1434 nghiên cứu quy trình nhân giống in vitro hai giống dứa kiểng thơm son (ananas bracteatus) và long phụng (ananas comosus)

Nguyễn Thị Điệp tgk Tạp chí KHOA HỌC ĐHSP TPHCM _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG IN VITRO HAI GIỐNG DỨA KIỂNG THƠM SON (ANANAS BRACTEATUS) VÀ LONG PHỤNG (ANANAS COMOSUS) NGUYỄN THỊ ĐIỆP*, PHẠM ĐÌNH DŨNG*, KHA NỮ TÚ UYÊN**, NGUYỄN THỊ HỒNG TÚ** TÓM TẮT Đề tài nghiên cứu xây dựng quy trình nhân giống in vitro hai giống dứa kiểng Thơm Son (Ananas bracteatus) Long Phụng (Ananas comosus), tạo trực tiếp từ chồi bên dứa mà không qua tạo mô sẹo Kết thu được, dứa Thơm Son, mơi trường thích hợp để nhân chồi mơi trường MS có bổ sung 0,1 mg/l NAA mg/l BA Chồi tạo rễ môi trường MS có bổ sung 1,0 mg/l NAA tỉ lệ sống vườn ươm đạt 90% Đối với dứa Long Phụng, mơi trường thích hợp để nhân chồi mơi trường MS có bổ sung 0,1 mg/l NAA 0,5 mg/l BA Chồi tạo rễ mơi trường MS có bổ sung 2,0 mg/l NAA tỉ lệ sống vườn ươm đạt 82% Từ khóa: nhân giống in vitro, dứa Thơm Son, dứa Long Phụng ABSTRACT In vitro micropropagation of the ornamental pineapple plant Ananas bracteatus AND Ananas comosus This research investigates the in vitro propagation for Ananas bracteatus and Ananas comosus, creating derect seedlings from the buds of pineaple without any callus The results showed that, Ananas bracteatus, suitable medium for buds proliferation was on MS medium supplemented with BA 2.0 mg/l and NAA 0.1 mg/l, buds induced roots on MS medium supplemented NAA 1.0 mg/l and survival rate of plantlets in nursery garden was 90% For Ananas comosus, suitable medium for bud proliferation was on MS medium supplemented with BA 0.5 mg/l and NAA 0.1 mg/l, buds induced roots in MS medium complemented NAA 2.0 mg/l and survival rate of plantlets in nursery garden was 82% Keywords: In vitro propagation, Ananas bracteatus, Ananas comosus Mở đầu Ở TP Hồ Chí Minh phong trào trồng kiểng hình thành phát triển từ lâu Đến cuối năm 2011, diện tích gieo trồng hoa, kiểng 2010 Việc phát triển sản phẩm hoa kiểng tạo nên nét đặc trưng riêng biệt trình chuyển đổi nơng nghiệp thành phố lớn Dứa kiểng lồi trồng có giá trị kinh tế cao, đáp ứng nhu cầu tiêu dùng giải trí, thưởng thức người dân thị * ** ThS, Trung tâm Nghiên cứu phát triển Nông nghiệp Công nghệ cao TPHCM CN, Trung tâm Nghiên cứu phát triển Nông nghiệp Công nghệ cao TPHCM Dứa Long Phụng lồi cảnh có trái phân thành nhiều nhánh, nhiều tầng tạo thành hình chim phượng hồng xịe cánh Đây loại trái đẹp, độc đáo chưng mâm ngũ ngày Tết kết hình