TÁC DỤNG CỦA POLYPHENOL CHÈ XANH (CAMELLIA SINENSIS) TRÊN TRẠNG THÁI CHỐNG OXY HOÁ TRONG MÁU Ở CHUỘT CỐNG TRẮNG GÂY ĐÁI THÁO ĐƯỜNG THỰC NGHIỆM pptx

TCNCYH 38 (5) - 2005 TÁC DỤNG CỦA POLYPHENOL CHÈ XANH (CAMELLIA SINENSIS) TRÊN TRẠNG THÁI CHỐNG OXY HOÁ TRONG MÁU Ở CHUỘT CỐNG TRẮNG GÂY ĐÁI THÁO ĐƯỜNG THỰC NGHIỆM Trần Thị Chi Mai, Nguyễn Thị Hà, Phạm Thiện Ngọc , l Bộ môn Hoá - Hoá sinh - Trường Đại học Y Hà Nội Bệnh nhân ĐTĐ thường phải chịu tác động của các stress oxy hoá. Chè xanh là một thảo dược tốt cho sức khoẻ và trong điều trị một số bệnh. Mục tiêu: Khảo sát sự biến đổi trạng thái chống oxy hoá trong máu và tác dụng của polyphenol chè xanh trên sự biến đổi đó ở chuột gây ĐTĐ thực nghiệm. Đối tượng và phươ ng pháp: Dùng mô hình thực nghiệm khảo sát một số chỉ số sinh học trong máu ở chuột gây ĐTĐ bằng STZ với chế độ ăn giàu chất béo và tác dụng của polyphenol chè xanh trên các chỉ số đó. Kết quả: Hoạt độ GPx hồng cầu và nồng độ MDA huyết tương ở chuột ĐTĐ tăng cao so với chuột bình thường và chuột bị rối loạn chuyển hoá lipid (p < 0,001) đồng th ời chịu ảnh hưởng của polyphenol chè xanh. Tuy nhiên, hoạt độ SOD hồng cầu và TAS huyết tương thay đổi không có ý nghĩa giữa các lô chuột thực nghiệm. Kết luận: Polyphenol chè xanh đã cải thiện trạng thái chống oxy hoá trong máu ở chuột gây ĐTĐ bằng STZ. Từ khoá: đái tháo đường, polyphenol chè xanh, chống oxy hoá. I. ĐẶT VẤN ĐỀ Đái tháo đường (ĐTĐ) là một bệnh rối loạn chuyển hoá mạn tính, tỷ lệ mắc bệnh ĐTĐ ngày càng gia tăng ở các nước phát triển và đang phát triển. Điều trị ĐTĐ nhằm kiểm soát nồng độ glucose máu, giảm và loại bỏ các yếu tố nguy cơ gây biến chứng, điều trị biến chứng. Bệnh nhân ĐTĐ được cho là ch ịu tác động của các stress oxy hóa. Mối liên quan giữa ĐTĐ và các stress oxy hóa đã được đề cập [4]; nhưng các thực nghiệm để làm sáng tỏ tầm quan trọng của vấn đề này vẫn chưa hoàn chỉnh. Nồng độ F2 - isoprostan và các peroxid lipid huyết tương (đã được hiệu chỉnh theo mức tăng của lipid huyết tương) ở bệnh nhân ĐTĐ dường như cao hơn bình thường, mặ c dù điều này chưa được sự nhất trí [4]. Cùng với những rối loạn khác, sự gia tăng các stress oxy hoá trong ĐTĐ có thể là một trong những yếu tố đóng vai trò hàng đầu trong bệnh sinh của các biến chứng ĐTĐ. Từ lâu chè xanh được biết đến như một loại thảo dược có tác dụng tốt cho sức khoẻ con người. Trong vài thập kỷ gần đây, nhiều nhà khoa học trên thế giới đã quan tâm nghiên cứu về tác dụng của chè xanh trong y sinh học. Thành phần hoá học của một số loài chè xanh đã được xác định và công bố; trong đó các polyphenol là thành phần quan trọng vì hàm lượng tương đối cao và được chứng minh là có tác dụng tốt trong điều trị một số trạng thái bệnh lý như ngăn ngừa và hạn chế tác hại của phóng xạ, chống oxy hoá, chống ung thư, ức ch ế sự phát triển của một số vi khuẩn gây bệnh, [7]. Tác dụng cải thiện các rối loạn chuyển hoá lipid ở chuột cống trắng gây ĐTĐ thực nghiệm của polyphenol chè xanh đã được công bố [3]. Đề tài này nhằm mục tiêu: Khảo sát sự biến đổi của trạng thái chống oxy hoá trong máu (hoạt độ SOD và GPx hồng cầu, nồng độ TAS và MDA huyết tương) và tác dụng của polyphenol chè xanh trên sự biến đổi đó ở chuột cống trắng gây ĐTĐ thực nghiệm. II. