Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính kháng viêm của cây đòn võ (premna flavescens wall ex c b clarke) phân bố ở tỉnh thái nguyên

TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI LUẬN VĂN THẠC SĨ Nghiên cứu thành phần hố học hoạt tính kháng viêm Đòn võ (Premna flavescens Wall Ex C B Clarke) phân bố tỉnh Thái Nguyên TÔ THỊ NGỌC ANH anh.ttn211202@sis.hust.edu.vn Ngành Kỹ thuật Hoá học Giảng viên hướng dẫn: TS Nguyễn Tuấn Anh Chữ ký GVHD PGS TS Lê Minh Hà Chữ ký GVHD Viện: Kỹ thuật Hố học HÀ NỘI, 09/2022 CỘNG HỊA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc BẢN XÁC NHẬN CHỈNH SỬA LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên tác giả luận văn: Tô Thị Ngọc Anh Đề tài luận văn: Nghiên cứu thành phần hố học hoạt tính kháng viêm Đòn võ (Premna flavescens Wall Ex C B Clarke) phân bố tỉnh Thái Nguyên Chuyên ngành: Kỹ thuật Hoá học Mã số HV: 20211202M Tác giả, tập thể Người hướng dẫn khoa học Hội đồng chấm luận văn xác nhận tác giả sửa chữa, bổ sung luận văn theo biên họp Hội đồng ngày 23 tháng năm 2022 với nội dung sau: - Sửa lỗi in ấn tên cây, tên loài in nghiêng, lỗi tả, lỗi dịch thuật, tên nhóm chất hố học - Sửa số câu văn khoa học dạng chủ động dạng bị động phù hợp với văn phong khoa học - Bổ sung phổ GC/MS tính chất tinh dầu Đòn võ - Bổ sung sửa lại tài liệu tham khảo, trích dẫn phù hợp - Bổ sung danh mục từ viết tắt Ngày 20 tháng 10 năm 2022 Giảng viên hướng dẫn TS Nguyễn Tuấn Anh PGS TS Lê Minh Hà CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG PGS TS Vũ Đình Hồng Tác giả luận văn Tơ Thị Ngọc Anh Lời cảm ơn Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến thầy TS Nguyễn Tuấn Anh, Bộ mơn Cơng nghệ Hố dược Bảo vệ thực vật – Viện Kỹ thuật Hoá học – Trường Đại học Bách Khoa Hà Nội; PGS TS Lê Minh Hà, Phịng Hố dược – Viện Hố học Các hợp chất Thiên nhiên – Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam giao đề tài, tận tình hướng dẫn, tạo điều kiện thuận lợi suốt trình làm thực nghiệm Em xin chân thành cảm ơn thầy, Bộ mơn Cơng nghệ Hố dược Bảo vệ thực vật, tập thể cán phịng Hố dược; cảm ơn gia đình, bạn bè, đồng nghiệp động viên, quan tâm chia sẻ em suốt trình học tập hồn thiện luận văn Tóm tắt nội dung luận văn Cây Đòn võ (còn gọi Cách vàng, Mắt trâu Bông hôi) tên khoa học Premna flavescens Wall Ex C B Clarke thuộc chi Premna Trên giới chúng phân bố nhiều vùng nhiệt đới nóng cựu lục địa; Việt Nam, phân bố số vùng như: Nghệ An, Vĩnh Phúc, Kon Tum, Thái Nguyên… Trong y học dân gian, Đòn võ người dân địa vùng núi tỉnh Thái Nguyên sử dụng để điều trị bệnh liên quan đến viêm, thoái hoá xương khớp, thoát vị đĩa đệm… Mặc dù ứng dụng phổ biến giới nước chưa có nhiều cơng trình nghiên cứu cách có hệ thống cấu trúc hố học hoạt tính sinh học Đòn võ Với mục tiêu nghiên cứu phân lập thử hoạt tính kháng viêm Địn võ, thực đề tài với nội dung phương pháp nghiên cứu cụ thể