ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG TÁI SINH CỦA MỘT SỐ GIỐNG ĐẬU TƯƠNG TRONG MÔI TRƯỜNG IN VITRO

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA NÔNG HỌC ~~~~~***~~~~~ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG TÁI SINH CỦA MỘT SỐ GIỐNG ĐẬU TƯƠNG TRONG MÔI TRƯỜNG IN VITRO Người hướng dẫn: TS VŨ THỊ THÚY HẰNG TS ĐINH TRƯỜNG SƠN Người thực : HOÀNG ĐỨC NHẬT LINH Mã sinh viên : 621688 Lớp : K62CGCT Bộ môn : DI TRUYỀN VÀ CHỌN GIỐNG CÂY TRỒNG HÀ NỘI - 2021 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi Các số liệu, kết trình bày báo cáo trung thực, khách quan, nghiêm túc chưa cơng bố cơng trình khác Hà Nội, ngày 20 tháng 11 năm 2021 Sinh viên Hoàng Đức Nhật Linh LỜI CẢM ƠN Em xin gửi lời cảm ơn tới Bộ môn Di truyền – Chọn giống trồng – Khoa Nông học Bộ môn Công nghệ sinh học thực vật - Khoa Công nghệ sinh học đã tạo điều kiện thuận lợi cho em hoàn thành đề tài nghiên cứu Đặc biệt, em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới TS Vũ Thị Thúy Hằng, giảng viên Khoa Nông học TS Đinh Trường Sơn, giảng viên khoa Công nghệ sinh học đã tận tình chỉ bảo, giúp đỡ hướng dẫn em thời gian thực đề tài Em xin cảm ơn Kỹ sư Phạm Thị Ly đã hỗ trợ em thời gian thực thí nghiệm ni cấy mơ Cuối cùng, em xin cảm ơn gia đình đã tạo điều kiện vật chất chỗ dựa tinh thần cho em suốt thời gian thực tập; cảm ơn bạn bè đã hết lòng động viên, giúp đỡ suốt thời gian qua Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 13 tháng 11 năm 2021 Sinh viên thực Hoàng Đức Nhật Linh TÓM TẮT Nghiên cứu tiến hành từ tháng 1-10/2021 tại Bộ môn CNSH Thực vật, Khoa Công nghệ sinh học, Học viện Nông Nghiệp Việt Nam nhằm xác định phương pháp khử trùng hạt, ảnh hưởng môi trường nuôi cấy, chất điều tiết sinh trưởng đến khả phát sinh hình thái loại mẫu cấy callus giống đậu tương DT2008, ĐT35 VNUAĐ2 Trong đó, nghiên cứu xác định phương pháp khử trùng hạt đánh giá tỷ lệ nhiễm tỷ lệ nảy mầm sau ngày nuôi cấy Các nghiên cứu ảnh hưởng môi trường nuôi cấy, chất điều tiết sinh trưởng, loại mẫu cấy đến khả phát sinh hình thái đánh giá chỉ tiêu bao gồm tỷ lệ phát sinh hình thái (callus, chồi, rễ), đặc điểm hình thái callus (kích thước, màu sắc, cấu trúc), đặc điểm chồi rễ phát sinh mẫu cấy sau t̀n ni cấy Kết thí nghiệm cho thấy khử trùng Presept 5% 15 phút, sau bóc vỏ hạt khử trùng tiếp Presept 5% 10 phút cho tỷ lệ mẫu nhiễm thấp, dưới 5% không ảnh hưởng đến tỷ lệ nảy mầm hạt (tỷ lệ nảy mầm đạt 90%) Nền môi trường, kiểu gen (giống), chất điều tiết sinh trưởng (BA, BA + αNAA, BA + αNAA + IAA) có ảnh hưởng rõ rệt đến khả tái sinh đậu tương Trong đó, mơi trường MS bổ sung vitamin thích hợp cho tái sinh đậu tương từ nguồn mẫu cấy khác Chồi thích hợp để phát sinh callus, đốt mầm thích hợp cho tạo chồi Mơi trường MS bổ sung vitamin + mg/l BA đối với giống ĐT35 hoặc mg/l BA đối với giống VNUAĐ2 thích hợp cho phát sinh callus từ chồi Callus giống ĐT35 có cảm ứng phát sinh chồi nồng độ mg/l αNAA bổ sung thêm BA tỷ lệ còn