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 1. Đối tượng nghiên cứu Chuột cống trắng, chủng Ratus norvegicus, 2 tháng tuổi, cân nặng 100 - 140g. Chuột được nuôi tại Bộ môn Hoá - Hoá sinh, 1 con/1 chuồng. Chuột được ăn uống đầy đủ theo nhu cầu thực nghiệm, thức ăn được chuẩn bị hàng ngày. 2. Phương pháp nghiên cứu 2.1. Chiết suất polypheno chè xanh: Theo qui trình của Đặng Ngọc Dung và cộng sự [2]. 2.2. Mô hình thực nghiệm 1 TCNCYH 38 (5) - 2005 Mô hình khảo sát tác dụng của polyphenol chè xanh trên sự biến đổi hoạt độ một số enzym chống oxy hoá hồng cầu và nồng độ TAS, MDA huyết tương ở chuột cống trắng gây ĐTĐ thực nghiệm. Chuột cống trắng gồm 6 lô, được định lượng glucose máu trước thực nghiệm. - Lô 1 (Lô chứng): n = 20, được nuôi bởi chế độ bình thường với 12% calo của khẩu phần ăn là ch ất béo (theo Bảng thành phần dinh dưỡng thực phẩm Việt Nam - Viện Dinh dưỡng, Bộ Y tế - Nhà xuất bản Y học năm 2000). - Lô 2 (Lô gây rối loạn thành phần lipid huyết tương = lô RLCH lipid): n = 20, được nuôi bởi chế độ giàu lipid: 40% calo của khẩu phần ăn là chất béo (theo bảng thành phần dinh dưỡng thực phẩm Việt Nam - Viện Dinh dưỡng, Bộ Y tế - Nhà xuất bản Y học năm 2000). - Lô 3 (Lô RLCH lipid và ĐTĐ): n = 10, được nuôi b ởi chế độ giàu lipid trong quá trình thực nghiệm, sau 30 ngày được gây ĐTĐ bằng cách tiêm phúc mạc streptozotocin 50 mg/kg thân trọng với một liều duy nhất. Sau 48 - 72 giờ tiếp theo, định lượng glucose máu của chuột, mức glucose máu > 10mmol/L được xem là chuột bị ĐTĐ. Chuột được uống dung dịch NaCl 0,9% kể từ khi bị ĐTĐ và uống liên tục trong 60 ngày. - Lô 4, 5, 6 (Lô RLCH lipid và ĐTĐ được uống bổ xung polyphenol chè xanh hoặc vitamin E): tiến hành thực nghiệ m như lô 3. Chuột được uống polyphenol chè xanh hoặc vitamin E kể từ khi chuột bị ĐTĐ và uống trong 60 ngày. Lô 4: n = 10, uống polyphenol chè xanh liều 200mg/kg/ngày, lô 5: n = 10, uống polyphenol chè xanh liều 100mg/kg/ngày, lô 6: n = 10, uống vitamin E liều 200mg/kg/ngày. Để hạn chế mức glucose máu tăng quá cao và duy trì trọng lượng của chuột, chuột bị ĐTĐ (lô 3,4,5 và 6) được tiêm dưới da 2 IU insulin chậm/ ngày vào buổi sáng. Sau 30 ngày thực nghiệm, giết 10 chuột của lô 1 và 10 chuột của lô 2; sau 60 ngày thực nghiệm ti ếp theo giết toàn bộ chuột của các lô, lấy máu xác định hoạt độ SOD, GPx hồng cầu và định lượng TAS, MDA huyết tương. 