rồng phụng hội thi chưng mâm ngũ quả, hội hoa xuân Hơn nữa, dứa Long Phụng mọc nhánh con, khả nhân chồi thấp nên khó mở rộng diện tích trồng thời gian ngắn, thiếu nguồn giống tốt Còn dứa Thơm Son loại cảnh có màu sắc đẹp, rực rỡ màu son nên ưa chuộng dùng để chưng mâm ngũ ngày Tết Trong năm gần nhu cầu tiêu thụ dứa kiểng thị trường lớn Vì vậy, việc nghiên cứu nhân giống in vitro tạo nguồn giống dứa kiểng với số lượng lớn, đồng mặt di truyền không nhiễm bệnh việc cần thiết đáp ứng nhu cầu giống chất lượng tốt kịp thời phục vụ sản xuất Nghiên cứu nhằm xây dựng quy trình nhân giống in vitro hai giống dứa kiểng Thơm Son (Ananas bracteatus) Long Phụng (Ananas comosus), nhằm tạo nguồn đồng làm giống đồng thời tạo nguồn in vitro phong phú dùng làm nguồn vật liệu cho nghiên cứu sau Vật liệu, phương pháp 2.1 Vật liệu Chồi nách dứa Thơm Son (Ananas bracteatus) dứa Long Phụng (Ananas comosus) có chiều cao khoảng 15cm lựa chọn để vô mẫu tạo nguồn vật liệu ban đầu 2.2 Phương pháp Môi trường nuôi cấy: Môi trường khống MS (Murashige Skoog, 1962) có bổ sung đường saccharose 20g/l, agar 8g/l nồng độ chất điều hịa sinh trưởng theo nghiệm thức thí nghiệm, pH môi trường điều chỉnh 5,8 trước hấp khử trùng Điều kiện ni cấy: Nhiệt độ phịng sáng 26 ± oC, ẩm độ tương đối phòng 60 ± 5%, thời gian chiếu sáng 12 h/ngày, cường độ ánh sáng 2000 lux Phương pháp khử trùng mẫu dứa Thơm Son Long Phụng: Chồi nách dứa thu từ mẹ khơng dính bùn đất Loại bỏ phần bên Cho mẫu vừa cắt vào erlen lắc với xà phịng pha lỗng 10 phút, rửa xà phịng nước Đưa mẫu vào tủ cấy vơ trùng, chuyển mẫu vào erlen có chứa cồn 70o, lắc mẫu phút, rửa lại lần nước cất vô trùng Khử trùng mẫu thực lần Lần 1, mẫu lắc theo tỉ lệ javen: nước cất vô trùng = 1:1 (Javen Mỹ Hảo 5%) Bổ sung giọt Tween 20 nhằm nâng cao hiệu khử trùng, lắc mẫu 30 phút Sau rửa mẫu nước cất vơ trùng - lần chẻ dọc mẫu làm Khử trùng mẫu lần theo tỉ lệ javen : nước cất vô trùng = 1:3, lắc mẫu 15 phút Rửa mẫu lại nước cất vô trùng từ - lần Mẫu loại bỏ phần bị tổn thương, cấy mẫu vào mơi trường MS có bổ sung 20g/l sucrose 8g/l agar Mẫu thu sau tuần nuôi cấy sử dụng làm nguồn vật liệu ban đầu cho thí nghiệm Các thí nghiệm bố trí sau: Nghiên cứu ảnh hưởng BA kết hợp với NAA lên sinh trưởng khả nhân chồi giống dứa Thơm Son giai đoạn nhân nhanh Thí nghiệm bố trí theo kiểu hai yếu tố hồn tồn ngẫu nhiên với nghiệm thức, lần lặp lại, lần lặp lại cấy mẫu Nghiệm thức đối chứng không bổ sung chất điều hòa sinh trưởng, nghiệm thức cịn lại có bổ sung 0,1 – 0,2 mg/l NAA 0,5 – 3,0 mg/l BA