Đánh giá tác động ở mức độ phiên mã của cao phân đoạn Trâm Bầu Combretum quadrangualre Kurz lên con đường apoptosis ở tế bào ung thư gan HepG2.pdf

NTTU-NCKH-04 CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc Đơn vị chủ trì: Trường Đại học Nguyễn Tất Thành BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NCKH DÀNH CHO CÁN BỘ - GIẢNG VIÊN 2021 Tên đề tài: Đánh giá tác động ở mức độ phiên mã cao phân đoạn Trâm Bầu Combretum quadrangualre Kurz lên đường apoptosis ở tế bào ung thư gan HepG2 Số hợp đồng: 2021.01.37 Chủ nhiệm đề tài: Nguyễn Thị Phương Đơn vị công tác: Viện kỹ thuật công nghệ cao NTT- Đại học Nguyễn Tất Thành Thời gian thực hiện: tháng TP Hồ Chí Minh, ngày tháng 10 năm 2020 CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc - Đơn vị chủ trì: Trường Đại học Nguyễn Tất Thành BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NCKH DÀNH CHO CÁN BỘ - GIẢNG VIÊN 2021 Tên đề tài: Đánh giá tác động ở mức độ phiên mã cao phân đoạn Trâm Bầu Combretum quadrangualre Kurz lên đường apoptosis ở tế bào ung thư gan HepG2 Số hợp đồng: 2021.01.37 Chủ nhiệm đề tài: Nguyễn Thị Phương Đơn vị công tác: Viện kỹ thuật công nghệ cao NTT- Đại học Nguyễn Tất Thành Thời gian thực hiện: tháng Các thành viên phối hợp cộng tác: STT Họ tên Chuyên ngành Cơ quan công tác Ký tên MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Sơ lược tình hình ung thư 1.2 Giới thiệu Trâm Bầu 1.3 Tình hình nghiên cứu hoạt tính kháng ung thư từ Trâm Bầu 1.4 Quá trình apoptosis ung thư 1.5 Survivin 10 2.1 Vật liệu nghiên cứu 15 2.2 Phương pháp nghiên cứu 15 2.2.1 Phân đoạn cao chiết từ Trâm Bầu 15 2.2.2 Thử nghiệm khả gây độc tế bào ung thư gan HepG2 các cao phân đoạn 16 2.2.3 Tác động cao phân đoạn Trâm Bầu lên biểu một số gene liên quan đến quá trình apoptosis ở mức đợ phiên mã 17 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 19 3.1 Thu nhận cao phân đoạn 19 3.2 Khảo sát hoạt tính gây độc tế bào HepG2 các cao phân đoạn 19 3.2.1 Hoạt tính gây độc tế bào HepG2 các cao phân đoạn lỏng-lỏng 19 3.2.2 Hoạt tính gây độc tế bào HepG2 các cao phân đoạn P 20 3.3 Ảnh hưởng cao phân đoạn P12 lên mức độ biểu mRNA ở tế bào HepG2 22 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 25 ii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Tên viết tắt Tên đầy đủ DMEM : Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium DMSO : Dimethyl sulfoxide ((CH3)2SO) DOX : Doxorubicin EtOH : Ethanol FBS : Huyết thai bị IC50 : Nồng đợ ức chế 50% đối tượng thử - Inhibitory concentration 50% MTT : [3 - (4,5 - dimethylthiazol - - yl) - 2,5 - diphenyl tetrazolium bromid] PBS : Phosphate buffered saline SD : Độ lệch chuẩn - Standard Deviation SDS : Dodecyl sulfate sodium WHO : Tổ chức Y tế Thế giới - World Health Organization iii DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ, HÌNH ẢNH Hình 1.1 Bản đồ biểu diễn ước tính số lượng ca mắc ung thư toàn thế giới năm 2012 Hình 1.2 Số lượng người tử vong ung thư thế giới năm 2016 Hình 1.3 Hình chụp lá và quả Trâm Bầu Hình 1.4 Cấu trúc chức protein survivin Hình 3.1 Hoạt tính gây độc tế bào HepG2 cao chiết (A) ethanol lá, rễ, hạt trâm bầu; (B) phân đoạn Ea, H, H:Ea và BuOH từ trâm bầu Hình 3.2 Hoạt tính gây độc tế bào HepG2 cao phân đoạn P (A) P1 - P4, (B) P5 – P8, (C) P9 – P11 (D) P12 – PAX1 Hình 3.3 Tác động cao phân đoạn P12 lên mức độ biểu gene caspase 3, và tế bào HepG2 Hình 3.3 Tác đợng cao phân đoạn P12 lên mức độ biểu gene survivin tế bào HepG2 iv DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU Bảng 3.1 Giá trị IC50 cao chiết ethanol từ lá, rễ, hạt cao chiết Ea, H, H:Ea và BuOH dòng tế bào HepG2 Bảng 3.2 IC50 IC90 các cao phân đoạn P (P1 – PAX1) dòng tế bào HepG2 v TÓM TẮT KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU STT Kết quà đạt Công việc thực Thu nhận cao phân đoạn từ lá Thu nhận cao phân đoạn từ lá Trâm Bầu Combretum Trâm Bầu quadrangulare Thử nghiệm hoạt tính gây độc tế IC50 các cao phân đoạn Trâm Bầu bào ung thư gan HepG2 từ các dòng tế bào HepG2 cao phân đoạn từ lá Trâm Bầu Combretum quadrangulare