thấp (2%) Bổ sung BA, αNAA, IAA có ảnh hưởng đến cấu trúc callus không cho tái sinh tạo chồi từ callus đậu tương Từ khóa: Tái sinh, đậu tương, VNUAĐ2, ĐT35, callus, tạo chồi MỤC LỤC Trang DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng 2.1 Tình hình sản xuất đậu tương giới từ năm 2011 – 2019 Tình hình sản xuất đậu tương Việt Nam từ năm 2010 – 2020 Một số phương pháp nuôi cấy mô đậu tương Thành phần môi trường sử dụng khảo sát môi trường nuôi cấy loại mẫu cấy đến khả phát sinh hình thái Thành phần mơi trường thí nghiệm đánh giá ảnh hưởng nồng độ BA loại mẫu cấy đến khả phát sinh hình thái 2.2 2.3 3.1 3.2 Tran g 20 29 32 3.3 4.1 4.2 4.3 4.4 Thành phần môi trường thí nghiệm đánh giá ảnh hưởng nồng độ BA, NAA IAA đến khả phát sinh hình thái callus giống đậu tương ĐT35 VNUAĐ2 Ảnh hưởng phương pháp khử trùng hạt đến khả tạo mẫu vô trùng nảy mầm giống đậu tương DT2008, ĐT35 VNUAĐ2 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy mẫu cấy đến khả phát sinh hình thái giống đậu tương DT2008, ĐT35 VNUAĐ2 sau tuần nuôi cấy Ảnh hưởng giống loại mẫu cấy đến khả phát sinh hình thái giống đậu tương DT2008, ĐT35 VNUAĐ2 sau tuần nuôi cấy Ảnh hưởng môi trường mẫu cấy đến đặc điểm phát sinh hình thái giống đậu tương DT2008, ĐT35 VNUAĐ2 sau tuần nuôi cấy Ảnh hưởng nồng độ BA đến khả phát sinh hình thái hai giống đậu tương ĐT35 VNUAĐ2 sau tuần nuôi cấy 4.6 Ảnh hưởng nồng độ BA đến đặc điểm phát sinh hình thái giống đậu tương ĐT35 VNUAĐ2 sau tuần nuôi cấy 4.7 Ảnh hưởng nồng độ BA αNAA đến khả phát sinh hình thái callus giống đậu tương ĐT35 VNUAĐ2 sau tuần nuôi cấy 4.8 Ảnh hưởng nồng độ BA αNAA đến đặc điểm phát sinh hình thái callus giống ĐT35 VNUAĐ2 sau tuần nuôi cấy 4.9 Ảnh hưởng nồng độ IAA αNAA đến khả phát sinh hình thái callus giống đậu tương ĐT35 VNUAĐ2 sau tuần nuôi cấy 4.10 Ảnh hưởng nồng độ IAA αNAA đến đặc điểm hình thái callus giống đậu tương ĐT35 VNUAĐ2 sau tuần nuôi cấy 33 35 39 40 43 4.5 46 50 54 55 58 60 DANH MỤC HÌNH ST T 2.1 2.2 3.1 3.2 3.3 4.1 4.2 4.3 4.4 4.5 Tên hình Một số vật liệu nuôi cấy nuôi cấy mô đậu tương Môi trường thành phần phytohooc-môn tái sinh đậu tương Chuẩn bị mẫu cấy trụ hạ diệp, chồi mầm Đốt mầm cắt từ sau ngày nuôi cấy đưa vào bình ni cấy Callus sau t̀n ni cấy lựa chọn cắt nhỏ để cấy chuyển sang môi trường tái sinh Ảnh hưởng phương pháp khử trùng hạt đến tỷ lệ nhiễm hạt giống đậu tương DT2008, ĐT35, VNUAĐ2 Hình thái sau nuôi cấy ngày nuôi cấy môi trường in vitro Sự phát sinh hình thái loại mẫu cấy môi trường GB5 + 1,5 mg/l BA sau tuần nuôi cấy Sự sinh trưởng loại mẫu cấy môi trường MS bổ sung vitamin + 1,5 mg/l BA sau tuần nuôi cấy Ảnh hưởng BA đến khả phát sinh hình thái Tran g 18 24 30 31 33 36 37 45 45 52 4.6 4.7 từ chồi sau tuần nuôi cấy (a) ĐT35 (b) VNUAĐ2 Sự tái sinh tạo chồi từ callus sau tuần nuôi cấy (a) ĐT35 (b) VNUAĐ2 Hình thái callus giống đậu tương (a) ĐT35 (b) VNUAĐ2 sau tuần nuôi cấy môi trường MS + vitamin bổ sung nồng độ BA, αNAA IAA khác 58 61 DANH MỤC CÁC CỤM TỪ VÀ KÍ HIỆU VIẾT TẮT Viết tắt BA (6-BA) cs CNSH CT 2,4 D ĐC GB5 IAA IBA MS MT NXB αNAA TB TN Viết đầy đủ Benzyladenine (6-Benzyladenine) Cộng Công nghệ sinh học Công thức 2,4 Dichlorophenoxyaxetic acid Đối chứng Gamborg B5 Indole-3-axetic acid Indole-3-butyric acid Muraghige Skoog (1962) Môi trường Nhà xuất Alpha-Naphthaleneacetic acid Trung bình Thí nghiệm Chương I ĐẶT VẤN ĐỀ 1.1 Tính cấp thiết đề tài Đậu tương (Glycine max L Merril) loại đậu tốt toàn cầu họ đậu hạt quan trọng lâu đời nhất, góp phần chiếm khoảng 25% lượng dầu ăn tồn cầu khoảng 2/3 lượng protein đặc giới làm thức ăn chăn nuôi Với khoảng 40% protein 20% dầu, đậu tương lấy hạt có dầu có giá trị Hạt đậu tương chứa hàm lượng protein cao, giàu dinh dưỡng thực phẩm cho người gia súc Từ hạt đậu, ta chế biến nhiều sản phẩm khác như: Sản xuất dầu thực vật, sản xuất dầu ăn, đậu phụ, tào phớ, sữa đậu tương, những sản phẩm công nghiệp chế biến từ đậu tương có lợi cho sức khoẻ người, góp phần chống suy dinh dưỡng bệnh thần kinh, tim mạch Ngoài việc cung cấp 40-50% lượng protein hạt đậu tương có chứa hàm lượng lớn lipit (12 - 24%) Vì vậy, đậu tương lồi cơng nghiệp lấy dầu quan trọng giới Bên cạnh đó, có khả cố định đạm tự nhờ cộng sinh với vi khuẩn Rhizobium japonicum mà đậu tương trồng bảo vệ đất chống xói mòn Cây đậu tương còn FAO xem trồng chiến lược góp phần xóa đói, giảm nghèo, tạo sinh kế cho người nơng dân nước thu nhập nghèo trung bình Ở Việt Nam, diện tích trồng đậu tương mặc dù giảm những năm gần đậu tương vẫn trồng quan trọng nguồn cung cấp dinh dưỡng, dầu protein thực vật quan trọng cho người vật nuôi Tuy vậy, sản xuất đậu tương nước mới chỉ cung cấp 18% nhu cầu (Mai Quang Vinh & cs., 2009) Do đó, nâng cao suất chất lượng đậu tương những mục tiêu quan trọng cải công tác chọn tạo giống Với phát triển khoa học, đặc biệt lĩnh vực cơng nghệ sinh học phương pháp chuyển gen chỉnh sửa gen hướng mới, cung cấp công cụ chọn tạo giống với ưu mức độ xác rút ngắn thời gian chọn tạo vật liệu, dòng, giống mới với tính trạng mục tiêu Có nhiều phương pháp chuyển gen vào thực vật, phương pháp chuyển gen thông qua vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens vào mô in vitro nhằm tạo trồng biến đổi gene đem lại tỷ lệ thành công cao Tuy nhiên hiệu chuyển gen chỉnh sửa gen phụ thuộc vào nhiều yếu tố khả tái sinh in vitro có vai trò định Đã có nhiều nghiên cứu việc tái sinh in vitro đậu tương thông qua quan mầm, trụ hạ diệp, mắt thật đầu tiên, thật đầu tiên non, phôi soma,…với môi trường khác (Sign & cs 2020) Cũng nghiên cứu tái sinh với trồng khác, khả tái sinh đậu tương phụ thuộc vào yếu tố kiểu gen (giống), thành phần mơi trường, loại mẫu ni cấy Chính cần phải có nghiên cứu khả tái sinh nguồn vật liệu hay giống đậu tương trước tiến hành nghiên cứu chuyển gen hay chỉnh sửa gen đối với vật liệu định Xuất phát từ những ly trên, đã tiến hành đề tài: “Nghiên cứu khả tái sinh số giống đậu tương môi trường in vitro” phục vụ 10 Error 51428.95 166 Total 154106.93 