KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CAO BENZEN VÀ CAO CLOROFOMCỦA CÂY AN ĐIỀN NHÁM – HEDYOTIS RUDIS PIERRE EX PIT , HỌ CÀ PHÊ (RUBIACEAE) Mai Anh Hùng*, Từ Đức Dũng†, Nguyễn Kim Phi Phụng‡ 1 Mở đầu Chi Hedyot[.]
Tạp chí KHOA HỌC ĐHSP TP HCM Mai Anh Hùng tác giả KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CAO BENZEN VÀ CAO CLOROFOMCỦA CÂY AN ĐIỀN NHÁM – HEDYOTIS RUDIS PIERRE EX PIT., HỌ CÀ PHÊ (RUBIACEAE) Mai Anh Hùng*, Từ Đức Dũng†, Nguyễn Kim Phi Phụng‡ Mở đầu Chi Hedyotis (họ Cà phê Rubiaceae) có khoảng 160 loài, phân bố chủ yếu Trung Hoa, Ấn Độ, Nhật Bản, Indonesia, Thái Lan Việt Nam Trong có nhiều lồi ngành y học cổ truyền Việt Nam Trung Hoa sử dụng để điều trị chứng bệnh bỏng, lỵ, rắn cắn, viêm ruột thừa, viêm gan, viêm amiđan đặc biệt có hoạt tính kháng nhiều dịng tế bào ung thư, ung thư phổi A549, ung thư buồng trứng SK-OV-3, ung thư dày SNU-1, … [1,2] Tuy chưa có cơng trình cơng bố thành phần hóa học dược tính Hedyotis rudis Pierre ex Pit hy vọng Hedyotis rudis thừa hưởng đặc tính quí báu chi Bài nhằm giới thiệu hai axit tritecpen cô lập từ phân đoạn cao benzen cao clorofom Hedyotis rudis thu hái vùng núi Langbiang (huyện Lạc Dương, tỉnh Lâm Đồng) Kết thảo luận Hợp chất (1) Hợp chất (1) cô lập từ phân đoạn cao clorofom, có dạng bột màu trắng Phổ IR (KBr, vcm-1): 3433 (OH); 2966-2870 (CH); 1690 (C=O); 1042 (CO) * CN, Khoa Hóa học - Trường ĐH Sư phạm Tp.HCM CN, Khoa Hóa học - Trường ĐH Khoa học tự nhiên Tp HCM † ‡ PGS.TS, Khoa Hóa học - Trường ĐH Khoa học tự nhiên Tp HCM Phổ 1H-NMR (500MHz, DMSO-d6, δ ppm): 5,13 (m; H-12); 3,01 (dd; 10,0Hz; 5,0Hz; H-3); 2,11 (d; 11,5Hz; H-18) Phổ 13C-NMR kết hợp với DEPT-NMR (125MHz, DMSO-d 6, δ ppm) cho thấy có xuất tín hiệu nguyên tử cacbon cacboxylic vùng từ trường thấp 178,4 (–COOH) Đồng thời có cặp tín hiệu 138,3 (>C=) 124,7 (–CH=), cặp tín hiệu đặc trưng nối đơi dạng >C=CH– hợp chất có khung ursan-12-en Do đó, hợp chất (1) axit tritecpen có khung sườn ursan-12-en So sánh tín hiệu phổ 13C-NMR DEPT (1) với axit ursolic [3] (bảng 1) cho thấy có tương hợp Do đó, chúng tơi khẳng định hợp chất (1) cô lập axit ursolic 30 29 20 19 12 26 22 18 11 25 21 COOH 13 17 10 HO 23 14 16 15 28 27 24 (1 ) Bảng Số liệu phổ NMR (1) so sánh với axit ursolic Vị trí C DEPT Axit ursolic (DMSO-d6) Hợp chất (1) (DMSO-d6) -CH2-CH2> CH-OH >C< >CH-CH2-CH2- δ H ppm (J, Hz) 3,01 (dd; 10,0; 5,0) 0,66 (m) δC ppm 38,3 27,0 77,0 38,5 54,9 18,0 32,8 δ C ppm 38,2 27,0 76,8 38,5 54,8 18,0 32,7 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 >C< >CH>C< -CH2-CH= >C= >C< -CH2-CH2>C< >CH>CH>CH-CH2-CH2-CH3 -CH3 -CH3 -CH3 -CH3 -COOH -CH3 -CH3 5,13 (m) 2,11 (d; 11,5) 0,90 (s) 0,87 (s) 0,68 (s) 0,75 (s) 1,04 (s) 0,81 (d; 6,5) 0,91 (d; 9,0) 41,7 46,9 36,6 22,9 124,7 138,3 41,7 27,6 23,9 47,1 52,5 38,6 38,5 30,2 36,4 28,3 15,3 16,1 17,0 23,3 178,4 17,1 21,1 Hợp chất (2) Hợp chất (2) cô lập từ phân đoạn cao benzen Hedyotis rudis, có dạng bột màu trắng (kết tinh CHCl3) Phổ 1H-NMR (500MHz, CDCl3, δ ppm): 5,23 (dd; 3,5Hz; 3,5Hz; H-12); 4,49 (dd; 7,5Hz; 6,5Hz; H-3); 2,18 (d; 11,0Hz; H-18); 2,04 (s; H-2’) Phổ 13C-NMR