Đặc điểm dấu ấn sinh học và bất thường gen MYC, BCL2, BCL6 trong bệnh u lympho không Hodgkin não nguyên phát tế bào B lớn lan tỏa tại Bệnh viện Chợ Rẫy

U lympho không Hodgkin não nguyên phát tế bào B lớn lan tỏa là một biến thể hiếm gặp của ULKH ngoài hạch. Bài viết trình bày đặc điểm dấu ấn sinh học và bất thường gen MYC, BCL2, BCL6 trong bệnh u lympho không Hodgkin não nguyên phát tế bào B lớn lan tỏa tại Bệnh viện Chợ Rẫy.

KỶ YẾU CÁC CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CHUN NGÀNH HUYẾT HỌC - TRUYỀN MÁU ĐẶC ĐIỂM DẤU ẤN SINH HỌC VÀ BẤT THƯỜNG GEN MYC, BCL2, BCL6 TRONG BỆNH U LYMPHO KHÔNG HODGKIN NÃO NGUYÊN PHÁT TẾ BÀO B LỚN LAN TỎA TẠI BỆNH VIỆN CHỢ RẪY Hoàng Thị Thuý Hà1, Lê Hùng Phong1, Mạc Hồng Phước1, Nguyễn Trường Sơn2, Phạm Quang Vinh3 TÓM TẮT 34 Đặt vấn đề: U lympho không Hodgkin (ULKH) não nguyên phát tế bào B lớn lan tỏa biến thể gặp ULKH hạch Nguồn gốc tế bào khối u thuộc nhóm khơng tâm mầm với dấu ấn đặc trưng MUM1 BCL6 dương tính tỷ lệ cao Đối tượng phương pháp nghiên cứu: Đối tượng gồm 57 bệnh nhân chẩn đoán ULKH não nguyên phát tế bào B lớn lan tỏa, làm xét nghiệm hóa mơ miễn dịch phát bất thường gen MYC, BCL2, BCL6 kỹ thuật FISH Phương pháp nghiên cứu: mô tả tiến cứu Kết quả: Tỷ lệ dương tính với dấu ấn CD10, BCL6, MUM1 BCL2 10,5%; 61,4%; 87,7% 67,3% Tỷ lệ nhóm tâm mầm 19,3% không tâm mầm 80,7% Chỉ số Ki67 dương tính cao với trung vị 60% (từ 0% đến 95%) Bất thường di truyền thường gặp tái xếp BCL6 (9,8%), chuyển đoạn MYC (5,9%) Tái xếp BCL2 double-hit (MYC/BCL2, Bệnh viện Chợ Rẫy Bộ Y tế Đại học Y Hà Nội Chịu trách nhiệm chính: Hồng Thị Thúy Hà SĐT: 0908.456.307 Email: thuyhado@yahoo.com.vn Ngày nhận bài: 20/8/2022 Ngày phản biện khoa học: 20/8/2022 Ngày duyệt bài: 17/10/2022 298 MYC/BCL6) gặp bệnh nhân (1,9% nhóm) Kết luận: Đa số bệnh nhân u lympho não nguyên phát có nguồn gốc tế bào không tâm mầm tái xếp gen MYC gặp tỷ lệ cao bất thường di truyền Từ khóa: U lympho khơng Hodgkin não ngun phát, đặc điểm sinh học khối u, bất thường di truyền SUMMARY TUMOR BIOMARKERS, MYC TRANSLOCATION, BCL2 AND BCL6 REARRANGEMENTS IN NEWLY DIAGNOSED PRIMARY CEREBRAL DIFUSE LARGE B CELL LYMPHOMA AT HEMATOLOGY DEPARTMENT IN CHO RAY HOSPITAL Background: Primary cerebral diffuse large B cell lymphoma is an uncommon variant of extranodal non – Hodgkin lymphoma The cell origin of the tumor is the non- geminal center Bcell Subjects and Research method: Subject: We performed a analysis of molecular biomarkers, MYC translocations, BCL2 and BCL6 rearrangements by FISH in 57 patients who have been diagnosed primary cerebral lymphoma Research method: prospective descriptive study Results: CD10, BCL-6, MUM1, BCL-2 antigens were immunohistochemically labeled on paraffin-embedded sections; the were positive TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 520 - THÁNG 11 - SỐ ĐẶC BIỆT - 2022 in 10,5%; 61,4%; 87,7% and 67,3% of the tumors, respectively Among the 57 patients, the percentage of GCB was 19,3% and of non- GCB was 80,7% The Ki67 index positive was high level (median 60%, range: 0-95%) The most common genetic abnormalities were BCL6 rearrangements (9,8%), MYC