Luận văn sử dụng phương pháp quang phổ phát hiện độc tố aflatoxin trong thực phẩm

MỞ ĐẦU Aflatoxin độc tố vi nấm sản sinh tự nhiên số loài Aspergillus flavus, Aspergillus parasiticus Aspergillus nomius – loại nấm mốc Aflatoxin độc tố tác nhân gây ung thư Chính thế, việc kiểm định độc tố aflatoxin thực phẩm giữ vai trò quan trọng Các loại nông sản thường bị nhiễm aflatoxin ngũ cốc (ngơ, kê, lúa, miến, gạo, lúa mì…), hạt có dầu (lạc, đậu tương, hạt hướng dương, hạt bông…), gia vị (ớt, hạt tiêu đen, rau mùi, nghệ, gừng…) loại hạt khác hạt dẻ, dừa…Trên sở nghiên cứu nhà khoa học, Bộ Y tế ban hành QUY CHUẨN KỸ THUẬT QUỐC GIA ĐỐI VỚI GIỚI HẠN Ô NHIỄM ĐỘC TỐ VI NẤM TRONG THỰC PHẨM Văn pháp quy công bố ngày 25 tháng 10 năm 2011 Nước ta nước có khí hậu nhiệt đới điều kiện thuận lợi để loại vi nấm aflatoxin phát triển Do ảnh hưởng khí hậu nhiệt đới, tác động loại vi nấm gây nên tổn thất lớn cho nông sản giai đoạn sau thu hoạch bảo quản, tổn thất gây nấm mốc chiếm phần đáng kể Ngoài việc gây tổn thất số lượng, nấm mốc sinh độc tố đặc biệt nguy hiểm với sức khỏe người động vật Nấm mốc phát triển lương thực, ngũ cốc, bên cạnh việc sử dụng chất dinh dưỡng hạt protein, glucid, lipid, vitamin… chúng sinh độc tố Aflatoxin gây độc cho người gia súc gây tổn thương gan, gây quái thái, đột biến, ung thư, chí với liều lượng cao gây tử vong… Có nhiều phương pháp để xác định aflatoxin phương pháp sắc ký lỏng, phương pháp khối phổ Đây phương pháp cho phép ngưỡng phát cao, nhiên thiết bị đắt tiền có sở kiểm định chuyên nghiệp đồng thời quy trình phức tạp đòi hỏi nhiều thời gian Phương pháp sử dụng kít thử nhanh, phương pháp cho kết nhanh nhiên giới hạn phát độ xác lại bị hạn chế Phương pháp quang phổ dựa tính chất quang độc tố aflatoxin – hấp thụ – phát quang vùng nhìn thấy cho phép phát aflatoxin với ngưỡng cao nhiều so với phương pháp dùng kit thử nhanh với thao tác đơn giản, khơng cần hóa chất xử lý mẫy, thiết bị phân tích đắt tiền Mục đích đề tài: Sử dụng phương pháp truyền lượng cộng hưởng huỳnh quang (FRET) thông qua tương tác cặp donor – acceptor aflatoxin B1 – chấm lượng tử CdSe/ZnS phát aflatoxin B1 Phương pháp cho phép phát hàm lượng aflatoxin B1 tới ppM Thử nghiệm phương pháp truyền lượng cộng hưởng huỳnh quang phát AFB1 ngô Phương pháp nghiên cứu Luận văn tiến hành chủ yếu phương pháp thực nghiệm Luận văn với tiêu đề “ Sử dụng phương pháp quang phổ phát độc tố aflatoxin thực phẩm” Nội dung luận văn chia làm chương: Chương 1: Tổng quan Tìm hiểu khái niệm aflatoxin, loại aflatoxin dạng chuyển hóa chúng, điều kiện gây nhiễm aflatoxin độc tính aflaftoxin Các