Bước đầu nuôi cấy cây viễn chí lá nhỏ (Polygala paniculata L.) trong điều kiện in vitro.pdf

NTTU-NCKH-05 CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc Đơn vị chủ trì: Trường Đại học Nguyễn Tất Thành BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐÈ TÀI NCKH DÀNH CHO CÁN Bộ - GIẢNG VIÊN 2016 - 2017 Tên đề tài: BƯỚC ĐẦU NUÔI CÁY CÂY VIỄN CHÍ LÁ NHỎ LÁ NHỎ (POLYGALA PANĨCƯLATA L.) TRONG ĐIỀU KIỆN IN VITRO Sổ hợp đồng: 2017.01.35 Chủ nhiệm đề tài: Lê Thu Thủy Đơn vị công tác: Khoa Dược Thời gian thực hiện: 04/2017 -01/2018 CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc Đơn vị chủ trì: Trường Đại học Nguyễn Tất Thành BÁO CÁO TỔNG KÉT ĐÈ TÀI NCKH DÀNH CHO CÁN Bộ - GIẢNG VIÊN 2016 - 2017 Tên đề tài: BƯỚC ĐẦU NUÔI CẤY CÂY VIỄN CHÍ LÁ NHỎ LÁ NHỎ (POLYGALA PANICƯLATA L.) TRONG ĐIỀU KIỆN IN VITRO Số hợp đồng : 2017.01.35 Chủ nhiệm đề tài: Lê Thu Thủy Đơn vị công tác:Khoa Dược Thời gian thực hiện: 4/2017 - 1/2018 ii MỤC LỤC MỞ ĐÀU CHƯƠNG TÓNG QUAN TÀI LIỆU CHƯƠNG NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu CHƯƠNG KÉT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 11 CHƯƠNG KÉT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 22 TÀI LIỆU THAM KHẢO 23 PHỤ LỤC 1: DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHŨ VIẾT TẢT BA (BAP) adenosine triphosphate ga3 gibberellin acid (acid gibberellic) IAA indol acetic acid (acid indol acetic) IBA indol-3-butyric acid MS Murashige vaf Skoog, 1962 NAA a-naphtalene acetic acid (acid a-naphtalene acetic) PHỤ LỤC 2: DANH MỤC CÁC BẢNG BIẾU, sơ ĐỒ, HÌNH ẢNH DANH MỤC BẢNG BIẾU Bàng 3.1: Tỷ lệ mầu nhiễm sống sót sau khữ trùng chất khù trùng nong độ khác thời gian 10 phút 11 Bàng 3.2: Ảnh hường gibberellin nảy mầm cùa hạt 13 Bàng 3.3 Ảnh hưởng nhiệt độ nảy mầm cùa hạt 14 Bàng 3.4 Ảnh hưởng xữ lý cắt hạt 14 Bàng 3.5: Sự phát triển in vitro theo thời gian 16 Bàng 3.6: Sự phát triển cùa choi in vitro sau tuần ni cấy mơi trường MS có bổ sung BA nồng độ 18 Bảng 3.7: Sự phát triển rề từ khúc cắt choi in vitro sau tuần nuôi cấy mơi trường MS có bổ sung loại auxin 20 Bàng 3.8: Sự phát triển rề từ khúc cắt choi in vitro sau tuần ni cấy mơi trường MS có bo sung NAA nong độ 20 Bàng 3.8 Khả phát triển thành mô sẹo cùa sau tuần nuôi cấy môi trường MS có bo sung BA 0,2 mg/L NAA nong độ khác nhau, điều kiện nuôi cấy có ánh sáng tối 22 iii DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1: Cây Viễn chí nhỏ nhỏ mọc Bảo Lộc, Lâm Đồng Hình 2.1: Khúc cắt chồi nách cùa Viễn chí nhỏ nhỏ thu hái từ Bảo Lộc, Lâm Đông Thanh ngang mm Hình 2.2: Hạt Viễn chí nhỏ nhở thu hái từ Bào Lộc, Lâm Đong Thanh ngang mm Hình 3.1: Khúc cat thân mang choi in vitro sau tuần ni cấy Thanh ngang mm 12 Hình 3.2: Hạt cat đau vỏ hạt, sau ngày nuôi cấy môi trường MS,thanh ngang 0,5 mm 15 Hình 3.3: Cây mầm tuần tuổi mơi trường MS, ngang 0,5 cm 15 Hình 3.4: Cây in vitro tuần tuổi mòi trường MS, ngang cm 17 Hình 3.5: Sự phát triển chồi từ khúc cắt chồi in vitro sau tuần nuôi cấy mơi trường MS có bổ sung BA nồng độ: (A) MS; (B) 0,125 mg/L; (C) 0,25 mg/L; (D) 0,5 mg/L, ngang cm 19 Hình 3.6: Sự phát triển rề từ khúc cắt chồi in vitro sau tuần ni cấy mơi trường MS có bổ sung loại auxin: (A) MS; (B) IBA 0,25 mg/L; (C) NAA 0,25 mg/L, ngang mm 21 Hình 3.7: Sự phát triển rề từ khúc cắt chồi in vitro sau tuần ni cấy mơi trường MS có bổ sung NAA nồng độ: (A) NAA 0,125 mg/L; (B) NAA 0,25 mg/L; (C) NAA 0,5 mg/L, ngang mm 21 Hình 3.8 Sự phát sinh rề từ in vitro sau tuần nuôi cay môi trường MS có bổ sug BA 0,2 mg/L NAA nong độ, điều kiện ánh sáng (thanh ngang mm) 23 Hình 3.9 Sự phát sinh hình thái từ in vitro sau tuần ni cấy mơi trường MS có bổ sung BA 0,2 mg/L NAA nong độ điều kiện tối (thanh ngang