2.3. Kỹ thuật xét nghiệm Định lượng Glucose máu: Kỹ thuật enzym glucose oxydase và peroxydase, đọc kết quả trên máy One Touch Profile do hãng Johnson – Johnson sản xuất. Hoạt độ SOD (superoxid dismutase) hồng cầu: Phản ứng chuyển xanthin thành acid uric dưới tác dụng của xanthin oxidase đồng thời cũng sinh ra gốc superoxid. Xanthin oxidase t t Gốc superoxid phản ứng với muối P- iodonitro tetrazolium (INT) tạo ra chất màu formazan (đỏ). SOD có mặt trong mẫu đo cạnh tranh gốc superoxid với INT, do đó enzym này ức chế sự tạo thành chất màu formazan. Hoạt độ SOD được đo bởi mức độ ức chế sự tạo thành chất màu formazan. Hoạt độ GPx (glutathion peroxidase) hồng cầu: ROOH: peroxid hữu cơ Hoạt độ của GPx được đo bằng sự thay đổi độ hấp thụ phổ ở bước sóng 340nm do sự oxy hóa NADPH thành NADP + . Xác định TAS ( o al antioxidant status) huyết tương: Xanthin Acid uric + O 2 • - SOD 2H + + O 2 • O 2 + H 2 O 2 GPx GSH + ROOH GSSG + H 2 O + ROH G R GSSG + NADPH + H + 2GSH + NADP + 2 TCNCYH 38 (5) - 2005 ABTSΣ [2,2 - Azino – di (3 - Ethylbenzthialime sunphonate)] được ủ với metmyoglobin và H 2 O 2 để tạo gốc cation ABTSΣ + . Chất này cho màu xanh da trời và đo được ở bước sóng 600nm. Chất chống oxy hóa thêm vào phản ứng là nguyên nhân ức chế sự tạo thành sản phẩm màu này và mức độ ức chế sẽ tỷ lệ vói hợp chất màu được tạo ra. Fe 3+ + H 2 O 2 → X - [Fe 4+ = O] + H 2 O ABTSΣ + X - [Fe 4+ = O] → ABTSΣ + + HX - Fe 3+ HX - Fe 3+ : Metmyoglobin X-[Fe 4+ =O] : Ferrylmyoglobin Xác định MDA (malondialdehyd) huyết tương: MDA phản ứng với Thiobarbituric acid tạo thành phức Trimethine có màu hồng. Phức hợp này có đỉnh hấp thụ tối đa ở 532 nm. Cường độ màu tỷ lệ thuận với hàm lượng MDA (phương pháp cải tiến của Buege và Aust). 2.4. Xử lý số liệu Các kết quả nghiên cứu được biểu diễn bằng giá trị trung bình ± độ lệch chuẩn. So sánh sự khác biệt giữa các lô thực nghiệm bằng phép toán t-student và ANOVA. III. KẾT QUẢ 1. Ảnh hưởng của chế độ ăn giàu chất béo trên hoạt độ SOD, GPx hồng cầu và nồng độ TAS, MDA huyết tương ở chuột cống trắng Bảng 1. Ảnh hưởng của chế độ ăn giàu chất béo trên hoạt độ SOD và GPx hồng cầu, nồng độ TAS và MDA huyết tương ở chuột cống trắng (sau 30 ngày thí nghiệm) Lô chuột N SOD (U/g Hb) X ± SD GPx (U/gHb) X ± SD TAS (mmol/L) X ± SD MDA (nmol/L) X ± SD Lô 1 10 3166 ± 570 1603 ± 207 1,09 ± 0,18 3,75 ± 0,74 Lô 2 10 3069 ± 381 1840 ± 169 1,01 ± 0,21 6,69 ± 1,67 P > 0,05 < 0,05 > 0,05 < 0,01 Nhận xét: Sau 30 ngày thí nghiệm, lô chuột được nuôi bằng chế độ ăn giàu chất béo (lô RLCH lipid có hoạt độ GPx hồng cầu và hàm lượng MDA huyết tương tăng có ý nghĩa so với lô chuột ăn chế độ bình thường (lô chứng) với p < 0,05 và p < 0,01. ) 2. Tác dụng của polyphenol chè xanh trên hoạt độ SOD, GPx hồng cầu và nồng độ TAS, MDA huyết tương ở chuột cống trắng gây đái tháo đường thực nghiệm 3 TCNCYH 38 (5) - 2005 Hình 1. Tác dụng của polyphenol chè xanh trên hoạt độ GPx hồng cầu ở chuột gây đái tháo đường thử nghiệm Hình 2. Tác dụng của polyphenol chè xanh trên