phương pháp phát aflatoxin phương pháp quang phổ phát aflatoxin Chương 2: Kỹ thuật thực nghiệm Trình bày trình chuẩn bị mẫu đo, phương pháp thực nghiệm sử dụng luận văn đo phổ hấp thụ, phổ huỳnh quang, thời gian sống huỳnh quang Chương 3: Trình bày kết tính chất quang aflatoxin, đặc trưng hình thái tính chất quang chấm lượng tử CdSe/ZnS Truyền lượng huỳnh quang cộng hưởng aflatoxin chấm lượng tử CdSe/ZnS Thử nghiệm xác định aflatoxin hạt ngô CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1: TỔNG QUAN VỀ AFLATOXIN 1.1.1: Khái niệm loại aflatoxin 1.1.1.1: Khái niệm aflatoxin Aflatoxin độc tố vi nấm sản sinh tự nhiên số loài Aspergillus, loại nấm mốc, đáng ý Aspergillus flavus Aspergillus parasiticus Aflatoxin độc tố tác nhân gây ung thư Sau thâm nhập vào thể, aflatoxin gan chuyển hóa thành dạng trung gian epoxit hoạt hóa thuỷ phân trở thành M1 độc Hình 1.1 Aspergillus flavus Hình 1.2 Aspergillus parasiticus 1.1.1.2: Lịch sử phát aflatoxin Vào năm 1960, nghề nuôi gia cầm Anh bị tổn thất nặng nề, lúc đầu 10.000 gà tây chết bệnh gọi “bệnh gà tây X” (Turkey X disease) Sau đó, loại gia cầm khác như: Vịt, gà lôi bị nhiễm bệnh tử vong nhiều.Qua điều tra, người ta xác định bệnh có liên quan đến loại độc tố nấm có thức ăn sinh Đến năm 1961, người ta tìm chất hóa học độc tố aflatoxin vi nấm Aspergillus flavus Aspergillus parasiticus Năm 1961, cơng trình nghiên cứu cơng nhận aflatoxin tạo nấm Aspergillus flavus nguyên nhân gây khối u gan động vật Trên động vật thủy sản, nghiên cứu độc tố aflatoxin cá hồi thực Ashley cộng Từ trở có nhiều cơng trình nghiên cứu độc tố aflatoxin Các nhà khoa học xác định công thức phân tử công thức cấu tạo aflatoxin 1.1.1.3: Điều kiện gây nhiễm bẩn aflatoxin Các loài sinh aflatoxin thuộc chi Aspergillus phân bố rộng tự nhiên Chúng tạo khuẩn lạc gây nhiễm vào hạt trước thu hoạch trình bảo quản Cây chủ dễ bị gây nhiễm Aspergillus sau phơi nhiễm kéo dài môi trường có độ ẩm cao bị tổn thương điều kiện xấu hạn hán Các môi trường sống địa Aspergillus đất, thực vật mục nát ngũ cốc bị giảm sức đề kháng vi sinh vật xâm nhập tất loại chất hữu có điều kiện thuận lợi cho phát triển Điều kiện thuận lợi bao gồm độ ẩm cao (ít 7%) nhiệt độ cao Hình 1.3 Một số loại nơng sản bị nhiễm aflatoxin 10 Các loại nông sản thường bị nhiễm aflatoxin ngũ cốc (ngô, kê, lúa miến, gạo, lúa mì…), hạt có dầu (lạc, đậu tương, hạt hướng dương, hạt bông…), gia vị (ớt, hạt tiêu đen, rau mùi, nghệ, gừng…) loại hạt khác hạt dẻ, dừa… Aflatoxin xuất sữa động vật cho ăn thức ăn nhiễm aflatoxin Hầu tất nước có quy chuẩn sử dụng aflatoxin Tại Hoa Kỳ có hàm lượng