Theo dõi tiêu sau 60 ngày: Chiều cao chồi (cm), số chồi (chồi/mẫu), tỉ lệ mẫu nhân chồi (%), đặc điểm chồi (đánh giá cảm quan) Nghiên cứu ảnh hưởng BA kết hợp với NAA lên sinh trưởng khả nhân chồi giống dứa Long Phụng giai đoạn nhân nhanh Thí nghiệm bố trí theo kiểu hai yếu tố hoàn toàn ngẫu nhiên với nghiệm thức, lần lặp lại, lần lặp lại cấy mẫu Nghiệm thức đối chứng không bổ sung chất điều hịa sinh trưởng, nghiệm thức cịn lại có bổ sung 0,1 – 0,2mg/l NAA 0,3 – 1,0mg/l BA Theo dõi tiêu sau 60 ngày: Chiều cao chồi (cm), số chồi (chồi/mẫu), tỉ lệ mẫu nhân chồi (%), đặc điểm chồi (đánh giá cảm quan) Nghiên cứu ảnh hưởng NAA lên hình thành rễ giống dứa Thơm Son dứa Long Phụng Thí nghiệm bố trí theo kiểu yếu tố hồn tồn ngẫu nhiên với nghiệm thức, lần lặp lại, lần lặp lại cấy mẫu Nghiệm thức đối chứng khơng bổ sung chất điều hịa sinh trưởng, nghiệm thức cịn lại có bổ sung 0,5 – 2,0mg/l NAA Thí nghiệm sử dụng chồi dứa Thơm Son chồi dứa Long Phụng in vitro có chiều cao từ - 1,5cm môi trường nhân chồi tốt làm nguồn vật liệu thí nghiệm Theo dõi tiêu sau 45 ngày: Chiều cao chồi (cm), số rễ (rễ/mẫu), chiều dài rễ (cm), tỉ lệ mẫu rễ (%), đặc điểm rễ (đánh giá cảm quan) Chăm sóc dứa Thơm Son dứa Long Phụng hậu ni cấy mơ Khảo sát khả thích ứng dứa Thơm Son dứa Long Phụng in vitro với điều kiện vườn ươm Theo dõi tiêu sau 28 ngày: tỉ lệ sống (%) quan sát hình thái ngồi vườn ươm Kĩ thuật trồng chăm sóc in vitro vườn ươm: Khi dứa Thơm Son dứa Long Phụng in vitro thí nghiệm có rễ phát triển đầy đủ, cao từ – 4cm, tiến hành rửa môi trường trồng giá thể đất trơ trộn với xơ dừa, tro trấu theo tỉ lệ đất: xơ dừa: tro trấu = 1: 1:1 Tổng số mang vườn trồng 50 Nước tưới: ngày tưới lần vào thời điểm 8h30 15h Mỗi lần tưới khoảng phút, 0,5lít/m2 Xử lí số liệu Số liệu thu thập xử lí thống kê chương trình Statgraphic 3.0 Đọc kết dựa vào bảng ANOVA, bảng trung bình bảng so sánh khác biệt nghiệm thức Số 61 năm 2014 Tư liệu tham khảo _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ Kết thảo luận 3.1 Đối với giống dứa Thơm Son Giai đoạn nhân nhanh Thí nghiệm sử dụng BA kết hợp với NAA để kích thích q trình phân chia tế bào phát sinh chồi dứa Thơm Sơn (hình 1) sau 60 ngày nuôi cấy kết thu bảng Nghiệm thức bổ sung NAA 0,1mg/l BA 2,0mg/l có số chồi chiều cao chồi cao nhất, tương ứng với 3,8 chồi/mẫu 1,02cm Hầu hết nuôi cấy nghiệm thức khác có bổ sung NAA BA, mẫu cấy hình thành chồi Trong đó, nghiệm thức có bổ sung NAA 0,1mg/l BA 2,0mg/l có tỉ lệ mẫu hình thành chồi cao (100%) Các nghiệm thức cịn lại có tỉ lệ mẫu hình thành chồi thấp từ 80 – 95% Mặt khác, trình quan sát nghiệm thức ni cấy nghiệm thức có bổ sung 0,1mg/l NAA 2mg/l BA chồi dứa Thơm Son có màu xanh non, chồi sinh trưởng khỏe thân mập (hình 1) so với chồi dứa phát triển nghiệm thức lại Nghiệm thức NAA 0,1mg/l; BA 3mg/l nghiệm thức NAA 0,2mg/l; BA 3mg/l hai nghiệm thức có chồi bị chết sau 60 ngày nuôi cấy Bảng Ảnh hưởng BA NAA lên nhân chồi dứa Thơm Son tuần sau nuôi cấy NAA (mg/l) BA (mg/l) Số chồi (chồi/mẫu) 2,0c Chiều cao chồi (cm) 0,67bc 0,1 0,5 1,0 2,22c 2,87b 0,56cd 0,74b 2,0 3,8a 1,02a 3,0 1,33d 0,41d 0,5 2,2c 0,7bc 93,33 1,0 2,33c 0,51d 93,33 2,0 2,4c 0,78b 96,67 3,0 1,47d 0,52d 93,33 Ftính 26,8** 12,61** CV (%) 13,82 17,27 0,2 Tỉ lệ mẫu hình Đặc điểm chồi thành chồi (%) 86,67 Chồi phát triển bình thường, màu xanh non 93,33 Chồi nhỏ, có màu xanh non 93,33 Chồi nhỏ, yếu, màu xanh non 100 Chồi to, khỏe, màu xanh non 80 Có chồi bị chết Chồi phát triển, nhỏ, màu xanh non Chồi phát triển bình thường, màu xanh non Chồi phát triển bình thường, màu xanh non Có chồi bị chết 0,71ns Ghi chú: *: khác biệt có ý nghĩa mức p ≤ 0,05; **: khác biệt có ý nghĩa mức p ≤ 0,01; ns: khơng có khác biệt; a, b, c, d, e: khác biệt nghiệm thức theo trắc nghiệm phân hạng LSD Theo Bùi Trang Việt (2002) [1], tỉ lệ auxin/cytokinin cao giúp tạo rễ, auxin/cytokinin thấp giúp tạo chồi Do đó, hầu hết thí nghiệm chúng tơi sử dụng tỉ lệ auxin/cytokinin thấp nên tái sinh chồi dễ dàng Theo kết nghiên cứu Amin (2005) [7], tái sinh chồi từ mô sẹo nuôi cấy môi trường MS bổ sung BA 1,0mg/l NAA 0,1mg/l cho tỉ lệ tái sinh chồi 100%, với số lượng chồi chiều cao chồi tương ứng 18,5 chồi/mẫu 5,28cm (Alvard, 1993) [6] Trong thí nghiệm này, tỉ lệ mẫu tạo chồi cao 100%, số chồi chiều cao chồi đạt 3,8 chồi/mẫu 1,02 cm Có khác biệt nguồn vật liệu cấy ban đầu thí nghiệm khác nên thu kết khác a b c Hình Chồi dứa Thơm Son (A Bracteatus) in vitro tuần sau nuôi cấy môi trường khác a BA mg/l; NAA mg/l; b BA 2,0 mg/l; NAA 0,1 mg/l; c BA 3,0 mg/l; NAA 0,2 mg/l Giai đoạn tạo rễ dứa Thơm Son Chọn cao từ - 3cm từ nghiệm thức nhân chồi 0,1mg/l NAA 2mg/l BA tốt cấy vào môi trường tạo rễ khảo sát kết thu sau 45 ngày sau cấy bảng Nghiệm thức có bổ sung NAA 1mg/l thu chiều cao chồi 5,19cm, số rễ 13,27 rễ/mẫu chiều dài rễ 0,93cm có khác biệt có ý nghĩa so với nghiệm thức ni cấy lại Bảng Ảnh hưởng NAA lên tạo rễ dứa Thơm Son tuần sau nuôi cấy NAA (mg/l) Chiều cao chồi Số rễ (rễ/mẫu) Chiều dài rễ (cm) Đặc điểm rễ (cm) 3,72d 6,33d 2,55a Rễ dài, mảnh, rễ màu nâu 0,5 4,56b 9,73c 0,75c