Phân lập, định danh và xác định điều kiện nhân nuôi giống cấp 1 một số chủng nấm vân chi (trametes versicolor) bản địa miền núi phía bắc việt nam

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NGUYỄN THANH HẰNG PHÂN LẬP, ĐỊNH DANH VÀ XÁC ĐỊNH ĐIỀU KIỆN NHÂN NUÔI GIỐNG CẤP MỘT SỐ CHỦNG NẤM VÂN CHI (TRAMETES VERSICOLOR) BẢN ĐỊA MIỀN NÚI PHÍA BẮC VIỆT NAM LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC Thái Nguyên, 2022 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NGUYỄN THANH HẰNG PHÂN LẬP, ĐỊNH DANH VÀ XÁC ĐỊNH ĐIỀU KIỆN NHÂN NUÔI GIỐNG CẤP MỘT SỐ CHỦNG NẤM VÂN CHI (TRAMETES VERSICOLOR) BẢN ĐỊA MIỀN NÚI PHÍA BẮC VIỆT NAM Chun ngành: Cơng nghệ sinh học Mã số ngành: 42 02 01 LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Dương Văn Cường Thái Nguyên, 2022 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết nêu luận văn hoàn toàn trung thực chưa cơng bố cơng trình nghiên cứu khác Nếu nội dung nghiên cứu bị trùng lặp với cơng trình nghiên cứu khác cơng bố Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm tn thủ kết luận đánh giá luận văn Hội đồng khoa học Thái Nguyên, ngày tháng năm 2022 Người cam đoan Nguyễn Thanh Hằng ii LỜI CẢM ƠN Luận văn hồn thành chương trình đào tạo Thạc sĩ khóa 28 trường Đại học Nơng lâm Thái Nguyên Lời đầu tiên, xin chân thành cảm ơn tập thể Ban lãnh đạo, thầy cô anh chị Viện Khoa học sống tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Đặc biệt, xin gửi lời biết ơn sâu sắc đế PGS.TS Dương Văn Cường Th.s Vũ Hồi Nam tận tình hướng dẫn tơi để tơi hồn thành tốt đề tài nghiên cứu Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lịng cảm ơn đến quan tâm gia đình, bạn bè đồng nghiệp động viên tạo điều kiện thuận lợi để tơi học tập, hồn thiện đề tài nghiên cứu Tôi xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, ngày tháng Học viên Nguyễn Thanh Hằng năm 2022 iii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Địa điểm thu thập mẫu Vân chi 27 Bảng 2.2 Thơng tin trình tự cặp mồi ITS 30 Bảng 2.3 Danh mục thiết bị sử dụng 30 Bảng 2.4 Các phương pháp khử trùng mẫu thể tươi nấm Vân chi thu thập 31 Bảng 2.5 Thành phần phản ứng PCR 36 Bảng 2.6 Các môi trường nhân giống cấp 39 Bảng 2.7 Các tiêu theo dõi 41 Bảng 3.1 Phân bố đặc điểm hình thái thể nấm Vân chi 42 thu thập 42 Bảng 3.2 So sánh kết phân lập giống gốc từ thể nấm Vân chi sử dụng phương pháp khử trùng khác nhau………………………………………45 Bảng 3.3 Kết đo độ tinh nồng độ DNA 48 Bảng 3.4 So sánh trình tự vùng gen ITS chủng phân lập với liệu công bố GenBank NCBI……………………………………………… 52 Bảng 3.5 Ảnh hưởng môi trường nhân giống cấp tới sinh trưởng phát triển hệ sợi nấm 56 Bảng 3.6 Ảnh hưởng nguồn carbon tới sinh trưởng 58 Bảng 3.7 Ảnh hưởng nguồn nitơ tới sinh trưởng hệ sợi nấm 59 Bảng 3.8 Ảnh hưởng nguồn muối khoáng tới sinh trưởng hệ sợi nấm 61 iv DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Phân loại khoa học nấm Vân chi………………………………… Hình 1.2 Hình ảnh hướng dẫn nhận dạng nấm Vân chi (Trametes versicolor) Hình 2.1 Sơ đồ thiết kế nghiên cứu 33 Hình 2.2 Hiển thị kết giải trình tự qua phần mềm BioEdit 37 Hình 3.1 Hình ảnh 10 chủng nấm Vân chi thu thập 44 Hình 3.2 Hình ảnh 05 chủng nấm Vân chi sau ngày phân lập 47 Hình 3.3 Hình ảnh kết tách chiết DNA tổng số 05 mẫu Vân chi 48 Hình 3.4 Kết khuếch đại gene thị ITS 49 Hình 3.5 Kết kiểm tra chất lượng tín hiệu giải trình tự gene ITS 51 Hình 3.6 Kết sơ đồ mối quan hệ mẫu nghiên cứu với ngân hàng gene NCBI 55 Hình 3.7 Tốc độ sinh trường hai chủng nấm Vân chi môi trường nhân giống cấp sau ngày 55 Hình 3.8 Ảnh hưởng nguồn carbon đến sinh trưởng hệ sợi chủng nấm Vân chi sau ngày 58 Hình 3.9 Ảnh hưởng nguồn nitơ đến sinh trưởng hệ sợi chủng nấm Vân chi sau ngày 60 Hình 3.10 Ảnh hưởng nguồn muối khoáng đến sinh trưởng hệ sợi chủng nấm Vân chi sau ngày 62 Hình 3.11 Ảnh huởng pH mơi trường tới sinh trưởng phát triển hệ sợi nấm 59 Hình 3.12 Ảnh hưởng nhiệt độ nuôi cấy đến sinh trưởng hệ sợi chủng nấm 64 Hình 3.13 Vùng trình tự gene ITS chủng nấm VC ngân hàng Genbank NCBI………………………………………………………………77 v Hình 3.14 Vùng trình tự gene ITS chủng nấm Tra ngân hàng Genbank NCBI………………………………………………………………78 vi DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT BLAST Basic Local Alignment Search TooL Bp Base pair CNM Cao nấm men CTAB Cetyl Trimethyl Ammonium Bromide DNA Deoxyribonucleic acid dNTP Deoxyribonucleotide triphosphate g gram Kb Kilobase NCBI National Center for Biotechnolgy Information PCR Polymerase Chain Reaction Primer F/R Primer Forward/ Reverse RNA Ribonucleic acid TAE Tris - Acetic acid - EDTA Taq polymerase Thermus aquaticus polymerase TE Tris - Ethylenedisminetetrsscetic scid vii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii DANH MỤC CÁC BẢNG iii DANH MỤC CÁC HÌNH iv DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT vi MỤC LỤC vii MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn 3.1 Ý nghĩa khoa học 3.2 Ý nghĩa thực tiễn CHƯƠNG TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Tổng quan chung nấm Vân chi 1.1.1 Lịch sử nghiên cứu 1.1.2 Vị trí phân loại 1.1.3 Đặc điểm phân bố 1.1.4 Giá trị dược liệu 1.1.5 Các hoạt chất có nấm Vân chi 11 1.2 Tình hình nghiên cứu ni trồng nấm Vân chi Việt Nam giới 12 1.2.1 Tình hình nghiên cứu ni trồng nấm Vân chi Thế giới 12 1.2.2 Tình hình nghiên cứu ni trồng nấm Vân chi Việt Nam 14 1.3 Các phương pháp định danh nấm 16 1.3.1 Phương pháp định danh hình thái học 16 1.3.2 Phương pháp định danh sinh học phân tử 17 viii 1.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng phát triển nấm Vân chi .20 1.4.1 Ảnh hưởng yếu tố giống 20 1.4.2 Ảnh hưởng yếu tố dinh dưỡng 20 1.4.3 Ảnh hưởng yếu tố môi trường 22 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG, PHƯƠNG PHÁP VÀ NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 27 2.1 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 27 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 27 2.1.2 Phạm vi nghiên cứu 27 2.1.3 Nội dung nghiên cứu 28 2.1.4.Vật tư hoá chất 28 2.2 Phương pháp nghiên cứu 31 2.2.1 Phương pháp phân lập, lưu giữ nguồn gene chủng nấm Vân chi 31 2.3 Phương pháp nghiên cứu điều kiện nuôi cấy hệ sợi chủng nấm Vân chi 38 2.3.1 Nghiên cứu ảnh hưởng môi trường nhân giống cấp 38 2.3.2 Nghiên cứu ảnh hưởng nguồn dinh dưỡng carbon 39 2.3.3 Nghiên cứu ảnh hưởng nguồn dinh dưỡng nitơ 40 2.3.4 Nghiên cứu ảnh hưởng muối khoáng 40 2.3.5 Nghiên cứu ảnh hưởng pH môi