hộ Mỹ vào ngày 22/10/1993 Sáng chế đề cập tới đoạn gen mã hóa interferon gà phương pháp sản xuất chúng Theo đồ thị biểu diễn, thấy lượng sáng chế tập trung nhiều từ năm 2008 nay, cụ thể sau:  Năm 1993-2007: có 51 sáng chế, trung bình năm có khoảng sáng chế đăng ký  Năm 2008-2013: có 103 sáng chế, trung bình năm có khoảng 17 sáng chế đăng ký, nhiều gấp khoảng lần so với lượng sáng chế trung bình giai đoạn trước  Lượng sáng chế tập trung nhiều năm: năm 2010 (28 SC), năm 2012 (26 SC) -8- 2.2 Tình hình đăng ký bảo hộ sáng chế quốc gia: 120 102 100 80 60 40 25 20 4 CN US RU KR JP CA Tình hình đăng ký sáng chế nghiên cứu ứng dụng interferon phòng ngừa chữa bệnh cho gia cầm quốc gia Hiện nay, sáng chế nghiên cứu sử dụng interferon phòng ngừa chữa bệnh cho gia cầm đăng ký bảo hộ ở:  Tổ chức châu Âu – EP: sáng chế tổ chức giới – WO: sáng chế  quốc gia: Trung Quốc (CN): 102 sáng chế, Mỹ (US): 25 sáng chế, Nga (RU): sáng chế, Hàn Quốc (KR): sáng chế, Nhật (JP): sáng chế Canada (CA): sáng chế Theo bảng số liệu đây, sáng chế nghiên cứu sử dụng interferon phòng ngừa chữa bệnh gia cầm đăng ký bảo hộ Mỹ (năm 1993) Đến năm 1994 có sáng chế đăng ký bảo hộ Nga Canada Trong 10 năm gần đây, sáng chế interferon phòng ngừa chữa bệnh gia cầm bắt đầu đăng ký bảo hộ quốc gia khu vực châu Á:  Năm 2004: có sáng chế đăng ký bảo hộ Trung Quốc  Năm 2006: có sáng chế đăng ký bảo hộ Nhật  Năm 2009: có sáng chế đăng ký bảo hộ Hàn Quốc -9- Nơi đăng ký bảo hộ Sáng chế đăng ký Mỹ 1993 Nga 1994 Canada 1994 Trung Quốc 2004 Nhật 2006 Hàn Quốc 2009 Bảng số liệu: tình hình đăng ký bảo hộ sáng chế quốc gia theo thời gian (1993-2013) Nhìn chung, lượng sáng chế đăng ký bảo hộ nghiên cứu ứng dụng interferon phòng ngừa chữa bệnh cho gia cầm quốc gia có đặc điểm sau:  Sáng chế đăng ký bảo hộ khu vực khu vực châu Á (Trung Quốc, Hàn Quốc, Nhật) tập trung nhiều giai đoạn năm gần (2008-2013)  Sáng chế đăng ký bảo hộ Canada, Nga Mỹ tập trung nhiều giai đoạn 1993-2002 2.3 Các hướng nghiên cứu quan tâm nhiều nghiên cứu ứng dụng interferon phòng ngừa chữa bệnh cho gia cầm theo bảng phân loại sáng chế quốc tế IPC Giai đoạn 1993-1997 Giai đoạn 1998-2002 Giai đoạn 2003-2007 Giai đoạn 2008-2013 CA CN JP KR RU US 50% 0% 0% 0% 25% 32% 50% 0% 0% 0% 25% 36% 0% 11% 50% 0% 25% 24% 0% 89% 50% 100% 25% 8% -10- Với 154 sáng chế phía Trung tâm tiếp cận được, đưa vào bảng phân loại sáng chế quốc tế IPC (International Patent Classification), nhận thấy:  25% lượng sáng chế thuộc hướng nghiên cứu ứng dụng interferon  75% lượng sáng chế thuộc hướng nghiên cứu sản xuất interferon Nghiên cứu sản xuất interferon Ứng dụng interferon 25% 75% A Hƣớng nghiên cứu sản xuất interferon: Nghiên cứu sản xuất interferon 25 22 22 20 14 15 10 4 4 Tình hình đăng ký sáng chế nghiên cứu sản xuất interferon phòng ngừa chữa bệnh cho gia cầm Hướng nghiên cứu sản xuất interferon phòng ngừa chữa bệnh cho gia cầm bắt đầu có sáng chế đăng ký bảo hộ vào năm 1993 Theo thời gian tình hình đăng -11- protein