cm) 24 iv V TÓM TẦT KẾT QUẢ NGHIÊN cứu Sản phẩm thực đạt Sản phẩm đăng ký thuyết minh Quy trình khừ trùng hạt Viền chí nhị Quy trình khử trùng Viễn chí nhị lá nhỏ nhỏ Ảnh hướng nồng độ cytokinin auxin Ành hường cũa chất điều hòa tăng trường lên phát triển chồi rễ từ khúc cắt chồi in thực vật lên phát triển chồi từ khúc cắt chồi vitro in vitro Ảnh hưởng auxin cytokinin lên Ảnh hường chất điều hịa tăng trưởng hình thành mô sẹo từ in vitro thực vật lên hình thành mơ sẹo từ in vitro Ảnh hưởng chất điều hòa tăng trường thực vật lên phát triển chồi từ mô sẹo in vitro Thòi gian đăng ký: từ 4/2017 đển 1/2018 Thòi gian nộp báo cáo: ngày 18/1/2018 vi MỞ ĐẦU Viễn chí nhỏ nhỏ lồi thực vật thường hay gặp tình Lâm Đồng Lồi thường sử dụng y học cổ truyền để trị sổ mũi, đầy hơi, dùng rễ ngâm cồn để xoa bóp chữa tê thấp nhức mỏi Ngồi ra, Viền chí nhỏ cịn có nhiều hợp chất saponin, xanthone, coumarin, flavonoid, methyl salicylate có tác dụng bào vệ te bào than kinh, kháng viêm, chống oxi hóa, an than Việc thu nhận họp chất cần phải thu hái toàn thu hái rễ, điều làm giám phân bố cùa loài Mặt khác, chù yểu phân bo Lâm Đồng, khó khăn điều kiện thu hái vận chuyển Do đó, việc ni cấy in tro để tạo lượng lớn Viền chí nhỏ việc làm cần thiết, định hướng cho ứng dụng sâu hơn, nâng cao giá trị khoa học sử dụng phổ biến ngành dược loại dược liệu Từ ứng dụng trồng điều kiện khí hậu địa lý khác nhau, thuận tiện cho việc thu hái vận chuyển Thêm vào đó, từ nghiên cứu bước đầu việc tạo mô sẹo tiền đề cho việc nuôi cấy dịch treo te bào việc thu nhận họp chất thứ cấp methyl salicylate, xanthone, coumarin, Xuất phát từ lý trên, tác già thực đe tài “Bước đầu ni cay Viền chí nhỏ nhở (Polygala paniculata L.) điều kiện in vitro CHƯƠNG TÓNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan Viễn chí nhỏ nhỏ Viễn chí nhỏ nhỏ hay cịn gọi Cây dầu nóng, Kích nhũ chùm tụ tán thuộc giới Plantae, ngành Angiospermatophyta, lóp Magnoliopsida, Fabales, họ Polygalaceae, chi Polygala, có tên khoa học Polygala paniculata L Viễn chí nhỏ nhở năm, mọc thẳng đứng, phân nhánh, cao đến 40 cm, có hóa gồ gốc Rễ có mùi methyl salicylate Thân có tiết diện trịn, có lơng tiết Lá mọc so le, thn dài, kích thước - 20 X 1-4 mm, cuống ngắn, nhọn, bìa phiến cong xuống phía dưới, khơng có lơng, 4-5 gàn gốc có cách xếp giống mọc vòng Kiểu cụm hoa chùm đầu cành nách lá, kích thước cụm hoa dài - 10 cm Lá bắc rụng sớm Hoa thường có màu trang hồng tía, kích thước 1,5-2 mm Hoa có đài cánh hoa, thn dài Nhị: nhị, rời Bầu nỗn: có nỗn, vịi nhụy thang, đính đinh bầu, bầu nhụy hình bầu dục, đầu vịi nhụy có túm lơng Quả nang, hình bầu dục, kích thước dài khoảng mm [23] Cây Viền chí nhị thường mọc ven đường đất hoang vùng Đà Lat, Lạc Dương, Di Linh, Bảo Lộc tỉnh Lâm Đơng [1], [2] Cây Viễn chí nhỏ nhỏ có chứa họp chất saponin, xanthone, coumarin, flavonoid, rề có methyl salicylate [15] Trong y học cổ truyền, Viễn chí nhỏ sử dụng để trị sổ mũi, chữa đầy hơi, dùng rễ ngâm cồn tinh dầu pha cồn để xoa bóp chữa tê thấp, nhức mỏi [1] Hình 1.1: Cây Viên chí nhỏ nhỏ mọc Bảo Lộc, Lâm Đông ... DÀNH CHO CÁN Bộ - GIẢNG VIÊN 2016 - 2017 Tên đề tài: BƯỚC ĐẦU NUÔI CẤY CÂY VIỄN CHÍ LÁ NHỎ LÁ NHỎ (POLYGALA PANICƯLATA L.) TRONG ĐIỀU KIỆN IN VITRO Số hợp đồng : 2017.01.35 Chủ nhiệm đề tài: Lê... coumarin, Xuất phát từ lý trên, tác già thực đe tài ? ?Bước đầu ni cay Viền chí nhỏ nhở (Polygala paniculata L.) điều kiện in vitro CHƯƠNG TÓNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan Viễn chí nhỏ nhỏ Viễn chí. .. nhau, điều kiện ni cấy có ánh sáng tối 22 iii DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1: Cây Viễn chí nhỏ nhỏ mọc Bảo Lộc, Lâm Đồng Hình 2.1: Khúc cắt chồi nách cùa Viễn chí nhỏ nhỏ thu