trường 40 2.3.6 Nghiên cứu ảnh hưởng nhiệt độ 40 2.3.7 Các tiêu theo dõi 41 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 42 3.1 Kết thu thập, nghiên cứu quy trình phân lập lưu giữ nguồn gene chủng nấm Vân chi địa thu thập miền núi phía Bắc Việt Nam 42 3.1.1 Kết thu thập mẫu nấm Vân chi 42 3.1.2 Kết phân lập giống gốc chủng nấm Vân chi 45 3.2 Kết định danh, phân loại chủng nấm Vân chi thu thập 47 65 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận - Thu thập 10 mẫu nấm có đặc điểm hình thái tương tự nấm Vân Chi hai Vườn Quốc gia Ba Bể - Bắc Kạn Xuân Sơn - Phú Thọ Qua q trình phân lập, chúng tơi chọn lọc lưu giữ chủng thành công Trong khuôn khổ thí nghiệm chúng tơi khuyến cáo nên sử dụng phương pháp khử trùng mẫu trước tái sinh Ethanol 70% + kháng sinh Cefotaxim 400 mg/l đạt tỷ lệ mẫu thành công cao (50%) tỷ lệ mẫu bị chết (20%) - Trong mẫu phân lập được, phương pháp so sánh trình tự gene ITS xác định chủng thuộc loài Trametes versicolor, chủng thuộc loài Trametes cubensis, chủng thuộc lồi Cubamyces lactineus Chúng tơi đăng ký thành cơng chủng VC1 Tra1 thu thập thuộc loài Trametes versicolor với ngân hàng liệu NCBI , mang mã số OK036446 OK036445 - Đã xác định điều kiện nhân giống cấp phù hợp cho sinh trưởng phát triển hệ sợi chủng nấm thu thập khu vực miền núi phía Bắc Việt Nam, cụ thể sau: mơi trường nhân giống cấp tốt môi trường GP cải biên nguồn dinh dưỡng carbon nitơ, muối khoáng là: Fructose, Cao nấm men, MgSO4; Nhiệt độ thích hợp 240C 66 đường kính khuẩn lạc đạt 71,6 mm mm (chủng VC1) 70,4 mm (chủng Tra1) pH môi trường tối ưu khoảng - 4.2 Kiến nghị Tiếp tục nghiên cứu hoàn thiện quy trình ni trồng nhân tạo thể nấm Vân chi điều kiện nhân tạo đánh giá hoạt chất sinh học quý có thể nấm nhân tạo Thực đánh giá đặc điểm di truyền chủng nấm qua hệ CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN Vũ Hồi Nam, Phạm Lệ Giang, Trần Lâm Oanh, Nguyễn Thanh Hằng, Nguyễn Huy Thuần, Dương Văn Cường (2021), “Nghiên cứu điều kiện nuôi cấy hệ sợi hai chủng nấm vân chi địa thu thập miền núi phía Bắc Việt Nam”, Báo cáo khoa học Hội nghị Công nghệ Sinh học toàn quốc 2021 67 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt [1] Nguyễn Thị Bích Thùy (2014), Luận án Tiến sĩ nông nghiệp “Nghiên cứu đặc điểm sinh học công nghệ nhân giống, nuôi trồng nấm Sò (Pleurotus eryngii) nấm Vân chi (Trametes vesicolor) Việt Nam” [2] Nguyễn Diễm My, Đỗ Tấn Khang, Nguyễn Phạm Anh Thi, Trần Nhân Dũng (2019), “Khảo sát môi trường nuôi cấy nấm Vân chi đỏ (Trametes sanguinea (L.) Imazeki)”, Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ, Vol 55(2): p 158-165, 2019 [3] Nguyễn Thị Hồng (2019), Luận văn thạc sỹ, “Nghiên cứu phân lập - nhân giống nuôi trồng nấm đông trùng hạ thảo (cordyceps militaris) Việt Nam” [4] Nguyễn Huy Thuần, Tạ Thị Huệ, Bùi Hương Lan,Vũ Thị Khánh Linh, Phạm Thị Thêu, Đỗ Tuấn Anh, Nguyễn Thị Bích Thùy, Nguyễn Văn Giang, (2020), “Ảnh hưởng nhiệt độ, pH môi trường nuôi cấy đến sinh trưởng phát triển chủng nấm sị (Pleurotus sp.) FH PN20”, Khoa học Nơng nghiệp 68 [5] Nguyễn Văn Giang, Nguyễn Thị Bích Thuỳ, Vũ Thị Khánh Linh, Nguyễn Duy Trình, Trần Thu Hà (2021), “ Ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy đến sinh trưởng hệ sợi nấm Phellinus linteus”, Khoa học nông nghiệp [6] Phan Huy Dục (2002), “Nấm Vân chi – nguồn dược liệu quý”, Tạp chí Dược liệu, số 5, tr.155:132 [7] Phạm Thị Thu, Lê Văn Vẻ, Nguyễn Duy Trình, Vũ Thanh Hải (2017), “Ảnh hưởng chất, nhiệt độ, độ ẩm đến sinh trưởng phát triển nấm Địa sâm Coprinus comatus (O F Muller.)”, Tạp chí Khoa học Nơng nghiệp Việt Nam 2017, 15(5): 545-552 [8] Phạm Thị Lan, Đỗ Hải Lan, Nguyễn Thị Hồng Hạnh, Bạc Thị Thu, Phạm Văn Nhã (2016), “Nghiên cứu ảnh hưởng nhiệt độ ánh sáng tới sinh trưởng, phát triển hàm lượng hoạt chất cordycepin nấm Cordyceps militaris NBRC 100741 nhộng tằm”, Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Y Dược, Tập 32, Số (2016) 63-72 [9] Trịnh Tam Kiệt (2011), Nấm lớn Việt Nam, Tập (Tái lần thứ 20), Nhà xuất Khoa học tự nhiên Công nghệ [10] Trịnh Tam Kiệt (2012), Nấm lớn Việt Nam, Tập 2, Nhà xuất Khoa học tự nhiên Công nghệ [11] Trung, T Đ (2009), Luận văn thạc sỹ, "Nghiên cứu đánh giá đa dạng di truyền giống/ dòng chè (Camellia Sinensis (L.) O KunTze Việt Nam thị hình thái thị phân tử microsatellite (SSR)." Trường Đại Học Bách Khoa Hà Nội : 22-45 69 [12] Vũ Tuấn Minh Lê Thị Thu Hường (2017), “Nghiên cứu sinh trưởng, phát triển suất nấm Vân chi (Trametes versicolor (L.) Pilat) trồng loại giá thể Thừa Thiên Huế” Tạp chí Khoa học Cơng nghệ nông nghiệp, 1: 77-86 [13] Vũ Tuấn Minh, Lê Thị Thu Hường (2019), “Nghiên cứu sinh trưởng, phát triển suất nấm Vân chi (Trametes versicolor) nguyên liệu mùn cưa cao su với tỷ lệ giống cấy khác tỉnh Thừa Thiên Huế”, Tạp chí Khoa học & công nghệ nông nghiệp, Vol 3(1): 10451052, 2019 Tài liệu Tiếng Anh [14] Asmamaw, T., Abebe, T And Gebre, K (2015) Optimization of oystẻ (Pleurotus ostreatus) mushroom cultivation using locally availble substrates and materials in Debre Berhan, Ethiopia, Journal of Applied Biology and Biotechnology, 3(1):15-20 [15] Ahmed M Hashim, Aishah Alatawi, Faris M Altaf, Sameer H Qari, Mohamed E Elhady, Gamal H Osman and Heba H Abouseadaa, “Phylogeneetic relationships and DNA barcoding of nine endangered medicinal plant species endemic to Saint Katherine protectorate”, Saudi J Biol Sci, 2021, 28(3), pg 1919–1930 [16] Adebayo-Tayo B.C and Ugwu E.E (2011), “Influence of Different Nutrient Sources on Exopolysaccharide Production and Biomass Yield by Submerged Culture of Trametes versicolor and Coprinus sp ”, Australian Journal of Biotechnology, 15(2), pp 63-69 [17] BollaK., GopinathB V., Shaheen S.Z.and CharyaM.A.S.(2010), “Optimization of carbon and nitrogene sources ofsubmerged culture 70 process for the production ofmycelial biomass and exopolysaccharides by Trametes versicolor” International Journal for Biotechnology and Molecular Biology Research,1(2), pp.15-21 [18] Cui J., Goh K K., Archer R Singh H Characterisation and bioactivity of protein bound polysaccharides from submerged – culture fermentation of Coriolus versicolor Wr – 74 and ATCC20545 strains J Ind Microbiol Biotechnol 2007; 34: 393-402 [19] Dictionary of the Fungi; Paul M Kirk, Paul F Cannon, David W Minter and J A Stalpers; CABI, 2008 [20] Daniel Roca-Lema, Olaia Martinez-Iglesias, Catalina Fernández de Ana Portela, Arturo