kết hợp với DEPT-NMR (125MHz, CDCl3, δ ppm) cho thấy vùng từ trường thấp, ngồi tín hiệu nguyên tử cacbon cacboxylic 183,7 (–COOH) có tín hiệu ngun tử cacbon cacboxylat 171,0 (–COO–) Bên cạnh cặp tín hiệu đặc trưng nối đôi >C=CH– khung ursan-12- 41,6 46,8 36,3 22,8 124,6 138,2 41,6 27,5 23,8 47,0 52,4 38,4 38,4 30,2 36,5 28,3 15,2 16,1 17,1 23,3 178,3 16,9 21,1 en 143,7 (>C=) 122,3 (–CH=) Do đó, hợp chất (2) dẫn xuất dạng este axit ursolic So sánh tín hiệu phổ 13C-NMR (2) với phổ axit 3β-axetylursolic [4] (bảng 2) cho thấy có tương hợp Đồng thời tương quan thu nhận từ phổ hai chiều HSQC, HMBC 1H-1H COSY (bảng 2) (2) phù hợp với cấu trúc axit 3β-axetylursolic Do đó, đề nghị hợp chất (2) axit 3β-axetylursolic Thực nghiệm 3.1 Nguyên liệu Cây tươi thu hái vùng núi Langbiang, thuộc huyện Lạc Dương, tỉnh Lâm Đồng vào tháng 07 năm 2008 Tên khoa học xác định Hedyotis rudis Pierre ex Pit dược sĩ Phan Đức Bình, Phó Tổng biên tập Bán nguyệt san Thuốc Sức Khỏe Cây lưu mẫu lưu giữ tiêu thực vật, kí hiệu mẫu số US-C016 Bộ mơn Hóa hữu cơ, Khoa Hóa học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Tp.HCM 3.2 Chiết tách cô lập hợp chất Mẫu tươi (14,0kg) rửa sạch, để khô tự nhiên, sấy 65 oC 48 xay nhuyễn thành dạng bột (2,0kg) Dịch chiết trình ngâm dầm mẫu với etanol 96 o nhiệt độ phịng quay áp suất thấp để thu cao thô etanol (100,0g) Tiến hành sắc kí cột silica gel pha thường dung môi ete dầu hỏa 60-90, benzen, clorofom, etyl axetat metanol để điều chế phân đoạn cao có độ phân cực tương ứng Bằng phương pháp sắc kí cột silica gel sắc kí điều chế nhiều lần phân đoạn cao clorofom (16,5g) cao benzen (23,0g), bước đầu cô lập hợp chất (1) (14,0g) (2) (60,0mg) tương ứng Q trình chiết tách lập hợp chất khác phân đoạn cao phân đoạn cao khác tiếp tục thực 30 29 20 19 12 11 25 26 COOH 13 17 2' O Vị trí C 10 11 1' H3C C O 10 16 14 15 27 23 21 22 18 24 (2) Bảng Số liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT tương quan HSQC, HMBC, 1H-1H COSY hợp chất (2) so sánh với phổ 13C-NMR (125MHz, Piriđin-d5) axit 3β-axetylursolic Axit 3βHợp chất (2) (CDCl3) axetylursolic HSQC (Piriđin-d5) HMBC (H→C) H-1H COSY δC δC ppm ppm δ H ppm (J, Hz) DEPT 1,65 (m) 1,07 H-2; H-3; H-CH238,4 38,3 C-2; C-3; C-5 (m) 25 1,87 (m) 1,07 -CH224,1 23,6 C-23 H-1 (m) 4,49 (dd; 7,5; C-2; C-10; C-23; C-24; -CH-O80,9 81,0 6,5) C-1’ >C< 38,0 39,5 >CH55,7 55,3 0,82 (m) C-3 1,52 (m) 1,36 C-1; C-5; C-8; C-10; C-CH218,6 18,2 H-24 (m) 24 0,92 (dd; 11,5; -CH233,5 32,8 C-5; C-9; C-26 H-11; H-26 8,5) >C< 40,0 41,9 >CH47,9 47,5 1,54 (m) C-11; C-27 >C< 37,2 37,7 1,91 (m) 1,07 H-9; H-12; H-CH223,7 23,3 C-9; C-12; C-13; C-25 (m) 25 5,23 (dd; 3,5; 3,5) 12 -CH= 125,6 125,7 13 14 15 >C= >C< -CH2- 139,4 42,6 28,8 16 -CH2- 25,0 17 18 >C< >CH- 48,2 53,6 138,0 41,9 29,7 1,25 (m) 1,99 (dd; 13,5; 24,1 4,0) 48,0 52,5 2,18 (d; 11,0) 19 >CH- 39,6 39,3 1,33 (m) 20 >CH- 39,6 39,0 1,33 (m) 21 22 23 -CH2-CH2-CH3 31,2 37,6 28,3 30,6 1,50 (m) 36,7 1,70 (m) 28,1 0,86 (s) 24 -CH3 17,1 16,7 0,85 (s) 25 26 27 28 29 30 1’ 2’ -CH3 -CH3 -CH3 -COOH -CH3 -CH3 -COO-CH3 15,7 17,5 24,1 180,1 17,7 21,6 170,7 21,3 15,4 17,0 23,6 183,7 