Rễ ngắn, khỏe, màu trắng có nhiều chồi gốc 1,0 5,19a 13,27b 0,93b Rễ ngắn, khỏe, màu trắng có nhiều chồi gốc 1,5 4,5b 14,4a 0,74c Rễ ngắn, đầu rễ to trịn, giịn, màu trắng có nhiều chồi gốc 2,0 4,11c 14,73a 0,69c Rễ ngắn, đầu rễ to trịn, giịn, màu trắng có nhiều chồi gốc Ftính 19,57** 119,03** 410,99** CV (%) 6,28 6,39 7,8 Ghi chú: *: khác biệt có ý nghĩa mức p ≤ 0,05; **: khác biệt có ý nghĩa mức p ≤ 0,01; ns: khơng có khác biệt; a, b, c, d, e: khác biệt nghiệm thức theo trắc nghiệm phân hạng LSD Ở nghiệm thức bổ sung NAA 1,5mg/l NAA 2,0mg/l, quan sát rễ ngắn, đầu rễ to tròn, giòn, màu trắng có nhiều chồi gốc Điều nồng độ NAA cao ảnh hưởng đến hình thành rễ, chiều dài rễ cịn làm cho rễ phát triển có hình dạng khơng bình thường Hơn nữa, nghiệm thức có bổ sung NAA, sau tuần nuôi cấy hầu hết dứa đẻ chồi xung quanh, – chồi/mẫu Điều mơi trường bổ sung NAA, thời gian đầu cảm ứng tạo rễ nồng độ NAA cao rễ khơng thể kéo dài Vùng gần chóp rễ quan quan trọng tổng hợp cytokinin (Mai Trần Ngọc Tiếng, 2001) [2] làm mẫu cảm ứng tạo chồi, điều giải thích mơi trường cảm ứng tạo rễ có tạo chồi Theo kết thu Amin cộng (2005) [7], chồi dứa in vitro cảm ứng tạo rễ mơi trường ½ MS với nồng độ khác chất NAA, IBA IAA Rễ hình thành tốt mơi trường MS có bổ sung 0,2mg/l IBA 0,2mg/l NAA (Alvard, 1993) [6] Cũng tương tự kết (Atique, 2003) [8], chuyển chồi dứa in vitro vào nuôi cấy môi trường rắn có bổ sung NAA IBA riêng lẻ, phối trộn NAA IBA chồi cho rễ Tuy nhiên, chồi dứa ni cấy mơi trường có bổ sung phối trộn NAA IBA cho kết tốt chồi dứa nuôi cấy môi trường bổ sung riêng lẻ NAA IBA (Duval, 2001) [9] a b d c e Hình Ảnh hưởng NAA lên hình thành rễ dứa Thơm Son tuần sau nuôi cấy a NAA mg/l b 0,5 mg/l NAA c 1,0 mg/l NAA d 1,5 mg/l NAA e 2,0 mg/l NAA Chăm sóc dứa Thơm Son hậu nuôi cấy mô Các dứa Thơm Son in vitro thu thí nghiệm tạo rễ có từ rễ trở lên, rễ dài 0,5cm, rễ khỏe, cao từ – cm đem trồng vườn ươm để khảo sát khả thích ứng dứa Thơm Son in vitro với điều kiện vườn ươm Tổng số mang vườn trồng 50 Sau tuần trồng ngồi vườn, quan sát có 90% dứa Thơm Son phát triển bình thường Cây có hình dạng bình thường, hình dạng sinh trưởng bình thường, khơng có biến dị hình thái Do thời gian làm thí nghiệm hạn chế nên khơng thể khảo sát điều kiện tự nhiên: ánh sáng, độ ẩm, chất dinh dưỡng, lượng nước tưới, ảnh hưởng đến sinh trưởng phát triển dứa Thơm Son in vitro vườn ươm Kết tỉ lệ sống sót dứa Thơm Son ngồi vườn ươm phù hợp với kết nghiên cứu Amin (2005) [7], dứa in vitro tái sinh thành công chuyển đất trồng tỉ lệ sống sót đạt 90 % (Alvard, 1993) [6] Hình Cây dứa Thơm Son tuần sau trồng nhà lưới 3.2 Đối với giống dứa Long Phụng Giai đoạn nhân nhanh chồi Cây dứa Long Phụng mọc con, khả nhân chồi thấp nên khó mở rộng diện tích trồng thời gian ngắn, thiếu nguồn giống tốt Để cung cấp giống phục vụ cho nhu cầu sản xuất, chúng tơi tìm hiểu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng lên khả tạo chồi nhân nhanh ni cấy in vitro Do đó, thí nghiệm sử dụng BA kết hợp với NAA để kích thích q trình phân chia tế bào phát sinh chồi dứa Long Phụng (A comosus), sau tuần nuôi cấy kết thu bảng Nghiệm thức có bổ sung BA 0,5mg/l NAA 0,1mg/l có số chồi tạo cao (5,4 chồi/mẫu) chiều cao chồi cao (2,80cm/cây) Bảng Ảnh hưởng kết hợp BA NAA lên nhân chồi dứa Long Phụng (A comosus) tuần sau nuôi cấy NAA (mg/l) Số chồi (chồi/mẫu) Chiều cao chồi (cm) 0 1,2e 0,75f 100 0,3 0,1 2,8b 2,04b 93,33 Chồi phát triển tốt, có màu xanh non 0,5 0,1 5,4a 2,8a 100 Chồi mập, phát triển khỏe, màu xanh non 0,7 0,1 2,4bc 1,2d 100 Chồi chậm phát triển, màu xanh non 1,0 0,1 2,33c 0,78f 100 Xuất cụm chồi nhỏ, màu xanh nhạt 0,3 0,2 2,47bc 1,04de 100 Chồi khỏe, màu trắng xanh 0,2 c c 100 Chồi phát triển bình thường, BA (mg/l) 0,5 2,33 1,52 Tỉ lệ hình thành chồi (%) Đặc điểm chồi Chồi chậm phát triển, màu xanh đậm màu xanh non 93,33 Chồi phát triển, màu xanh non 0,95ef 100 Có số chồi phát triển khơng bình thường 59,02** 80,91** 0,87ns 14,12 12,8 0,7 0,2 1,87d 0,92ef 1,0 0,2 1,53de Ftính CV (%) Ghi chú: *: khác biệt có ý nghĩa mức p ≤ 0,05; **: khác biệt có ý nghĩa mức p ≤ 0,01; ns: khơng có khác biệt; a, b, c, d, e, f: khác biệt nghiệm thức theo trắc nghiệm phân hạng LSD Theo kết Majid (2013) [11] khảo sát ảnh hưởng cytokinin đến khả hình thành chồi dứa Queen (Ananas comosus ‘Queen’) cho thấy, cụm chồi tăng trưởng môi trường MS bổ sung BA 0,5mg/l cho tỉ lệ hình thành số chồi cao (7,0 chồi/cụm) Tuy nhiên, chồi môi trường nhỏ, với chiều cao chồi 2,72cm, có có diện tích nhỏ (1,74cm2 ) Trong thí nghiệm này, số chồi bên tạo cao (cao 5,33 chồi/cụm) Chồi tạo phát triển tốt với chiều cao chồi (2,8 cm/chồi), chồi có nhiều Theo kết Khan (2004) [10], chồi đỉnh dứa ni cấy mơi trường MS ½ MS có bổ sung 5,0 mg/l BA cho số lượng chồi cao chiều dài chồi tốt Kết nghiên cứu Abul – Soad (2006) cho kết giống nuôi cấy chồi dứa in vitro từ nách môi trường MS bổ sung 1mg/l BA kinetin Cũng vậy, theo Adel (2011) [5], nghiên cứu tái sinh dứa phát triển chồi ảnh hưởng BAP 2,0 mg/l NAA 0,2 mg/l điều kiện nuôi cấy in vitro Kết cho thấy BAP 2,0 mg/l cho hiệu