PHÂN TÍCH MICROVESICLES BẰNG KĨ THUẬT PROTEOMICS potx

   !"#$ #$ %&'()*!"#" $ +,- ./0$1% • 23 45678744 • %9:- 455;<484 • =:9 456;<<74 • >:? 455;<464 • 0:@ 455;;454 • A:BC • 0D9E • =0F9 455;7174 • G'@H 455;7I54 • A:JC 45515854 CH+1 4KLC 63/H/ I'@L 8MN • OMM>PQ  !"#$!% & '()*+!,-.)(/0!,/1234  '5(67!7! 8)+!9::! ;<!" 9=>?:!">@"A :!%-8 &BC+()*D+ &' E; F !G H .4 #   A         .   !,6   ' E; & I 4 J>>"%)!,/(%I' • KLC  KL+@:4MNOE!%,P!,64!)NQ/!% R'E;5S%,PNOE&R-!%"4TNQ?%&!%%U R'  OL>V4A4 44/ ? 4TL&6 4$DR#NOE>!,8 )M.6!!W' XYR&>+)A.NOE"!,6";Z(*% @= >?4%T,+#M' PHƯƠNG PHÁP: 4 bước chính [' M!%,NOE \' ]T04R(!G:#NOE ^' ]T04R(!G:#./!$!M _' ]T`P4 GRGSTC#$ • a>*NOE"EEKbc[\EEKbc[_!6M %&H4T !!,/#!)EQc[' UMN/+VW2#$ • O![:&V/,T.&"d!! ]eO UMN/+VW2XYZR • K/!$!M"/!%R"5L>V //H 4R' • 2!)RC%:]fagh U[\]/ • OL>V4A4 4+>\-! • d!4T`C3bijcKkQ3bijcKkQKkQ4l: '3bijcKkQO4T`H+6)e!1mjR'a& ))4&`H' 3/H/^-_6` iB/4T n44' f4+>/o+6>l4TL' • p+>/o+,*+>04!o+ >4a'K>!>?+(4a66V" 4 q4T,?DADC/@+8' p+>:4TL4lOiOc]3rN"OiO4s4 4T, 4TL4(: !"OiO(+` T%C(@6C&44.>/` %! ; 0   0   4 P   ! 7! ! 4,44.>' f  >* +7!"4TL 45  OiOq!,/)+M#HcHt4T  : Tự động hoàn toàn 3!mKkQuKkQL>V3bijcKkQ@!%   9>V+4' 3!mKkQuKkQ`4+7!,-34e! i/&d!G%(?DD ' 3/H//KaWMb c  dCefC_ MC _/XghCXij M> ak N  +C \] /3/H/alS//mMCnbCe "odfpfqiM>akN/UHH_,CRC\C cqe/!KkQuKkQC4s4 ?4C:CP   ?: 44."!(?>4L>V4s4:4ls4 3bijcKkQuKkQ' K.$,-d!v)MHF* T,' [...]... protein gây ô nhiễmtừ môi trường bằng cách rửa với PBS Trong các mẫu bị cô lập được ly tâm ở 40 000g hoặc 100 000 g được rửa hai lần với 10 ml dung dịch PBS, nồng độ protein tổng số là 0.290.1 mg / ml (N010), chỉ ra rằng PBS rửa loại bỏ protein gây ô nhiễm và xác nhận các kết quả trước đây của chúng tôi Phân tích Proteomics • Hòa tan MV tách sang 2-DE Điều này phân tích cho thấy phần lớn các protein... nguồn gốc từ màng tế bào của hESC • MV phân lập từ hESC được nuôi dưới điều kiện tiêu chuẩn trên một lớp feeder MEF sẽ không bị nhiễm MV từ MEF • Qua việc đo nồng độ protein trong MV mà có chứa phần nhỏ môi trường hESC được cô lập bằng ly tâm ở 40 000 đvị, chúng tôi xác định rằng 3.2390.32 mg / ml MV đã được giải phóng từ các tế bào này Để giải quyết khả năng rằng sự phân lập của MV với độ ly tâm này là... 2-DE bằng tách ly protein, những điểm trên bản gel đã được tìm thấy để biểu diễn cho sự phân tán albumin (A) khuẩn lạc của hESC nhuộm màu với PKH67 (màu xanh lá cây) Nhân tế bào được nhuộm với DAPI (màu xanh) Sự không đồng nhất, bảng nhuộm có vết lấm chấm chỉ ra rằng hESC có nguồn gốc khác thường có tác dụng ngăn sự hợp nhất của thuốc nhuộm với màng tế bào (B) MV đầu tiên có nguồn gốc từ hESC được phân. .. / ml MV đã được giải phóng từ các tế bào này Để giải quyết khả năng rằng sự phân lập của MV với độ ly tâm này là không đầy đủ, tăng mức độ ly tâm đến 100 000 đvị Tuy nhiên, nồng độ protein của MV được phân lập với giao thức này là 3.2690mg / ml thì không khác biệt đáng kể so với nghiệm thức đầu tiên,cho thấy cường độ ly tâm thấp hơn là đủ để cô lập MV một cách thỏa đáng Kiểm tra lại kết quả cho thấy: