Phân lập và xác định một số đặc điểm sinh hóa của vi khuẩn Mycoplasma pneumoniae gây bệnh viêm họng cấp tính.pdf

ĐẠI HỌC NGUYỄN TÁT THÀNH NGL YEN TAT THANH THỤC HỌC - THỤC HÀNH - THỤC DANH - THỤC NGHIỆP KHOA CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHĨA LUẬN TĨT NGHIỆP PHÂN LẶP VÀ XÁC ĐỊNH MỘT SỐ ĐẶC ĐIẺM SINH HÓA CỦA VI KHUẨN Mycoplasma pneumoniae GÂY BỆNH VIÊM HỌNG CẤP TÍNH Sinh viên thực : Trịnh Hồi Phưong Mà số sinh viên : 1511541894 Chuyên ngành : Công nghệ Sinh học Giảng viên hướng dẫn : TS Thân Văn Thái TP HCM, 2019 TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYÊN TẤT THÀNH CỘNG HỊA XÀ HƠI CHÙ NGHĨA VIỆT NAM KHOA CỊNG NGHỆ SINH HỌC Độc Lập - Tự Do - Hạnh Phúc - -oOo - NHIỆM VỤ KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP Họ tên: Trịnh Hoài Phương MSSV: 1511541894 Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Lớp: 15DSH1A Đầu đề luận văn: Phân lập xác định số đặc điểm sinh hóa vi khuẩn Mycoplasma pneumoniae gây bệnh viêm họng cấp người Mục tiêu - Phân lập vi khuẩn M pneumoniae mẫu bệnh phẩm viêm họng cấp tính - Xác định đặc tính sinh hóa vi khuẩn M pneumoniae bao gồm: thử nghiệm glucose, thử nghiệm urea thử nghiệm arginine Nội dung: - Thu thập mẫu bệnh phẩm viêm họng cấp tính bệnh viện Thống Nhất - Phân lập lựa chọn khuấn lạc có đặc điểm hình thái đặc trưng vi khuấn M pneumoniae - Thực phản ứng PCR sử dụng cặp mồi đặc hiệu với vi khuẩn M pneumoniae - Thử nghiệm phản ứng sinh hóa với vi khuân M pneumoniae: thử nghiệm glucose, thử nghiệm urea thử nghiệm arginine Thời gian thực hiện: tháng 02 - 8/2019 Người hướng dẫn chính: TS Thân Văn Thái Nội dung yêu cầu KLTN thông qua Bộ môn TP HCM, ngày thảng năm20 Bộ MÔN (Ký ghi rõ họ tên) CÁN Bộ HƯỚNG DẲN (Ký ghi rõ họ tên) LỜI CẢM ƠN Đe hoàn thành đề tài này, xin cám ơn đến cha mẹ bên cạnh ủng hộ, chăm lo, động viên, hồ trợ cho từ vật chất đến tinh thần Em xin chân thành cảm ơn đến thầy cô giảng viên khoa Công nghệ sinh học - Trường Đại học Nguyền Tất Thành, đà trực tiếp giảng dạy truyền đạt kiến thức quý báu cho em học trường Em xin gửi cám ơn sâu sắc đến thầy TS Thân Văn Thái đà tạo điều kiện tốt đe em có thời gian học tập làm khóa luận Người trực tiếp tận tình hướng dần, xem xét, chia sẻ kinh nghiệm quý báu cung cấp kiến thức cần thiết giúp đỡ em hồn thành khóa luận cách tốt Đây kinh nghiệm quý báu cho em đe bước vào môi trường làm việc sau tốt Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới thầy BS Lê Nhật Vinh, Bệnh viện Thống Nhất, Tp Hồ Chí Minh đà hồ trợ lấy mầu suốt trình thực đề tài Cùng với tập thể lóp 15DSH1B nhiệt tình giúp đỡ, động viên em nhiều điều thời gian làm đề tài Vì kiến thức thân hạn chế, trinh làm khóa luận tốt nghiệp em khó tránh khỏi sơ sót, kính mong nhận lời góp ý từ Q thầy Cuối em xin kính chúc quý thầy cô dồi sức khỏe thành công nghiệp cao quý Em xin chân thành cám ơn! Trịnh Hồi Phương Khoa Cơng nghệ Sinh học Trường Đại Học Nguyễn Tất Thành MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii TÓM TẮT iv SUMMARY V DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH vi