sau: Tổng quan tài liệu nước chi Premna Đòn võ; Thu thập định danh mẫu Đòn võ (Premna flavescens Wall Ex C B Clarke) tỉnh Thái Nguyên Chiết phân lập chất từ Đòn võ phương pháp chiết rắn – lỏng, sắc kí lớp mỏng, sắc kí cột phương pháp tinh chế Xác định cấu trúc hợp chất phương pháp phổ 1D, 2D NMR đối chiếu tài liệu tham khảo Chiết thu hồi tinh dầu Đòn võ phương pháp chưng cất lôi theo nước; Phân tích thành phần hợp chất có tinh dầu Đòn võ phương pháp GC/MS Đánh giá hoạt tính kháng viêm tinh dầu Đòn võ dòng tế bào đại thực bào RAW 264.7 thử nghiệm MTT khả ức chế sản sinh NO Với mục tiêu nội dung nghiên cứu trên, nhóm nghiên cứu thực đề tài tiến độ thu kết sau:  Đã xây dựng tổng quan tài liệu Đòn võ  Phân lập chất từ cặn chiết n-hexan Đòn võ bao gồm: friedelinol (PF-1); ethyl p-methoxycinamate (PF-2), β-sitosterol (PF-3) 7-oxo-beta-sitosterol (PF-4)  Phân tích tinh dầu Địn võ phương pháp GC/MS thu 51 hợp chất với nhóm chất sesquiterpenoid (83,0%) chất mang hoạt chất β-Caryophyllene (26,3%)  Đánh giá hoạt tính kháng viêm tinh dầu Địn võ thử nghiệm MTT cho thấy mẫu dịch chiết PFL-EO thể hoạt tính ức chế sinh NO mạnh với giá trị IC50 = 5,88 ± 0,19 𝜇𝜇g/mL HỌC VIÊN Ký ghi rõ họ tên Tô Thị Ngọc Anh MỤC LỤC CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Đặc điểm chung họ Lamiacaea 1.2 Đặc điểm chi Premna 1.3 Các nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học chi Premna Các thuốc dân gian Hoạt tính sinh học chi Premna Thành phần hố học có chi Premna 1.4 Giới thiệu Đòn Võ (Premna flavescens Wall ex C B Clarke) 12 Đặc điểm thực vật 12 Tác dụng dược lý Đòn Võ 13 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1 Đối tượng nghiên cứu 15 2.2 Phương pháp chiết thực vật 15 2.3 Phương pháp sắc ký 16 Đặc điểm chung phương pháp sắc ký 16 Cơ sở phương pháp sắc ký 16 Phân loại phương pháp sắc ký 16 Sắc ký cột 17 Sắc ký lớp mỏng 18 2.4 Phương pháp kết tinh lại 19 2.5 Phương pháp chưng cất lôi nước 20 2.6 Các phương pháp xác định cấu trúc hợp chất hữu 20 Phổ hồng ngoại (Infrared spectroscopy, IR) 20 Phổ khối lượng (Mass spectroscopy, MS) 21 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân NMR (Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy) 21 Phổ HMBC (Heteronuclear Multiple-Bond Connectivity) 22 Phổ HSQC (Heteronuclear Single-Quantum Coherence) 22 Phổ COSY (Correlation Spectroscopy) 22 2.7 Phương pháp thử hoạt tính kháng viêm 22 Vật liệu 22 Phương pháp nghiên cứu 22 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM 25 3.1 Thu hái xử lý mẫu .25 3.2 Dung mơi, thiết bị hố chất 25 Thiết bị 25 Hoá chất 25 3.3 Quy trình tạo cặn chiết 26 3.4 Phân lập chất từ cặn chiết 27 3.5 Dữ liệu phổ chất phân lập 28 Dữ liệu phổ hợp chất PF-1 28 Dữ liệu phổ hợp chất PF-2 28 Dữ liệu phổ hợp chất PF-3 28 Dữ liệu phổ hợp chất PF-4 29 3.6 Chiết tách tinh dầu từ Đòn võ 29 3.7 Xác định thành phần hố học tinh dầu Địn võ .29 3.8 