BÀI PHÚC TRÌNH THỰC TẬP VI SINH HỌC ĐẠI CƯƠNG

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC ***  *** BÀI PHÚC TRÌNH THỰC TẬP VI SINH HỌC ĐẠI CƯƠNG MÃ HP: CS113 NHÓM: 01 (Chiều thứ 3: 8/8 – 29/8) GIẢNG VIÊN HƯỚNG DẪN: NGUYỄN THỊ LIÊN NHÓM SINH VIÊN THỰC HIỆN: LÂM THỊ CẨM DUYÊN ĐẶNG THỊ MỸ HUYỀN PHẠM ĐÌNH KHANG ĐẶNG THỊ CẨM LINH MSSV: B2107372 B2107377 B2107378 B2111154 BÀI 1: KÍNH HIỂN VI VÀ MỘT SỐ THIẾT BỊ THƯỜNG SỬ DỤNG TRONG PHỊNG THÍ NGHIỆM VI SINH VẬT HỌC I TRẢ LỜI CÂU HỎI: Thứ tự Câu hỏi Câu trả lời Vai trò dầu cèdre sử dụng vật kính Dầu cèdre có chiết xuất n=1,5 tương X100 tự thủy tinh nên tạo môi trường ĐỒNG CHIẾT XUẤT nên ánh sáng bị khúc xạ tập trung vào độ vật kính X100 nên quan sát ảnh rõ Cách bảo quản vật kính X100 sau nhỏ Do dầu cèdre dễ bị oxi hóa dầu dầu đưa ánh sáng thời gian ngắn [10 – 15 phút] kết làm vật kính X100 bị ố hỏng ln, nên vệ sinh vật kính X100 sau sử dụng để nhằm bảo quản vật kính X100 lâu dài Đầu tiên dùng giấy [giấy lau mặt] lau qua lớp dầu cèdre dính vật kính X100 Dùng tờ giấy thứ hai thấm xylol (dung mơi hữu cơ) hay hỡn hợp cồn cao độ + ether lau cho hết dầu cịn sót lại vật kính X100, Cuối dùng tờ giấy thứ ba lau lại cho dầu xylol hay cồn + ether hai loại làm tan lớp keo dán thấu kính ống kính vật kính X100 Trong vật dụng KIM LOẠI, CAO Khử trùng nhiệt khơ: thủy tinh, SU, THỦY TINH, NƯỚC CẤT, MƠI kim loại TRƯỜNG NUÔI CẤY; đem khử trùng Khử trùng nhiệt ướt: Cao su, nước loại khử trùng loại khử cất, mơi trường ni cấy trùng NHIỆT KHƠ khử trùng NHIỆT Lưu ý: Nên chọn loại cao su phù ƯỚT hợp để tránh bị nóng chảy khử trùng nhiệt ướt Tại bắt đầu khử trùng với nồi khử Vì: Nếu cịn khơng khí bên trùng nhiệt ướt phải xả hết khơng khí nồi khơng thể đạt nhiệt độ nồi ra? mà ta mong muốn Không đạt nhiệt độ đủ cao không loại bỏ hồn tồn vi sinh vật lây nhiễm vào mẫu vật thí nghiệm Vì ta nên xả hết khơng khí áp suất đạt mức thích hợp để đạt nhiệt độ mà ta mong muốn Nếu môi trường lỏng nên KHỬ Ta nên khử trùng nồi khử TRÙNG thiết bị cho thích hợp? trùng nhiệt ướt Tại sao? Vì: Nếu khử trùng mơi trường lỏng tủ khử trùng nhiệt khô, đến nhiệt độ cao nước mơi trường lỏng bốc hết gây cháy mơi trường Cịn nồi khử trùng nhiệt ướt lượng nước bốc mơi trường lỏng bão hịa, bốc ngưng tụ lại nhiêu nên không làm ảnh hưởng đến thành phần môi trường Nên ta thường dùng nồi khử trùng nhiệt ướt để khử trùng môi trường lỏng, môi trường nuôi cấy vi sinh vật hay nước tinh khiết tiệt trùng II THỰC HÀNH:  Sinh viên thực tập sử dụng kính hiển vi để quan sát vẽ hình nhóm vi sinh vật: NẤM MỐC, NẤM MEN, VI KHUẨN Hình 1.1 Vi khuẩn Hình 1.2 Nấm men Hình 1.3 Nấm mốc BÀI 2: MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY & CÁC NGUỒN VI SINH VẬT I TRẢ LỜI CÂU HỎI: Th ứ tự Câu hỏi Câu trả lời Cho biết công dụng agar mơi - Vì có lồi vi sinh vật có khả trường ni cấy Thử phân loại mơi trường phân hủy agar Vì agar khoai tây – agar thuộc loại môi trường gì? sử dụng để làm chất chống đỡ mơi trường nuôi cấy Phân loại: - Theo trạng thái vật lý: Môi trường đặc - Theo nguồn gốc vật liệu: Môi trường thiên nhiên - Theo công dụng: Môi trường Nếu môi trường khoai tây – agar khử - Không thể khử trùng môi trường trùng tủ khử trùng nhiệt khô 121°C, tủ khử trùng nhiệt khơ có khơng? Tại sao? - Vì: nhiệt độ khử trùng cao gây nước môi trường dẫn đến cháy môi trường Tại phải mở cửa, mở quạt máy Vì: Khi mở cửa mở quạt làm cho thí nghiệm lấy vi sinh vật từ khơng khí? khơng khí bị xáo trộn khiến cho vi sinh vật dễ rơi vào dĩa petri II THỰC HÀNH Sinh viên thực làm nút gòn nắp giấy sử dụng môi trường nuôi cấy vi sinh vật Hình 2.1 Nắp giấy Hình 2.2 Nút gòn Bài 3: I TRẢ LỜI CÂU HỎI Th ứ tự QUAN SÁT VI SINH VẬT Câu hỏi Câu trả lời Quan sát vẽ hình nhóm vi sinh vật mẫu giọt ép? Hình 3.1 Nấm men Hình 3.2 Nấm mốc Cho biết nhóm vi khuẩn - Nhóm vi khuẩn: có khả di chuyển thật (chuyển di chuyển thật hay động thật) di chuyển tạm thời - Nhóm nấm men: di chuyển tạm thời (chuyển động (chuyển động Brown) Brown) - Nhóm nấm mốc: khơng di chuyển II THỰC HÀNH Sinh viên quan sát khuẩn lạc dĩa petri chứa môi trường đặc, mô tả vẻ khuẩn lạc: khuẩn lạc vi khuẩn – nấm men khuẩn lạc nấm mốc với đặc trưng DẠNG, ĐỘ NỔI VÀ BÌA khuẩn lạc Th ứ tự Hình ảnh Ảnh kính hiển vi Mơ tả khuẩn lạc Nấm men - Hình dạng: khơng - Độ nổi: phẳng - Dạng bìa: chia thùy - Màu sắc: trắng đục - Kích thước: + Dài 25mm26mm + Ngắn 15mm16mm - Bề mặt: trơn, bóng Nấm mốc - Hình dạng: dạng trịn - Độ nổi: Mơ - Dạng bìa: bìa sợi - Màu sắc: màu trắng, đen - Kích thước: đường kính từ 28-29mm - Bề mặt: khô, khuẩn ti xốp Bài 4: NHUỘM VI SINH VẬT I TRẢ LỜI CÂU HỎI Th ứ tự Câu hỏi Trả lời câu hỏi Nếu sau trải vi sinh vật không Nếu sau trải vi sinh vật không cố định mẫu cố định mẫu vật trước nhuộm, vật trước nhuộm thì: kết nào? - Vi sinh vật cịn sống, vi sinh vật khơng bắt màu nhuộm tốt (vi sinh vật chết bắt màu nhuộm tốt hơn) - Vi sinh vật không bám chặt vào phiến kính, bị trơi sau bước rửa nước Cho biết lợi ích việc nhuộm Nhuộm đơn nhằm làm cho mẫu vật ăn màu kép loại phẩm nhuộm để giúp ta quan sát kính hiển vi Cho biết lợi ích việc nhuộm Nhuộm kép nhằm giúp ta xác định mẫu đơn vật nghiên cứu Gram âm hay Gram dương Có kết luận vi sinh vật Tế bào vi sinh vật Gram dương: tế bào lên nhuộm phần thực hành (Gram màu tím xanh vách tế bào dày, iod dán dương hay Gram âm) crystal violet bám