translocations (5,9%) BCL2 rearrangements and double-hit (MYC/BCL2, MYC/BCL6) occurred in patient (1,9% each) Conclusion: The majority of primary cerebral lymphoma patients were classified in the non- GCB subgroup and the MYC translocations had the highest rate of genetic abnormalities Keywords: Primary Cerebral diffuse large B cell Lymphoma, tumor biomarkers, genetic abnormalities I ĐẶT VẤN ĐỀ U lympho không Hodgkin (ULKH) nguyên phát hệ thần kinh trung ương biến thể khơng phổ biến ULKH ngồi hạch, biểu não, màng não mềm, mắt hay tủy sống mà khơng có dấu hiệu ULKH hệ thống xem bệnh Theo thống kê hàng năm có 2,5 – 30 trường hợp mắc/10 triệu người ULKH não nguyên phát với đặc điểm khối u khu trú não phân nhóm thường gặp (chiếm đến 80% ULKH nguyên phát hệ thần kinh) [1] Phần lớn ULKH não nguyên phát (>95%) u lympho tế bào B lớn lan tỏa (DLBCL) với biểu dấu ấn dòng tế bào B (như CD20, CD19, CD79a), dấu ấn đơn dòng immunoglobulin chuỗi nhẹ bề mặt Tương tự ULKH hệ thống, ULKH não nguyên phát tế bào B lớn lan tỏa có nhóm: tâm mầm khơng tâm mầm Hai nhóm phân biệt với dựa vào mức độ biểu gen diễn tiến lâm sàng Tuy vậy, cịn số trường hợp khơng thể xếp vào loại biểu gen không dễ thực rộng rãi quốc gia, nước phát triển Vì vậy, phân nhóm DLBCL dựa vào xét nghiệm hóa mơ miễn dịch (CD10, BCL6 IRF4 / MUM1) thuật toán để xếp vào hai nhóm tâm mầm khơng tâm mầm Mặc dù nhóm khơng có tương quan chặt chẽ chấp nhận lâm sàng lược đồ Hans phù hợp với biểu gen [2] Một số nghiên cứu giới tập trung nghiên cứu hình thái ULKH não nguyên phát tế bào B lớn Kết cho thấy 50-80% có biểu BCL6 lam nhuộm hóa mơ 95% dương tính với MUM1, chứng minh phần lớn ca bệnh thuộc phân nhóm khơng tâm mầm Theo nghiên cứu CALGB 50202, khối u tăng tiết BCL6 có mối tương quan với tình trạng kháng trị bệnh, thời gian sống cịn thời gian sống bệnh khơng tiến triển ngắn, sử dụng BCL6 dấu ấn để tiên lượng bệnh [3] Bất thường di truyền ULKH não nguyên phát gặp bất thường gen tương tự DLBCL hệ thống chuyển đoạn MYC, tái xếp BCL2, BCL6 bất thường liên quan đến kết cục đáp ứng bệnh Bệnh nhân ULKH não nguyên phát gặp bất thường một, hai ba gen Các bất thường gen MYC, BCL2, BCL6 xác định nhiều kỹ thuật sinh phân tử khác kỹ thuật lai chỗ huỳnh quang hai màu (dual FISH) sử dụng phổ biến với giá trị chẩn đoán cao Do ULKH não nguyên phát bệnh gặp, chẩn đoán điều trị bệnh cần sở y tế chuyên khoa sâu phẫu thuật thần kinh, giải phẫu bệnh, hóa-xạ trị nên 299 KỶ YẾU CÁC CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CHUYÊN NGÀNH HUYẾT HỌC - TRUYỀN MÁU nghiên cứu ULKH não nguyên phát Số bệnh nhân hàng năm chẩn đoán ULKH não nguyên phát tế bào B lớn lan tỏa Khoa Huyết học- bệnh viện Chợ Rẫy chiếm khoảng 4% tổng số bệnh nhân ULKH Tỷ lệ có xu hướng tăng dần tỷ lệ cao so với dịch tễ chung (1% ULKH) Vì vậy, chúng tơi tiến hành nghiên cứu đề tài với mục tiêu“Mô tả đặc điểm sinh học khối u bất thường gen MYC, BCL2, BCL6 bệnh u lympho không Hodgkin não nguyên phát tế bào B lớn lan tỏa bệnh viện Chợ Rẫy” II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng: 57 bệnh nhân chẩn đoán ULKH não nguyên phát tế bào B lớn lan tỏa Khoa Huyết học- bệnh viện