Đánh giá hoạt tính kháng viêm tinh dầu Đòn võ 30 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 31 4.1 Xác định cấu trúc hoá học hợp chất PF-1 31 4.2 Xác định cấu trúc hoá học hợp chất PF-2 34 4.3 Xác định cấu trúc hoá học hợp chất PF-3 36 4.4 Xác định cấu trúc hoá học hợp chất PF-4 39 4.5 Kết xác định thành phần hoá học tinh dầu Đòn võ 42 4.6 Kết thử hoạt tính sinh học tinh dầu Đòn võ 45 KẾT LUẬN 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO 47 PHỤ LỤC PHỔ CÁC HỢP CHẤT ĐÃ PHÂN LẬP CỦA CÂY ĐỊN VÕ 54 PHỤ LỤC CƠNG TRÌNH KHOA HỌC CÔNG BỐ TRONG KHUÔN KHỔ LUẬN VĂN 85 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ Hình 1.1 Các dạng sinh học họ Lamiaceae Hình 1.2 Nguồn tinh dầu từ thực vật họ Lamiaceae Hình 1.3 Hình thái Premna clavata Hình 1.4 Một số hợp chất Diterpenoids phân lập từ lồi chi Premna Hình 1.5 Một số hợp chất iridoid diglycosides từ P resinosa 10 Hình 1.6 Một số hợp chất iridoid glycosides từ P integrifolia 11 Hình 1.7 Một số hợp chất flavonoids flavonoids glycosides từ chi Premna 12 Hình 1.8 Hoa Địn võ (P flavescens) 13 Hình 1.9 Thân Đòn võ (P flavescens) 13 Hình 4.1 Phổ cộng hưởng từ 1H-NMR hợp chất PF-1 31 Hình 4.2 Phổ cộng hưởng từ 13C-NMR hợp chất PF-1 31 Hình 4.3 Phổ HSQC hợp chất PF-1 32 Hình 4.4 Phổ HMBC hợp chất PF-1 32 Hình 4.5 Cấu trúc hóa học hợp chất PF-1 34 Hình 4.6 Phổ cộng hưởng từ 1H-NMR hợp chất PF-2 34 Hình 4.7 Phổ cộng hưởng từ 13C-NMR hợp chất PF-2 35 Hình 4.8 Phổ DEPT hợp chất PF-2 35 Hình 4.9 Cấu trúc hoá học hợp chất PF-2 36 Hình 4.10 Phổ cộng hưởng từ 1H-NMR hợp chất PF-3 36 Hình 4.11 Phổ cộng hưởng từ 1H-NMR hợp chất PF-3 37 Hình 4.12 Phổ cộng hưởng từ 13C-NMR hợp chất PF-3 37 Hình 4.13 Phổ DEPT hợp chất PF-3 37 Hình 4.14 Cấu trúc hoá học hợp chất PF-3 39 Hình 4.15 Phổ 1H-NMR hợp chất PF-4 40 Hình 4.16 Phổ 13C-NMR hợp chất PF-4 40 Hình 4.17 Phổ HMBC hợp chất PF-4 40 Hình 4.18 Phổ HSQC hợp chất PF-4 41 Hình 4.19 Cấu trúc hố học hợp chất PF-4 42 Hình 4.20 Đường chuẩn NaNO2 45 DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ Sơ đồ 3.1 Sơ đồ điều chế cặn chiết 26 Sơ đồ 3.2 Sơ đồ phân lập chất 27 DANH MỤC BẢNG Bảng 4.1 Bảng kiện phổ 1H, 13C-NMR hợp chất PF-1 so với tài liệu tham khảo 34 Bảng 4.2 Bảng kiện phổ 1H, 13C-NMR hợp chất PF-2 so với tài liệu tham khảo 37 Bảng 4.3 Bảng kiện phổ 1H, 13C-NMR hợp chất PF-3 so với β-sitosterol 40 Bảng 4.4 Bảng kiện phổ 1H, 13C-NMR hợp chất PF-4 so với tài liệu tham khảo 43 Bảng 4.5 Thành phần hoá học tinh dầu Đòn võ 45 Bảng 4.6 Khả ức chế sinh sản NO tinh dầu Đòn võ 47 78 79 80 81 A.4.5 Phổ COSY hợp chất PF-4 82 83 A.5 Phổ GC/MS tinh dầu Đòn võ 84 PHỤ LỤC CƠNG TRÌNH KHOA HỌC CƠNG BỐ TRONG KHN KHỔ LUẬN VĂN Ngọ Thị Phương, Tơ Thị Ngọc Anh, Nguyễn Tuấn Anh, Nguyễn Minh Việt, Lê Minh Hà “Phân lập xác định cấu trúc hóa học vài hợp chất từ Đòn võ (Premna lucidula Miq.)”, đăng tạp chí Khoa học & Công nghệ trường Đại học Công nghiệp