aflatoxin từ ppb đến 20 ppb cho tiêu dùng trực tiếp, thức ăn dùng để vỗ béo cho bò thịt, lợn, gia cầm giai đoạn cuối chấp nhận mức 300 ppb, thực tế thường thấp nhiều mức khuyến cáo an toàn Cục Dược phẩm Thực phẩm Hoa Kỳ (FDA) FDA đưa mức khuyến cáo hàm lượng aflatoxin thực phẩm thức ăn chăn nuôi nhằm bảo vệ sức khoẻ người tiêu dùng sức khoẻ động vật Tại Việt Nam , Bộ Y tế ban hành quy chuẩn QCVN 8-1:2011/BYT Quy chuẩn kỹ thuật quốc gia giới hạn ô nhiễm độc tố vi nấm thực phẩm gới hạn aflatoxin cho bảng 1.1 bảng 1.2 Bảng 1.1 Các giới hạn tối đa hàm lượng aflatoxin thực phẩm Hàm lượng, ppb Tiêu chí 20 Đối với ngơ loại hạt dùng cho vật nuôi chưa trưởng thành (kể gia cầm chưa trưởng thành) vật nuôi cho sữa dùng cho mục đích khác khơng cơng bố; thức ăn chăn nuôi ngoại trừ ngô bột từ hạt 100 Đối với ngô loại hạt dùng cho giống vật ni (bị, lợn) gia cầm trưởng thành 11 200 Đối với ngô loại hạt dùng cho lợn thịt từ 100 pound trở lên 300 Đối với ngô loại hạt dùng cho bị giai đoạn cuối (ví dụ vỗ béo) bột hạt dùng cho bò, lợn gia cầm Bảng 1.2 Các giới hạn tối đa (ML) theo quy định Bộ Y tế Việt Nam ML (microgam/kg) 15 0,5 Tiêu chí Đối với Aflatoxin B1 thực phẩm nói chung Đối với Aflatoxin B1, B2, G1, G2 thực phẩm nói chung Đối với Aflatoxin M1 sữa sản phẩm sữa 1.1.1.4: Các dạng aflatoxin chuyển hóa chúng Aflatoxin có 18 dạng khác tự nhiên, Aflatoxin B1, B2, G1, G2, M1 M2 coi quan trọng có độc tố mạnh [6] Các nhóm aflatoxin khác phân biệt cấu trúc phân tử Aflatoxin nhóm B (B1 B2) có vịng cyclopentane, nhóm G (G1 G2) chứa vịng lacton [7] Aflatoxin nhóm B có huỳnh quang màu xanh dương (Blue), nhóm G thể huỳnh quang màu lục (Green) Trong số nhóm aflatoxin, aflatoxin B1 nhiều phổ biến [8] chiếm 75% tổng số aflatoxin gây ô nhiễm thực phẩm [16] Aflatoxin B1, B2 sữa bị chuyển hóa thành aflatoxin M1, M2 12 Hình 1.4 Cấu tạo hóa học số loại aflatoxin Ngoài loại aflatoxin chủ yếu trên, người ta phát số loại aflatoxin khác, người ta đề nghị gọi hợp chất flavatoxin flavacuramin: - Aflatoxin P1: sản phẩm trao đổi chất, dẫn xuất fenolic Aflatoxin B1 Người ta phân lập chúng cột ambeclit XAD – (Rohm Haas) Trọng lượng phân tử xác định khối phổ 2.8 Sản phẩm kết khử metyl aflatoxin B1 - Aflatoxin 3B hay toxin B3: Một chất có Rf thấp, phân lập từ bình ni cấy aflatoxin Flavus, dạng tinh thể, màu vàng kim, độ độc aflatoxin B1 từ 40 đến 50 lần - Aflatoxin B3 gọi prositicol: Nhân xiclopenten tận aflatoxin B1 thay chuỗi etanol, chất – metoxi – – (2 – hydroxi etyl) difuro Cumarin 1.1.2: Cấu tạo hóa học tính chất aflatoxin B1 1.1.2.1: Cấu tạo hóa học aflatoxin B1 Aflatoxin B1 coi