Nghiên cứu khả năng đối kháng nấm bệnh ở cây tiêu của một số vi khuẩn được phân lập từ đất trồng tiêu tại tây nguyên

LỜI CẢM ƠN Trước hết, xin gừi lời cám ơn đến PGS TS Phạm Việt Cường, viện trướng Viện nghiên cứu KH Mien Trung, Viện Hàn lâm khoa học công nghệ Việt Nam tạo điều kiện cho tơi học tập, thực hành thí nghiệm suốt q trình thực đề tài Tơi xin bày tó lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Nguyễn Thị Kim Cúc, ThS Trần Thị Hồng anh chị Phòng Cơng nghệ sinh học, viện Hóa sinh biến Trung tâm sinh học phân tứ Nghĩa Đô (Viện nghiên cứu KH Miền Trung) tận tình chi báo giúp đỡ tơi suốt q trình nghiên cứu Tơi xin cám ơn thầy cô khoa Công nghệ sinh học, Viện Đại Học Mớ Hà Nội, người truyền đạt cho kiến thức quý báu suốt thời gian học tập trường Cuối cùng, tơi xin chân thành cám ơn gia đình bạn bè ln động viên, khích lệ giúp đỡ tồi quci trình họe tựp vh nghiên cứu Hà Nội, ngày tháng năm 2015 Sinh viên Nguyễn Hồng Hạnh DANH MỤC CÁC CHŨ VIẾT TẮT STT CHỦ VIẾT TÁT TÊN DÀY DỦ ADN Axit deoxyribonucleotit ARN Axit ribonucleotit Agar Thạch BLAST Basic Local Alignment Search Tool CN Chết Nhanh DNTP Deoxynucleotide triphosphates EDTA Ethylenediaminetetraacetic acid HTKS Hoạt tính kháng sinh I111KW- Viện Đại ikfc'hfekinhVửờng 10 NBCI National Biological Control Institute 11 MPA Meat-Peptone-Agar 12 PCR Polymerase Chain Reaction 13 TAE Tris-acetic acid-EDTA 14 TE Tris-EDTA 15 uv Ultraviolet DANH MỤC BẢNG Băng 2.1: Tên mẫu địa điếm lấy mẫu 17 Băng 2.2 : Trình tự thông số cặp mồi đế khuếch đại gen 16S rRNA cho vi khuấn 18 Bảng 2.3 : Thành phần phản ứng PCR cho vi khuần 22 Bảng 3.1: Khá kháng nam F.oxysporum cùa chủng vi khuẩn 24 Bàng 3.2 Khả sinh trưởng môi trường MPA chúng vi khuấn tuyển chọn .27 Băng 3.3: Khả kháng nấm R.solani chúng vi khuấn 28 Bâng 3.4 Khả sinh trường môi trường MPA cùa chúng vi khuẩn tuyến chọn 30 Bảng 3.5: Một số đặc điếm hình thái cùa chúng đối kháng 31 Bảng 3.6: Ket xác định tỷ lệ A260/A280 nồng độ ADN (pg/ml) chủng vi khuẩn nghiên cứu 33 Thư viện Viện Đại học Mở Hà Nội DANH MỤC HÌNH VÀ ĐỊ THỊ Hình 1.1:Triệu chứng Tiêu mắc bệnh chết nhanh Hình 1.2:Triệu chứng ticu mac bệnh chết chậm Hình 1.3:Triệu chứng cà phê bị bệnh thối rễ tơ 10 Hình 1.4:Triệu chứng cà phê bị bệnh thối rề cọc 11 Hình 3.1: Khă đối kháng F.oxyporum cúa chúng vi khuấn phân lập 25 Hình 3.2: Hình thái cùa chúng vi khuẩn đối kháng nấm F.oxyporum 26 Hình 3.3: Khá đối kháng nam Rhizoctonia solani chúng vi khuân phân lập 29 Hình 3.4: Hình thái chùng vi khuẩn phân lập đối kháng với nấm R.solani.29 Hình 3.5: Điện di đồ ADN tống so cúa chúng vi khuấn nghiên cứu 33 Hình 3.6: Điện di đồ sán phẩm PCR cùa chùng vi khuẩn VK5 CM5crk, VK10 CM4crk VK5 CS|trk, BX 101 CS]trk.CF III EHjcd 34 Hình 3.7 Kết so sánh trình tự 16S rADN chùng VK10 CM4 CrK bàng BLAST 35 Hình 3.9: Kết quíj-ỊSft|.sệij|i tr'mh tự 16S rApN cua chúng Ỵ^5CM5 CrK bàng BLAST : ’ ' 37 Hình 3.10: Cây phát sinh chúng loại cúa VK5CM5 CrK 37 Hình 3.11: Kết quà so sánh trình tự 16S rADN cúa chủng Vk5CSl TrK bàng BLAST 38 Hình 3.12: Cây phát sinh lồi cùa chùng VK5CS1 Trk 39 Hình 3.13: Ket so sánh trình tự 16S rADN chủng Bx-101 CS|trk bang BLAST 40 Hình 3.14: Cây phát sinh chúng loại chúng Bx-101 cs,tfk 40 Hình 3.15: Kết so sánh trình tự 16S rADN cùa chúng Bx-101 CS|trk BLAST 42 Hình 3.16: Cây phát sinh chúng loại chúng CFIII EHỵcđ 42 MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẢT DANH MỤC BÁNG DANH MỤC HÌNH VÀ ĐỊ THỊ MỤC LỤC MỎ ĐÀU CHUÔNG TÔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Dặc điểm số vi nấm gây bệnh ỏ' thực vật 1.1.1 Khái quát nấm bệnh 1.1.2 Đặc điểm hình thái, sinh lý, chế gây bệnh biếu Fusarium oxysporum 1.1.3 Đặc điểm hình thái, sinh lý, chế gây bệnh biếu cúa Rhizoctonia solani 1.2 Tổng quan Tiêu 1.3 Một số bệnh Tiêụ\ Ị Ị^ Trang web tham khảo: 28 http://www.caytieuvn.com 29 http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cei 48 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan kết quà số liệu nghiên cứu trình bày luận văn trung thực chưa sử dụng đế bào vệ học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ việc thực luận văn câm ơn, thông tin trích dẫn luận văn chi rõ nguồn gốc Sinh viên Nguyền Hồng Hạnh Thư viện Viện Đại học Mờ Hà Nội 49 ... ’? ?Nghiên cún khả đối kháng nấm bệnh tiêu số vi khuấn phân lập tù'' đất trồng Tiêu Tây Nguyên? ?? Thư vi? ??n Vi? ?n Đại học Mớ Hà Nội Mục tiêu nghiên cứu Luận văn: Có chúng vi khuân đối kháng nguồn bệnh. .. 2.1.1 Đối tượng nghiên cún Đối tượng nghiên cứu chủng vi khuẩn phân lập từ đất trồng tiêu Tây Nguyên Các mẫu đất đtrợc lấy vào ngày 12 tháng 01 năm 2014 Tây Nguyên Đất lấy tang mặt, độ sâu từ -... luận: Từ mẫu đất rề khác cùa tiêu bị bệnh cùa đất trồng tiêu Tây Nguyên, phân lập 42 chúng vi khuẩn có hoạt tính đối kháng với loại nấm bệnh F.oxysporum Rh.solani Trong số 42 chủng phân lập, 26