KHOA HỌC CÔNG NGHỆ NGHIÊN CỨU KHẢ NÃNG TÁI SINH VÀ SINH TRUÔNG CHỒI //V VITRO CÂY VIỆT QUĂT (Vaccinium myrtillus Linn J THÔNG OUA NUÔI CẤY ĐỐT THÂN Phan Xuân Huyên1'''', Nguyễn Thị Thanh Hằng1, 1 Viện Ng[.]
KHOA HỌC CÔNG NGHỆ NGHIÊN CỨU KHẢ NÃNG TÁI SINH VÀ SINH TRUÔNG CHỒI //V VITRO CÂY VIỆT QUĂT (Vaccinium myrtillus Linn.J THÔNG OUA NUÔI CẤY ĐỐT THÂN Phan Xuân Huyên1', Nguyễn Thị Thanh Hằng1, Nguyễn Thị Phượng Hoàng1, Đinh Văn Khiêm1 TÓM TẮT Cày việt quất (Vaccinium myrtilhis Linn.) giống ãn trái nhập nội tốt cho sức khỏe có gia trị kinh tế cao Hiện nước ta chưa có cơng bố nghiên cứu nhân giống in vitro việt quất Bài báo tiến hành nghiên cứu nhàn giống in vitro cày việt quất phương pháp nuối cấy đốt thân Kết qua cho thấy, môi trường WPM bổ sung 0,5 mg/1 zeatin kết hợp 0,1 mg/1 NAA (chiều cao chồi 4,53 cm, chồi/mẫu, 11,20 đốt/chồi), môi trường WPM bổ sung mg/1 BA kết họp 0,1 mg/1 NAA (chiều cao chồi 4,18 cm, chói/mầu, 9,10 đốt/chồi) mơi trương WPM bố sung mg/1 Kinetin kết họp 0,1 mg/1 NAA (chiều cao chồi 3,88 cm, chồi/mẫu, 8,50 đốt/chồi) môi trường tốt đến tái sinh sinh trướng chồi in vitro việt quất Tạo rề in vitro, môi trường WPM bổ sung mg/1 NAA tốt (chiều cao 5,14 cm, chiều dài rẻ 1,42 cm, tỷ lệ rể đạt 100%) Cây việt quất cấy mơ chuyển ngồi vườn ươm thi giá thề vụn xơ dừa tốt đến sinh trưởng tỷ lệ sống (chiều cao 7,46 cm, chiều dài rễ 3,48 cm, tỷ lệ sống 90,48%) Những việt quất cấy mô sinh trưởng tốt giá thể vụn xơ dừa sau tháng nuôi trống, tiếp tục sinh trưỏng tốt sau tháng ni trồng Từ khóa: Cãy việt quất, chiều cao chồi, mòi trường WPM, số chồi, số đốt ĐẶTVÃNĐÉ Cây việt quất (Vacciniưm myrtillus Linn.) giống ăn trái nhập nội tốt cho sức khỏe có giá trị kinh tế cao, có cơng dụng như: cung cấp nhiều chất dinh dưõng có lọi cho thể, giàu chất chống oxy hóa, giúp tăng cường trí nhớ, giúp người béo phi giảm cân hiệu quả, làm hạ cholesterol, tốt cho mắt, Tại nước Mỹ, trái việt quất xếp hạng nhóm loại giàu dinh dưông [12, 14, 5], Do đó, việc tiến hành nghiên cứu nhân giống in vitro ni trồng hóa giống việt quất nhập nội có giá trị vấn đề cần thiết Trên giới có nhiều nghiên cứu nhân giống in vitro việt quất [1, 2, 11, 3, 10] có nhiều nghiên cứu thành phần hóa học, tác dụng dược tính việt quất [8, 7, 5], Ớ nước ta chưa có nghiên cứu nhân giống in vitro, nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng dược tính việt quất Hiện nay, việt quất nhập trồng nước ta, sinh trưởng phát triển tốt hoa đậu Theo phương pháp nhân giống truyền thống bàng hạt thường có nhược điểm giống bị phân ly tính trạng, hạt giống có tỉ lệ mầm thấp Viện Nghiên cứu Khoa học Tây Nguyên, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Email: phanxuanhuyenl974@gmail.com 42 Theo phương pháp nhân gióng giâm cành thi khơng tạo số lượng lớn giống để trồng quy mô công nghiệp, giống không đồng nhất, thường bị nhiêm bệnh thối hóa, sinh trưởng phát triển cho suất thấp, ứng dụng công nghệ sinh học, nuôi cấy mô tế bào thực vật nhân giống in vitro việt quất khắc phục hạn chế phương pháp nhân giống trồng truyền thống Kết nghiên cứu góp phần cung cấp liệu khoa học nghiên cứu nhàn giống in vitro việt quất hướng đến cung cấp giống cấy mô cho sản xuất VẬT LIỆU VÀ PHUONG PHAP NGHIÊN cúu 2.1 Vật liệu Vật ỉiệư Những cành non cùa việt quất nuôi trồng Viện Nghiên cứu Khoa học Tây Nguyên (Hình la) lựa chọn tiến hành khử trùng mẫu đưa vào ống nghiệm Mẫu sau thu rửa nước xà phịng, sau khử trùng bàng cồn 70° thời gian phút, rửa lại mẫu bàng nước cất vô trùng lần Tiếp theo, mẫu khừ tràng dung dịch NaOCl 2% thời gian 10 phút, rửa lại mẫu nước cất vô trúng lần [16], Mẫu sau khử trùng cấy môi trường WPM (woody plant medium) không bổ sung chất điều hòa