CN102899331 alpha-interferon vịt vector tái tổ hợp 25/09/2012 CN101899446 Phương pháp tái tổ hợp alpha-interferon vịt 08/02/2010 Sáng chế nghiên cứu sản xuất interferon gamma gà CN102250919 Gamma interferon gà làm giảm độc dược 31/05/2011 Salmonella CN102978214 Gamma interferon gà, kỹ thuật tái tổ hợp ứng 30/08/2011 dụng chúng CN102964443 Xây dựng phương pháp sản xuất vector 13/12/2012 tái tổ hợp Gamma interferon gà Sáng chế nghiên cứu sản xuất interferon alpha gà CN102108096 Phương pháp sản xuất alpha-interferon gà hóa 25/12/2009 trị II CN001594568 Phương pháp sản xuất alpha-interferon gà 24/06/2004 vector tái tổ hợp CN102961334 Phương pháp sản xuất alpha-interferon gà ổn 11/12/2012 định - Ứng dụng đưa vào phun xịt chuồng trại CN102041263 Alpha interferon/interleukin gà 08/02/2010 Sáng chế ứng dụng interferon Thức ăn gia súc có chứa alpha interferon gà CN101785535 US5885567 Điều trị bệnh nhiễm trùng cho gia cầm thông 19/09/1994 qua đường uống protein interferon gia cầm RU2398596 Phương pháp phòng ngừa điều trị bệnh gây virus cúm gia cầm H5N1 việc 24/09/2008 sử dụng interferon chất ức chế neuraminidase KR20120098351 Interferon, thành phần để ngăn ngừa cúm 28/02/2011 gia cẩm CN101417122 Phương pháp điều chế alpha-interferon gà tái tổ 04/12/2008 hợp ứng dụng tiêm chủng cho gà -14- 08/04/2010 NHẬN XÉT: Trong nhóm sáng chế protein tổng hợp có khả kích thích miễn dịch cho gia cầm mà Trung tâm tiếp cận được, hướng nghiên cứu sản xuất ứng dụng interferon phòng ngừa chữa bệnh cho gia cầm hướng nghiên cứu có nhiều sáng chế đăng ký bảo hộ Từ năm 1993 đến nay, sáng chế nghiên cứu ứng dụng interferon phòng ngừa chữa bệnh cho gia cầm đăng ký bảo hộ quốc gia 10 năm gần bắt đầu đăng ký bảo hộ khu vực châu Á Phần lớn sáng chế đăng ký bảo hộ tập trung vào hướng nghiên cứu sản xuất interferon, chiếm 75%; hướng nghiên cứu ứng dụng interferon chiếm 25% Trong hướng nghiên cứu sản xuất interferon, đa phần sáng chế có nghiên cứu liên quan đến công nghệ vi sinh tái tổ hợp để sản xuất interferon, chiếm khoảng 70% tổng lượng sáng chế nghiên cứu sản xuất interferon phòng ngừa chữa bệnh cho gia cầm III INTERFERON GÀ TRONG CHĂN NUÔI – KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU TẠI TRUNG TÂM CƠNG NGHỆ SINH HỌC TP.HỒ CHÍ MINH Tác dụng ngừa chữa bệnh virus gây interferon áp dụng rộng rãi chăn nuôi Interferon gà sản phẩm nghiên cứu sản xuất nhiều để ứng dụng chăn nuôi Trong thời gian gần đây, hàng loạt sáng chế ứng dụng interferon chăn nuôi đăng ký nhiều Trung Quốc Nỗi bật ứng dụng interferon gà chăn nuôi sử dung interferon nhằm kháng bệnh nói chung cho gà sử dụng inteferon gamma làm tăng trọng gà Đây hướng mà nước hướng tới nhằm giảm thiểu sử dụng kháng sinh thuốc tăng trọng chăn nuôi Mặt khác, với gia tăng dòng virus cúm gia cầm hàng năm, việc sử dụng kết hợp vaccine interferon làm giảm thiểu bùng phát đại dịch cúm gia cầm gây Việt Nam, xu hội nhập, cần nhanh chóng phát triển ngành công nghệ nhằm đưa công nghiệp chăn nuôi lên