185 309.81 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=5.09653 Error: 309.8130 df: 166 Giong Means n S.E DT35 87.29 94 1.85 A VNUAD2 91.35 92 1.94 A Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=8.09312 Error: 309.8130 df: 166 nong BA Means n S.E 46.59 39 2.88 A 100.00 42 2.81 100.00 35 3.11 100.00 38 2.93 100.00 32 3.25 B B B B Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=5.20604 Error: 309.8130 df: 166 Mau cay Means n S.E Choi ngon 88.85 112 1.68 A dot 89.79 74 2.09 A Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=11.48227 Error: 309.8130 df: 166 Giong nong BA Means n DT35 36.46 18 VNUAD2 56.73 21 VNUAD2 100.00 20 VNUAD2 100.00 15 VNUAD2 100.00 20 DT35 100.00 18 DT35 100.00 20 DT35 100.00 22 DT35 100.00 16 VNUAD2 100.00 16 S.E 4.17 3.95 4.02 4.82 4.13 4.26 3.94 3.82 4.44 4.75 A B C C C C C C C C Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=7.39281 Error: 309.8130 df: 166 Giong Mau cay Means n S.E DT35 dot 84.58 41 2.78 VNUAD2 Choi ngon 87.69 59 2.30 DT35 Choi ngon 90.00 53 2.44 VNUAD2 dot 95.00 33 3.13 A A A B B B Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=11.70347 Error: 309.8130 df: 166 nong BA Mau cay Means n Choi ngon 44.23 23 dot 48.96 16 dot 100.00 15 Choi ngon 100.00 26 dot 100.00 16 Choi ngon 100.00 23 S.E 3.70 4.40 4.82 3.45 4.44 3.67 A A B B B B 96 4 dot Choi ngon Choi ngon dot 100.00 100.00 100.00 100.00 15 20 20 12 4.55 3.94 3.96 5.15 B B B B Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=16.74480 Error: 309.8130 df: 166 Giong nong BA Mau cay Means n S.E DT35 dot 22.92 6.22 A VNUAD2 Choi ngon 38.46 13 4.88 A DT35 Choi ngon 50.00 10 5.57 VNUAD2 dot 75.00 6.22 VNUAD2 Choi ngon 100.00 12 5.08 DT35 dot 100.00 5.87 VNUAD2 Choi ngon 100.00 10 5.57 DT35 dot 100.00 6.65 VNUAD2 Choi ngon 100.00 13 4.88 DT35 dot 100.00 10 5.57 VNUAD2 Choi ngon 100.00 11 5.31 DT35 dot 100.00 6.65 Choi ngon 100.00 13 4.88 Choi ngon 100.00 10 5.57 VNUAD2 dot 100.00 6.65 DT35 Choi ngon 100.00 11 5.31 Choi ngon 100.00 5.87 VNUAD2 dot 100.00 6.22 VNUAD2 dot 100.00 7.87 VNUAD2 dot 100.00 7.87 D D D D D D D DT35 D DT35 D D D DT35 D D D D D B B C Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Ty le tao choi Variable Ty le tao choi N 186 R² 0.35 Adj R² 0.27 Analysis of variance table (Partial SS) S.V SS CV 31.81 df MS F p-value 97 Model 63571.08 19 3345.85 4.64 0.05) Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=7.94191 Error: 721.0005 df: 166 Mau cay Means n S.E dot 83.44 74 3.19 A Choi ngon 85.07 112 2.56 A Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=17.51644 Error: 721.0005 df: 166 Giong nong BA Means n DT35 46.23 16 VNUAD2 69.79 20 DT35 72.33 22 DT35 85.00 20 VNUAD2 86.36 16 VNUAD2 90.00 15 DT35 96.43 18 VNUAD2 96.43 20 DT35 100.00 18 VNUAD2 100.00 21 S.E 6.77 6.13 5.82 6.00 7.24 7.35 6.49 6.29 6.37 6.03 A B B B B C C C C D D D D D D D Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) 98 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=11.27789 Error: 721.0005 df: 166 Giong Mau cay Means n S.E DT35 dot 76.06 41 4.23 A DT35 Choi ngon 83.93 53 3.72 A VNUAD2 Choi ngon 86.21 59 3.51 A VNUAD2 dot 90.82 33 4.78 B B B Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=17.85388 Error: 721.0005 df: 166 nong BA Mau cay Means n Choi ngon 55.81 20 dot 75.00 15 dot 76.79 12 dot 78.37 16 Choi ngon 79.17 23 dot 87.05 15 Choi ngon 90.38 26 dot 100.00 16 Choi ngon 100.00 20 Choi ngon 100.00 23 S.E 6.03 7.35 7.86 6.77 5.60 6.95 5.27 6.71 6.00 5.65 A B B B B B B Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=25.54453 Error: 721.0005 df: 166 Giong nong BA Mau cay Means n C C C C C S.E DT35 Choi ngon 38.89 8.95 A DT35 dot 53.57 10.15 A B VNUAD2 Choi ngon 58.33 12 7.75 A B C DT35 dot 63.89 8.95 B C dot 70.00 10 8.49 B C E E E E E E E E E E Choi ngon 72.73 11 8.10 B C dot 80.00 12.01 B C Choi ngon 80.77 13 7.45 C dot 81.25 9.49 C dot 92.86 10.15 dot 92.86 10.15 dot 100.00 9.49 Choi ngon 100.00 11 8.10 Choi ngon 100.00 13 7.45 Choi ngon 100.00 10 8.49 DT35 D VNUAD2 D VNUAD2 DT35 D D VNUAD2 DT35 D D VNUAD2 DT35 D DT35 VNUAD2 DT35 F F F F F F F F F 99 DT35 VNUAD2 E E VNUAD2 VNUAD2 VNUAD2 F F F F F Choi ngon 100.00 10 8.49 dot 100.00 12.01 Choi ngon 100.00 10 8.49 Choi ngon 100.00 13 7.45 dot 100.00 9.49 Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) ty le tao re Variable ty le tao re N 186 R² 0.78 Adj R² 0.76 Analysis of variance table (Partial SS) S.V SS value Model 284186.04 0.05) Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=9.16024 Error: 475.6574 df: 166 Giong Mau cay Means n S.E DT35 Choi ngon 19.50 53 3.02 VNUAD2 Choi ngon 22.59 59 2.85 DT35 dot 37.43 41 3.44 VNUAD2 dot 44.71 33 3.88 A A B B Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=14.50146 Error: 475.6574 df: 166 nong BA Mau cay Means n Choi ngon 0.00 20 dot 1.79 16 Choi ngon 1.92 26 dot 2.50 15 Choi ngon 10.00 20 Choi ngon 10.98 23 dot 11.79 12 Choi ngon 82.31 23 dot 89.29 15 dot 100.00 16 S.E 4.90 5.50 4.28 5.97 4.88 4.55 6.39 4.59 5.64 5.45 A A A A A A A B B C C Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=20.74805 Error: 475.6574 df: 166 Giong nong BA Mau cay Means VNUAD2 dot 0.00 DT35 Choi ngon 0.00 VNUAD2 Choi ngon 0.00 DT35 Choi ngon 0.00 VNUAD2 Choi ngon 0.00 DT35 dot 0.00 VNUAD2 dot 3.57 DT35 dot 3.57 DT35 Choi ngon 3.85 DT35 dot 5.00 VNUAD2 Choi ngon 8.33 DT35 Choi ngon 13.64 VNUAD2 dot 20.00 VNUAD2 Choi ngon 20.00 DT35 dot 78.57 DT35 Choi ngon 80.00 VNUAD2 Choi ngon 84.62 n 11 10 13 7 13 10 12 11 10 10 13 S.E 9.75 7.27 6.58 6.90 6.05 7.27 8.24 8.24 6.05 6.90 6.30 6.58 9.75 6.90 8.24 6.90 6.05 A A A A A A A A A A A A A A B B B 101 VNUAD2 VNUAD2 DT35 0 dot dot dot 100.00 100.00 100.00 8 7.71 7.71 7.71 B B B Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Thí nghiệm Ảnh hưởng nồng độ BA NAA đến khả phát sinh hình thái callus giống đậu tương ĐT35 VNUAĐ2 ty le tao choi Variable ty le tao choi N 143 R² 0.10 Adj R² 0.00 Analysis of variance table (Partial SS) S.V SS