sinh trưởng, nhiều chồi non tái sinh từ NỊNG NGHIÊP VÀ PHÁT TRIEN nịng thơn - KỲ + - THÁNG 2/2022 KHOA HỌC CÔNG NGHỆ đốt thân (Hình Ib) Tiến hành cắt đốt thân chồi non cấy chuyền môi WPM có bổ sung 0,5 mg/1 zeatin [3], nhũng chồi tái sinh từ đốt thân sử dụng làm nguồn vật liệu cho thí nghiệm (Hình lc) họp 0,1 mg/1 NAA, 30 g/1 sucrose, 10 g/1 agar, pH 5,8 Mỗi nghiệm thức cấy 15 mẫu, sau 50 ngày nuôi cấy tiến hành thu số liệu Chỉ tiêu theo dôi chiều cao chồi (cm), số chồi/mẫu, số đốt/chồi đánh giá cảm quan hình thái chồi Mơi trường' WPM [9] môi trường nuôi cấy sử dụng cho nhũng thí nghiệm nhân giống in vitro, tùy theo mục đích thí nghiệm mà bổ sung chất điều hòa sinh trưởng như: zeatin (Hãng Merck), BA (6-benzyl adenin) (Hãng Merck), Kinetin (Hãng Merck), NAA (a-Naphthalene acetic acid) (Hãng Merck) Giá thể nghiên cứu chuyển cấy mô vườn ưom vụn xơ dừa, đất mùn đất bazan Điều kiện ni cấy Đối với thí nghiệm in vitro, thòi gian chiếu sáng giờ/ngày, cường độ ánh sáng 34 pmol.m‘2.s4, nhiệt độ 25 ± 2°c độ ẩm khơng khí 75% - 85% Thực thí nghiệm giai đoạn vườn ươm theo điều kiện hậu tự nhiên Đà Lạt - Lâm Đồng, vườn ươm có mái nylon trắng che mưa (nhiệt độ trung bình 18°c - 21°c, độ ẩm trung bình 82%, ánh sáng tự nhiên) 2.2 Phương pháp 2.2.1 Khảo sát ảnh hưởng zeatin kết họp NAA đến tái sinh sinh trưởng chổi in vitro Những đốt thân việt quất in vitro (Hình lc) cấy mơi trường WPM có bổ sung mg/1; 0,5 mg/1; mg/1; 1,5 mg/1; mg/1 zeatin kết họp 0,1 mg/1 NAA, 30 g/1 sucrose, 10 g/1 agar, pH 5,8 Mỗi nghiệm thức cấy 15 mẫu, sau 50 ngày nuôi cấy tiến hành thu số liệu Chỉ tiêu theo dõi chiều cao chồi (cm), số chồi/mẫu, số đốt/chồi đánh giá cảm quan hình thái chồi 2.2.2 Khảo sát ảnh hưởng BA kết họp NAA đến tái sinh sinh trưởng chồi in vitro Những đốt thân việt quất in vitro (Hình lc) cấy mơi trường WPM có bổ sung mg/1; 0,5 mg/1; mg/1; 1,5 mg/1; mg/1 BA kết họp 0,1 mg/1 NAA, 30 g/1 sucrose, 10 g/1 agar, pH 5,8 Mỗi nghiệm thức cấy 15 mẩu, sau 50 ngày nuôi cấy tiến hành thu số liệu Chỉ tiêu theo dõi chiều cao chồi (cm), số chồi/mẫu, số đốt/chồi đánh giá cảm quan hình thái chồi 2.2.4 Khảo sát ảnh hưởng NAA đến tạo rễ in vitro 2.2.3 Khảo sát ảnh hưởng Kinetin kết họp NAA đến tái sinh sinh trưởng chồi in vitro Những đốt thân việt quất in vitro (Hình lc) cẩy mơi trường WPM có bổ sung mg/1; 0,5 mg/1; mg/1; 1,5 mg/1; mg/1 Kinetin kết Những đốt thân việt quất in vitro (Hình lc) cấy mơi trường WPM có bổ sung 0,5 mg/1; mg/1; 1,5 mg/1; mg/1 NAA, 30 g/1 sucrose, 10 g/1 agar, pH 5,8 Mỗi nghiệm thức cấy 15 mẫu, sau 50 ngày nuôi cấy tiến hành thu số liệu Chỉ tiêu theo dôi chiều cao chồi (cm), chiều dài rê (cm), tỷ lệ mẫu tạo rễ (%) đánh giá cảm quan hình thái 2.2.5 Khảo sát ảnh hưởng giá thể đến tì lệ sống sinh trưởng cấy mơ chuyển ngồi vườn ưom Những việt quất cấy mơ có đầy đủ thân rễ có chiều cao khoảng cm - cm (Hình 2b) trồng giá thể vụn xơ dừa, đất mùn đất bazan Mỗi nghiệm thức trồng 21 cày, sau 50 ngày nuôi trồng tiến hành thu số liệu Chỉ tiêu theo dõi chiều cao cày (cm), chiều dài rễ (cm), tỷ lệ sống (%) đánh giá cảm quan hình thái 2.3 Xử lý số liệu Số liệu thí nghiệm xử lý phần mềm thống kê SPSS (bản 15.0) Duncan’s test [4] với p < 0,05 KÉT QUÁ VÀ THÀO LUẬN 3.1 Khảo sát ảnh hưởng zeatin kết họp NAA đến tái sinh sinh trưởng chồi in vitro Khả tái sinh sinh trưởng chồi in vitro việt quất tứ đốt thân sau 50 ngày nuôi cấy thể bảng Kết cho thấy, tất đốt thân nuôi cấy môi trường khác tái sinh chồi tái sinh chồi/mẫu, nhiên mòi trường bổ sung nóng độ zeatin khác kết họp NAA thỉ có sinh trưởng khác Môi trường bổ sung 0,5 mg/1 zeatin kết họp 0,1 mg/1 NAA chồi tái sinh sinh trưởng tốt nhất, với chiều cao chồi 4,53 cm 11,20 đốt/chồi Khi tăng