Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG NGUYEN TAT THANH KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP ĐÁNH GIÁ HIỆU Lực KHÁNG VI KHUẨN Edwardsiella ỉctalurỉ CỦA CHÉ PHẨM A[.]
Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG NGUYEN TAT THANH KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP ĐÁNH GIÁ HIỆU Lực KHÁNG VI KHUẨN Edwardsiella ỉctalurỉ CỦA CHÉ PHẨM AgNPs/PVA TRONG ĐIỀU KIỆN IN VITRO VÀ MÔI TRƯỜNG ƯƠNG NUÔI CÁ TRA Sinh viên thực hiện: Huỳnh Thị Hạnh Duyên Chuyên ngành: Công nghệ sinh học TP.HCM, tháng năm 2018 ft Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MƠI TRƯỜNG KHĨA LUẬN TĨT NGHIỆP ĐÁNH GIÁ HIỆU Lực KHÁNG VI KHUẨN Edwardsiella ỉctalurỉ CỦA CHÉ PHẲM AgNPs/PVA TRONG ĐIỀU KIỆN IN VITRO VÀ MÔI TRƯỜNG ƯƠNG NUÔI CÁ TRA Sinh viên thực hiện: Huỳnh Thị Hạnh Duyên Mã số sinh viên: 1411532937 Lớp: 14DSH02 Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Giáo viên hướng dần: PGS.TS Lê Quang Luân ThS Trần Lệ Trúc Hà TP.HCM, tháng năm 2018 i LỜI CẢM ƠN Em xin chân thành cảm ơn Ban Giám Hiệu, quý Thầy Cô đặc biệt quý Thầy Cô khoa Công nghệ sinh học Môi truờng trường Đại Học Nguyễn Tất Thành, tạo điều kiện cho em có mơi trường tốt đe học tập, nghiên cứu rèn luyện suốt trình theo học trường Em xin chân thành tở lời cảm ơn sâu sắc đến quý thầy PGS.TS Lê Quang Luân, người tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt trình hoàn thành đề tài Em xin chân thành gửi lời cảm ơn đến quý cô ThS Trần Lệ Trúc Hà, người đà truyền đạt kiến thức, kinh nghiệm quý báo cho em suốt thời gian qua Em xin chân thành cảm ơn ThS Hàng Khánh Linh tận tình hỗ trợ em suốt trình thực đề tài, anh chị phịng Cơng Nghệ Sinh Học Vật Liệu Nano, Trung tâm Công nghệ Sinh học Thành phố Ho Chí Minh ln động viên giúp đờ em thời gian qua Em xin gửi lời cảm ơn đến Trung tâm Công nghệ Sinh học Thành phố Hồ Chí Minh hỗ trợ vật liệu, dụng cụ thiết bị cho em thực đề tài Gửi lời cảm ơn chân thành đến bạn lớp 14DSH02 bạn sinh viên phịng Cơng nghệ Sinh học Vật liệu Nano, Trung tâm Công nghệ Sinh học Thành phố Hồ Chí Minh ln giúp đờ động viên thời gian qua Cuối cùng, xin tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến ba mẹ gia đình, người ln u thương, tin tưởng ủng hộ Vì kiến thức chun mơn cịn hạn hẹp thân cịn thiếu nhiều kinh nghiệm nên em không tránh khỏi sai sót, mong nhận thơng cảm, đóng góp ý kiến bảo thêm quý thầy để báo cáo em hồn thiện Em xin chân thành cảm ơn! Tp Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 2018 Huỳnh Thị Hạnh Duyên Khoa Công nghệ Sinh học Môi trường Trường Đại Học Nguyền Tất Thành ii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii TÓM TẮT V DANH MỤC CÁC TÙ VIẾT TẮT vii DANH MỤC CÁC HÌNH viii DANH MỤC CÁC BẢNG ix ĐẬT • VẤN ĐỀ CHƯƠNG TÓNG QUAN 1.1 Giới thiệu chung 1.1.1 Công nghệ nano 1.1.2 Nano bạc 1.1.3 Đặc điểm sinh học cá tra 1.1.4 Edwardsiella ictaluri 1.2 Tình hình nghiên cứu ngồi nuớc 13 1.3 Tình hình nghiên cứu nuớc 14 CHƯƠNG NỘI DƯNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 16 2.1 Thời gian địa điếm nghiên cứu .16 2.2 Nội dung nghiên cứu 16 2.3 Đối tuợng nghiên cứu 16 2.4 Vật liệu, thiết bị dụng cụ thí nghiệm 16 2.4.1 Vật liệu thí nghiệm 16 2.4.2 Thiết bị dụng cụthí nghiệm 16 2.4.3 Hóa chất 17 2.5 Phuong pháp thực 17 2.5.