CV 729.47 df MS F p-value Model 667.13 15 44.48 0.96 0.4996 giong 147.48 147.48 3.19 0.0766 Nong BA 62.66 20.89 0.45 0.7167 Nong NAA 147.48 147.48 3.19 0.0766 giong*Nong BA 62.66 20.89 0.45 0.7167 giong*Nong NAA 147.48 147.48 3.19 0.0766 Nong BA*Nong NAA 62.66 20.89 0.45 0.7167 giong*Nong BA*Nong N 62.66 20.89 0.45 0.7167 Error 5875.22 127 46.26 Total 6542.35 142 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=2.25372 Error: 46.2616 df: 127 giong Means n S.E VNUAD2 0.00 75 0.79 A ĐT35 2.04 68 0.83 A Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=3.18426 Error: 46.2616 df: 127 Nong BA Means n S.E 2.50 0.00 35 1.15 A 2.00 1.04 35 1.15 A 0.00 1.19 36 1.15 A 1.50 1.85 37 1.12 A Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=2.25549 Error: 46.2616 df: 127 Nong NAA Means n S.E 0.50 0.00 76 0.78 A 1.00 2.04 67 0.83 A Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) 102 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=4.51007 Error: 46.2616 df: 127 giong Nong BA Means n S.E ĐT35 2.50 0.00 17 1.65 VNUAD2 1.50 0.00 19 1.56 VNUAD2 2.50 0.00 18 1.61 VNUAD2 0.00 0.00 19 1.56 VNUAD2 2.00 0.00 19 1.56 ĐT35 2.00 2.08 16 1.70 ĐT35 0.00 2.38 17 1.68 ĐT35 1.50 3.70 18 1.60 A A A A A A A A Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=3.19352 Error: 46.2616 df: 127 giong Nong NAA Means n S.E ĐT35 0.50 0.00 36 1.14 VNUAD2 1.00 0.00 35 1.15 VNUAD2 0.50 0.00 40 1.08 ĐT35 1.00 4.08 32 1.21 A A A B Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=4.51532 Error: 46.2616 df: 127 Nong BA Nong NAA Means n S.E 2.00 0.50 0.00 18 1.61 2.50 0.50 0.00 19 1.56 0.00 0.50 0.00 20 1.52 1.50 0.50 0.00 19 1.56 2.50 1.00 0.00 16 1.70 2.00 1.00 2.08 17 1.65 0.00 1.00 2.38 16 1.71 1.50 1.00 3.70 18 1.60 A A A A A A A A Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=6.40108 Error: 46.2616 df: 127 giong Nong BA Nong NAA Means ĐT35 2.00 0.50 0.00 ĐT35 2.50 0.50 0.00 ĐT35 0.00 0.50 0.00 ĐT35 1.50 0.50 0.00 VNUAD2 1.50 1.00 0.00 VNUAD2 2.50 1.00 0.00 VNUAD2 0.00 0.50 0.00 VNUAD2 0.00 1.00 0.00 VNUAD2 2.00 1.00 0.00 VNUAD2 2.50 0.50 0.00 VNUAD2 1.50 0.50 0.00 VNUAD2 2.00 0.50 0.00 ĐT35 2.50 1.00 0.00 ĐT35 2.00 1.00 4.17 ĐT35 0.00 1.00 4.76 ĐT35 1.50 1.00 7.41 n S.E 2.40 2.27 2.15 2.27 2.27 2.40 2.15 2.27 2.27 2.15 2.15 2.15 2.40 2.40 2.57 2.27 10 9 10 9 10 10 10 8 A A A A A A A A A A A A A A A Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) B B B ty le tao re Variable ty le tao re N 143 R² 0.19 Adj R² 0.09 CV 135.10 103 Analysis of variance table (Partial SS) S.V SS df MS F p-value Model 18549.73 15 1236.65 1.95 0.0241 giong 167.46 167.46 0.26 0.6084 Nong BA 1035.83 345.28 0.54 0.6531 Nong NAA 765.67 765.67 1.21 0.2741 1798.53 599.51 0.94 0.4213 95.54 95.54 0.15 0.6987 4082.74 1360.91 2.14 0.0979 giong*Nong BA*Nong N 10549.02 3516.34 5.54 0.0013 Error 80611.11 127 634.73 Total 99160.84 142 giong*Nong BA giong*Nong NAA Nong BA*Nong NAA Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=8.34804 Error: 634.7332 