Sàng lọc các chủng Streptomyces từ dược liệu, đất, nước có khả năng E.coli sinh ESBL.pdf

z o c ĐẠI HOC tTl’i z NGUYỄN TẤT THÀNH H X 'hH H X NGUYEN TAT TH ANH THỤC HỌC - THỤC HÀNH - THỤC DANH - THỤC NGHIỆP > z X X o KHOA CỒNG NGHỆ SINH HỌC !Z> Z o X •Q n Q > O X Q X O Z Z >< o Z Co Q ỉ KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP SÀNG LỌC CÁC CHỦNG Streptomyces TỪ DƯỢC LIỆU, ĐÁT, NƯỚC CÓ KHẢ NĂNG KHÁNG E.Coli SINH ESBL Q g GO >—Ị Z X ặ □ C •O’ n Hr-—< •m- Sinh viên thực : Nguyễn Thị Thanh Thủy MSSV : GVHD : ThS Nguyễn Trung Hiếu 1311523926 >” Z C ộ Q Q O' TP HCM, 2019 ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH NGUYEN TAT THANH _ _ Ạ , THỤC HỌC - THỤC HÀNH - THỤC DANH - THỤC NGHIỆP KHOA CỒNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP SÀNG LỌC CÁC CHỦNG Streptomyces TỪ DƯỢC LIỆU, ĐÁT, NƯỚC CÓ KHẢ NĂNG KHÁNG E.Coli SINH ESBL Sinh viên thực hiện: Nguyền Thị Thanh Thủy MSSV : 1311523926 GVHD : ThS Nguyền Trung Hiếu TP HCM, 2019 TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỀN TÁT THÀNH KHOA CỊNG NGHỆ SINH HỌC CỘNG HỊA XÀ HƠI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc Lập - Tự Do - Hạnh Phúc oOo - NHIỆM VỤ KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP : Nguyền Thị Thanh Thủy Họ tên MSSV: 1311523926 Lớp Chuyên ngành : Công nghệ sinh học : 13DSH02 Đầu đề luận văn: Sàng lọc chủng streptoniyces từ dược liệu, đất, nước có khả kháng E coli sinh ESBL Mục tiêu - Sàng lọc chủng Streptomyces từ dược liệu, đất, nước có khả kháng E coli sinh ESBL Nội dung: - Xác định chủng E coli sinh ESBL - Phân lập chủng Streptomyces từ thực vật, đất nước - Khảo sát tính kháng E coli sinh ESBL chủng Streptomyces phân lập - Khảo sát hoạt tính kháng số vi khuẩn khác chủng Streptomyces SS435 Thời gian thực hiện: tháng 02/2019 đến tháng 8/2019 Người hướng dần chính: ThS Nguyền Trung Hiếu Nội dung yêu cầu KLTN thông qua Bộ môn TP HCM, ngày thảng năm 20 Bộ MÔN (Ký ghi rõ họ tên) CÁN Bộ HƯỚNG DẲN (Ký ghi rõ họ tên) LỜI CẢM ƠN Trên hết, xin chân thành biết ơn sâu sắc đến Thạc Sĩ Nguyễn Trung Hiếu người tận tình hướng dẫn, động viên, giúp đờ tơi suốt thời gian làm đề tài; với tất tinh thần tình thương trách nhiệm thầy giúp tơi hồn thành luận văn, bên cạnh tơi học hỏi nhiều kiến thức quý báu nơi thầy phương pháp nghiên cứu khoa học Tôi chân thành cám ơn thầy cô khoa Công Nghệ Sinh Học Trường Đại Học Nguyễn Tất Thành, tận tình giúp đờ thời gian thực đề tài luận văn giúp đỡ, động viên tạo điều kiện thuận lợi suốt thời gian làm đề tài Cảm ơn Thầy Tiến Sĩ Nguyễn Hoàng Chương bạn bè phịng thí nghiệm Trung tâm Nghiên cứu ứng dụng Sinh học nhiệt tình giúp đỡ cho tôi, dạy tôi, làm việc mệt bận vui sè hành trang đường tương lai tiếp tục nghiên cứu tìm tịi thêm nhiều chủng Streptomyces Tơi xin chân thành cảm ơn! (Sinh viên ký tên) Nguyễn Thị Thanh Thủy Khoa Công nghệ Sinh học Trường Đại Học Nguyễn Tất Thành MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii TÓM TẮT iv SUMMARY V DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH vi DANH MỤC BẢNG BIÊU vii ĐẶT VÁN ĐÈ ix CHƯƠNG TÒNG QUAN TÀI LIỆU .1 1.1 Tong quan xạ khuẩn 1.1.1 Sơ lược xạ khuẩn 1.1.2 Phân loại 1.1.3 Đặc điểm hình thái 1.1.3.1 Khuẩn lạc 1.1.3.2 Khuẩn ty 1.1.3.3 Bào tử 1.1.4 Khả sinh chất kháng sinh cùa xạ khuẩn 1.1.4.1 Khái niệm chất kháng sinh 1.1.4.