Hà Nội, ISSN 1859-3585 85 86 PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC HĨA HỌC MỘT VÀI HỢP CHẤT TỪ LÁ CÂY ĐỊN VÕ (Premna lucidula Miq.) ISOLATION AND STRUCTURE ELUCIDATION OF SOME COMPOUNDS FROM THE LEAVES OF Premna lucidula Miq Ngọ Thị Phương1, Tô Thị Ngọc Anh2, Nguyễn Tuấn Anh2, Nguyễn Minh Việt3, Lê Minh Hà1* Viện Hóa học hợp chất thiên nhiên, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam (VAST) Trường Đại học Bách Khoa Hà Nội Khoa Cơng nghệ Hóa, Trường Đại học Cơng nghiệp Hà Nội * Email: halm2vn@gmail.com TĨM TẮT Bốn hợp chất bao gồm friedelinol (1), ethyl p-methoxycinamate (2), β-sitosterol (3), 7-oxo-beta-sitosterol (4) phân lập từ dịch chiết n-hexan Đòn võ (Premna lucidula Miq.) thu hái tỉnh Thái Nguyên, Việt Nam Cấu trúc chúng xác định việc phân tích phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) so sánh với số liệu phổ công bố tài liệu tham khảo Trong đó, hợp chất ethyl pmethoxycinamate (2) 7-oxo-beta-sitosterol (4) lần phân lập từ chi Premna; hợp chất friedelinol (1) β-sitosterol (3) lần phân lập từ Đòn võ (P lucidula) Từ khóa: Địn võ, Premna lucidula Miq., dịch chiết n-hexan, ethyl p-methoxycinamate, β-sitosterol, friedelinol, 7-oxo-beta-sitosterol ABSTRACT Four compounds including friedelinol (1), ethyl p-methoxycinamate (2), βsitosterol (3), and 7-oxo-beta-sitosterol (4) have been isolated from the n-hexan extract of the leaves of Premna lucidula Miq collected in Thai Nguyen Provice, Vietnam The structures of these compounds have been identified based on Nuclear Magnetic Resonance (NMR) and compared with spectral data published in the references Compounds ethyl p-methoxycinamate (2) and 7-oxo-beta-sitosterol (4) were isolated from the genus Premna for the first time, while compounds friedelinol (1) and β-sitosterol (3) were reported from P lucidula for the first time Keywords: Premna lucidula Miq., n-hexan extract, ethyl p-methoxycinamate, βsitosterol, friedelinol, 7-oxo-beta-sitosterol GIỚI THIỆU Cây Đòn võ có tên khoa học Premna lucidula Miq., tên đồng vần (synonym) Premna flavescens Wall Ex C B Clarke thuộc họ Hoa mơi (Lamiaceae) [1] Cây Địn võ dạng thân gỗ mọc hoang vùng núi phát số nơi thuộc huyện Đồng Hỷ, tỉnh Thái Nguyên [2] Cây Đòn võ thuốc quý người dân địa sử dụng Lá Đòn võ sử dụng loại trà toàn sử dụng để điều trị bệnh thấp khớp viêm xương khớp y học dân gian Mặc dù Đòn võ dùng dân gian làm thuốc chữa bệnh nghiên cứu thành phần hoá học hoạt tính sinh học Địn võ cịn hạn chế Cho đến có hai cơng bố Nguyễn Huy Hùng cộng (2020) [3] Lê Minh Hà cộng (2021) [4] nghiên cứu thành phần hoá học hoạt tính sinh học tinh dầu Địn võ Trong báo này, báo cáo kết phân lập xác định cấu trúc hợp chất: friedelinol (1), ethyl p-methoxycinamate (2), βsitosterol (3), 7-oxo-beta-sitosterol (4) từ cặn chiết n-hexan Đòn võ NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên liệu Lá