df: 127 giong Means n S.E ĐT35 17.15 68 3.07 A VNUAD2 19.33 75 2.92 A Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=11.79490 Error: 634.7332 df: 127 Nong BA Means n S.E 2.50 15.28 35 4.28 A 2.00 16.67 35 4.28 A 0.00 18.61 36 4.24 A 1.50 22.41 37 4.15 A Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=8.35460 Error: 634.7332 df: 127 Nong NAA Means n S.E 1.00 15.91 67 3.09 A 0.50 20.57 76 2.90 A Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=16.70586 Error: 634.7332 df: 127 giong Nong BA Means n S.E ĐT35 0.00 11.67 17 6.21 VNUAD2 2.50 12.50 18 5.98 ĐT35 2.00 16.67 16 6.30 VNUAD2 2.00 16.67 19 5.79 ĐT35 2.50 18.06 17 6.12 ĐT35 1.50 22.22 18 5.94 VNUAD2 1.50 22.59 19 5.79 VNUAD2 0.00 25.56 19 5.79 A A A A A A A A Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) 104 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=11.82917 Error: 634.7332 df: 127 giong Nong NAA Means n S.E ĐT35 1.00 14.00 32 4.47 VNUAD2 1.00 17.82 35 4.26 ĐT35 0.50 20.30 36 4.21 VNUAD2 0.50 20.83 40 3.98 A A A A Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=16.72528 Error: 634.7332 df: 127 Nong BA Nong NAA Means n S.E 2.00 1.00 6.25 17 6.12 2.50 0.50 13.89 19 5.79 0.00 0.50 15.00 20 5.63 2.50 1.00 16.67 16 6.30 1.50 1.00 18.52 18 5.94 0.00 1.00 22.22 16 6.35 1.50 0.50 26.30 19 5.79 2.00 0.50 27.08 18 5.98 A A A A A A B B B B B B B Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=23.71040 Error: 634.7332 df: 127 giong Nong BA Nong NAA Means n S.E VNUAD2 2.00 1.00 0.00 8.40 A ĐT35 0.00 1.00 0.00 9.52 A B VNUAD2 0.00 0.50 6.67 10 7.97 A B C VNUAD2 2.50 1.00 8.33 8.91 A B C ĐT35 2.50 0.50 11.11 8.40 A B C D ĐT35 2.00 1.00 12.50 8.91 A B C D VNUAD2 2.50 0.50 16.67 10 7.97 A B C D VNUAD2 1.50 1.00 18.52 8.40 A B C D ĐT35 1.50 1.00 18.52 8.40 A B C D 2.00 0.50 20.83 8.91 A B C D 0.00 0.50 23.33 10 7.97 B C D 2.50 1.00 25.00 8.91 B C D 1.50 0.50 25.93 8.40 C D VNUAD2 1.50 0.50 26.67 10 7.97 C D VNUAD2 2.00 0.50 33.33 10 7.97 VNUAD2 0.00 1.00 44.44 8.40 ĐT35 ĐT35 E ĐT35 E ĐT35 E E E E E D Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) 105 Thí nghiệm Ảnh hưởng nồng độ BA αNAA, IAA đến khả phát sinh hình thái callus giống đậu tương ĐT35 VNUAĐ2 ty le tao choi Variable ty le tao choi N 180 R² nd Adj R² nd CV nd Cell-unbalanced data To get another SS decomposition define appropriate contrasts Analysis of variance table (Sequential SS) S.V SS df MS Model 0.00 19 0.00 giong 0.00 0.00 Nong NAA 0.00 0.00 nong IAA 0.00 0.00 giong*Nong NAA 0.00 0.00 giong*nong IAA 0.00 0.00 Nong NAA*nong IAA 0.00 0.00 giong*Nong NAA*nong 0.00 0.00 Error 0.00 160 0.00 Total 0.00 179 F nd nd nd nd nd nd nd nd p-value nd nd nd nd nd nd nd nd ty le tao re Variable ty le tao re N 180 R² 0.12 Adj R² 0.01 CV 941.24 Cell-unbalanced data To get another SS decomposition define appropriate contrasts Analysis of variance table (Sequential SS) S.V SS df MS F p-value Model 2277.78 19 119.88 1.10 0.3596 giong 271.60 271.60 2.48 0.1170 Nong NAA 136.83 