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến sinh tổng hợp chất kháng sinh 1.1.5 1.1.5.1 Tình hình nghiên cứu, sản xuất, ứng dụng xạ khuẩn giới 1.1.5.2 Tình hình nghiên cứu, sản xuất, ứng dụng xạ khuẩn nước 1.1.6 1.2 Tình hình nghiên cứu, sản xuất ứng dụng xạ khuẩn Phương pháp phân lập xạ khuẩn Tình hình nghiên cứu vi khuẩn E colỉ sinh ESBL 1.2.1 Tình hình nghiên cứu vi khuẩn E coỉỉ sinh ESBL giới 1.2.2 Tình hình nghiên cứu vi khuấn E coli sinh ESBL Việt Nam 10 CHƯƠNG 2: NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỬƯ 12 2.1 Nơi thực 12 2.2 Nội dung nghiên cứu 12 2.2.1 Nội dung nghiên cứu 12 2.2.2 Vật liệu nghiên cứu 12 ii 2.3 2.2.2.1 Nguyên liệu phân lập Streptomyces 12 2.2.2.2 Vi sinh vật kiểm định 12 Dụng cụ, hóa chất, thiết bị 13 2.3.1 Dụng cụ 13 2.3.2 Hóa chất 13 2.3.3 Thiết bị 13 2.4 Phương pháp nghiên cứu 14 2.4.1 Phân lập xạ khuân 14 2.4.1.1 Phân lập xạ khuẩn từ mầu thực vật 14 2.4.1.2 Phân lập xạ khuân từ mầu đất 15 2.4.1.3 Phân lập xạ khuẩn từ mầu nước 15 2.4.2 Bảo quản chủng xạ khuấn 15 2.4.3 Sàng lọc xạ khuẩn sinh chất kháng khuẩn 16 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 17 3.1 Ket sàng lọc chủng E coli sinh ESBL 17 3.2 Ket phân lập xạ khuấn từ đất, nước, cát dược liệu tự nhiên 18 3.3 Ket khảo sát hoạt tính kháng Escherichia coli sinh ESBL chủng xạ khuẩn phân lập 19 3.4 Ket khảo sát khả kháng cùa xạ khuan SS435 với số chủng vi khuẩn khác 21 KÉT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 24 TÀI LIỆU THAM KHAO PHỤ LỤC iii TÓM TẤT E coỉi sinh ESBL gây bệnh tăng lên cách nhanh chóng nhiều nơi giới, đặc biệt nước thuộc khu vực châu Á, đặc biệt Việt Nam tỉ lệ vi khuẩn E colỉ kháng thuốc kháng sinh thông dụng ngày tăng cao Kháng sinh nhân to chủ yếu đe kiểm soát dịch bệnh từ E coli sinh ESBL Streptomyces nhóm vi khuấn có lợi Hon 2/3 kháng sinh sử dụng có nguồn gốc từ xạ khuẩn - đặc biệt lồi thuộc chi Streptomyces Đe tài: “Sàng lọc chủng streptomyces từ dược liệu, đất, nước có khả kháng E.colì sinh ESBL” thực Trung Tâm Nghiên Cứu ứng Dụng Sinh Học từ tháng năm 2019 đến tháng năm 2019 với mục tiêu tìm chủng Streptomyces phân lập từ tự nhiên có hoạt tính kháng E coli sinh ESBL gây bệnh góp phần việc phát trien thuốc kháng sinh Đe tài gồm nội dung chính: Xác định chùng E coli sinh ESBL; Phân lập chủng Streptomyces từ thực vật, đất nước; Khảo sát tính kháng E coli sinh ESBL cùa chủng Streptomyces phân lập Khảo sát hoạt tỉnh kháng số vi khuấn khác chủng Streptomyces SS435 Những kết đạt sau tháng nghiên cứu: - Xác định chủng E coli sinh ESBL - Phân lập 65 chủng Streptomyces từ thực vật, đất nước - Khảo sát tính kháng E coli sinh ESBL 65 chủng Streptomyces phân lập có 12 chủng kháng E coli sinh ESBL Chủng Streptomyces SS435 cho kết quà vòng kháng lớn với đường kính kháng khuấn 16mm - Khảo sát hoạt tính