dạng độc sản sinh Aspergillus flavus Aspergillus parasiticus Có cơng thứ C17H12O6 với trọng lượng phân tử 321 Trong cấu trúc phân tử có nhóm lacton 13 metoxyl, khơng có nhóm hidroxyl tự B chữ viết tắt blue (màu xanh nước biển), aflatoxin B1 có màu huỳnh quang xanh nước biển Hình 1.5 Cấu tạo hóa học Aflatoxin B1 1.1.2.2: Tính chất aflatoxin B1 Các aflatoxin phát quang mạnh ánh sáng cực tím Điều cho phép xác định hợp chất nồng độ thấp (0,5ng hay thấp vết sắc kí mỏng) Aflatoxin tinh khiết bền vững nhiệt độ cao lên đến điểm nóng chảy, làm nóng khơng khí Tuy nhiên, tương đối khơng bền để khơng khí tia cực tím phiến sắc kí mỏng, đặc biệt hịa tan dung mơi có độ phân cực cao Các aflatoxin dung môi clorofom benzen bền vững nhiều năm giữ chổ tối lạnh Các aflatoxin khơng bị phân hủy điều kiện nấu bình thường làm nóng trùng Tuy nhiên, có độ ẩm nhiệt độ cao tiêu hủy aflatoxin thời gian định Các aflatoxin hịa tan dung mơi phân cực nhẹ clorofom, metanol Tính tan aflatoxin nước dao động từ 10 – 20mg/l 14 Tất aflatoxin diện dạng tinh thể nhỏ, mịn, màu trắng vàng lợt Aflatoxin B1 có màu huỳnh quang xanh nước biển, loại aflatoxin thường gặp độc Aflatoxin B1 phân tử mỡ, có trọng lượng phân tử thấp, dễ dàng hấp thu sau ăn, hấp thu hoàn toàn 1.1.3: Độc tính chế gây bệnh aflatoxin B1 1.1.3.1: Độc tính aflatoxin B1 Aflatoxin chất gây ung thư mạnh, aflatoxin B1 có độc tính mạnh Ngồi việc gây ngộ độc cấp tính (liều gây chết người khoảng 10mg), độc tố aflatoxin coi nguyên nhân gây xơ gan ung thư Aflatoxin chất gây ung thư gan mạnh nhất, hấp thu lượng 2,5mg aflatoxin thời gian ngắn (khoảng tháng) dẫn đến ung thư gan sau năm Aflatoxin gây tác hại sau đây: - Phá hủy tế bào gan, thận phận khác - Ức chế lên hệ miễn dịch - Ăn mòn thành ruột dày - Suy dinh dưỡng, chậm lớn, chết - Gây ung thư gan người gia súc 1.1.3.2: Cơ chế gây bệnh aflatoxin B1 Do cấu trúc hóa học có vịng dihydro – furan nên aflatoxin B1 liên kết với số enzym làm cản trở trao đổi chất dẫn đến tử vong Ngoài ra, Aflatoxin B1 cịn tương tác đồng hóa trị với vật chất di truyền (DNA, RNA) làm rối loạn cấu trúc di truyền dẫn đến tổn thương gan ung thư gan Với phụ nữ mang thai, hấp thu lượng định dẫn đến dị tật thai nhi quái thai, nặng gây chết non thai nhi 15 Aflatoxin B1 phân tử lực mạnh với thành ruột, có trọng lượng phân tử thấp nên dễ dàng hấp thu hoàn toàn sau ăn Khi đến ruột non, Aflatoxin B1 nhanh chóng hấp thu vào tĩnh mạch ruột non, tá tràng Từ ống tiêu hóa, theo tĩnh mạch cửa, aflatoxin tập trung vào gan nhiều (chiếm khoảng 17% lượng aflatoxin thể) thận, cơ, mô mỡ, tụy, lách Trong vịng 24 có khoảng 80% bị