nồng độ MDA huyết tương ở chuột gây đái tháo đường thực nghiệm Nhận xét: Hoạt độ SOD hồng cầu và TAS huyết tương ở các lô chuột thí nghiệm không có sự khác biệt. Hoạt độ GPx hồng cầu ở lô RLCH lipid (lô 2) cao hơn có ý nghĩa so với lô chứng (lô 1). Hoạt độ GPx hồng cầu ở lô ĐTĐ (lô 3) cao hơn có ý nghĩa so với lô 2 (p < 0,001). Hoạt độ GPx hồng cầu của lô ĐTĐ được uống bổ sung polyphenol chè xanh liều 200mg/kg/ngày (lô 4) thấp hơn có ý nghĩa so vớ i lô 3 (p < 0,001); và ở mức tương đương với lô 2; tuy nhiên vẫn ở mức cao hơn so với lô chứng (p < 0,05). Hoạt độ GPx hồng cầu của lô ĐTĐ được uống bổ sung polyphenol chè xanh liều 100mg/kg/ngày (lô 5) thấp hơn hoạt độ GPx hồng cầu của lô 3 nhưng sự khác biệt không có ý nghĩa thống kê và cao hơn của lô 4 (p < 0,05). Hoạt độ GPx hồng cầu của lô ĐTĐ được uống bổ xung vitamin E liề u 200mg/kg/ngày (lô 6 thấp hơn có ý nghĩa so với lô 3 (p < 0 001) và ở mức tương đương với lô 4. Nồng độ MDA huyết ương của lô 2 tăng cao so với lô 1 (p < 0 01) và nồng độ MDA huyết tương của lô 3 cao hơn có ý nghĩa so với lô 2 (p < 0,001). Nồng độ MDA huyết ương của lô 4 thấp hơn có ý nghĩa so với lô 3 (p < 0,001), ở mức tương đương với lô 2 và 6, nhưng cao hơn lô 1 p < 0,01) và thấp hơn lô 5 (p < 0,01). ) , t , t ( IV. BÀN LUẬN 4 TCNCYH 38 (5) - 2005 Chế độ ăn ảnh hưởng sâu sắc đến trạng thái chống oxy hoá và được xếp vào một trong những yếu tố nguy cơ hàng đầu gây nên các trạng thái bệnh lý. Lipid của cơ thể (các acid béo không bão hoà) rất nhạy cảm với các tác nhân oxy hoá, dễ bị tấn công bởi các gốc tự do và sản phẩm oxy hoá của chúng có thể gây ra những thương tổn nặng nề cho tế bào và mô. Chế độ ăn giàu lipid gây rối loạn các chỉ số lipid huyết tương ở chuột cống trắng [3]. Nồng độ MDA huyết tương - sản phẩm của quá trình peroxy hoá lipid - ở lô chuột ăn chế độ giàu lipid (lô RLCH lipid) tăng cao rõ rệt so với lô chứng, tuy nhiên hàm lượng TAS huyết tương không khác biệt giữa 2 lô chuột (bảng 1). Bởi vì hàm lượng TAS huyết tương chịu tác động của nhiều yếu tố nên có thể chỉ số này không phải là mộ t chỉ điểm nhạy cho việc đánh giá tình trạng chống oxy hoá của cơ thể. Khảo sát ảnh hưởng của chế độ ăn giàu chất béo trên một số enzym chống oxy hoá trong máu cho thấy hoạt độ GPx hồng cầu ở lô RLCH lipid cao hơn có ý nghĩa so với lô chứng và hoạt độ SOD hồng cầu không có sự khác biệt giữa hai lô (bảng 1). GPx là enzym xúc tác sự phân huỷ các peroxid hữu cơ và vô cơ. Như v ậy, hoạt độ GPx tăng cao có thể là phản ứng bảo vệ của cơ thể chống lại sự gia tăng các stress oxy hoá, thể hiện qua sự gia tăng các sản phẩm lipid hydroperoxid do chế độ ăn giàu chất béo gây ra. Cần nghiên cứu thêm về enzym SOD hồng cầu, kết quả thu được trong nghiên cứu có thể do nồng độ anion superoxid ít thay đổi. Nguồn gốc của các stres oxy hoá trong ĐTĐ có thể bao gồm s ự mất cân bằng của quá trình oxy hoá - khử