nồng độ zeatin từ mg/1 - 0,5 mg/1 chiều cao chồi số đốt tảng lên, nồng độ zeatin tăng lên mg/1 - mg/1 chiều cao chồi số đốt giảm xuống Điéu giải thích, nồng độ zeatin thấp kích thích tái sinh tăng NƠNG NGHIỆP VÀ PHÁT TRIEN nồng thơn - KỲ + - THÁNG 2/2022 43 KHOA HỌC CÔNG NGHỆ trưởng chiều cao chồi, nồng độ zeatin tãng cao xảy trinh ngược lại ức chế sinh trưởng chồi Kết cho thấy, mẫu cấy mơi trường có bổ sung zeatin NAA hình thành callus, mẫu nuôi cấy môi trường không bổ sung chất điều hịa sinh trưởng khơng tạo callus Đặc điểm hình thái chồi môi trường không bổ sung chất điều hòa sinh trưởng thi sinh trưởng yếu hon có màu xanh đậm hon (Hình ld/1 Chồi môi trường bổ sung 0,5 mg/1 mg/1 zeatin kết họp 0,1 mg/1 NAA sinh trường tốt hon có màu nâu phần (Hình ld2, ld3) Chồi nuôi cấy môi trường bổ sung 1,5 mg/1 zeatin kết họp 0,1 mg/1 NAA sinh trưởng yếu hon thân chồi có màu nàu (Hình ld4) Chồi ni cấy mòi trường bổ sung mg/1 zeatin kết họp 0,1 mg/1 NAA sinh trưởng yếu hon, thân chồi có màu nâu có biểu mọng nước (Hình ld5) Chất điều hòa sinh trường zeatin cytokinin có tác dụng kích thích phân chia tế bào thúc đầy phát triển chồi nuôi cấy mò tế bào thực vật Nhiều nghiên cứu cho thấy, zeatin kết họp vói auxin làm tăng hiệu nhân giống thực vật in viữo Hiện nước ta chưa có cơng bố sử dụng zeatin kết họp với auxin nghiên cứu vi nhân giống việt quất, giới có nhiều cống bố Củce cs (2016) [2] nghiên cứu nhân giống in vitro lồi việt quất có lồi Vaccinium myrtillus, kết cho thấy, mơi trường WPM có bổ sung mg/1 zeatin 0,1 mg/1 IBA tốt với 10,83 đốt thân/mẫu Một nghiên cứu khác Củce Sởkmen (2017) [3] xây dựng quy trinh nhân giống in vitro việt quất loài Vaccinium uliginosum sử dụng môi trường WPM để nuôi cấy, kết bổ sung kết họp zeatin IBA hiệu nhân giống in vitro loài Vaccinium uliginosum với chiều cao chồi thu 40,02 mm Gajdosova cs (2006) [6] sử dụng zeatin nghiên cứu nhân giống in vitro thành công việt quất Mohamed cs (2018) [10] sử dụng zeatin kết họp với IBA xây dựng thành công quy trình nhản giống in vitro lồi Vaccinium corymbosum Như vậy, môi trường WPM bổ sung 0,5 mg/1 zeatin kết họp 0,1 mg/1 NAA tốt đến tái sinh sinh trưởng chồi in vitro cày việt quất Bảng Ảnh hưởng zeatin kết họp NAA đến tái sinh sinh trường chồi in vitro sau 50 ngày ni cấy Hình thái chồi Số Zeatin NAA Chiều cao Số (mg/1) chồi (cm) chồi/mẫu đốt/chồi (mg/l) Chồi có màu xanh đậm sinh l,oa 6,10d 0,0 0,0 2,78’* trưởng yếu Chồi sinh trưởng tốt, có màu nâu phần ll,20a l,oa 0,5 4,53a 0,1 mẫu tạo callus Chồi sinh trưởng tốt, có màu nâu phần 9,40 b 3,82 b l,o a 1,0 0,1 mẫu tạo callus Chồi sinh trưởng yếu hơn, thân chồi có 8,50c l,oa 2,67c 1,5 0,1 màu nàu mẫu tạo callus Chồi sinh trưởng yếu hơn, thân chồi màu 4,80e l,oa 2,0 2,19d 0,1 nâu, mọng nước mẫu tạo callus Ghi chú: *Nhừng chữ khác (a, b, ) cột biểu diễn khác có ý nghĩa với p< 0,05 Duncan’s test 3.2 Khảo sát ảnh hưởng BA kết họp NAA chồi/mẫu, sinh trưởng chồi có khác Những chồi mịi trường bổ sung mg/1 đến tái sinh sinh trưởng chồi in vitro BA kết họp 0,1 mg/1 NAA sinh trường tốt nhất, với Khả tái sinh sinh trưởng chồi từ đốt thân chiều cao chồi 4,18 cm 9,10 đốt/chồi Điều có việt quất sau 50 ngày nuôi cấy thể thể giải thích nồng độ mg/1 BA kết họp 0,1 mg/1 bảng Kết cho thấy, BA kết họp NAA có NAA tối ưu cho tái sinh sinh trưởng chồi in ảnh hường tốt lên tai sinh sinh trưởng chồi vitro Ở môi trường khơng bổ sung chất điều hịa Mẫu cấy mơi trường khơng có chất điều hịa sinh trưởng chiều cao chồi đạt 2,69 cm 6,10 sinh trưởng mơi trường có bổ sung nồng đốt/chồi Khi tảng nồng độ BA lên 1,5 mg/1 độ BA khác kết họp 0,1 mg/1 NAA tái sinh mg/1 thi chiều cao chồi giảm xuống (tương ứng 3,72 44 NƠNG NGHIỆP VÀ PHÁT TRIEN nơng thôn - KỲ + - THÁNG 2/2022 KHOA HỌC CÔNG NGHỆ cm 3,16 cm) số đốt giảm xuống (tương ứng 8,50 đốt/chồi 7,10 đốt/chổi) Điều cho thấy, nồng độ BA thấp thi kích thích chồi sinh trưởng tăng chiều cao, nồng độ BA tăng cao thi có tác dụng ngược lại ức chế sinh trưởng chồi, đó, tái sinh chồi nghiệm thức thi khơng có khác biệt Đặc điểm hình thái chồi cho thấy, mẫu cấy mơi trường có bổ sung chất điều hịa sinh trưởng hình thành callus, chồi ni cấy mơi trường có bổ sung 0,5 mg/1, mg/1 1,5 mg/1 BA có màu nàu xanh phần chồi sinh trưởng tốt (Hình le2, le3 le4), thân chồi ni cấy mơi trường mg/1 BA có màu nâu chồi sinh trưởng yếu hon (Hình le5), chồi cấy mơi trường khơng bổ sung chất điều hịa sinh trưởng có màu xanh đậm sinh trưởng yêu (Hình le,) BA chất điều hịa sinh trưởng thuộc nhóm cytokinin có vai trị quan trọng phân chia tế bào kích thích hình thành chồi BA sử dụng phổ biến nuôi cấy mô tể bào thực vật giai đoạn nhân nhanh Ớ loại trồng khác thi thích hợp nồng độ BA khác nhau, có loại thích họp nồng độ BA cao, có loại thích họp nồng độ BA thấp Trong nhân giống in vitro, nhiều nghiên cứu cho thấy việc kết họp BA với auxin làm tăng hiệu nhân giống Ở nước ta chưa có cơng bố sừ dụng BA kết họp vói auxin nghiên cứu nhân giống in vitro việt quất, giới có cơng bổ cịn Melani Adriana (2016) [11] sử dụng BA kết họp với IBA nghiên cứu nhân giống in vitro thành cơng lồi Vaccinium myrtillus Rache cs (2010) 117] sử dụng BA kết họp vói IAA nghiên cứu nhân giống in vitro loài Vaccinium meridionale Như vậy, môi trường WPM bổ sung mg/1 BA kết họp 0,1 mg/1 NAA tốt đến tái sinh sinh trường chồi ÚI vitro việt quất Bảng Ảnh hường BA kết họp NAA đến tái sinh sinh trường chổi in vitro sau 50 ngày nuôi cấy BA NAA Chiều cao Số đốt/chồi Số Hình thái chồi (mg/1) chồi (cm) chồi/mẫu (mg/1) 0,0 ao 2,69e* l,0a 6,10d Chồi có màu xanh đậm sinh trưởng yếu hon l,oa 0,5 3,35c 8,30b Chồi có màu nâu phần ngọn, sinh 0,1 trưởng tốt mẫu tạo callus 1,0 4,18a l,oa 9,10a Chồi có màu nâu phần ngọn, sinh 0,1 trường tốt mẫu tạo callus 1,5 3,72b l,oa 8,50b Chồi có màu nâu phần ngọn, sinh 0,1 trưởng tốt mẫu tạo callus 2,0 3,16d l,oa 7,10c Thàn chồi có màu nâu, chồi sinh trưởng 0,1 yếu mẫu tạo callus Ghi chú: *Những chữ khác (a, b, ) củng cột biểu diễn khác có ý nghĩa với p 0,05 Duncan’s test 3.3 Khảo sát ảnh hưởng Kinetin kết hợp nồng độ Kinetin tăng 1,5 mg/1 - mg/1 chiều cao chồi số đốt/chồi giảm xuống Điều NAA đến tái sinh sinh trưởng chồi in vitro Khả tái sinh sinh trưởng chồi từ đốt thân giải thích, nồng độ Kinetin thấp kích việt quất sau 50 ngày ni cấy thể thích tăng trưởng chiều cao chồi số đốt/chồi, bảng Kết cho thấy, đốt thân nuôi cấy nồng độ Kinetin tảng cao thi xảy tất môi trường tái sinh chồi, nhiên trinh ngược lại ức chế sinh trưởng chồi Nhưng môi trường bổ sung nồng độ Kinetin tái sinh chồi nghiệm thức không bổ sung chất điều khác kết họp 0,1 mg/1 NAA chồi có hòa sinh trưởng nghiệm thức bổ sung sinh trưởng khác Chồi nuôi cấy môi nồng độ Kinetin kết họp NAA khơng có khác trường bổ sung mg/1 Kinetin kết họp 0,1 mg/1 biệt, tái sinh chồi/mẫu Đặc điểm hình thái chồi NAA sinh trưởng tốt nhất, với chiều cao chồi 3,88 cm cho thấy, chồi nuôi cấy môi trường bổ sung 0,5 8,50 đốt/chồi Khi tăng nồng độ Kinetin từ mg/1 mg/1; mg/1 1,5 mg/1 Kinetin kết họp 0,1 mg/1 - mg/1 chiều cao chồi số đốt/chồi tăng lèn, NAA có màu nâu sinh trưởng tốt NÔNG NGHIỆP VÀ PHÁT TRIEN nông thôn - KỲ + - THÁNG 2/2022 45 KHOA HỌC CƠNG NGHỆ (Hình lf2, lf3 lf4), thân chồi môi trường bổ sung mg/1 Kinetin kết họp 0,1 mg/1 NAA có màu nâu sinh trưởng yếu (Hình lf5), chồi ni cấy mịi trường khơng bổ sung chất điều hịa sinh trưởng có màu xanh đậm sinh trưởng yếu (Hình lfj) Các chất điều hịa sinh trưởng thuộc nhóm cytokinin nói chung chất Kinetin nói riêng có tác dụng lên mẫu cấy theo quy luật chung, tăng dần nồng độ thi kích thích tái sinh sinh trưởng chồi mẫu, đến nồng độ tối ưu tái sinh sinh trưởng chồi đạt tốt nhất, vượt qua ngưỡng nồng độ tối ưu sê gây tượng ức chế tái sinh sinh trưởng chồi làm cho mẫu bị chết [15,16] Hiện chưa có công bố sử dụng Kinetin kết họp NAA nghiên cứu tái sinh sinh trưởng chồi in vitro việt quất, dược liệu có nhiều công bố như: Phan Xuân Huyên Nguyễn Lâm Thanh (2014) [13] nghiên cứu nhàn giông in vitro đảng sâm (Codonopsis javanica Blume) thông qua nuôi cấy chồi ngủ sử dụng Kinetin kết họp với NAA, kết cho thấy, môi trường bổ sung 0,1 mg/1 - 0,3 mg/1 kết họp vói 0,1 mg/1 NAA có chiều cao chồi tốt nhất; Phan Xuân Huyên cs (2018) [16] nghiên cứu nhân giống in vitro loài lan gấm (Anoectochilus formosanus Hayata) cho thấy, môi trường nuôi cấy bổ sung mg/1 Kinetin chồi tái sinh sinh trưởng tốt Như vậy, mòi trường WPM bổ sung mg/1 Kinetin kết họp 0,1 mg/1 NAA tốt đến tái sinh sinh trưởng chồi in vitro việt quất Bảng Ánh hướng Kinetin kết họp NAA đến tái sinh sinh trưởng chổi in vitro sau 50 ngày ni cấy Hình thái chồi Chiều cao Số Kinetin NAA Số đốt/chồi chồi (cm) chồi/mẫu (mg/1) (mg/1) 5,80c Chồi có màu xanh đậm sinh 0,0 2,65e* 1,0“ 0,0 trưởng yếu Chồi có màu nâu phần sinh 7,80b 0,5 3,26b 1,0s 0,1 trưởng tốt Chồi có màu nâu phần sinh 8,50a 1,0 3,88a l,0a 0,1 trưởng tốt Chồi có màu náu phần sinh 7,70 b 3,14 b l,o a 1,5 0,1 trưỏng tốt 6,10c Thân chồi có màu nâu sinh trưởng l,oa 2,0 2,62c 0,1 yếu Ghi chú: *Những chữ khác (a, b, ) củng cột biểu diễn khác có ý nghĩa VỚÍP< 0,05 Duncan’s test 1,5 mg/1; mg/1 zeatin kết họp 0,1 mg/ì 44,- et, e2, (',,, e, e5 Tái sinh sinh trưởng chồi in vitro mòi trường WPM bổ sung mg/ỉ; 0,5 mg/1; mg/1; 1,5 mg/1; mg/1 BA kết họp 0,1 mg/1 NAA; íỊ, f2, f3, f4, f5 Tái sinh sinh trường chồi in vitro mòi trường WPM bổ sung 0; 0,5 mg/1; mg/1; 1,5 mg/1; mg/ì Kinetin kết họp 0,1 mg/ỈNAA 3.4 Khảo sát ảnh hưởng NAA đến tạo rễ in vitro Từ kết thí nghiệm cho thấy Hình Nghiên cứu khả tái sinh sinh trưởng mịi trường khơng bổ sung chất điều hòa sinh trưởng chồi in vitro việt quất (Vaccinium myrtillus Linn.) thi mẫu cấy không tạo rễ mà tạo chói, thơng qua nuôi cấy đốt thân thi nghiệm NAA bố trí ngẫu nhiên Ghi chú: a Cây việt quất; b Mẫu tái sinh chồi in nồng độ như: 0,5 mg/1; mg/1; 1,5 mg/1 vitro sau khử trùng: c Chồi việt quất in vitro; dIt mg/1 Khả tạo rẽ in vitro việt quất sau 50 d2, d3, d4, d5 Tái sinh sinh trường chồi in vitro trẽn ngày nuôi cấy thể bảng Kết cho môi trường WPM bồ sung mg/1; 0,5 mg/ỉ; mg/1; thấy, mơi trường có ảnh hưởng đến tạo rễ 46 NƠNG NGHIỆP VÀ PHÁT TRIÊN nơng thơn - KỲ + - THÁNG 2/2022 KHOA HỌC CÔNG NGHỆ mẫu, nhiên môi trường bổ sung nuôi cấy mô thực vật, tỷ lệ hình thành rễ phụ nồng độ NAA khác tạo rễ khác nhau, thuộc vào nồng độ NAA phụ thuộc vào nghiệm thức bổ sung 0,5 mg/1 NAA có tỷ lệ tạo rễ loại trồng Ớ nước ta chưa có công bố sử dụng thấp nhất, đạt 80% Tỷ lệ tạo rễ mẫu nghiệm thức bổ sung 1,0 mg/1 NAA; 1,5 mg/1 NAA chất thuộc nhóm auxin nghiên cứu tạo rễ in mg/1 NAA đạt 100% vitro việt quất, giới có cơng bố sử Theo xử lý thống kê số liệu cho thấy, chiều cao dụng IBA nghiên cứu tạo rê in vitro việt quất, nghiệm thức khơng có khác biệt, chưa có cơng bố sử dụng NAA Củce chiều dài rẻ theo xử lý thống kê số liệu cho thấy, Sokmen (2015) [1] nghiên cứu nhân giống in vitro môi trường bổ sung 0,5 mg/1 1,0 mg/1 NAA khơng việt quất lồi Vaccứúum uliginosum cho thấy, có khác biệt, mịi trường bổ sung 1,5 mg/1 NAA môi trường WPM bổ sung 0,5 mg/1 IBA kết họp với 2,0 mg/1 NAA khơng có khác biệt, chiều 1,0 mg/1 than hoạt tính cho