tốt đến sinh trưởng phát triển chồi dứa (Abul-Soad, 2006) [4] a b c Hình Chồi dứa Long Phụng tuần sau nuôi cấy a.NAA mg/l; BA mg/l; b NAA 0,1 mg/l; BA 0,5 mg/l;c NAA 0,2 mg/l; BA 1,0 mg/l Sự tạo rễ giống dứa Long Phụng Kết thu sau 45 ngày nuôi cấy bảng Nghiệm thức có bổ sung NAA 2mg/l thu chiều cao chồi 5,58cm, số rễ 24,07 rễ/mẫu chiều dài rễ cm, có khác biệt có ý nghĩa so với nghiệm thức ni cấy cịn lại Bảng Ảnh hưởng NAA lên tạo rễ dứa Long Phụng tuần sau nuôi cấy NAA (mg/l) Chiều cao chồi (cm) Số rễ (rễ/chồi) Chiều dài rễ (cm) 3,79c 3,97d 1,93a 3,67 b b 0,83 c Rễ khỏe, rễ màu trắng 1,0 4,37 b 16,27 0,87 c Rễ khỏe, rễ màu nâu 1,5 4,09bc 19,2b 2,0 5,58 a Ftính 12,99** 198,97** 49,54** CV (%) 9,35 7,25 13,74 0,5 19,8 24,07 c a 0,77c 1,11 b Đặc điểm rễ Rễ dài, mảnh, rễ màu nâu Rễ khỏe, phân nhánh, rễ màu nâu Rễ khỏe, phân nhánh, rễ màu nâu Ghi chú: *: khác biệt có ý nghĩa mức p ≤ 0,05; **: khác biệt có ý nghĩa mức p ≤ 0,01; ns: khơng có khác biệt; a, b, c, d, e, f: khác biệt nghiệm thức theo trắc nghiệm phân hạng LSD a b c e d Hình Ảnh hưởng NAA lên tạorễ dứa Long Phụng tuần sau nuôi cấy a NAA mg/l b NAA 0,5 mg/l c NAA 1,0 mg/l d NAA 1,5 mg/l e NAA 2,0 mg/l Chăm sóc dứa Long Phụng hậu nuôi cấy mô Các dứa Long Phụng in vitro thu thí nghiệm có từ rễ trở lên, rễ dài 0,5cm, rễ khỏe, cao từ – 4cm đem trồng vườn ươm để khảo sát khả thích ứng dứa Long Phụng in vitro với điều kiện vườn ươm Tổng số mang vườn trồng 50 Sau tuần trồng vườn, quan sát có 82% dứa Long Phụng phát triển bình thường Cây có hình dạng bình thường, hình dạng sinh trưởng bình thường, khơng có biến dị hình thái Do thời gian làm thí nghiệm hạn chế nên khơng thể khảo sát điều kiện tự nhiên: ánh sáng, độ ẩm, chất dinh dưỡng, lượng nước tưới, ảnh hưởng đến sinh trưởng phát triển dứa Long Phụng in vitro ngồi vườn ươm Hình Cây dứa Long Phụng sau tuần trồng nhà lưới Kết luận Đối với dứa Thơm Son, môi trường để nhân chồi in vitro mơi trường MS có bổ sung 0,1mg/l NAA 2mg/l BA, môi trường để rễ tạo hồn chỉnh mơi trường MS có bổ sung NAA 1mg/l tỉ lệ sống vườn ươm đạt 90% Đối với dứa Long Phụng, mơi trường thích hợp để nhân chồi in vitro môi trường MS có bổ sung 0,1mg/l NAA 0,5 mg/l BA, mơi trường thích hợp để cảm ứng rễ tạo hồn chỉnh mơi trường MS có bổ sung NAA 2,0mg/l tỉ lệ sống vườn ươm đạt 82% Số 61 năm 2014 Tư liệu tham khảo _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ TÀI LIỆU THAM KHẢO Bùi Trang Việt (2002), Sinh lí Thực vật Đại cương, phần I, Nxb Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh Mai Trần