Đòn võ thu hái xã Văn Hán, huyện Đồng Hỷ, tỉnh Thái Nguyên, Việt Nam vào tháng năm 2021 Mẫu giám định Tiến sĩ Nguyễn Thế Cường – Viện sinh thái Tài nguyên Sinh vật, VAST Mẫu tiêu số DV2021 bảo quản Viện Hoá học hợp chất thiên nhiên – Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam 2.2 Hoá chất thiết bị Sắc ký lớp mỏng (TLC): sắc ký lớp mỏng thực mỏng tráng sẵn DC-Aluofolien 60 F245 (Merck 1,05715) Phát vệt chất đèn tử ngoại hai bước sóng 254nm 368nm dùng thuốc thử dung dich H2SO4 10%, sấy khơ hơ nóng từ từ bếp điện đến phát màu Sắc ký cột (CC): Sắc ký cột tiến hành với chất hấp phụ silicagel Merck, pha thường, cỡ hạt 0,040-0,063 mm (240-430 mesh) Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H-(500 MHz) 13C-(125MHz) đo máy Bruker AM500-FT-NMR sử dụng TMS làm chất nội chuẩn 2.3 Chiết tách phân lập chất Lá khô Đòn võ (2 kg) nghiền thu bột mịn, sau ngâm chiết với ethanol 50oC, (3 lần, lần 24 giờ) Dịch chiết gom lại, lọc qua giấy lọc cất loại dung môi áp suất giảm thu 25g cặn chiết tổng PL/EtOH Cặn ethanol sau thêm 100 ml nước cất nhiệt độ phòng tiến hành chiết phân bố n-hexan, ethyl acetate với dung môi chiết lần gom dịch chiết lại, thu dịch chiết tương ứng Cất loại dung môi áp suất giảm thu cặn chiết tương ứng PL/n-hexan (6,4g), PL/ethyl acetate (7,2g), PL/nước (9,4 g) Phần cặn PL/n-hexan (6,4g) tiến hành phân tách qua sắc ký cột silicagel pha thường, hệ dung môi rửa giải gradient n-hexan : EtOAc (100:0, 70:30, 50:50, 30:70, 0:100) thu phân đoạn (ký hiệu F1 đến F5) Phân đoạn F3 (2,5g) tiếp tục phân tách sắc ký cột silicagel pha thường, hệ dung môi rửa giải n-hexan : acetone (60:1) thu phân đoạn kí hiệu F3.1 đến F3.4 Phân đoạn F3.3 tiếp tục phân tách sắc ký cột silicagel pha thường với dung môi rửa giải n-hexane-acetone (50:1) thu phân đoạn ký hiệu F3.3.1 đến F3.3.3 Phân đoạn F3.3.2 tiếp tục phân tách cột sắc ký với hệ dung môi n-hexane-acetone (20:1) thu hợp chất (12,1 mg) có dạng tinh thể hình kim, màu trắng Hợp chất (18,5mg) thu sau kết tinh lại phân đoạn F3.3.1 hỗn hợp n-hexan – ethyl acetate (2:1) Phân đoạn F5 (1,80g) phân tách sắc ký cột silicagel pha thường, hệ dung môi rửa giải nhexan:EtOAc (25:1) thu phân đoạn kí hiệu F5.1 đến F5.5 Phân đoạn F5.2 tiếp tục phân tách sắc ký cột silicagel pha thường với dung môi rửa giải n-hexaneethyl acetate (12:1) thu hợp chất (15,0 mg) Phân đoạn F5.3 tiếp tục phân tách sắc ký cột silicagel pha thường, hệ dung môi rửa giải n-hexane-acetone (5:1) thu hợp chất (11,2mg) có dạng tinh thể hình kim, màu trắng Hợp chất 1: Friedelinol Tinh thể hình kim, màu trắng (500MHz, CDCl3) δ (ppm): 3,73 (1H, m, H-3); 1,17 (3H, s, H-28); 1,00 (3H, s, H-27); 0,99 (3H, s, H-30); 0,98 (3H, s, H-26); 0,96 (3H, s, H-24); 0,93 (3H, s, H-29); 0,89 (3H, d, J = 7,5 Hz, H-23); 0,86 (3H, s, H-25) 1H-NMR (125MHz, CDCl3) δ (ppm): 72,77 (C-3); 61,38 (C-10); 53,22 (C-8); 49,20 (C-4); 42,86 (C-18); 41,76 (C-6); 39,70 (C-14); 39,29 (C-22); 38,39 (C-13); 37,86 (C5); 37,13 (C-9); 36,11 (C-2); 35,58 (C-16); 35,26 (C-11); 35,22 (C-19); 35,03 (C-29); 32,85 (C-21); 32,35 (C-15); 32,10 (C-28); 31,80 (C-30); 30,65 (C-12); 30,04 (C-17); 28,18 (C-20); 20,12 (C-26); 18,65 (C-27); 18,25 (C-25); 17,56 (C-7); 16,40 (C-24); 15,81 (C-1); 11,62 (C-23) 13C-NMR Hợp chất 2: Ethyl p-methoxycinamate Tinh thể kim màu trắng -NMR (500MHz, CDCl3) δ (ppm): 7,63 (1H, d, J = 15,5 Hz, H-2); 7,48 (2H, d, J = 9,0 Hz, H-6, H-8); 6,90 (2H, d, J = 9,0 Hz, H-5, H-9); 6,30 (1H, d, J =15,5 Hz, H-3); 4,26 (2H, q, J = 7,5 Hz, CH2-1’); 3,83 (3H, s, OCH3); 1,33 (3H, t, J = 7,5 Hz, H-2’) 1H (125MHz, CDCl3) δ (ppm): 167,3 (C-1); 161,3 (C-3); 144,2 (C-2); 129,7 (C7 C-8); 127,2 (C-7); 115,7 (C-4); 114,3 (C-5 C-9); 60,3 (C-1’); 55,3 (OCH3-7); 14,3 (C-2’) 13C-NMR Hợp chất 3: β-sitosterol Tinh thể hình kim, màu trắng (500 MHz, CDCl3) δ (ppm): 5,35 (1H, t, J = 5,0 Hz, H-6); 3,53(1H, m, H3); 1,01 (3H, s, CH3-18); 0,93 (3H, d, J = 7,5 Hz, CH3-21); 0,84 (3H, d, J = 7,0 Hz, CH329); 0,83 (6H, d, J = 6,5 Hz, CH3-26, 27); 0,68 (3H, s, CH3-19) 1H-NMR (125MHz, CDCl3) δ (ppm): 140,74 (C-5);121,71 (C-6); 71,80 (C-3); 56,77 (C-14); 56,07 (C-17); 50,14 (C-9); 45,84 (C-24); 42,32 (C-13); 42,27 (C-4); 39,78 (C12); 37,25 (C-1); 36,50 (C-10); 36,14 (C-20); 33,95 (C-22); 31,91 (C-7, 8); 31,62 (C-2); 29,16 (C-25); 28,24 (C-16); 26,09 (C-23); 24,30 (C-15); 23,07 (C-28); 21,08 (C-11); 19,81 (C-26); 19,39 (C-27); 19,04 (C-21); 18,78 (C-18); 11,98 (C-29); 11,86 (C-19) 13C-NMR Hợp chất 4: 7-oxo-beta-sitosterol Tinh thể hình kim, màu trắng (500MHz, CDCl3), δ (ppm): 5,69 (1H, s, H-6); 3,67 (1H, m, H-3); 2,23 (1H, t, J = 11,0 Hz, H-8); 1,20 (3H, s, H-19); 0.93 (3H, d, 7,0 Hz, H-21); 0,84 (6H, d, J = 7,5 Hz, H-26, 29); 0,83 (3H, d, J = 7,5 Hz, H-27); 0,68 (3H, s, H-18) 1H-NMR 13C-NMR (125MHz, CDCl 3), δ (ppm): 202,30 (C-7); 165,07 (C-5); 126,15 (C-6); 70,56 (C-3); 54,76 (C-17); 50,01 (C-9); 49,99 (C-14); 45,88 (C-24); 45,45 (C-8); 43,14 (C-13); 41,84 (C-4); 38,74 (C-12); 38,31 (C-10); 36,38 (C-1); 36,10 (C-20); 33,99 (C-22); 31,23 (C-2); 29,19 (C-25); 28,57 (C-16); 26,35 (C-23); 26,16 (C-15); 23,10 (C-28); 21,25 (C11); 19,81 (C-26); 19,07 (C-27); 18,95 (C-21); 17,33 (C-19); 11,99 (C-18,29) KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Từ phần cặn chiết n-hexan Đòn võ, phương pháp sắc kí, chúng tơi phân lập hợp chất ký hiệu 1, 2, Hợp chất 1: Friedelinol Hợp chất thu dạng tinh thể hình kim màu trắng Dữ liệu phổ 1H-NMR hợp chất cho thấy tín hiệu nhóm metyl dạng singlet nhóm metyl dạng doublet δH 0,86 (3H, s, H-25); 0,89 (3H, d, J = 7,5 Hz, H-23); 0,93 (3H, s, H-29); 0,96 (3H, s, H-24); 0,98 (3H, s, H-26); 0,99 (3H, s, H-30); 1,00 (3H, s, H-27); 1,17 (3H, s, H28) Phổ 13C-NMR xuất tín hiệu 30 nguyên tử C Điều gợi ý có khung friedelan phân tử [3] Phổ 13C-NMR xuất tín hiệu nguyên tử cacbon δC 