Chợ Rẫy, đồng ý hóa trị phác đồ Methotrexate liều cao phối hợp Rituximab 2.2 Phương pháp nghiên cứu: mô tả tiến cứu Thời gian từ tháng 10/2015 đến tháng 12/2017 2.3 Phương pháp thực hiện: 2.3.1 Tiêu chuẩn chọn bệnh: - Sinh thiết khối u não, khảo sát giải phẫu bệnh với đặc điểm mô bệnh học tế bào lớn lan tỏa mang dấu ấn dịng tế bào B có CD20 dương tính - Khảo sát loại trừ vị trí tổn thương nguyên phát: CT - Scan, MRI, PET- CT, tủy đồ, chọc dịch não tủy (khảo sát tế bào, đạm) - Loại trừ bệnh nhân khơng đủ điều kiện hóa trị phác đồ Methotrexate liều cao phối hợp Rituximab bao gồm: độ lọc cầu thận < 60ml/phút; có chống định đa dịch truyền anti – HIV (+) 300 2.3.2 Phương pháp tiến hành xét nghiệm: - Mẫu mô vùi nến thực xét nghiệm hóa mơ miễn dịch hệ thống máy nhuộm tự động: + Dấu ấn CD10, BCL2, KI67 thực hệ thống máy Vetana- BenchMark (ROCHE) + Dấu ấn BCL6, MUM thực hệ thống máy IntelliPATH (BIOCARE) - Đánh giá kết nhuộm hóa mơ CD10, BCL2, BCL6, MUM1 : + Âm tính: khơng bắt màu bào tương tế bào u bắt màu nhạt tế bào mô đệm < 30% tế bào u vùng xâm lấn + Dương tính: >30% tế bào u bắt màu bào tương với cường độ tương đương đậm tế bào mơ đệm - Đánh giá kết nhuộm hóa mô Ki67: kết thể tỷ lệ % tế bào dương tính + Âm tính: khơng bắt màu bào tương tế bào u bắt màu nhạt tế bào mơ đệm + Dương tính: tế bào u bắt màu bào tương với cường độ tương đương đậm tế bào mô đệm - Phát bất thường gen MYC, BCL2, BCL6 phương pháp lai huỳnh quang chỗ FISH hệ thống máy Bioview (ABBOTT) + Kết đánh giá dựa tỷ lệ % tế bào có chuyển đoạn tín hiệu nhiễm sắt thể 14 ( bất thường gen MYC), đứt gãy tín hiệu nhiễm sắc thể 18 (bất thường gen BCL2) đứt gãy tín hiệu nhiễm sắc thể (bất thường gen BCL6) TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 520 - THÁNG 11 - SỐ ĐẶC BIỆT - 2022 III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Từ tháng 10/2015- 12/2017, chúng tơi có 57 bệnh nhân ULKH não nguyên phát tế bào B lớn lan tỏa hóa trị phác đồ Methotrexate liều cao phối hợp Rituximab với kết sau: 3.1 Đặc điểm chung nhóm bệnh nhân nghiên cứu Bảng Đặc điểm chung nhóm bệnh nhân nghiên cứu Đặc điểm Số bệnh nhân (n=57) (Tỷ lệ %) Tuổi: trung bình 53,2 ± 12,5 (15-80) ≥ 60 16 (28,1%) < 60 41 (71,9%) Giới Nam 34 (59,6%) Nữ 23 (40,4%) Nhận xét: Tuổi trung bình nhóm bệnh nhân 53,2 tuổi, trung vị tuổi bệnh nhân thời điểm chẩn đoán 55 tuổi, 71,9 % bệnh nhân 60 tuổi.Tỷ lệ nam/nữ 1,47/1, khác biệt ý nghĩa thống kê với p = 0,18 3.2.Đặc điểm dấu ấn miễn dịch khối u Bảng Dấu ấn miễn dịch khối u Âm tính Dương tính Số bệnh nhân Dấu ấn miễn dịch làm XN N % n % CD10 57 51 89,5 10,5 BCL6 57 22 38,6 35 61,4 MUM-1 57 12,3 50 87,7 BCL2 55 18 32,7 37 67,3 Nhận xét: 57 bệnh nhân xét nghiệm dấu ấn CD10, BCL6, MUM1 55 bệnh nhân xét nghiệm dấu ấn BCL2 Dấu ấn CD 10 dương tính 10,5%, đa số bệnh nhân dương tính với MUM1 Bảng Phân loại nhóm theo lược đồ Hans Phân loại nhóm Số bệnh nhân (n) Tỉ lệ (%) Tâm mầm 11 19,3 Không tâm mầm 46 80,7 Tổng 57 100 Nhận xét: Đa số bệnh nhân có đặc điểm tế bào u xếp vào nhóm khơng tâm mầm 80,7% Bảng Đặc điểm dấu ấn miễn dịch Ki67 Chỉ số Ki67 Số bệnh nhân (n=57) (Tỷ lệ %) Trung vị [tứ phân vị]: 60% [40-75%] Âm tính (3,5%) Dương tính 55 (96,5%) Nhận xét: - Dấu ấn Ki67 âm tính bệnh nhân - Trung vị số Ki67 60%, thấp 0%, cao 95% 301 KỶ YẾU CÁC CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CHUN NGÀNH HUYẾT HỌC - TRUYỀN MÁU 3.3 Đặc điểm bất thường di truyền khối u Bảng Đặc điểm bất thường di truyền khối u Bất thường di truyền Số bệnh nhân (n) Tỉ lệ (%) NST 18q21.33 (BCL2) 1,9 NST 3q27.3 (BCL6) 9,8 NST t(8;14) (IGH-MYC) 5,9 BCL6/MYC 1,9 BCL2/MYC 1,9 BCL6/BCL2/MYC 0 Âm tính 40 78,6 Tổng 51 100 Nhận xét: Số bệnh nhân có tái xếp gen BCL6 chiếm tỷ lệ cao 9,8%, chuyển đoạn MYC chiếm 5,9% Tái xếp gen BCL2, double- hit gặp khơng phát bệnh nhân có triple- hit IV BÀN LUẬN 4.1 Đặc điểm chung nhóm bệnh nhân nghiên cứu Trong thời gian nghiên cứu từ tháng 10/2015 đến tháng 12/2017, chúng tơi có 57 bệnh nhân chẩn đốn xác định ULKH não nguyên phát tế bào B lớn lan tỏa đồng ý tham gia vào nghiên cứu Trên thực tế số bệnh nhân chẩn đoán bệnh cao số bệnh nhân tuyển vào nghiên cứu khoảng 1,5 lần (khoảng 40-50 BN/ năm) Có thể thấy, số bệnh nhân chẩn đoán ULKH não nguyên phát tế bào B lớn lan tỏa Khoa Huyết học Bệnh viện Chợ Rẫy lớn, cao nhiều so với đặc điểm dịch tễ chung bệnh Do đặc điểm Bệnh viện Chợ Rẫy bệnh viện đa khoa tuyến cuối khu vực phía Nam, mạnh lớn phẫu thuật thần kinh nên số bệnh nhân chẩn đốn bệnh bệnh viện chúng tơi cao Tuổi trung bình thời điểm chẩn đốn bệnh 53,1 ± 12,5 tuổi (trung vị tuổi 55), đa số bệnh nhân độ tuổi từ 40-70 tuổi (84%) Kết tương đồng với kết báo cáo gần cho thấy, tuổi trung bình lúc chẩn đốn khoảng từ 45-65 302 tuổi, nhóm tuổi nguy cao ULKH nguyên phát hệ thần kinh trung ương 60 tuổi, tỷ lệ mắc nhóm tuổi ngày tăng lên [4] Trong nghiên cứu chúng tôi, bệnh nhân lớn tuổi 80 tuổi nhỏ tuổi 15 tuổi Tác giả Kasenda cộng phân tích gộp 13 nghiên cứu với 783 bệnh nhân chẩn đoán ULKH nguyên phát hệ thần kinh trung ương ≥ 60 tuổi, nhóm bệnh nhân 75 tuổi chiếm 14%, lớn tuổi 90 tuổi tiếp cận với phương pháp điều trị Methotrexate liều cao [5] Về giới tính, hầu hết nghiên cứu ghi nhận số bệnh nam trội nữ với tỷ lệ nam: nữ dao động 1,5:1 đến 2:1 [4] Nghiên cứu ghi nhận tỷ lệ BN nam chiếm 59,6% nữ 40,4%, nam/nữ 1,47:1 với khác biệt giới ý nghĩa thống kê 4.2 Đặc điểm dấu ấn miễn dịch khối u Kết bảng 2, tỷ lệ bệnh nhân có dấu ấn CD10 dương tính số 10,5% Đa số bệnh nhân dương tính với dấu ấn MUM1 (87,7%) Kết nghiên cứu phù hợp với đặc điểm sinh học khối u TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 520 - THÁNG 11 - SỐ ĐẶC BIỆT - 2022 ULKH não nguyên phát Một số nghiên cứu giới tập trung nghiên cứu hình thái ULKH nguyên phát hệ thần kinh trung ương thể tế bào B lớn, kết cho thấy 50-80% có biểu BCL6 lam nhuộm hóa mơ 95% dương tính với MUM1 chứng minh phần lớn ca bệnh thuộc phân nhóm khơng tâm mầm, gặp trường hợp dương tính với CD10 (95%) u lympho tế b? ?o B lớn lan tỏa (DLBCL) với bi? ?u d? ?u ấn dòng tế b? ?o B (như CD20, CD19, CD79a), d? ?u ấn đơn dòng immunoglobulin... 40-50 BN/ năm) Có thể thấy, số b? ??nh nhân chẩn đoán ULKH não nguyên phát tế b? ?o B lớn lan tỏa Khoa Huyết học B? ??nh viện Chợ Rẫy lớn, cao nhi? ?u so với đặc điểm dịch tễ chung b? ??nh Do đặc điểm B? ??nh viện