đào thải theo đường tiêu hóa qua mật, đường tiết niệu qua thận đáng ý cịn tiết qua tuyến sữa gây bệnh cho thai nhi bú sữa mẹ Cho đến nay, luận chứng khoa học công nhận khả tác động lên tế bào gan aflatoxin qua giai đoạn sau: - Ức chế men polymerase mà chúng có vai trị tổng hợp DNA RNA - Làm chậm ngừng hẳn tổng hợp DNA - Ngăn cản chế sinh tổng hợp RNA truyền tin - Biến đổi hình dạng nhân tế bào - Hạn chế trình sinh tổng hợp protein Hậu gây ung thư biểu mô tế bào gan Như vậy, aflatoxin có khả gây độc cấp tính mãn tính người động vật, nghiêm trọng nguy hiểm khả gây ung thư gan xơ gan Do vấn đề bảo quản lương thực thực phẩm, an toàn lương thực thực phẩm, không sử dụng thực phẩm bị hỏng, bị nấm mốc vấn đề quan trọng có ý nghĩa việc hạn chế tần suất xuất bệnh ung thư gan nguyên phát 16 STOP Modul nhận tín hiệu từ đầu thu MCP , xử lý đưa vào máy tính thông qua giao tiếp USB - Phần mền thu nhận điều khiển xủa lý số liệu điều khiển, đặt thông số đo của hệ đo bước sóng, thời gian tích phân … Ex Sample Monochrom -ator or PD or PMT Ultra short pulse laser Stop pulse CFD PMT TDC TTL Em Amp CFD Computer Reader and communication card Start pulse Hình 2.6 Sơ đồ tổng quát hệ TCSPC Hệ TCSPC hoạt động sau: Xung laser qua gương chia, phần dùng kích thích mẫu, phần dùng làm xung trigger so sánh Tín hiệu ánh sáng từ mẫu phát quang hội tụ qua filter qua máy đơn sắc để thu ánh sáng đơn sắc Hệ quang học điều chỉnh phù hợp để tín hiệu ánh sáng tới đầu thu photon đơn lẻ Tín hiệu đơn photon chuyển thành xung tín hiệu điện từ đầu thu, sau khuếch đại qua khối tiền khuếch đại đến CFD Toàn hệ quang đầu thu phải đặt buồng tối để tránh nhiễu ánh sáng bên Bộ CFD cho phép trigger lấy mẫu nhanh với độ xác ổn định cao Xung tín hiệu từ CFD chuyển thành xung TTL đến khối TDC với vai trò xung start (nếu sử dụng TAC phải có thêm chuyển đổi tương tự sỐ - ADC) Phần laser sử dụng để tạo xung so sánh thu đầu thu nhanh (như PIN photodiode) Xung so sánh sau qua tách xung (discriminator theo phương pháp leading-edge CFD) chuyển đổi thành xung TTL đến TDC với vai trò xung stop Khối TDC đo thời gian 37 từ xung start đến xung stop, liệu thời gian chuyển sang dạng tín hiệu số ghi vào nhớ Card đọc ghi liệu, chuyển sang máy tính để máy tính dựng lại biểu đồ theo thời gian cường độ Hệ huỳnh quang phân giải thời gian sử dụng hệ đo Viện vật lý sử dụng laser kích thích bước sóng 505 nm, độ rộng xung 100 ps, tần số lặp lại 4MHz, modun đếm đơn photon Picoharp có độ phân giải tới 2ps, sử dụng đầu thu ống nhân quang điện đa vi kênh Hamamatsu R3890 Độ phân giải chung hệ 35 ps 38 