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh huởng nồng độ chế phàm AgNPs/PVA lên phát triển vi khuẩn E ictaluri điều kiện in vitro 17 iii 2.5.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát khả xử lý vi khuấn chế phẩm AgNPs/PVA môi trường ương nuôi cá tra giống quy mơ phịng thí nghiệm 19 2.6 Phương pháp xừ lý so liệu 23 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 24 3.1 Ảnh hưởng cùa nồng độ chế phẩm AgNPs/PVA lên phát triển vi khuẩn E ictalurỉ điều kiện in vitro 24 3.2 Khả xử lý vi khuấn chế phẩm AgNPs/PVA môi trường ương nuôi cá tra giống quy mơ phịng thí nghiệm 27 3.2.1 Khả tăng trọng 27 3.2.2 Tỷ lệ cá chết 28 3.2.3 Mật độ tổng vi khuẩn hiếu khí 30 KỂT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO 33 PHỤ LỤC 36 IV TÓM TẮT Đe tài: “Đánh giá hiệu lực kháng vi khuẩn Edwardsiella ỉctaliưi chế phẩm AgNPs/PVA điều kiện ìn vitro mơi trường ương ni cá tra” thực từ tháng 2/2018 đến 8/2018 Phòng Công nghệ Sinh học Vật liệu Nano, Trung tâm Cơng nghệ Sinh học thành phố Hồ Chí Minh, số 2374 Quốc lộ 1A, phường Trung Mỹ Tây, quận 12, TP HCM Mục tiêu đề tài đánh giá hiệu lực kháng vi khuẩn Edwardsialla ỉctaluri điều kiện in vitro đánh giá hiệu lực kháng khuẩn môi trường ương nuôi cá tra giống quy mơ phịng thí nghiệm chế phẩm AgNPs/PVA Đe tài gồm hai nội dung nghiên cứu chính: + Khảo sát ảnh hưởng nồng độ chế phẩm AgNPs/PVA đến phát triển vi khuẩn Edwardsialla ictaluri môi trường nuôi cấy lỏng brain heart infusion (BHI) môi trường thạch BHI điều kiện in vitro + Khảo sát khả xừ lý vi khuẩn cùa chế phấm AgNPs/PVA môi trường ương nuôi cá tra giống quy mơ phịng thí nghiệm Những kết đạt sau tháng nghiên cứu: Chế phẩm AgNPs/PVA có hiệu lực kháng vi khuan Edwardsialla ictaluri tốt điều kiện in vitro Hiệu lực kháng vi khuan Edwardsialla ictaluri chế phẩm AgNPs/PVA tăng dần theo nồng độ AgNPs Trong đó, bổ sung AgNPs nong độ 15 ppm cho hiệu lực kháng khuẩn tối ưu (100%) Chế phẩm AgNPs/PVA sử dụng nồng độ ppm cho hiệu lực kháng vi khuẩn môi trường ương nuôi cá tra giống tương đối tốt, tương đương với sản phẩm có thị trường (virkon A) V SUMMARY The project titled “Assessing the efficaciousness of AgNPs/PVA against Edwardsiella ictaluri bacterium in vitro condition Pagasianodon hypoththalmus farming environment.” was performed from 2/2018 to 8/2018 in the Biotechnology Materials and Nano room, at the Biotechnology center in Ho Chi Minh city, 2374, National Highway 1A, Trung My Tay Ward, District 12, Ho Chi Minh city The main objective is assessing the efficaciousness of AgNPs/PVA against Edwardsiella ictaluri bacterium in vitro condition assessing the antibacterial efficaciousness in Pagasianodon hypoththalmus fanning environment on laboratory scale There are two study contents in the project: + Investigating the effect of AgNPs/PVA concentration on the growth of Edwardsialla ictaluri bacterium on agar liquid brain heart infusion (BHI) in vitro condition + Evaluating the bacterialtreatmentability of AgNPs/PVAin Pagasianodon hypoththalmus farming environment