do các rối loạn chuyển hoá carbohydrat và lipid, sự tăng sinh các dạng oxy hoạt động (bởi quá trình glycosyl hoá hoặc oxy hoá lipid) và sự giảm hoạt động của các hệ thống chống oxy hoá bảo vệ cơ thể. Kết quả nghiên cứu cho thấy hoạt độ SOD hồng cầu không khác biệt có ý nghĩa giữa các lô chuột thực nghiệm, nhưng hoạt độ GPx hồng cầu ở lô chu ột bị ĐTĐ cao hơn lô chứng (p < 0,001) và lô chuột RLCHLP (p < 0,01), như vậy sự tăng hoạt độ GPx ở lô chuột ĐTĐ không chỉ do chế độ ăn giàu lipid mà còn chịu tác động của bệnh lý ĐTĐ. Sự gia tăng các stress oxy hoá trong bệnh lý ĐTĐ có thể cảm ứng việc tổng hợp hoặc làm tăng hoạt tính xúc tác của GPx. Nhiều nghiên cứu cho thấy có sự gia tă ng hoạt độ các enzym chống oxy hoá ở các mô của chuột ĐTĐ thực nghiệm. Hunker và cộng sự thấy sự tăng hoạt độ GPx, catalase ở mô động mạch chủ, tim, gan và hoạt độ GPx tăng ở mô thận, phổi của chuột gây ĐTĐ thực nghiệm bằng STZ [9]. Tuy nhiên, một số tác giả khác lại thấy hoạt độ SOD, GPx hồng cầu giảm ở bệnh nhân ĐT Đ, đặc biệt là ĐTĐ có biến chứng. Phạm Trung Hà và cộng sự thấy hoạt độ SOD hồng cầu giảm ở bệnh nhân ĐTĐ typ 2 và giảm nhất ở nhóm có biến chứng thận, võng mạc [1]. Tuy nhiên, Carmen Dominguez và cộng sự thấy hoạt độ SOD hồng cầu của bệnh nhân ở giai đoạn khởi phát ĐTĐ typ 1 cao hơn so với nhóm chứng [5]. Như vậy, ở bệnh nhân ĐTĐ hoạt độ SOD thay đổi theo thời gian tiến triển và mức độ bệnh, giai đoạn đầu của bệnh có thể có sự gia tăng hoạt độ SOD để bảo vệ cơ thể theo cơ chế thích nghi, trong giai đoạn muộn của ĐTĐ mức độ glycosyl hoá enzym tăng làm giảm hoạt tính xúc tác của SOD [1]. Sự giảm hoạt độ GPx đượ c giải thích là do lượng GSH - cofactor của GPx - giảm ở bệnh nhân ĐTĐ. Tuy nhiên, một số nghiên cứu không thấy sự khác biệt về hoạt độ GPx của bệnh nhân ĐTĐ so với nhóm chứng. Xu hướng trái ngược nhau của kết quả nghiên cứu về hoạt độ một số enzym chống oxy hồng cầu ở chuột ĐTĐ thực nghiệm của chúng tôi và của các tác giả khác thu đượ c trên bệnh nhân ĐTĐ cần tiếp tục xem xét. Một giả thiết có thể là những bệnh nhân ĐTĐ được nghiên cứu đã mắc bệnh một thời gian dài, nhưng lô chuột ĐTĐ thực nghiệm của chúng tôi được khảo sát hoạt độ enzym chống oxy hoá chưa có khoảng thời gian bị mắc bệnh tương ứng (sau khi bị bệnh khoảng 80 - 90 ngày), cho nên sự thay đổi hoạt độ enzym trên chuột ĐTĐ thực nghiệm có thể xảy ra ở giai đoạn muộn hơn; sự khác biệt về kết quả có thể do sự khác nhau về đối tượng thực nghiệm và thời gian tiến hành đo lường kể từ khi phát bệnh. Mặt khác, với chuột ĐTĐ thực nghiệm, nhiều nghiên cứu cũng cho kết quả có xu hướng trái ngược nhau về ho ạt độ enzym chống oxy hoá ở cùng một mô hoặc các mô khác nhau. Như vậy mẫu hình biến đổi hoạt độ của các enzym chống oxy hoá ở các mô trên cơ thể ĐTĐ rất phức tạp, liên quan đến thời gian phát bệnh và sự tiến triển của bệnh. Sự tăng hoạt độ một số enzym chống