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1: TÍNH CHẤT QUANG CỦA AFLATOXIN B1 Phổ hấp thụ huỳnh quang Aflatoxin B1 trình bày hình 3.1 Phổ hấp thụ trạng thái aflatoxin B1 cho thấy diện dải hấp thụ mạnh bước sóng 360 nm, ngồi số cơng bố khác cịn có đỉnh hấp thụ yếu vùng bước sóng 254 nm Tuy nhiên, gới hạn nghiên cứu nghiên cứu vùng khả kiến nên phổ bước sóng 300 nm Phổ phát xạ huỳnh quang aflatoxin B1 phụ thuộc vào môi trường dung môi, nghiên cứu cho thấy đỉnh phổ huỳnh quang aflatoxin thay đổi từ 393 nm môi trường benzen tới 440 nm môi trường PBS (Phosphate buffer solution) Trong trường hợp sử dụng dung môi methanol đỉnh huỳnh quang aflatoxin B1 quan sát thấy 435 nm, phổ huỳnh quang đối xứng gương với phổ hấp thụ trạng thái có cực đại 360 nm 60 0.3 0.2 20 PL Intensity Absorption 40 0.1 0.0 300 350 400 450 500 550 600 650 Wavelength (nm) Hình 3.1 Phổ hấp thụ huỳnh quang Aflatoxin B1 39 3.2: TÍNH CHẤT QUANG CỦA CHẤM LƯỢNG TỬ CdSe/ZnS Sau chế tạo hai chấm lượng tử CdSe/ZnS cấu trúc lõi/vỏ khảo sát tính chất hệ đo huỳnh quang hấp thụ hồng ngoại khả kiến, phổ hấp thụ phổ huỳnh quang chấm lượng tử CdSe/ZnS cho thấy hình 3.2 Phổ hấp thụ CdSe/Zn có đỉnh hấp thụ 520 nm (2.37 eV) dải hấp thụ mạnh 490 nm (2.51 eV) Giá trị lượng vùng cấm quang tương ứng với đỉnh hấp thụ thứ phổ hấp thụ Đỉnh phát huỳnh quang 545 nm (2.26 eV) E g  1.74  0.89  0.36 * D  0.22 * D (3.1) Khi nghiên cứu tính chất quang chấm lượng tử, Zeger Hens [27] đưa công thức xác định độ rộng vùng cấm quang chấm lượng tử CdSe với cấu trúc tinh thể dạng lập phương giả kẽm từ kết thực nghiệm (công thức 3.1) Sử dụng công thức 3.1 để xác định kích thước hạt D trung bình chấm lượng tử dựa vào lượng vùng cấm E g tính từ kết phổ hấp thụ chấm lượng tử Kết thu chấm lượng tử CdSe/ZnS sử dụng có kích thước trung bình 3.5 nm 0.25 120 100 0.20 60 0.10 40 0.05 0.00 300 PL Intensity Absorption 80 0.15 20 350 400 450 500 550 600 650 Wavelength (nm) Hình 3.2 Phổ hấp thụ huỳnh quang chấm lượng tử CdSe/ZnS 40 3.3: TRUYỀN NĂNG LƯỢNG HUỲNH QUANG CỘNG HƯỞNG CỦA AFLATOXIN VÀ CHẤM LƯỢNG TỬ CdSe/ZnS Hình 3.3 Phổ hấp thụ (a) phổ huỳnh quang (b) mẫu aflatoxin B1 với tỉ lệ hàm lượng khác Mẫu aflatoxin B1 chuẩn bị theo nồng độ khác môi trường có chấm lượng tử CdSe/ZnS nhằm xác định đường chuẩn theo nồng độ sở truyền lượng Aflatoxin B1 chấm lượng tử CdSe/ZnS Để xác định tương tác truyền lượng cộng hưởng huỳnh quang Aflatoxin B1 chấm lưởng tử CdSe/ZnS, hình 3.3 trình bày phổ hấp thụ 41 phổ huỳnh quang mẫu aflatoxin B1 – CdSe/ZnS với tỉ lệ hàm lượng khác bảng 2.1 Phổ hấp thụ mẫu aflatoxin B1 – CdSe/ZnS đặc trưng đỉnh hấp thụ aflatoxin