DANH MỤC BẢNG BIỂU vii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT viii ĐẶT VẤN ĐÈ ix CHƯƠNG TÓNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Bệnh viêm họng cấp tính .1 1.1.1 Triệu chứng, tác hại cùa viêm họng cấp tính 1.1.2 Nguyên nhân gây bệnh viêm họng cấp 1.1.3 Chấn đoán phân loại bệnh viêm họng cấp tính 1.1.4 Phịng trị bệnh viêm họng cấp tính 1.2 Tổng quan M pneumoniae 1.2.1 Giới thiệu chung chủng Mycoplasma 1.2.2 Phân loại khoa học M pneumoniae 1.2.3 Đặc điểm cấu trúc .5 1.2.4 Co chế gây bệnh độc lực 1.2.5 Nguồn truyền nhiễm phương thức lây truyền 1.2.6 Dịch tề học 1.3 Phương pháp PCR 1.4 Nghiên cứu nước ii 1.4.1 Nghiên cứu nước 1.4.2 Nghiên cứu giới 10 CHƯƠNG NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 12 2.1 Nơi thực 12 2.2 Nội dung nghiên cứu 12 2.3 Phương pháp nghiên cứu 12 2.3.1 Thu mầu 12 2.3.2 Phương pháp phân lập vi khuẩn M pneumoniae 13 2.3.3 Phương pháp nhuộm Giemsa nhân vi khuấn 16 2.3.4 Phương pháp định danh phân tử M pneumoniae 16 2.3.5 Phương pháp giữ chủng 19 2.3.6 Các phương pháp test sinh hóa 19 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 24 3.1 Ket thu nhận phân lập vi khuấn từ mẫu bệnh viêm họng cấp 24 3.2 Ket xác định tác nhân gây bệnh PCR đặc hiệu 27 3.3 Kết test sinh hóa 30 3.3.1 Kết test Glucose 30 3.3.2 Kết test urea 31 3.3.3 Ket test agrinine 31 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 33 TÀI LIỆU THAM KHẢO 34 PHỤ LỤC 36 iii TÓM TẤT Mycoplasma pneumoniae (M pneumoniae) vi khuẩn gây bệnh đường hơ hấp, viêm họng cấp xem bệnh điển hình Nếu khơng chữa trị triệt đế sè gây biến chứng nghiêm trọng viêm phối, viêm màng não nặng gây tử vong cho bệnh nhân Đe tài: “Phân lập xác định số đặc điểm sinh hóa vi khuẩn Mycoplasma pneumoniae gảy bệnh viêm họng cấp tính” thực từ 02 - 8/2019 Phịng thí nghiệm Vi sinh, trường Đại học Nguyễn Tất Thành Với mục tiêu dùng kì thuật ni cấy, nhuộm Giemsa, kiểm tra phản ứng sinh hóa PCR đe phân lập nhận biết vi khuẩn Mycoplasma pneumoniae gây bệnh viêm họng cấp người Đe tài có ba nội dung: Phân lập lựa chọn vi khuẩn có đặc điểm hình thái giống mơ tả vi khuẩn M pneumoniae từ mầu bệnh phấm viêm học cấp tính Thực phản ứng PCR đặc hiệu vi khuan M pneumoniae Xác định số đặc điếm sinh hóa bao gồm thử nghiệm glucose, thử nghiệm urea, thử nghiệm arginine Những kết đạt sau tháng nghiên cứu: Thu thập 100 mầu bệnh phẩm viêm họng cấp tính bệnh viện Thống Nhất, Tp HCM Phân lập làm 97 chủng vi khuấn có đặc điểm hình thái mơ tả vi khuẩn M pneumoniae Phản ứng PCR đặc hiệu vi khuẩn M pneumoniae cho kết dương tính 28/100 (28,86%) Kiếm tra phản ứng sinh hóa thu dương tính với glucose, âm tính với urea arginine IV SUMMARY Mycoplasma pneumoniae (M pneumoniae) is a bacteria that causes communtityacquired pneumoniae (CAP) The disease causes serious complications such as pneumoniae, meningitis and death for patients Thesis title: “Isolation and biochemistry characterization of Mycoplasma pneumoniae causes acute pharyngitis” was performed between 02 - 8/2019 at Microbiology labolatory, Nguyen Tat Thanh University The M