oxy hoá thường gặp trong giai đoạn sớm của bệnh có thể là do cơ chế bù trừ hoặc tăng hoạt tính xúc tác hoặc cảm ứng tổng hợp enzym để chống lại sự gia tăng stress oxy hoá trong ĐTĐ. Sự giảm hoạt độ một số 5 TCNCYH 38 (5) - 2005 enzym chống oxy hoá xuất hiện ở những giai đoạn muộn hơn hoặc khi đã có biến chứng có thể do cơ chế nhiễm độc hoặc tổn thương các mô [8]. TAS huyết tương ở lô chuột ĐTĐ không có sự khác biệt với lô chứng và lô chuột RLCH lipid. Kopprasch S. và cộng sự [10] nghiên cứu trên người nhận thấy TAS huyết tương của nhóm giảm dung nạp glucose và nhóm mới mắc ĐT Đ không khác biệt so với nhóm dung nạp glucose bình thường. Nhưng một số tác giả khác cho rằng TAS ở bệnh nhân ĐTĐ giảm có ý nghĩa so với người bình thường và giảm theo thời gian mắc bệnh, có liên quan đến sự xuất hiện các biến chứng. Như vậy các nghiên cứu về TAS huyết thanh ở bệnh nhân ĐTĐ thu được kết quả cũng rất khác nhau. TAS bao gồm nhiều hệ thống b ảo vệ của cơ thể chống lại những tác hại của gốc tự do và có nguồn gốc nội sinh, ngoại sinh; vì vậy TAS rất dễ bị ảnh hưởng bởi các yếu tố môi trường trong và ngoài cơ thể. Đó có thể là một trong những lý do giải thích cho sự đối lập kết quả nghiên cứu về TAS huyết tương trong ĐTĐ của các tác giả khác nhau Nghiên cứu v ề nồng độ MDA huyết tương cho kết quả ổn định và rõ hơn. Nồng độ MDA huyết tương ở lô chuột RLCH lipid cao hơn lô chứng (p < 0,01) và nồng độ MDA huyết tương của lô chuột ĐTĐ cao hơn có ý nghĩa so với lô chuột RLCH lipid (p < 0,001), như vậy sự tăng MDA ở lô chuột ĐTĐ do 2 nguyên nhân là sự RLCH lipid và trạng thái bệnh lý ĐTĐ. Kết quả này phù hợp v ới kết quả của Musalmah M. và cộng sự (2002), Venkateswaran S. (2003) Kim HY (2003). Các tác giả đã chứng minh rằng quá trình peroxy hoá lipid ở các mô như thận, tim, gan, động mạch chủ, võng mạc,… của chuột ĐTĐ thực nghiệm bằng STZ diễn ra mạnh hơn ở chuột bình thường thể hiện qua nồng độ MDA và các sản phẩm khác của quá trình peroxy hoá lipid ở các mô. Nhiềunghiên cứu trên người cũng cho kết quả tương tự và m ức độ tăng của MDA huyết tương phụ thuộc thời gian mắc bệnh và xuất hiện các biến chứng. Collier A. và cs nhận thấy nồng độ MDA huyết tương của nhóm bệnh nhân ĐTĐ không phụ thuộc insulin có albumin niệu vi lượng cao hơn có ý nghĩa so với nhóm bệnh nhân ĐTĐ không có albumin niệu vi lượng [6]. Sự tăng các sản phẩm của quá trình peroxy hoá trong huyết tương và ở các mô ở những cơ thể bị ĐTĐ gợi ý sự tăng các stress oxy hoá trong ĐTĐ. Khảo sát tác dụng của polyphenol chè xanh trên hoạt độ SOD và GPx hồng cầu ở chuột ĐTĐ thực nghiệm cho thấy: polyphenol chè xanh không làm thay đổi hoạt độ SOD hồng cầu của các lô chuột thực nghiệm nhưng có tác dụng rõ với hoạt độ GPx hồng cầu. Liều polyphenol chè xanh 200mg/kg cân nặng làm giảm có ý nghĩa hoạ t độ GPx hồng cầu của lô chuột ĐTĐ so với lô chuột ĐTĐ không được uống bổ sung