Ảnh hưởng cao phân đoạn Mức độ biểu tương đối các Trâm Bầu lên biểu gene liên gene quan đến apoptosis liên quan đến quá trình apoptosis caspase 3, 8, và survivin tế bào ung thư gan HepG2 xử lý với cao phân đoạn Trâm Bầu STT Sản phẩm đạt Sản phẩm đã đăng ký 01 bài báo đăng Tạp chí khoa 01 bài báo đăng Tạp chí khoa học cơng nghệ đại học Ngũn học công nghệ đại học Nguyễn Tất Tất Thành Thành Thời gian thực hiện: 01/2021 – 06/2021 Thời gian nộp báo cáo: 10/07/2021 vi MỞ ĐẦU Hiện nay, ung thư là một bệnh với số ca mắc bệnh tỷ lệ tử vong cao thế giới ở Việt Nam Trong đó, ung thư gan đứng thứ ba số lượng các ca mắc và tỉ lệ tử vong Ung thư là tên gọi chung bệnh liên quan đến việc phân chia tế bào mợt cách vơ tổ chức có khả lan truyền sang mô xung quanh Một các chế dẫn đến tạo thành tế bào ung thư là quá trình tích lũy các đợt biến và đào thoát khỏi trình apoptosis tế bào Apoptosis trình chết theo chương trình tế bào kiểm soát chặt chẽ Ức chế apoptosis dẫn đến trình tạo thành khối u cho phép tích lũy đợt biến nhằm kích hoạt q trình chủn dạng tế bào mơ bình thường Các nhân tố chính điều hịa q trình apoptosis protein tḥc họ Bcl-2 họ protein ức chế apoptosis (IAP - inhibitors of apoptosis) đó có survivin Survivin coi là một dấu chỉ tiềm cho liệu pháp phân tử chẩn đoán và điều trị ung thư Các nghiên cứu survivin đã chứng minh nếu tăng biểu vượt mức survivin làm tăng quá trình sinh ung thơng qua các gen sinh ung (oncogen) Ngược lại, một số nghiên cứu đã chứng minh ức chế biểu gene survivin dẫn đến gây chết tế bào ung thư Nghiên cứu bệnh ung thư là vấn đề rất quan tâm tồn thế giới Có rất nhiều nghiên cứu nhằm đưa các phương pháp chẩn đoán và điều trị ung thư Tuy nhiên, ung thư còn là vấn đề nan giải y học chưa tìm hợp chất hay phương pháp chữa trị hữu hiệu cho tất cả loại ung thư Đã có nhiều tổ chức các viện nghiên cứu ung thư thế giới thành lập với mục đích nghiên cứu chuyên sâu tìm các phương pháp chữa trị bệnh ung thư Trong đó, các nghiên cứu hợp chất tự nhiên có hoạt tính sinh học xem hướng nghiên cứu có triển vọng Cây trâm bầu (Combretum quadrangulare) một loại phổ biến ở vùng đồng miền nam Việt Nam lại có rất nhiều cơng dụng như: khả kháng khuẩn, chống lại virus HIV, khả gây độc lên tế bào ung thư Nhiều nghiên cứu đã chỉ hợp chất tách chiết từ trâm bầu có khả gây đợc cao mợt loạt loại tế bào ung thư ung thư ruột kết tràng chuột, ung thư máu dòng lympho và ung thư gan Chính vậy, nghiên cứu khảo sát hoạt tính gây độc tế bào ung thư cao chiết từ trâm bầu và chế ảnh hưởng cao chiết lên tế bào ung thư gan (dựa gen pro-apoptotic caspase 3, và gene ức chế apoptosis survivin) rất cần thiết CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Sơ lược tình hình ung thư Ung thư là tên gọi chung bệnh liên quan đến việc phân chia tế bào một cách vơ tổ chức có khả lan truyền sang mơ xung quanh Khác với tế bào bình thường, tế bào ung thư phát triển vượt khỏi kiểm soát trở nên xâm lấn Trong tế bào bình thường trưởng thành phát triển thành tế bào chuyên biệt với chức cụ thể cịn tế bào ung thư khơng có chức Hình 1.1 Bản đồ biểu diễn ước tính số lượng ca mắc ung thư toàn thế giới năm 2012 [1] Con số ngoặc thể số ca ung thư ở khu vực địa lí khác Vào năm 2012, toàn thế giới có 14,1 triệu trường hợp mắc ung thư mới, 8,2 triệu ca tử vong, 32,6 triệu người sống sau chẩn đoán mắc ung thư (trong phạm vi năm kể từ chẩn đoán mắc bệnh) Trong đó, 57% (8 triệu) trường hợp mắc ung thư mới, 65% (5,3 triệu) ca tử vong xảy phổ biến ở khu vực phát ... độ phiên mã cao phân đoạn Trâm Bầu Combretum quadrangualre Kurz lên đường apoptosis ở tế bào ung thư gan HepG2 Số hợp đồng: 2021.01.37 Chủ nhiệm đề tài: Nguyễn Thị Phương Đơn vị công tác: ... 15 2.2.1 Phân đoạn cao chiết từ Trâm Bầu 15 2.2.2 Thư? ? nghiệm khả gây độc tế bào ung thư gan HepG2 các cao phân đoạn 16 2.2.3 Tác động cao phân đoạn Trâm Bầu lên biểu... bệnh ung thư gan cao nhất thế giới Tại Việt Nam, ung thư gan có tỷ lệ mắc bệnh hàng đầu với 25.000 ca mắc (chiếm 15,4%), kế đó là ung thư phổi (14,4%), ung thư dạ dày (10,6%), ung thư