pneumoniae was identified by using culture, PCR, Giemsa, and biochemical activities Thesis contains the below contents: Isolation of the bacteria that has morphology as M pneumoniae from the acute pharyngitis samples; PCR using effective primer pair for M pneumoniae', and glucose test, urea test, and arginine test Results after months: We collected 100 acute pharyngitis samples from Thong Nhat hospital, Ho Chi Minh City Isolation of the 97 bacteria strains that provide morphology as description for M pneumoniae Results of PCR showed 28/100 (28,86 %) samples were M pneumoniae Biochemical tests showed: glucose positive, urea negative, and arginine negative V DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH • Hình 1.1 Qt vi điện tử te bào M pneumoniae Hình 1.2 Hình dạng khuẩn lạc M pneumoniae mọc môi trường thạch Hình 3.1 Quy trình ni cấy, phân lập khuẩn lạc M pneumoniae 26 Hình 3.2 Hình nhuộm Giemsa vi khuẩn M pneumoniae (vật kính 40x) 27 Hình 3.3 Biểu đồ trịn thể tỷ lệ dương tính dựa độ tuổi 28 Hình 3.4 Biếu đo trịn thể tỷ lệ dương tính dựa tiêu chí đặc trưng không đặc trưng 29 Hình 3.5 Kết diện di sản phẩm PCR phát gel agarose % 29 Hình 3.6 Ket kiếm tra Glucose sau 24 30 Hình 3.7 Ket kiếm tra Urea sau 48 31 vi DANH MỤC • BẢNG BIÉU Bảng 2.1 Thang điêm Centor Score (Modified/Mclsaac) cho Strep Pharyngitis 12 Bảng 2.2 Thành phần môi trường Nutrient Agar (NA) .13 Bảng 2.3 Thành phần môi trường Brain Heart Infusion Broth (BHI) .15 Bảng 2.4 Các thành phần phản ứng PCR 17 Bảng 2.5 Chu kì nhiệt phản ứng PCR 18 Bảng 2.6 Thành phần môi trường Kligler Iron Agar (KIA) 20 Bảng 2.7 Thành phần môi trường Arginine Dihydrolase Broth 21 Bảng 2.8 Thành phần môi trường Urea Broth 22 Bảng 3.1 Đặc điếm hình thái loại khuẩn lạc 25 Bảng 3.2 Tỷ lệ dương tính dựa tiêu chí độ tuổi 28 Bảng 3.3 Tỷ lệ dương tính dựa tiêu chí đặc trưng khơng đặc trưng 29 vii DANH MỤC CHỮ VIÉT TẮT NA : Nutrient Agar BHI : Brain Heart Infusion Broth NESID : Giám sát Dịch tễ học Bệnh truyền nhiễm Quốc gia (Nationnal Epidenmiological Surveillance of Infections Diseases) CAP : Bệnh viêm phổi mắc phải cộng đồng (Community Acquired pneumonia) ApCAP : Bệnh viêm phổi mắc phải cộng đồng mầm bệnh khơng điển hình (Community Acquired Pneumoniae caused by Atypical pathogens) PCR : Polymerase Chain Reaction PBS : Phosphate Buffered Saline TAE : Tris-acetate-EDTA MRMP : M pneumoniae kháng macrolide (Macrolide-resistant Mycoplasma pneumoniae) viii ... văn: Phân lập xác định số đặc điểm sinh hóa vi khuẩn Mycoplasma pneumoniae gây bệnh vi? ?m họng cấp người Mục tiêu - Phân lập vi khuẩn M pneumoniae mẫu bệnh phẩm vi? ?m họng cấp tính - Xác định đặc. .. sinh hóa PCR đe phân lập nhận biết vi khuẩn Mycoplasma pneumoniae gây bệnh vi? ?m họng cấp người Đe tài có ba nội dung: Phân lập lựa chọn vi khuẩn có đặc điểm hình thái giống mơ tả vi khuẩn M pneumoniae. .. biểu Vi? ?m họng khơng đặc hiệu chia thành hai loại vi? ?m họng khư trú vi? ?m họng tỏa lan Trong vi? ?m họng khư trú có hai nhóm vi? ?m họng cấp thơng thường gồm loại vi? ?m họng đỏ thông thường, vi? ?m họng