tỷ lệ rẽ cao dài rễ môi trường bổ sung 0,5 mg/1 NAA; 1,0 mg/1 60% Mohamed cs (2018) [10] nghiên cúu nhân NAAvà môi trường bổ sung 1,5 mg/1 NAA; 2,0 mg/1 giống in vitro lồi Vaccinium corymbosum cho thấy, NAA có khác biệt có ý nghĩa Đặc điểm hình mơi trường WPM bổ sung kết họp IBA (1 mg/1) thái cho thấy, nuôi cấy tất mơi trường than hoạt tính (0,1%) thu số rẽ trung bình sinh trưởng tốt có màu xanh đậm (Hình cao hình thành mẫu 5,9 Rache 2ab 2a2, 2a3, 2a4) Rẽ nuôi cấy môi trường bổ Pacheco (2010) [17] nghiên cứu nhân giống in vitro sung 0,5 mg/1 NAA; mg/1 NAA 1,5 mg/1 NAA có lồi Vaccinium meridionale cho thấy, tỷ lệ mẫu tạo rẻ màu trắng, rễ mơi đạt 88% -100% sau 60 ngày nuôi cấy trường bổ sung mg/1 NAA có màu nâu NAA Như vậy, môi trường WPM bổ sung mg/1 NAA chất điều hịa sinh trưởng thuộc nhóm auxin có tác tốt đến tạo rễ in vitro việt quất dụng kích thích tạo rễ sử dụng phổ biến Bảng Ảnh hưởng NAA đến tạo rễ in vitro sau 50 ngày nuôi cấy NAA (mg/l) Chiều dài rê (cm) Chiều cao (cm) Tỷ lệ rễ (%) Hình thái 0,5 5,53a l,46a 80 Cây sinh trưởng tốt, có màu xanh đậm rễ màu trắng 5,14a l,42a 100 Cây sinh trưởng tốt, có màu 1,0 xanh đậm rễ màu trắng 1,5 5,12a l,18b 100 Cây sinh trưởng tốt, có màu xanh đậm rễ màu trắng 2,0 4,17a l,12b 100 Cây sinh trường tốt, có màu xanh đậm rễ màu nâu Ghi chú: *Những chữ khác (a, b, ) cung cột biểu diễn khác có ý nghĩa vớiP< 0,05 Duncan’s test quất cấy mò trồng giá thể vụn xơ dừa, đất mủn đất bazan; d Cây việt quất cấy mô sau tháng nuôi trồng gia thể vụn xơ dừa; e Cây việt quất mị sau tháng ni trồng giá thề vụn xơ đùa; í Cây việc quất mô sau tháng nuôi trồng giá thể xụn xơ dừa Hình Nghiên cứu khả tái sinh sinh trưởng chồi in vitro việt quất (Vaccinium myrtilỉus Linn.) thông qua nuôi cấy đốt thân Ghi chú: ab ã2, a:b a4 Tạo rễ in vitro môi trường WPM bổ sung 0,5 mg/1, mg/1, 1,5 mg/l mg/ỈNAA b Cây việt quất cấy mô; cỊ, C2, c3 Cây việt 3.5 Khảo sát ảnh hưởng giá thể đến tỉ lệ sống sinh trưởng cấy mơ chuyển ngồi vườnưom Nghiên cứu chuyển cấy mơ ngồi vườn ươm bước quan trọng nuôi cấy mô thực vật Cây cấy mô phải thích nghi điều kiện chuyển từ điều kiện ni cấy in vitro điều kiện NƠNG NGHIỆP VÀ PHÁT TRIEN nịng thơn - KỲ + - THÁNG 2/2022 47 KHOA HỌC CÔNG NGHỆ vườn ươn, rể phải thích nghi giá sinh trường tốt sau tháng ni trồng (Hình 2d), thể mới, hon nữa, độ ẩm điều kiện in vitro cao tiếp tục sinh trưởng tốt sau tháng nuôi trồng ổn định điều kiện ngồi vườn ươm, đó, (Hình 2e) sau tháng ni trồng (Hình 2f) Vụn dẻ bị chết Vi vậy, cần phải chăm sóc xơ dừa, đất mùn đát bazan giá thể cẩn thận chuyển vườn ươm thòi thường sử dụng nghiên cứu chuyển cấy mơ gian đầu Khả sống sót thích nghi vườn ươm như: Phan Xuân Huyên việt quất cấy mô sau 50 ngày chăm sóc ngồi vườn Nguyễn Lâm Thanh (2014) [13] nghiên cứu chuyển ươm thể bảng Kết cho thấy, sâm cấy mơ ngồi vườn ươm trồng trồng giá thể vụn xơ dừa có tỷ lệ sống giá thể vụn xơ dừa, kết ghi nhận sau 20 sinh trưởng tốt nhất, với chiều cao cày 7,46 cm, chiều ngày ni trồng chăm sóc tỷ lệ sống đạt dài rễ 3,48 cm tỷ lệ sống 90,48% Cây trồng 100%; Phan Xuân Huyên Nguyễn Thị Phượng giá thể đất bazan có tỳ lệ sống sinh trưởng Hoàng (2017) [ 15] nghiên cứu trồng lan gấm nhất, với chiều cao 6,13 cm, chiều dài rễ 1,85 cm cấy mơ lồi Anoectochiỉus íormosanus điều tỷ lệ sống 76,19% Cày trồng gia thể đất mùn kiện ex vitro sử dụng giá thể vụn xơ dừa, kết có tỷ lệ sống sinh trưởng trồng cho thấy, tỷ lệ sống đạt 100% sau tháng giá vụn xơ dừa, tốt trồng trén đất nuôi trồng, nước ta chưa có cơng bó bazan (chiều cao 6,52 cm, chiều dài rễ 2,34 nghiên cứu chuyển việt quất cấy mơ ngồi cm tỷ lệ sống 85,71%) Điều giãi vườn ươm giới có cơng bố thích giá thể vụn xơ dừa thích họp cho