72,77 Những phân tích cho phép dự đốn có mặt nhóm hydroxyl hợp chất So sánh kiện phổ thu hợp chất với tài liệu tham khảo [5] thấy hoàn toàn trùng khớp Do hợp chất xác định friedelinol Hợp chất 2: Ethyl p-methoxycinamate Hợp chất thu dạng tinh thể hình kim màu trắng Dữ liệu phổ 1H-NMR HSQC hợp chất cho thấy tín hiệu nhóm methyl (δH 1,33, t, J = 7,5 Hz), nhóm oxygenated methylene (δH 1,33, q, J = 7,5 Hz), nhóm methoxy (δH 3,83) Hai olefinic proton δH 7,63 (1H, d, J = 15,5 Hz, H-2); 6,30 (1H, d, J = 15,5 Hz, H3)] bốn proton thơm δH 6,90 (2H, d, J = 9,0 Hz) 7,48 (2H, d, J = 9,0 Hz) gợi ý có mặt dẫn xuất p-coumarate Phổ 13C-NMR cho thấy tín hiệu 12 nguyên tử cacbon Tám carbons [114,3 (C-5,9); 115,7 (C-4); 127,2 (C-7); 129,7 (C-7,8); 144,2 (C-2); 161,3 (C-3)] nhóm carbonyl group δC 167,3 gán cho khung p-coumarate Tương tác HMBC từ δH 3,83 tới C-7 (δC 127,2) khẳng định nhóm methoxy gắn vào vị trí C-7 Do đó, hợp chất xác định ethyl pmethoxycinamate so sánh với liệu phổ tài liệu tham khảo [6] Hợp chất 3: β-sitosterol Hợp chất thu dạng tinh thể hình kim màu trắng Dữ liệu phổ 1H-NMR hợp chất cho thấy tín hiệu olefinic proton δH 5,35 (H-6); proton multiplet δH 3,53 (H-3); nhóm metyl có nhóm metyl góc dạng singlet δH 0,68 (CH3-19) 1,01 (CH3-18), gợi ý có mặt khung steroid Tương ứng phổ 13CNMR kết hợp với phổ DEPT hợp chất cho thấy tín hiệu 29 nguyên tử C Trong có nguyên tử C olefin δC 140,74 (C5) 121,71 (C6) Tín hiệu nguyên tử cacbon δC 71,80 gợi ý nguyên tử C gắn với nhóm hydroxy, phù hợp với nhóm OH gắn vào vị trí C3 khung steroid So sánh kiện phổ thu hợp chất với kiện phổ NMR β-sitosterol tài liệu tham khảo [7] thấy hoàn toàn trùng khớp Do vậy, hợp chất xác định β-sitosterol Hợp chất 4: 7-oxo-beta-sitosterol Hợp chất thu dạng tinh thể hình kim màu trắng Dữ liệu phổ 1H-NMR hợp chất cho thấy tín hiệu olefinic proton δH 5,69 (s, H-6), proton dạng multiplet δH 3,67 (H-3), nhóm metyl có nhóm metyl góc δH 1,20 (3H, s, H-19) 0,68 (3H, s, H-18), gợi ý hợp chất có chứa khung tương tự β-sitosterol [8] Phổ 13C-NMR hợp chất cho tín hiệu tương tự hợp chất β-sitosterol [8] Điểm khác biệt xuất thêm tín hiệu nhóm oxo δC 202,30 Tương tác xa HMBC thu H-8 (δH 2,23) với nhóm oxo gợi ý vị trí nhóm oxo C-7 So sánh kiện phổ thu hợp chất với hợp chất 7-oxo-beta- sitosterol tài liệu tham khảo [9] thấy hồn tồn trùng khớp Do hợp chất xác định 7-oxo-beta-sitosterol 29 30 19 20 12 11 H 18 13 29 21 27 28 22 19 28 14 10 15 27 16 14 10 HO 15 24 23 25 13 23 17 11 18 26 25 HO 24 20 12 16 26 22 21 17 H 29 28 O H3CO 18 CH3 O 11 25 10 15 16 14 27 13 HO 23 17 19 24 20 12 2' 26 22 21 1' O Hình 1: Cấu trúc hợp chất phân lập từ Đòn võ KẾT LUẬN Từ phần cặn chiết n-hexan Đòn võ (Premna lucidula Miq.), phân lập bốn hợp chất friedelinol (1), ethyl p-methoxycinamate (2), β-sitosterol (3), 7-oxo-beta-sitosterol (4) Cấu trúc hợp chất xác định dựa vào phương pháp phổ cộng hưởng từ hạt nhân NMR kết hợp so sánh với liệu phổ chất tương ứng tài liệu tham khảo Trong đó, hợp chất ethyl p-methoxycinamate (2) 7-oxo-beta-sitosterol (4) lần phân lập từ chi Premna; hợp chất friedelinol (1) β-sitosterol (3) lần phân lập từ Đòn võ (P lucidula) LỜI CẢM ƠN Nghiên cứu thực nhờ hỗ trợ kinh phí đề tài mã số NVCC 07.04/22-23 UDNGDP.01/21-22 TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Vũ Xuân Phương, 2007 Thực vật chí Việt Nam Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, 2, 153-154 [2] Phạm Hoàng Hộ, 2003 Cây cỏ Việt Nam Nhà xuất Trẻ, 822 [3] Hung NH, Huong NT, Chung NT, et al., 2020 Premna species in Vietnam: essential oil compositions and mosquito larvicidal activities Plants 9(9), 1130 [4] Ha LM, Phuong NT, Trang NTP, Thuy DTT, Hung LN, 2021 Chemistry and molecular characteristics of Premna flavescens Wall ex C B Clarke in Vietnam Nat Prod Commun 16(9), 1–4 [5] Hatem S Abbass, Ehab A Ragab, Abd El-Salam I Mohammed, Atef A El-Hela, 2015 Phytochemical and Biological Investigation of Ficus mysorensis Cultivated in Egypt Journal of Pharmaceutical, Chemical and Biological Sciences, 2015, 3(3), 396 – 407 [6] Hasali, Nor Hazwani Mohd, et al., 2013 Biotransformation of ethyl p-methoxycinnamate from Kaempferia galanga L using Aspergillus niger International Journal of Bioscience 3(7), 148-155 [7] Ododo, M M., Choudhury, M K., & Dekebo, A H., 2016 Structure elucidation of βsitosterol with antibacterial activity from the root bark of Malva parviflora SpringerPlus, 5(1), 6-10 [8] Venkata Sai Prakash Chaturvedula, 2012 Isolation of Stigmasterol and β-Sitosterol from the dichloromethane extract of Rubus suavissimus International Current Pharmaceutical Journal 2012, 1(9), 239-242 [9] Chun-Chao Zhao, Jian-Hua Shao 1, Xian Li, Jing Xu, and Peng Zhang, 2005 Antimicrobial Constituents from Fruits of Ailanthus Altissima SWlNGLE Arch Pharm Res, 28(10), 11471151 AUTHORS INFORMATION Ngo Thi Phuong1, To Thi Ngoc Anh2, Nguyen Tuan Anh2, Nguyen Minh Viet3, Le Minh Ha1* Institute of Natural Products Chemistry, Vietnam Academy of Science and Technology (VAST) Hanoi University of Science and Technology Faculty of Chemical Technology, Hanoi University of Industry ... nư? ?c chưa c? ? nhiều c? ?ng trình nghiên c? ??u c? ?ch c? ? hệ thống c? ??u tr? ?c hố h? ?c hoạt tính sinh h? ?c Địn võ Duy năm 2020, c? ? c? ?ng b? ?? t? ?c giả Nguyễn Huy Hùng c? ??ng nghiên c? ??u hợp chất hoạt tính sinh h? ?c. .. 1.3 C? ?c nghiên c? ??u thành phần hóa h? ?c hoạt tính sinh h? ?c chi Premna C? ?c thu? ?c dân gian Hoạt tính sinh h? ?c chi Premna Thành phần hố h? ?c c? ? chi Premna 1.4 Giới thiệu Đòn Võ (Premna. .. M? ?c dù ứng dụng phổ biến giới nư? ?c chưa c? ? nhiều c? ?ng trình nghiên c? ??u c? ?ch c? ? hệ thống c? ??u tr? ?c hố h? ?c hoạt tính sinh h? ?c Đòn võ Với m? ?c tiêu nghiên c? ??u phân lập thử hoạt tính kháng viêm Địn võ,