Rodríguez-Blanco, Manuel Valladares-Ayerbes, Andrea Díaz-Díaz, Alba Casas-Pais, Cecilia Prego and Angélica Figueroa In Vitro Anti-proliferative and Anti-invasive Effect of Polysaccharide-rich Extracts from Trametes versicolor and Grifola Frondosa in Colon Cancer Cells Int J Med Sci 2019; 16(2): 231–240 [21] El Enshasy H.A., Hatti – Kaul R Mushroom immunomoclulators Unique molecukes with unlimited appli cations Trends Biotechnol 2013; 31:668-677 [22] Fritz, H., Kennedy, D.A., Ishii, M., Fergusson, D., Fernandes, R., Cooley, K and Seely, D., 2015 Polysaccharide K and Coriolus versicolor extracts for lung cancer: A systematic review Integrative Cancer Therapies 14(3): 201–211 [23] Fisher, M., Yang, L.X., 2002 Anticancer effects and mechanisms of polysacchari-K (PSK): implications Anticancer Res 22:1737-1754 of cancer immunotherapy 71 [24] Gautam A.K Notes on wood rotting fungi from India (1): Trametes versicolor – The Turkey tail J New Biol Rep 2013;2:67-70 [25] Hayakawa K., Mitsuhashi N., Saito Y., Nakayama Y., Furuta M., Nakamoto S., Kawashima M., and Niibe H, 1997 Effect of Krestin as adjuvant treatment follwing radical radiotherapy in non-small cell lung cancer patients Cancer Detection anh Prevention 21(1): 71-7, JanuaryFebruary [26] Hossen, S.M.M., Akramul, M., Tanim, H., Hossain, M.S., Sami, S.A., & Emon, N.U., 2021 Deciphering the NCS anti-depressant, antioxidant and cytotoxic profiling of methanol and aqueous extracts of Trametes versicolor and molecular interactions of its phenolic compounds Saudi Journal of Biological Sciences, https://doi.org/10.1016/j.sjbs.2021.07.016 [27] Hassan F.R.H., Medany G.M and Hussein S D (2010), “Cultivation of the king oyster mushroom (Pleurotus eryngii) in Egypt”, Australian Journal of Basic and Applied Sciences, 4(1), pp 99-105 [28] Hebert, P D., Cywinska, A., Ball, S L., & Dewaard, J R (2003), “Biological identifications through DNA barcodes”, Proc Biol Sci, 270(1512), 313-321 [29] H Hur, et al (2008), “Suitable conditions for mycelial growth of Phellinus spp.” Mycobilogy, 36, pp 152-156 [30] Jin M., Zhou W., Jiang Z Diao S., Jin Z., LiG Anti – inflammatory activities of the chemical constituents isolated from Trametes versicolor: Nat Prod Res 2019; 33 2422-2425 [31] Ibragimova Z.B., Makarevich E.V., Kosogova T A., Mazurkov O.Y., Teplyakova T V., Mazurkova N A Anti – ìnluenza virus activity of 72 aqueous extract of macro – and micromycetes in experimentes in vitro and vivo Mod Probl Sci Educ 2012; 4:1-11 [32] Kidd, P.M., The use of mushroom glucans and proteoglycans in cancer treatment Altern Med Rev, 2000.5(1):p.4-27 [33] Kobayshi M., Kawashima H., Takemori K., Ito H., Mủai A., Masuda S., Yamada K., Uemura D., Horioo F Ternatin, a cyclic peptide isolated from mushroom, and its derivative suppress hyperglycemia and hepatic fatty acid synthesis in spomtaeoushy diabetic KK – A(y) mice Biochem Biophys Res Commun 2012: 427: 299-304 [34] Li, F., Wen, H., Zhang, Y., Aa, M., Liu, X., 2011 Purification and characterization of a novel immunomodulatory protien from the medicinal mushroom Trametes versicolor Sci Chi Life Sci 54: 379-85 [35] Leliebre – lara V., Moznote Fidalgo., Pferschy – Wenzing E M., Kunert O., Nogueiras Lima C., Bauer R In Vitro Antileishmanial Activity of Sterds from Trametes versicolor (Bres Rivarden) Molecules 2016; 21:1045 [36] Ljiljana Janjušević, Maja Karaman, Filip Šibul, Giuseppina Tommonaro, Carmine Iodice, Dragica Jakovljević and Boris Pejin The lignicolous fungus Trametes versicolor (L.) Lloyd (1920): a promising natural source of antiradical and AChE inhibitory agenets J Enzyme Inhib Med Chem 2017; 32(1): 355–362 [37] Mattheck, C., and Weber, K Manual of Wood Decays in Trees Arboricultural Association 2003 [38] Marijke P 1, “The clinical use of coriolus versicolor suplementationin HIV+ patients and the impact on CD4 count and viral load” marc 10 th 73 presentat on at th e 3rd international from mycology research laboratoieres [39] Munro E (2004), “Mental health tragedies: investigating beyond human error”, Journal of forensic psychiatry and psychology, 15(3), pp.475-493 [40] Maria L Kuzmina, et al (2012) "Identification of the vascular plants of Churchill, Manitoba, using a DNA barcode library." BMC Ecology 12: – 11 [41] M Petre, "Mushroom biotechnology developments and applications Elsevier/Academic Press" Amsterdam, Boston., 2016 [42] M.B Bellettini, et al (2019), “Factors affecting mushroom Pleurotus spp.”, Saudi Journal of Biological Sciences, 26, pp.633- 646 [43] Ramberg J.E., Nelson E.D., Sinnott R.A Immunomo dulatory dietary polysaccharides: A systematic review of the literture Nutr J 2010; 9: 54 [44] Pallav K., Dowd S.E., Villafuerte J., Yang X., Kabbani T., Hánen J., Dennis M., Leffler D.A., Newburg D.S., Kelly C.P Effects of polysaccharopeptide from Trametes versicolor and amoxicillin on the gut microbiome of healthy volumteets A randomized clinical trial Gut Microbes 2014;5:458-467 [45] Quimio T H (2002) Tropical Mushroom Cultivation Mushroom international April Issue Retrieved from: http://uer.gru.net/mushroom/details.htm [46] Qing-jun Yuan, Bin Zhang, Dan Jiang, Wen-Jing Zhang, Tsai-yun Lin, Nian-he Wang, Shu-Jiau Chiou anh Lu-qi Huang, “Identification of 74 species and materia medica within Angelica L (Umbelliferae) based on phylogeney inferred from DNA barcodes”, Mol Ecol Resour, 2015 Mar, 15(2), pg 358–371 [47] Roman B., et al (2003) "Geneetic relationships among Orabache species as revealed by RAPD analysis." Annals of Botany(91): 637-642 [48] Rajput, RD Koyani, HR Patel, AM Vasava, RS Patel, AD Patel, AP Singh “A preliminarychecklist of fungi of Gujarat State, India”.Current Research in Environmental & Applied Mycology (4), pp 285–306, 2015 [49] Standish, L.J., Wenner, C.A., Sweet, E.S., Bridge, C., Nelson, A., Martzen, M., Novack, J., Torkelson, C., 2008 Trametes versicolor mushroomimmune threpy in breast cancer J Soc Intergr Oncol 6:122-128 [50] Standish, L.J., Wenner, C.A., Sweet, E.S., Bridge, C., Nelson, A., Martzen, M., Novack, J., Torkelson, C., 2008 Antiviral activity of polyporoid mushrooms (higher Basidiomycetes) from Altai Mountains (Russia) Intern J Med Mushroom 14: 37-45 [51] Singdevsachan S.K, Auroshree P., Mishra J., Baliyarsingh B., Tayung K., Thatoi H Mushroom polysaccharides as protential prebiotics with their antitumor and immunomodulating