kháng số vi khuẩn khác chủng Streptomyces SS435 IV SUMMARY ESBL-producing E coli pathogens are increasing rapidly in many parts of the world, especially in Asian countries, especially in Vietnam, the rate of E coli bacteria resistant to resistant drugs popular birth is also increasing Antibiotics are a key factor in controlling the disease from ESBL-producing E coli Streptomyces is a group of beneficial bacteria More than two-thirds of the antibiotics used today are derived from actinomycetes - especially species of the genus Streptomyces Topic: “Screening strains of streptomyces from medicinal herbs, soil, and water-resistant to ESBLproducing E coir was conducted at the Center for Biological Research and Application from February 2019 to August 2019 with goals to identify naturally isolated Streptomyces strains that are resistant to pathogenic ESBL-producing E coll and contribute to the development of new antibiotics The thesis includes the following main contents: Identifying ESBL-producing E coll strains; Isolation of strains of Streptomyces from plants, soil, and water; Survey on ESBL-producing E coir, the resistance of isolated Streptomyces strain; Survey of activity against some other bacteria of Streptomyces SS435 The results achieved after months of research: - Determination of ESBL-producing E coli strain - Isolation of 65 strains of Streptomyces from plants, soil, and water - Surveying ESBL-producing E coll resistance of 65 isolated Streptomyces strains, including 12 ESBL-resistant E coli strains Streptomyces SS435 strain showed the largest resistance round with 16mm antibacterial diameter - Investigating activity against some other bacteria of Streptomyces SS435 strain V DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH • Hình 1.1 Tỉ lệ vi khuẩn E coli sinh ESBL (báo cáo WHO 2011 - 2014) 10 Hình 1.2 Tỉ lệ đề kháng kháng sinh trực khuẩn Gram âm 10 Hình 3.1 Kết test Escherichia coli môi trường Chromagar 17 Hình 3.2 Ket test E coli với loại kháng sinh 18 Hình 3.3 Đường kính kháng khuẩn 12 chủng xạ khuẩn có biêu kháng E coli sinh ESBL 20 Hình 3.4 Hình thái xạ khuẩn (A) đường kính kháng khuẩn cùa chủng SS435 với E.coli sinh ESBL (B) 21 Hình 3.5 Khả kháng xạ khuẩn SS435 với chủng vi sinh vật kiểm định 22 VI DANH MỤC BẢNG BIÉU Bảng 3.1 Kết kháng E coli sinh ESBL 12 chủng Streptomyces phân lập 19 Bảng 3.2 Kết khảo sát phổ kháng khuẩn SS435 với chủng vi sinh vật kiểm định 23 vii ... đề luận văn: Sàng lọc chủng streptoniyces từ dược liệu, đất, nước có khả kháng E coli sinh ESBL Mục tiêu - Sàng lọc chủng Streptomyces từ dược liệu, đất, nước có khả kháng E coli sinh ESBL Nội... khuấn có lợi Hon 2/3 kháng sinh sử dụng có nguồn gốc từ xạ khuẩn - đặc biệt loài thuộc chi Streptomyces Đe tài: ? ?Sàng lọc chủng streptomyces từ dược liệu, đất, nước có khả kháng E.colì sinh ESBL”... THỤC DANH - THỤC NGHIỆP KHOA CỒNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP SÀNG LỌC CÁC CHỦNG Streptomyces TỪ DƯỢC LIỆU, ĐÁT, NƯỚC CÓ KHẢ NĂNG KHÁNG E.Coli SINH ESBL Sinh viên thực hiện: Nguyền Thị Thanh