17,1 21,3 171,0 21,2 C-8; C-9; C-11; C-18 H-11 C-28 H-22; H-27 C-12; C-13; C-16; C17; C-19; C-27; C-30 H-19; H-20 C-20; C-22 0,95 (s) 0,85 (s) 1,63 (s) C-3; C-4 C-3; C-4; C-5; C-10; C23 C-1; C-9; C-10 C-6; C-7; C-8; C-10 C-15 0,76 (d; 11,0) 0,94 (d; 6,5) C-20 C-20; C-21; C-22; C-29 2,04 (s) C-1’ H-18; H-21; H-30 H-21; H-22; H-30 H-19; H-20 H-2; H-24 H-2’ H-1; H-11 H-19 H-19; H-20 3.3 Phổ nghiệm Phổ IR ghi máy FTIR-8400S Shimadzu Phịng thí nghiệm Khoa Hóa học, Trường Đại học Sư phạm Tp.HCM (280 An Dương Vương, Q5, Tp.HCM) Các phổ NMR (được ghi máy Brucker Avance 500 tần số 500MHz 125MHz cho 1H-NMR 13C-NMR tương ứng) Phịng NMR, Viện Hóa học Khoa Học Cơng Nghệ Việt Nam (18 Hồng Quốc Việt, Cầu Giấy, Hà Nội) Kết luận Từ phân đoạn cao clorofom benzen Hedyotis rudis Pierre ex Pit., bước đầu cô lập hai hợp chất axit ursolic (1) axit 3βaxetylursolic (2) tương ứng Trong đó, hợp chất (2) lần tìm thấy chi Hedyotis cô lập dạng tinh khiết TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Võ Văn Chi (1996), Từ điển thuốc Việt Nam, NXB Y Học Tp HCM, tr 104 [2] Kim Sung Hoon, Ahn Byung-Zun, Ryu Shiyong (1998), “Antitumor effects of ursolic acid isolated from Oldenlandia diffusa”, Phytotherapy research, 12 (8), pp 553-556 [3] Gamal A Mohamed and Sabrin R M Ibrahim (2007), “Eucalyptone G, a new phloroglucinol derivative and other constituents from Eucalyptus globulus Labill”, ARKIVOC (XV), pp 281-291 [4] Alexandre T C Taketa, Eberhard Breitmaier and Eloir P Schenkel (2004), “Triterpenes and Triterpenoidal Glycosides from the Fruits of Ilex paraguariensis (Maté)”, J Braz Chem Soc., Vol 15, No 2, pp 205211 Tóm tắt Ở Việt Nam giới, An điền nhám – Hedyotis rudis Pierre ex Pit., họ Cà phê (Rubiaceae), chưa nghiên cứu mặt hóa học dược tính Từ phân đoạn cao benzen cao clorofom Hedyotis rudis Pierre ex Pit., cô lập hai axit tritecpen axit ursolic (1) axit 3βaxetylursolic (2) Cấu trúc hợp chất khẳng định liệu phổ NMR so sánh với tài liệu tham khảo Abstract Examination of chemical elements of benzene and chloroform residues extracted from hedyotis rudis pierre ex pit., rubiaceae Chemically and pharmaceutically speaking, Hedyotis rudis Pierre ex Pit Has not been studied in Vietnam and over the world yet From the benzene and chloroform residues of the whole plant Hedyotis rudis Pierre ex Pit., two triterpenoid acids were isolated: ursolic acid (1) and 3β-acetylursolic acid (2) The structures of these compounds were identified through the NMR data and compared with references ... Việt Nam giới, An điền nhám – Hedyotis rudis Pierre ex Pit. , họ Cà phê (Rubiaceae), chưa nghiên cứu mặt hóa học dược tính Từ phân đoạn cao benzen cao clorofom Hedyotis rudis Pierre ex Pit. , cô lập... tham khảo Abstract Examination of chemical elements of benzene and chloroform residues extracted from hedyotis rudis pierre ex pit. , rubiaceae Chemically and pharmaceutically speaking, Hedyotis rudis. .. nghiệm 3.1 Nguyên liệu Cây tươi thu hái vùng núi Langbiang, thuộc huyện Lạc Dương, tỉnh Lâm Đồng vào tháng 07 năm 2008 Tên khoa học xác định Hedyotis rudis Pierre ex Pit dược sĩ Phan Đức Bình, Phó