tầm giới Trung tâm Công nghệ Sinh học Thành phố Hồ Chí Minh triển khai hướng nghiên cứu Chúng tơi tóm lược sau kết nghiên cứu interferon Trung tâm CNSH TP.HCM đồng thời đưa hướng ứng dụng tiềm dược sinh học vào phát triển ngành chăn cuôi nước ta -15- Tạo inteferon alpha gamma gà tái tổ hợp hệ thống Pichia pastoris: Hai loại interferon gà chúng tơi nhân dịng, chuyển nạp vào nấm men Pichia pastoris Các dòng vi khuẩn chuyển gen sản xuất lượng interferon ngoại bào mức cao; khoảng 1g inteferon/lit mơi trường Interferon cần qua sơ chế sử dụng cách an toàn, giá thành sản xuất thấp a Lựa chọn hệ thống biểu recombinant ChIFN: số hệ thống đưa so sánh xem xét:  Ecoli: có khả tái cấu trúc, sản xuất lại cấu trúc (refolding) ống nghiệm / có nguy nội độc tố  COS, Baculovirus: sản xuất protein mức thấp / có khả nhiễm virus tử động vật  Lettuce: sản xuất protein mức thấp / hoạt tính kháng virus khơng rõ ràng thể  Pichia pastoris: nấm men không độc, gần với thể người, tỷ lệ lên men với hiệu suất cao  Lựa chọn hệ thống nấm men Pichia pastoris để tạo inteferon alpha gamma gà tái tổ hợp b Nhân dòng biểu interferon gà hệ thống pichia pastoris Nhân dòng interferon gà: -16- Gen Interferon alpha nhân lên từ DNA genomic, gamma tổng hợp từ cặp mồi overlap Biểu interferon gà hệ thống pichia pastoris: -17- Lúc đầu: lên men bình thủy tinh Sau đó: chuyển sang hệ thống lên men -18- c Quy trình sản xuất interferon đơn giản: Sản xuất Interferon cho gia cầm u cầu phải có quy trình đơn giản, giá thành rẻ dáp ứng nhu cầu thực tiễn đưa vào sản xuất quy mô cơng nghiệp Chính lý đó, Trung tâm Cơng nghệ Sinh học TP.HCM thiết lập quy trình sản xuất Interferon gồm bước đơn giản đảm bảo chất lượng sản phẩm  Bước 1: lên men hệ thống  Bước 2: Ly tâm thu dịch  Bước 3: Lọc tiếp tuyến: loại bỏ tạp chất Lúc này, interferon đủ điều kiện để sử dụng cho gia súc, gia cầm -19- d Thử nghiệm tế bào – Điều trị bệnh cúm gia cầm ChIFN: Sau có interferon thực nghiệm, bước phải đem kiểm tra hiệu interferon với tế bào nhiễm virus Sử dụng đĩa petri ni tế bào nhiễm virus, sau giữ lại đĩa petri làm mẫu đối chứng, đĩa lại cho thử nghệm với interferon nồng độ khác (ChIFN type I + ChIFN type II để tăng cường hoạt tính kháng virus) Kết nhận thấy: đĩa petri có sử dụng intereferon số lượng tế bào chết giảm so với đĩa petri đối chứng ( không sử dụng interferon)  xem bước thử nghiệm sơ e Thử nghiệm độc tố sản phẩm rChIFN-α tế bào sơ phôi gà: Sau thử nghiệm sơ bộ, tiến hành tiếp tục thử nghiệm interferon tế bào sơ phơi gà Pha lỗng dịch interferon nồng độ khác nhau: 2.09 g/ml, 4.19 g/ml, 8.38 g/ml, 16.75 g/ml, 33.5 g/ml, 67 g/ml Điều trị interferon tế bào sơ phôi gà, sau 72h nhận thấy:  Ở nồng độ 67 /ml rChIFN-α, tế bào tách khỏi bề mặt bình tất tế bào chết, OD620 ghi nhận 0.114, tương ứng với 15% tế bào sống  Khi xử lý với nồng độ thấp hơn: 33,5 /ml rChIFN-α, nhận thấy số lượng tế bào chết giảm số lượng tế bào sống tăng lên -20-  Kết cho thấy rChIFN-α không biểu tác dụng gây độc