việt Mohamed cs (2018) [10] cho thấy, cấy mô việt quất cấy mô sinh trưởng giai đoạn đầu quất đâ trồng thành cơng giá thể đất, vói tỷ lệ sống sót đạt 100% Rache Pacheco (2010) [17] điều kiện ngồi vườn ươm Đặc điểm hình thái cho thấy, việt quất nghiên cứu chuyển việt quất cấy mơ ngồi cấy mõ ni trồng giá thể mọc thêm vườn trồng giá thể đất thành công Như vậy, giá thể vụn xơ dừa tốt để chồi có màu xanh mượt (Hình 2c1; 2c2, 2c:ỉ), chuyển việt quất cấy mơ điều kiện ngồi trồng giá thể vụn xơ dừa sinh trưởng tốt trồng giá thể đất mùn đất bazan Những vườn ươm việt quất cấy mô trồng giá thể vụn xơ dừa Bảng Ảnh hưởng giá thể đến tỉ lệ sống sinh trưởng cấy mơ chuyển ngồi vườn ươm sau 50 ngày ni trồng Hình thái Chiều dài rê Tỷ lệ sống Chiều cao Giá thể (cm) (cm) (%) Cây có màu xanh nhạt 90,48 3,48a Vụn xơ dừa 7,46** rê sinh trưởng 2,34b 85,71 Cây có màu xanh nhạt 6,52b Đất mùn rễ sinh trưởng Cày có màu xanh mượt l,85c 76,19 6,13c Đất bazan rễ sinh trưởng tốt Ghi chu: *Những chữ khác (a, b, ) cột biểu diễn khác có ý nghĩa với p< 0,05 Duncan’s test tốt đến tạo rễ in vitro việt quất Chuyển KẾT LUẬN việt quất cấy mơ ngồi vườn ươm thi giá thể Mơi trường WPM bổ sung 0,5 mg/1 zeatin kết vụn xơ dừa tốt đến sinh trưởng tỉ lệ họp 0,1 mg/1 NAA, môi trường WPM bổ sung mg/1 sống Những việt quất cấy mô sinh BA kết họp 0,1 mg/1 NAA môi trường WPM bổ trưởng tốt giá thể vụn xơ dừa sau tháng nuôi sung mg/1 Kinetin kết họp 0,1 mg/1 NAA tốt trồng, tiếp tục sinh trưởng tốt sau tháng đến tái sinh sinh trưởng chồi in vitro nuôi trồng việt quất Môi trường WPM bổ sung mg/1 NAA 48 NƠNG NGHIỆP VÀ PHÁT TRIEN nơng thơn - KỲ + - THÁNG 2/2022 KHOA HỌC CƠNG NGHỆ LỊI CẢM ON (Kalmia lai!folia) by use of shoot tip culture Com Các tác già xin chân thành cảm ơn Viện Nghiên Proc Int Plant Prop Soc., 30: 421-427 cứu Khoa học Tây Nguyên, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam hỗ trợ nghiên cứu TÀI LIỆU THAM KHẢO Củce M., Sõkmen A (2015) Micropropagation of Vaccinium myrtillus L (Bilberry) naturally growing in the Turkish flora TurkJ Biol., 39: 233-240 10 Mohamed G R A., Khusnetdinova L z., Timofeeva A (2018) Elaboration of micropropagation protocol for Vaccinium corymbosum cv "Sunt Blue Giant" Asian J Plant Sci Res., 8(5): 1-11 11 Melani N A., Adriana p V (2016) In vitro propagation of Vaccinium myrtillus J N R D., 6:122-129 12 Nestby R., Percival D., Martinussen I., Ciice M., Bekircan T., Sôkmen A (2016) Opstad N., Rohloff J (2010) The European Effect of medium pH on shoot regeneration of three blueberry (Vaccinium myrtillus L.) and the potential Vaccinium species naturally growing in Turkish for cultivation A review European J Plant Sei Flora TurkJ LifeSci., 1(2): 052-058 Biotechnol., 5: 5-16 Ciice M., Sõkmen A (2017) In vitro 13 Phan Xuân Huyên, Nguyền Lâm Thanh production protocol of Vaccinium uliginosum L (bog (2014) Nghiên cứu nhân giống in vitro đảng sâm bilberry) growing in the Turkish flora Turk J Agric (Codonopsis javanica Blume) thông qua nuôi cấy For, 41: 294-304 chồi ngủ Tạp chi Công nghệ Sinh học, 12(4): 6594 Duncan D B (1955) Multiple range and F 666 tests Biometrics, 11:1-42 14 Pepkolaj A., Faslia N., Ozuni E (2017) Elkiran 0., Avsar c (2020) Chemical Chemical variability of wild bilberry (Vaccinium composition and biological activities of the essential myrtillus L.) populations in northern part of Albania oil from the leaves of Vaccinium myrtillus L J Med Plants Res., 11(37): 576-582 Bangladesh J Bot., 49(1): 91-96 15 Phan Xuân Huyên, Nguyễn Thị Phượng Gajdosova A, Ostrolucká M G., Libiaková G., Hoàng (2017) Nghiên cứu tái sinh chồi in vitro Ondrusková E., Simala D (2006) Microclonal nuôi trồng lan gấm (Anoectochilus