B1 360 nm CdSe/ZnS 520 nm dải hấp thụ mạnh từ tử ngoại tới 500 nm với CdSe/ZnS từ tử ngoại tới 450 nm với mẫu có aflatoxin B1 Các mẫu có chứa aflatoxin B1 CdSe/ZnS xuất đỉnh 360 nm 520 nm với cường độ đỉnh 520 nm không đổi, cường độ đỉnh 360 nm giảm dần theo hàm lượng aflatoxin B1 mẫu Mẫu có aflatoxin B1 (M6) có đỉnh hấp thụ 360nm; mẫu có CdSe/ZnS (M0) có đỉnh 520 nm Tương tự vậy, phổ huỳnh quang đặc trưng đỉnh phát xạ 435 nm aflatoxin B1 535 – 545 nm CdSe/ZnS Với mẫu không chứa aflatoxin B1 đỉnh phát xạ huỳnh quang 535 nm, có aflatoxin B1 đỉnh phát xạ dịch tới 545 nm Sự dịch đỉnh thay đổi trạng thái bề mặt chấm lượng tử có mặt aflatoxin B1, đồng thời cường độ huỳnh quang mẫu giảm cường độ huỳnh quang 435 nm aflatoxin B1 mẫu tăng Phổ phát xạ aflatoxin B1 (hình 3.3b) chồng chập lên vùng hấp thụ chấm lượng tử (hình 3.3a) Đây điều kiện để xảy tượng truyền lượng cộng hưởng huỳnh quang Theo nghiên cứu aflatoxin B1, đỉnh phổ hấp thụ phát xạ aflatoxin B1 phụ thuộc vào môi trường dung môi, đỉnh phổ phát xạ thay đổi từ 398 nm, 418 nm, 438nm… tùy thuộc môi trường dung môi benzene, lipid… hay phosphate buffer solution (PBS) Hiệu suất truyền lượng cộng hưởng huỳnh quang hồn tồn tính từ thay đổi cường độ huỳnh quang (hình 3.3b) Tuy nhiên hình vẽ thấy cường độ huỳnh quang tương đối yếu có thăng giáng đáng kể vị trí đỉnh Hơn để khẳng định có tương tác trao đổi truyền lượng cộng hưởng huỳnh quang, phải có thay đổi thời gian sống huỳnh quang, chúng tơi đo đường cong suy giảm huỳnh quang để phân tích đánh giá FRET thơng qua thời gian sống huỳnh quang 42 Hình 3.4 Đường cong suy giảm huỳnh quang aflatoxin B1 – CdSe/ZnS với tỉ lệ khác đo bước sóng 435 nm (a) 545nm (b), kích thích bước sóng 405 nm Hình 3.4 cho thấy đồ thị đường cong suy giảm huỳnh quang mẫu aflatoxin B1 – CdSe/ZnS với tỉ lệ khác đo bước sóng phát xạ flatoxin B1 435nm (hình 3.4a) bước sóng phát xạ CdSe/ZnS 545nm (hình 3.4b) Thời gian sống huỳnh quang hạt tải trạng thái kích thích tính cách làm khớp (fit) đường cong suy giảm huỳnh quang theo hàm exponent Trường hợp mẫu có q trình tái hợp (trường hợp đơn phân tử) fit đường suy giảm huỳnh quang theo hàm exponent đơn 43 Trường hợp có nhiều q trình tái hợp xảy mẫu cần phải fit đường cong theo hàm bi-exponent, trip-exponent…hoặc hàm trung bình stretch – exponent Nhìn vào đồ thị hình 3.4 a, 435 nm – bước sóng phát xạ aflatoxin B1, mẫu có nồng độ aflatoxin B1 lớn (M6, M1, M2) đường cong suy giảm huỳnh quang giảm theo hàm exponent đơn, đó, mẫu có nồng độ aflatoxin B1 nhỏ, cường độ huỳnh quang yếu, đường cong suy giảm huỳnh quang có đóng góp đáp ứng hệ đo (