tế bào với liều sử dụng thấp 16,75 /ml, khơng có khác biệt đáng kể so với nhóm đối chứng f Thử nghiệm hiệu ứng kháng virus rChIFN-α nguyên bào sợi phôi gà: Sau xác định dịch interferon từ nồng độ 16,75 /ml trở xuống không gây độc tế bào, nhóm nghiên cứu tiếp tục thử nghiệm với nồng độ thấp 16,75 /ml tế bào nhiễm loại virus: virus cúm ( Newcatle disease virus) virus gây bệnh tiêu chảy ( Infectious bursal disease virus) Kế nhận thấy: nồng độ 1.34 bào sống cao: /ml 13.4 /ml có hiệu tốt, tỷ lệ tế  Ở nồng độ 1.34 /ml: tỷ lệ tế bào nhiễm virus cúm sống sót 90 tỷ lệ tế bào nhiễm virus gây bệnh tiêu chảy sống sót 88 ,  Ở nồng độ 13.4 /ml: tỷ lệ tế bào nhiễm virus cúm sống sót 90 tỷ lệ tế bào nhiễm virus gây bệnh tiêu chảy sống sót 85 , -21- Sau 2h nhiễm virus, xử lý interferon để điều trị, tỷ lệ tế bào sống mức cao :  Ở nồng độ 1.34 /ml: tỷ lệ tế bào nhiễm virus cúm sống sót 81 lệ tế bào nhiễm virus gây bệnh tiêu chảy sống sót 82  Ở nồng độ 13.4 /ml: tỷ lệ tế bào nhiễm virus cúm sống sót 69 tỷ lệ tế bào nhiễm virus gây bệnh tiêu chảy sống sót 81 -22- , tỷ , Sau 24h nhiễm virus, xử lý interferon để điều trị, nhận thấy có hiệu quả:  Ở nồng độ 1.34 /ml: tỷ lệ tế bào nhiễm virus cúm sống sót 90 tỷ lệ tế bào nhiễm virus gây bệnh tiêu chảy sống sót 79 ,  Ở nồng độ 13.4 /ml: tỷ lệ tế bào nhiễm virus cúm sống sót 86 lệ tế bào nhiễm virus gây bệnh tiêu chảy sống sót 83 , tỷ Interferon gà tăng tính kháng virus Gumboro gà: Thử nghiệm hoạt tính kháng virus Gumboro tế bào invitro gà cho thấy kết tốt Khi kết hợp loại interferon (alpha gamma), nhỏ mũi cho gà trước hay sau nhiễm virus cho kết tốt Hệ số sống sót tương đối (RPS: Relative Percent Survival) gà bị bệnh lên tới 80% Điều đặc biệt sử dụng interferon để ngừa bệnh hay chữa trị cho đàn gà có kết tốt Đây điểm bật interferon so với sản phẩm vaccine thông thường Hiệu rChIFN-α điều trị bệnh Gumboro gà tuần tuổi Nghiệm thức SL Tỉ lệ gà bệnh (%) Tỉ lệ gà chết (%) RPS ChIFNα (134 µg) 15 33,33b (5/15) 6,67b (1/15) 83,3% ChIFNα/γ (13,4) 15 33,33b (5/15) 6,67b (1/15) 83,3% -23- ChIFNα (1,34 µg) 15 46,67b (5/15) 13,33ab (2/15) 66,7% ChIFNα (0,134 µg) 15 53,33b (5/15) 20,00ab (3/15) 50% ĐC (+) 15 100,00a 40,00a (6/15) ĐC (-) 15 0,00 Hiệu phòng điều trị bệnh Gumboro ChIFNα/γ gà tuần tuổi Khảo sát hiệu phòng bệnh: nhỏ mũi gà interferon trước, sau cho đàn gà nhiễm virus Khảo sát hiệu trị bệnh: cho đàn gà nhiễm virus trước, sau xử lý interferon Nhóm Số liều IFN Virus Tỉ lệ bệnh Tỉ lệ chết (%) (%) RPS Phòng bệnh: ChIFNα/γ (100:1µg) + 16,7b (5/30) 6,7b (2/30) 80 % Phịng bệnh: ChIFNα/γ (10: 1µg) + 13,3b (4/30) 6,7b (2/30) 80% Trị bệnh: ChIFNα/γ (100: 1µg ) + 26,7b (8/30) 10b (3/10) 70% Chứng dương virus + 100a (30/30) 33,3a (10/30) Chứng âm virus - (0/30) (0/30) -24- Hiệu giá kháng thể gà nghiệm thức trƣớc sau gây nhiễm virus Gumboro Hiệu giá kháng thể cho thấy đàn gà sử dụng interferon khả đáp ứng miễn dịch tăng cao tuần lễ Interferon gà làm tăng khả đề kháng vịt lên virus viêm gan vịt: Đối với