polyphenol và giảm ở mức tương đương với lô chuột bị RLCHLP nghĩa là vẫn ở mức cao hơn so với lô chuột bình thường (hình 1). Kết quả thu được phù hợp với nghiên cứu của nhiều tác giả khác về tác dụng của các chất chống oxy hoá trên hoạt độ SOD và GPx ở các mô c ủa chuột ĐTĐ thực nghiệm bằng STZ. Có thể giả thiết là các enzym chống oxy hoá trong hồng cầu được điều hoà ngược bởi polyphenol chè xanh tình trạng chống oxy hoá của hồng cầu được cải thiện khi có mặt của polyphenol chè. Polyphenol chè xanh chưa có ảnh hưởng đến TAS huyết tương nhưng có tác dụng rất rõ đến nồng độ MDA huyết tương và tương tự tác dụng trên hoạt độ GPx h ồng cầu (hình 2). Khả năng của polyphenol chè xanh bảo vệ cơ thể chống lại các stress oxy hoá trong máu là quan trọng trong phòng ngừa vữa xơ động mạch bởi vì sự tạo thành các mảng vữa xơ ở thành mạch máu được cho là một phần do hoạt động của các gốc tự do [6]. Mặt khác, những két quả thu được cũng chỉ rõ polyphenol chè xanh có tác dụng tương tự như vitamin E trên hoạt độ các enzym chống oxy hoá h ồng cầu và hàm lượng MDA, TAS huyết tương. Điều hấp dẫn trong kết quả nghiên cứu này là vitamin E chỉ cải thiện tình trạng chống oxy hoá trong máu chuột ĐTĐ nhưng không có tác dụng đáng kể trên các chỉ số lipid máu; trong khi polyphenol chè xanh với liều tương đương vừa có tác dụng cải thiện tình trạng chống oxy hoá vừa có tác dụng giảm lipid máu [3]. Cùng với tác dụng giảm lipid máu, chống oxy hoá, polyphenol chè xanh còn có nhiều tác dụng dược lý khác. Như v ậy việc bổ sung polyphenol chè xanh trong điều trị ĐTĐ có thể sẽ rất có lợi vì trạng thái ĐTĐ chịu tác dụng đồng thời của sự RLCH lipid và sự gia tăng các stress oxy hoá. V. KẾT LUẬN 1. Hoạt độ GPx hồng cầu và nồng độ MDA huyết tương của lô chuột ĐTĐ tăng cao có ý nghĩa 6 TCNCYH 38 (5) - 2005 so với lô chứng (p < 0,001) và lô chuột RLCH lipid đơn thuần (p < 0,01); trong khi hoạt độ SOD hồng cầu và nồng độ TAS huyết tương không có sự khác biệt giữa các lô chuột thực nghiệm (p > 0,05). 2. Polyphenol chè xanh có tác dụng làm giảm sự gia tăng hoạt độ GPx hồng cầu và nồng độ MDA huyết tương ở chuột ĐTĐ, liều có tác dụng rõ rệt là 200mg/kg/ngày (p < 0,01). TÀI LIỆU THAM KHẢO 1. Phạm Trung Hà (2004), ” Nghiên cứu nồng độ 2,3-diphosphoglycerat và hoạt độ một số enzym chống oxy hoá trong hồng cầu bệnh nhân đái tháo đường typ 2”, Luận án Tiến sỹ Y học. 2. Trần Thị Chi Mai, Nguyễn Thị Hà, Phạm Thiện Ngọc (2004), “ Tác dụng của polyphenol chè xanh (Camellia sinensis) trên sự rối loạn chuyển hoá lipid ở chuột cống trắng gây đái tháo đường thực nghiệm”, Tạp chí Nghiên cứu Y học, Tập 32 - số 6, tr. 14 - 21. 3. Carmen Dominguez, Elena Ruiz, Miguel Guissinye et al (1998), “Oxidative stress at onset and in early stages of type 1 diabetes in children and aldolescents”, Diabetes care, 21, pp. 1736 - 1742. 