on laboratory scale Results obtained after months of study: AgNPs/PVA has good antibacterial efficaciousness against Edwardsiella ictaluri bacterium in vitro The efficaciousness against Edwardsiella ictaluri bacterium of AgNPs/PVA increased with increasing concentration.Additional AgNPs at the concentration of 15 ppm results in optimal antibacterial activity (100%) in vitro condition AgNPs/PVA at a concentration of ppm results in relatively good antibacterial activity in Pagasianodon hypoththalmus farming environment, which is comparable to the available products on the market (virkon A) VI DANH MỤC CÁC TÙ VIẾT TẮT Ag+: Bạc ion Ag°: Bạc nguyên tử AgNPs: Nano bạc PVA: Polyvinyl alcohol NT: Nghiệm thức BHI: Brain Heart Infusion PCA: Plate Count Agar cfu: Colony forming units E ictaluri: Edwardsiella ictaluri p: Hiệu lực kháng khuan Co-60: Đong vị cobalt 60 ctv: Cộng tác viên PCR: Polymerase Chain Reaction MT: Môi trường V11 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Tác động AgNPs lên vi khuấn Hình 1.2 Cơ chế diệt khuấn AgNPs thông qua tương tác với thành tế bào,các bào quan ADN Hình 1.3 Một số sản phấm có chứa AgNPs Hình 1.4 Cơng thức phân tử PVA Hình 1.5 Cá tra (Pagasianodon hypoththalmus) Hình 1.6 Vi khuẩn E ictaluri Hình 1.7 Gan, thận tỳ tạng cá tra xuấthiện nhiều đốm trắng Hình 1.8 Một số sản phẩm xử lý môi trường nuôi thủy sản Hình 2.1 Cá thí nghiệm Hình 2.2 Hệ thống be ni thí nghiệm Hình 3.1 Ảnh hưởng cùa nồng độ AgNPs lên phát triển vi khuẩn E ictaluri mơi trường thạch Hình 3.2 Ảnh hưởng nồng độ AgNPs lên phát triển cùa vi khuấn E ictaluri mơi trường lỏng Hình 3.3 Hiệu lực kháng vi khuan E ictaluri theo nong độ AgNPs Hình 3.4 Khả tăng trọng cá thí nghiệm Hình 3.5 Cá xuất huyết nhiễm bệnh Hình Tỷ lệ chết cá thí nghiệm Hình 3.7 Ket điện di khuấn lạc phân lập từ mẫu gan cá viii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Danh mục thiết bị dùng nghiên cứu Bảng 2.2 Danh mục dụng cụ dùng nghiên cứu Bảng 2.3 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ AgNPs/PVA đen phát triển vi khuẩn E ictaỉuri môi trường nuôi cấy lỏng Bảng 2.4 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ chế phấm AgNPs/PVA đến phát triển vi khuẩn E ictaluri môi trường nuôi cấy thạch Bảng 2.5 Bảng bố trí thí nghiệm Bảng 2.6 Thành phần phản ứng PCR Bảng 2.7 Chu trình nhiệt phản ứng PCR Bảng 3.1 Hiệu lực kháng khuan E ictaluri theo nong độ AgNPs Bảng 3.2 Khả tăng trọng, mg/con cá thí nghiệm Bảng 3.3 Tỷ lệ chết cá thí nghiệm Bảng 3.4 Mật độ tổng vi khuẩn hiếu khí bể ni, cfu/mL IX ... tiêu đề tài đánh giá hiệu lực kháng vi khuẩn Edwardsialla ỉctaluri điều kiện in vitro đánh giá hiệu lực kháng khuẩn môi trường ương ni cá tra giống quy mơ phịng thí nghiệm chế phẩm AgNPs/ PVA Đe tài... vi khuẩn Edwardsiella ictalurỉ chế phẩm AgNPs/ PVA điều kiện ìn vitro mơi trường ưong ni cá tra. ” Mục tiêu đề tài: Đánh giá hiệu lực kháng vi khuan Edwardsiella ictaluri điều kiện ỉn vitro cùa... kiện in vitro Hiệu lực kháng vi khuan Edwardsialla ictaluri chế phẩm AgNPs/ PVA tăng dần theo nồng độ AgNPs Trong đó, bổ sung AgNPs nong độ 15 ppm cho hiệu lực kháng khuẩn tối ưu (100%) Chế phẩm AgNPs/ PVA