Ngọc Tiếng(2001), Thực vật cấp cao, Nxb Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh Võ Thị Bạch Mai (2004), Sự phát triển chồi rễ, Nxb Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh Abul-Soad, A A., Boshra, E S Ali, H S (2006), “An improved protocol for the micropropagation of pineapple (Ananas comosus (L.) Merr.)”, Assiut J Agric Sci., 37(3), pp.13-30 Adel, M A., Sharif, H A B M Rosna, M T (2011), “Effects of benzylaminopurine and shoot growth of pineapple (Ananas comosus L Merr) in vitro”, African Journal of Biotechnology, 10(27), pp.5291 – 5295 Alvard, D., Cote, F Teisson, C(1993), “Comparison of methods of liquyd medium cultures for banana micropropagation, Effect of temporary immersion of explants”, Plant Cell Tissues, 32, 555-60 Amin, M N., Rahman, M M., Rahman, K W., Ahmed, R., Hossain, M S., Ahmed, M B (2005), “Large scale plant regeneration in vitro from leaf derived callus cultures of pineapple (Ananas comosus L Merr Cv Giant Kew)”, International journal of botany, 1(2), pp.128 – 132 Atique, A M., Biplab, K K Shyamal, K R(2003), “Callus induction and highfriquency plant regeneration of pineapple (Ananas comosus L Merr.)”, Plant tissue culture, 13(2), pp.109 – 116 Duval, M F., Coppens, d'Eeckenbrugge G., Fontaine, A Horry, J P (2001), “Ornamental Pineapple: Perspective from Clonal and Hybrid Breeding”Newsletter of the Pineapple Working Group, International Society for Horticultural Science, 8, pp.13 – 14 10 Khan, S.; Nasib, A Saeed, B.A (2004), “Employment of in vitro technology for large scale multiplication of pineapples (Ananas comosus)”, Pak J Bot., 36(3), pp.611-615 11 Majid, A I et al (2013), “Effect of cytokinin type and concentration, and source of explant on shoot multiplication of pineapple plant (Ananas comosus ‘Queen’) in vitro”, 10.2478/acas-2013-0002 (Ngày Tòa soạn nhận bài: 02-6-2014; ngày phản biện đánh giá: 14-7-2014; ngày chấp nhận đăng: 20-8-2014) 12 ... xuất Nghiên cứu nhằm xây dựng quy trình nhân giống in vitro hai giống dứa kiểng Thơm Son (Ananas bracteatus) Long Phụng (Ananas comosus), nhằm tạo nguồn đồng làm giống đồng thời tạo nguồn in vitro. .. đến sinh trưởng phát triển dứa Thơm Son in vitro vườn ươm Kết tỉ lệ sống sót dứa Thơm Son ngồi vườn ươm phù hợp với kết nghiên cứu Amin (2005) [7], dứa in vitro tái sinh thành công chuyển đất... rễ (%), đặc điểm rễ (đánh giá cảm quan) Chăm sóc dứa Thơm Son dứa Long Phụng hậu ni cấy mơ Khảo sát khả thích ứng dứa Thơm Son dứa Long Phụng in vitro với điều kiện vườn ươm Theo dõi tiêu sau 28