4. Barry Halliwell and John MC Gutteridge (1999), “Free radicals in Biology and Medicine” , Third edition, Oxford science publications, pp. 639 - 640. 5. Đặng Ngọc Dung, Phạm Thiện Ngọc, Nguyễn Thị Hà (2002), “Chiết xuất và đánh giá sơ bộ thành phần polyphenol lá chè xanh Việt Nam”, Tạp chí Nghiên cứu Y học, Tập 18 - số 2, tr. 35 - 39. 6. Halliwell B. (1996), “ Oxidative stress, nutrition and health. Exprimental strategies for optimization of nutritional antioxidant intake in humans”, Free Radical Research, 25, pp. 57 - 74. 7. Henry JP and Stephens- Larson P (1984), “ Reduction of chronic psychosocial hypertension mice by decaffeinated tea”, Hypertension, (6), pp. 437 - 444. 8. Hodgkinson AD, Bartlett T et al (2003), “The response of antioxidant genes to hyperglycemia is abnormal in patients with type 1 diabetse and diabetic nephropathy”, Diabetes, 52, pp. 846 - 851. 9. Hunker T, Aktan F, Ceylan A, Karasu C (2002), “ Effets of cod liver oil on tissue antioxidant pathways in normal and streptozotocin- diabetic rats”, Cell Biochem Funt, 20(4), pp. 297 – 302. 10. Kopprasch Steffi et al (2002), “In vivo evidence for increased oxidation of circulating LDL in impaired glucose tolerance”, Diabetes, Vol. 51, pp. 3102 - 3106. Summary EFFECT OF GREEN TEA (CAMELLIA SINENSIS) POLYPHENOL ON BLOOD ANTIOXYDANT STATUS IN STREPTOZOCIN INDUCED DIABETIC RATS The diabetic patients are usually suffered from oxidant stress. Green tea is one of the good herbal medicines has been used for treatment of some diseases. Objectives: Evaluate change of antioxidant status in blood and effect of the green tea polyphenol on this change in the experimental diabetic rats. Methods: Using in vivo model to investigate some biological indicators in STZ - induced diabetic rats fed with high fat diet and to evaluate effect of the green tea polyphenol on the changes of these indicators. Results: Erythrocyte GPx activity and serum MDA concentration in STZ - induced diabetic rats was higher than that of normal and lipid metabolism disorder groups (p < 0.001) and effected of the green tea polyphenol. However, no change in erythrocyte SOD activity and plasma TAS level was observed. Conclusions: Green tea polyphenol improved blood antioxidant status in STZ - induced diabetic rats. Keywords: Diabetes; green tea polyphenol; antioxydants. 7 . TCNCYH 38 (5) - 2005 TÁC DỤNG CỦA POLYPHENOL CHÈ XANH (CAMELLIA SINENSIS) TRÊN TRẠNG THÁI CHỐNG OXY HOÁ TRONG MÁU Ở CHUỘT CỐNG TRẮNG GÂY ĐÁI THÁO ĐƯỜNG THỰC NGHIỆM Trần Thị Chi Mai,. các lô chuột thực nghiệm. Kết luận: Polyphenol chè xanh đã cải thiện trạng thái chống oxy hoá trong máu ở chuột gây ĐTĐ bằng STZ. Từ khoá: đái tháo đường, polyphenol chè xanh, chống oxy hoá. I của polyphenol chè xanh trên hoạt độ GPx hồng cầu ở chuột gây đái tháo đường thử nghiệm Hình 2. Tác dụng của polyphenol chè xanh trên nồng độ MDA huyết tương ở chuột gây đái tháo đường thực