formosanus propagation of Vaccinium sp and Rubus sp and Hayata) Tạp chí Cơng nghệ Sinh học, 15(3): 515-524 detection of genetic variability in culture in vitro J 16 Phan Xuân Huyên, Trần Thị Hoàn Anh, Fruit Omani Plant Res., 14; 103-119 Nguyên Thị Phượng Hoàng, Nguyên Thị Thanh Glider A., Gùr M., Engin M s (2015) Hằng, Đinh Vãn Khiêm, Hoàng Văn Cưong (2018) Antidiabetic and antioxidant properties of bilberry Nghiên cứu nhân giống in vitro ảnh hưởng (Vaccinium myrtillus Linn.) fruit and their chemical phân bón đến sinh trưởng lan gấm composition J Agr Sci Tech., 17: 401-414 (Anoectochilus fonnosanus Hayata) Lảm Đồng Jaakola L., Riihinen K., Hăggman H., HohtolaTạp chí Dược liệu, 23(1): 52-59 A (2009) Bilberry in vitro protocols and analyses of 17 Rache L Y c., Pacheco J c M (2010) In phenolic compounds Methods Mol BioL, 547: 71-80 vitro propagation of mature plants of Vaccinium Lloyd G., McCown B (1980) Commercially-meridionale (Ericaceae) Acta Bot Bras., 24(4): 1086feasible micropropagation of mountain laurel 1095 NÒNG NGHIỆP VÀ PHÁT TRIEN NÔNG THÔN - KỲ + - THÁNG 2/2022 49 KHOA HỌC CÔNG NGHỆ STUDY ON ABILITY OF IN VITRO SHOOT GROWTH AND REGENERATION OF Vaccinium myrtillusUnn THROUGH STEM NODE CULTURE Phan Xuan Huyen1, Nguyen Thi Thanh Hang1, Nguyen Thi Phuong Hoang1, Dinh Van Khiem1 ’Tay Nguyen Institute for Scientific Research, Vietnam Academy ofScience and Technology Summary Vaccinium myrtillus Linn, is an imported fruit tree with high economic value and good for human health Currently, in the Vietnam there has not been publication researched on in vitro propagation of blueberry plant This paper conducted to study in vitro propagation of Vaccinium myrtillus by method of stem node culture The results showed that WPM medium supplemented with 0.5 mg/1 zeatin combined with 0.1 mg/1 NAA (shoot height 4.53 cm, shoot/explant, 11.20 nodes/shoot), WPM medium supplemented with mg/1 BA combined with 0.1 mg/1 NAA (shoot height 4.18 cm, shoot/explant, 9.10 nodes/shoot) and WPM medium supplemented with mg/1 Kinetin combined with 0.1 mg/1 NAA (shoot height 3.88 cm, shoot/explant, 8.50 nodes/shoot) were the best media for the regeneration and in vitro shoot growth of Vaccinium myrtillus For in vitro rooting, WPM medium supplemented with mg/1 NAA was the best (plant height 5.14 cm, root length 1.42 cm, rooting rate 100%) Transfer cultivated-tissue Vaccinium myrtillusto the greenhouse, substrate of coconut fiber powder was the best for the growth and survival rate of the plants (plant height 7.46 cm plant length 3.48 cm, survival rate 90.48%) Cultivated-tissue Vaccinium myrtillus grew well on substrate of coconut fiber powder after months of cultivation, Vaccinium myrtillus plants continued to grow well after months of cultivation and after months of cultivation Keywords: Number ofnode, number ofshoot, shoot height, Vaccinium myrtillus, WPM medium Người phản biện: PGS.TS Nguyễn Văn Đồng Ngày nhận bài: 14/5/2021 Ngày thông qua phản biện: 17/6/2021 Ngày duyệt đăng: 24/6/2021 50 NÔNG NGHIỆP VÀ PHÁT TRIÊN NÔNG THÔN - KỲ + - THÁNG 2/2022 ... tái sinh sinh trưởng chồi in vitro Khả tái sinh sinh trưởng chồi từ đốt thân giải thích, nồng độ Kinetin thấp kích việt quất sau 50 ngày ni cấy thể thích tăng trưởng chiều cao chồi số đốt /chồi, ... đùa; í Cây việc quất mô sau tháng nuôi trồng giá thể xụn xơ dừa Hình Nghiên cứu khả tái sinh sinh trưởng chồi in vitro việt quất (Vaccinium myrtilỉus Linn. ) thông qua nuôi cấy đốt thân Ghi chú:... Nghiên cứu khả tái sinh sinh trưởng mịi trường khơng bổ sung chất điều hịa sinh trưởng chồi in vitro việt quất (Vaccinium myrtillus Linn. ) thi mẫu cấy khơng tạo rễ mà tạo chói, thơng qua ni cấy