chặt vào vách tế bào, giai đoạn rửa cồn + aceton không tẩy Crystal violet, vách tế bào Crystal Tế bào vi sinh vật Gram âm: tế bào lên màu hồng đỏ vách tế bào mỏng hơn, Crystal violet không bám chặt vào vách tế bào, giai đoạn rửa cồn aceton tẩy Crystal violet khỏi vách tế bào, tế bào có màu hồng fuchsin II THỰC HÀNH Sinh viên thực mẫu nhuộm đơn mẫu nhuộm kép vi sinh vật ống nghiệm có sẵn Th ứ tự Hình ảnh Mơ tả - Đánh giá trải mẫu: Sau cố định mẫu ta tiến hành bước: + Nhỏ 1-2 giọt phẩm nhuộm blue methylen hay fuchsin phủ nơi cố định 30-60 giây + Rửa nước cho trôi hết 10 phẩm nhuộm + Dùng giấy thấm chậm hay hơ lửa cho khơ +Quan sát kính hiển vi Quan sát kính hiển vi, ta thấy: nấm men ăn màu phẩm nhuộm xanh methylen nên có màu xanh Hình ảnh nấm men nhuộm đơn kính hiển vi Hình ảnh nhuộm kép vi khuẩn (Gram dương) - Đánh giá trải mẫu: Sau cố định mẫu ta thực bước sau: + Nhỏ hay giọt Crystal violet cho phủ nơi cố định, để 60 giây + Rửa nước từ 2-3 giây, chậm nhẹ khô nước + Nhỏ dung dịch iod 60 giây + Rửa nước, chậm nhẹ + Rửa cồn + aceton thật nhanh để tẩy màu từ đầu đến cuối phiến kính, để giọt cồn + aceton khơng cịn giọt tím + Rửa nước vài giây, chậm nhẹ + Nhỏ Fuchsin hay Safranin từ – giọt để 60 11 giây + Rửa nước vài giây + Dùng giấy thấm chậm nhẹ hay hơ lửa cho khơ nước + Quan sát kính hiển vi Hình ảnh nhuộm kép vi khuẩn (Gram âm) Quan sát kính hiển vi, ta thấy: mẫu vi khuẩn bắt màu tím xanh mẫu vi khuẩn hồng đỏ + Mẫu vi khuẩn bắt màu tím xanh (Gram dương) + Mẫu vi khuẩn bắt màu hồng đỏ (Gram âm) BÀI 5: KỸ THUẬT GIEO CẤY (CHUYỂN) & PHÂN LẬP (TÁCH RÒNG) VI SINH VẬT I TRẢ LỜI CÂU HỎI Th ứ tự Câu hỏi Trả lời 12 Có thể định độ (rịng) vi Khơng thể xác định độ (ròng) vi sinh vật mắt khơng? sinh vật mắt thường vi sinh vật có kích thước nhỏ mà mắt thường khơng nhìn thấy Tại phân lập cần phải vẽ thành Vì tế bào rời rạc nhiều đường? phát triển thành khuẩn lạc độc lập Tại phải hơ lửa miệng ống nghiệm Vì để giết chết vi sinh vật bám trước đưa kim cấy vào bên ống lên thành ống nghiệm, để không bị nhiễm vào nghiệm? bên ống nghiệm II PHẦN THỰC HÀNH Sinh viên phân lập mẫu vi khuẩn hay nấm men: Hình 5.1: Mẫu cấy Đình Khang Hình 5.3: Mẫu cấy Cẩm Duyên Hình 5.2: Mẫu cấy Mỹ Huyền Hình 5.4: Mẫu cấy Cẩm Linh 13 BÀI 6: ĐO VÀ ĐẾM VI SINH VẬT I TRẢ LỜI CÂU HỎI Thứ tự Câu hỏi Trả lời Cho biết kích thước trung bình Kích thước trung bình tế bào nấm men là: 3-15µm tế bào nấm men vi khuẩn Kích thước trung bình tế bào vi khuẩn là: 0,5-5µm Cho biết lý khác biệt Phương pháp đếm trực tiếp tất vi sinh vật nhìn mặt số cho phương pháp đếm thấy kể sống chết, phương pháp đếm gián gián tiếp trực tiếp tiếp ta đếm đơn vị hình thành nên khuẩn lạc Do mật số phương pháp đếm trực tiếp lớn phương pháp đếm gián tiếp Cho biết công dụng thước Thước trắc vi vật kính giúp ta xác định trị số trắc vi vật kính khoảng thước trắc vi thị kính II PHẦN THỰC HÀNH Thực hành đo tế bào nấm men: Hình 6.1 Kích thước chiều ngang tế bào nấm men  Kích thước tế bao nấm men là: 2x2,5 = 5µm 14 Thực hành đếm mẫu nấm men phương pháp đếm trực tiếp kính mang vật Hình 6.2 Thị trường Hình 6.3 Thị trường 15 Hình 6.3 Thị trường Hình 6.4 Thị trường 16 Hình 6.6: thị trường  Đếm trực tiếp thị trường:      Thị trường 1: 40 tế bào Thị trường 2: 23 tế bào Thị trường 3: 62 tế bào Thị trường 4: 46 tế bào Thị trường 5: 26 tế bào  Số trung bình cộng tế bào:  Diện tích vng: 22 = 39.5 tế bào = 484 (  Diện tích thị trường: S=  Tính số tế bào 0,02 ml theo cơng thức: Số tế bào/1ml = Số trung bình cộng tế bào =13 tế bào  Vậy số tế bào đếm 0,02ml mẫu đếm 13 tế bào 17 BÀI SỰ LÊN MEN RƯỢU VÀ SỰ LÊN MEN GIẤM I TRẢ LỜI CÂU HỎI: Th ứ tự Câu hỏi Câu trả lời Nấm men lên men rượu Nấm men lên men rượu để lấy lượng cần thiết cho nhằm mục đích gì? Viết hoạt động sống chúng phản ứng lên men rượu Phản ứng lên men rượu: Glucose + nấm men 2C2H5OH + 2CO2 + 2ATP Cho biết cấu tạo Cái giấm hay giấm cấu tạo từ sợi cellulose giấm đan lại mặt nước thành màng Nó giúp cho vi khuẩn Acetobacter thu thập oxi để tồn II THỰC HÀNH: Sinh viên thực quan sát mẫu nấm men rượu vi khuẩn giấm kính hiển vi: 18 Hình 7.1 Nấm men rượu Hình 7.2 Vi khuẩn giấm Hình 7.3 Vi khuẩn Acetobacter 19 BÀI SỮA CHUA (YAOURT) I TRẢ LỜI CÂU HỎI: Th ứ tự Câu hỏi Thử xác định vi sinh vật nhìn thấy yaourt ủ 45°C thuộc nhóm nào? (nấm men, nấm mốc, vi khuẩn) vẽ hình Câu trả lời Vi sinh vật nhìn thấy thuộc nhóm vi khuẩn lactic Hình vẽ vi khuẩn lactic So sánh mật số nhóm Nhóm vi sinh vật hình que hình cầu có nhiều 45°C vi sinh vật hình que 30°C hình cầu yaourt ủ 30°C 45°C Vai trị nhóm vi Nhóm vi khuẩn lactic có vai trị chuyển hóa lactose thành khuẩn lactic lên acid lactic, làm casein sữa đông lại thành cục sữa men sữa (caseum) làm dịch sữa đơng đặc lại dễ tiêu hóa 20 ... nuôi cấy vi sinh vật hay nước tinh khiết tiệt trùng II THỰC HÀNH:  Sinh vi? ?n thực tập sử dụng kính hiển vi để quan sát vẽ hình nhóm vi sinh vật: NẤM MỐC, NẤM MEN, VI KHUẨN Hình 1.1 Vi khuẩn... nghiệm lấy vi sinh vật từ khơng khí? khơng khí bị xáo trộn khiến cho vi sinh vật dễ rơi vào dĩa petri II THỰC HÀNH Sinh vi? ?n thực làm nút gòn nắp giấy sử dụng môi trường nuôi cấy vi sinh vật Hình... - Vi sinh vật cịn sống, vi sinh vật khơng bắt màu nhuộm tốt (vi sinh vật chết bắt màu nhuộm tốt hơn) - Vi sinh vật không bám chặt vào phiến kính, bị trơi sau bước rửa nước Cho biết lợi ích vi? ??c