interferon, đặc hiệu loài thường gây cản trở hiệu kháng virus sử dụng interferon loài ứng dụng cho loài khác Tuy nhiên gia cầm, tương đồng cấu trúc loại interferon loài khác cao Do vậy, việc sử dụng interferon loài loài khác cho gia cầm cho có hiệu Ở nước ta, vịt loại nuôi nhiều thứ hai sau gà Hiện vịt đồng sông Cửu Long có dịch viêm gan siêu vi Nhóm nghiên cứu sơ tiến hành thử nghiệm có kết khả quan việc sử dụng interferon gà kháng virus viêm gan cho vịt Ngoài ra, kết tăng trọng vịt sau ngày thử nghiệm cho thấy tăng trọng rõ nét (38%) vịt cho uống interferon so với đối chứng Kết trùng với số kết mà giới công bố -25- Hiệu ChIFNs điều trị viêm gan vịt vịt ngày tuổi Nhóm Số vịt Virus Tỉ lệ vịt bệnh (%) Tỉ lệ vịt chết (%) RPS (%) ChIFNα (10µg) 30 + 100 (30/30) 26.7 71.4 ChIFNα (50µg) 30 + 100 (30/30) 23.3 75.0 ChIFNα (100µg) 30 + 100 (30/30) 20 78.7 ChIFNγ (10µg) 30 + 100 (30/30) 30 67.9 ChIFNγ (50µg) 30 + 100 (30/30) 33.3 64.3 ChIFNγ (100µg) 30 + 100 (30/30) 33.3 64.3 ĐC(+) 30 + 100 (30/30) 93.3 ĐC(-) 30 - (0/30) 100 Vịt cho uống dịch virus DHV-1 với liều gây nhiễm 103LD50 (0,2ml/con) Sau 12 giờ, vịt xử lí với ChIFNs (nhỏ mắt/mũi) Theo giõi ngày Kết khảo sát hoạt tính CHIFNS tăng trọng vịt Cân nặng trung bình (g/con) Nghiệm thức Số vịt ChIFNγ (100µg/con) % tăng Ngày Ngày Ngày Ngày 30 40a 58a 88a 117a 38% ChIFNα (100µg/con) 30 42a 55a 82b 100b 4% Đối chứng 30 41a 48b 74c 97b Sử dụng Interferon giúp gia cầm ngăn ngừa số bệnh, hấp thụ thức ăn tốt nên giúp gia cầm tăng trọng -26- Kết luận: Chế phẩm interferon alpha+gamma gà biểu hệ thống pichia pastoris sử dụng trực tiếp sơ chế gia cầm rChIFN-α+Y Có thể sử dụng để phòng điều trị gà kháng lại virus gumboro new catsle gây bệnh gà rChIFN-α+ Y có tác dụng ngừa chữa trị bệnh viêm gan siêu vi vịt rChIFN-α+ Y có khả tăng trọng gia cầm Interferon gà sử dụng để ngăn ngừa, khu trú cúm gia cầm loài gia cầm diện rộng vì: o Khả ngừa chữa trị bệnh virus o Tác dụng rộng loại virus khác o Tác dụng rộng loài gia cầm khác -27- TÀI LIỆU THAM KHẢO TS Nguyễn Quốc Bình; Tổng quan dược sinh học; 2014 Trung tâm Thông tin Khoa học & Công nghệ; Xu hướng nghiên cứu ứng dụng dược sinh học phòng ngừa chữa bệnh cho gia cầm sở số liệu sáng chế quốc tế; 2014 TS Nguyễn Quốc Bình; Interferon gà chăn nuôi – kết nghiên cứu Trung tâm Cơng nghệ Sinh học TP.Hồ Chí Minh; 2014 http://www.wipsglobal.com -28- ... killer cells Dựa chế hoạt động, interferon dược chia làm type Trong type1 cho loại ứng dụng nhiều vào sản xuất -5- II XU HƢỚNG NGHIÊN CỨU VÀ ỨNG DỤNG DƢỢC SINH HỌC TRONG PHÒNG NGỪA VÀ CHỮA BỆNH CHO... interferon Sáng chế thuộc hướng nghiên cứu đăng ký bảo hộ Trung Quốc Mỹ B Hƣớng ứng dụng interferon: Hƣớng ứng dụng interferon 12 11 10 6 4 2 2 Tình hình đăng ký sáng chế nghiên cứu ứng dụng interferon... sáng chế đăng ký bảo hộ thuộc hướng nghiên cứu ứng dụng interferon phòng chữa bệnh cho gia cầm Năm 1994 có sáng chế đăng ký bảo hộ, lượng sáng chế tập trung nhiều vào năm 2008 (11 sáng chế) Lượng