45.61 0.42 0.7410 nong IAA 116.93 58.47 0.53 0.5870 giong*Nong NAA 170.07 56.69 0.52 0.6703 giong*nong IAA 147.90 73.95 0.68 0.5100 Nong NAA*nong IAA 660.53 165.13 1.51 0.2018 giong*Nong NAA*nong 773.90 193.48 1.77 0.1377 Error 17500.00 160 109.38 Total 19777.78 179 106 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=3.09443 Error: 109.3750 df: 160 giong Means n S.E VNUAD2 0.00 99 1.05 A ĐT35 2.50 81 1.17 A Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=4.81204 Error: 109.3750 df: 160 Nong NAA Means n S.E 0.00 0.00 19 2.40 A 0.50 0.00 52 1.47 A 0.75 2.08 54 1.43 A 1.00 2.08 55 1.42 A Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=4.81175 Error: 109.3750 df: 160 nong IAA Means n S.E 0.50 0.00 53 1.45 A 0.00 0.00 19 2.40 A 0.25 2.08 53 1.44 A 0.75 2.08 55 1.42 A Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=6.83335 Error: 109.3750 df: 160 giong Nong NAA Means n S.E VNUAD2 0.00 0.00 10 3.31 VNUAD2 0.75 0.00 30 1.91 VNUAD2 0.50 0.00 30 1.91 ĐT35 0.50 0.00 22 2.23 VNUAD2 1.00 0.00 29 1.94 ĐT35 0.00 0.00 3.49 ĐT35 1.00 4.17 26 2.06 ĐT35 0.75 4.17 24 2.13 A A A A A A A A Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=6.82993 Error: 109.3750 df: 160 giong nong IAA Means n S.E ĐT35 0.50 0.00 23 2.19 VNUAD2 0.00 0.00 10 3.31 VNUAD2 0.25 0.00 29 1.94 VNUAD2 0.75 0.00 30 1.91 VNUAD2 0.50 0.00 30 1.91 ĐT35 0.00 0.00 3.49 ĐT35 0.75 4.17 25 2.11 ĐT35 0.25 4.17 24 2.13 A A A A A A A A Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=6.89287 Error: 109.3750 df: 160 Nong NAA nong IAA Means n S.E 0.50 0.00 nd nd 1.00 0.00 nd nd 0.75 0.00 nd nd A B C 107 0.00 0.75 nd nd 0.00 0.25 nd nd 0.00 0.50 nd nd 0.50 0.00 18 2.48 0.50 0.00 18 2.48 0.25 0.00 18 2.48 0.00 0.00 19 2.40 0.50 0.00 17 2.58 0.75 0.00 17 2.58 0.25 0.00 18 2.48 0.75 0.00 20 2.34 0.75 6.25 18 2.48 0.25 6.25 17 2.54 0.75 1.00 G 0.50 G 0.00 G 0.50 G 0.50 G 0.75 G 1.00 G 0.75 G 1.00 G G D E F Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=9.81432 Error: 109.3750 df: 160 giong Nong NAA nong IAA Means n S.E ĐT35 0.75 0.00 nd nd VNUAD2 1.00 0.00 nd nd VNUAD2 0.00 0.50 nd nd VNUAD2 0.75 0.00 nd nd ĐT35 1.00 0.00 nd nd 0.25 nd nd VNUAD2 0.00 F 0.50 0.00 nd nd ĐT35 0.00 nd nd ĐT35 0.00 0.50 H 0.25 nd nd ĐT35 0.50 0.00 nd nd VNUAD2 0.00 0.75 nd nd ĐT35 0.00 0.75 nd ĐT35 0.75 0.50 0.00 nd L 3.70 VNUAD2 0.75 0.75 0.00 10 3.31 VNUAD2 E G I J K A B C D M M 108 VNUAD2 0.75 0.25 0.00 10 3.31 VNUAD2 0.00 0.00 0.00 10 3.31 VNUAD2 0.50 0.25 0.00 10 3.31 ĐT35 1.00 0.50 0.00 3.70 VNUAD2 1.00 0.50 0.00 10 3.31 VNUAD2 0.50 0.75 0.00 10 3.31 VNUAD2 0.50 0.50 0.00 10 3.31 ĐT35 0.50 0.25 0.00 3.70 ĐT35 0.50 0.50 0.00 3.95 ĐT35 1.00 0.75 0.00 10 3.31 ĐT35 0.50 0.75 0.00 3.95 VNUAD2 1.00 0.25 0.00 3.49 ĐT35 0.00 0.00 0.00 3.49 VNUAD2 1.00 0.75 0.00 10 3.31 ĐT35 0.75 0.25 0.00 3.70 VNUAD2 0.75 0.50 0.00 10 3.31 ĐT35 1.00 0.25 12.50 3.70 ĐT35 0.75 0.75 12.50 3.70 M M M M M M M M M M M M M M M M N N Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) 109 110