properties: A review Bioact Carbohydr Diet Fibre 2016;7:1-14 [52] Saleh M H., Rashedi I., Keating A Immunomodulatory Properties of Coriolus versicolor: The Role of Polysaccharopeptide Font Immunol 2017; 8: 1087 [53] Solomon Habtemariam Trametes versicolor (Synn Coriolus versicolor) polysaccharides in cancar Therapy: Targets and Efficy Biomedicines 2020 May; 8(5): 135 75 [54] Smith, et al (2008) "DNA barcoding: CO1 DNA barcoding amphibians: take the chance, meet the challenge." Mol Ecol Resour 8(2): 235-246 [55] Sukumar M., Sivasamy A and Swaminathan G (2008, “Biological Decolorization of Dye House Effluent by Trametes sp.isolated from Contaminated Soil”, Res J Biotech.,3(3), pp 53-58 [56] Tsang K (2003), "Coriolus versicolor polysaccharide peptide slows progression of advanced non-small cell lung cancer", Respir Med., (97), pp 618-624 [57] Wenpan Dong, et al (2014) "A chloroplast geneomic strategy for designing taxon specific DNA mini-barcodes: a case study on ginsengs." BMC Geneomics 15: 1-8 [58] Woehrel M.L., Light W.H Mushroom of the Georgia Piedmont and Southern Appalachians: A Reference University of Georiga Press: Athens, GA, USA 2017 [59] Woo-Sik Jo, Min-Jin Kang, Seong-Yong Choi, Young-Bok Yoo, SoonJa Seok, Hee-Young Jung, "Culture Conditions for Mycelial Growth of Coriolus versicolor" Mycobiology; Vol 38(3): p 195-202, 2010 [60] W S Jo, et al (2006), “The culture conditions for the mycelial growth of Phellinus spp.” Mycobiology, 34, pp 487-497 [61] Yang D., Zhow Z., Zhang L Chapter Eight – An overview of fungal glycan – based therapeutics In: Zhang L., editor Progress in Molencular Biology and Translational Science Volume 163 Academic Press; New York, NY, USA: 2019.pp.135-163 76 [62] Zhang Z.S., Wang F., Wang X.M., Liu X.L., Hou Y., Zhang Q.B (2010), “Extraction of the polysaccharids from five algae and their potential antioxidant activity in vitro”, Carbohyd Polym, 82, pp.118-121 [63] V Zagrean, et al (2016), ‘Efect of nutritive media and pH on mycelial growwth of some Pleurotus eryngii strain in vitro”, Research Institute for Vegetable and Flower Growing Vidra, Ilfov Country, Romania, 73, pp 276-278 Nguồn Internet [64].https://soyte.hanoi.gov.vn/tin-tuc-su-kien//asset_publisher/4IVkx5Jltnbg/content/thong-tin-y-te-tren-cac-bao-ngay12-102020#:~:text=Theo%20C%E1%BB%A5c%20Qu%E1%BA%A3n%20l %C3%BD%20kh%C3%A1m,tim%20m%E1%BA%A1ch%20v%C3%A 0%20ung%20th%C6%B0 77 PHỤ LỤC 78 Hình 3.13 Vùng trình tự gene ITS chủng nấm VC ngân hàng Genbank NCBI 79 Hình 3.14 Vùng trình tự gene ITS chủng nấm Tra ngân hàng Genbank NCBI ... lập, định danh xác định điều kiện nhân nuôi giống cấp số chủng nấm Vân chi (Trametes versicolor) địa miền núi phía bắc Việt Nam? ?? Mục tiêu nghiên cứu - Thu thập, phân lập định danh chủng nấm Vân. .. HẰNG PHÂN LẬP, ĐỊNH DANH VÀ XÁC ĐỊNH ĐIỀU KIỆN NHÂN NUÔI GIỐNG CẤP MỘT SỐ CHỦNG NẤM VÂN CHI (TRAMETES VERSICOLOR) BẢN ĐỊA MIỀN NÚI PHÍA BẮC VIỆT NAM Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số ngành:... Nghiên cứu điều kiện nuôi cấy hệ sợi chủng nấm Vân chi địa thu thập miền núi phía Bắc Việt Nam 2 .1. 4.Vật tư hoá chất *Hoá chất Bảng 2.2 Danh mục loại hoá chất sử dụng STT 10 11 12 13 14 15 16 Tên