Nghiên cứu khoa học Vietnam Journal of Food Control vol 5, no 2, 2022 310 Xác định đồng thời ethylene oxide và 2 chloroethanol trong thực phẩm bằng sắc ký khí ghép khối phổ ba tứ cực kết hợp với chiết[.]
Nghiên cứu khoa học Xác định đồng thời ethylene oxide 2-chloroethanol thực phẩm sắc ký khí ghép khối phổ ba tứ cực kết hợp với chiết mẫu QuEChERS Dương Nguyên Nguyễn Nữ1, 2, Trương Văn Nhân1, Lê Thanh Tâm1, Nguyễn Thành Duy1, Lý Tuấn Kiệt1*, Nguyễn Văn Đơng2 Trung tâm Dịch vụ Phân tích Thí nghiệm Tp HCM, Việt Nam Trường Đại học Khoa học Tự nhiên - Đại học Quốc gia Tp HCM, Việt Nam (Ngày đến tòa soạn: 19/07/2022; Ngày chấp nhận đăng: 13/09/2022) Tóm tắt Trong nghiên cứu này, ethylene oxide (EO), chất hun trùng cho nông sản, dẫn xuất (2-chloroethanol, 2-CE), chiết làm phương pháp QuEChERS, sau định lượng thiết bị sắc ký khí ghép khối phổ ba tứ cực (GC-MS/MS) Mẫu chiết acetonitrile, làm kỹ thuật chiết pha rắn phân tán (d-SPE) gồm hỗn hợp MgSO4, PSA, C18, GCB, với thời gian chuẩn bị mẫu ngắn 20 phút Phương pháp thẩm định thành phần gói mì gia vị, dầu, vắt mì, bao bì Kết thẩm định cho thấy phương pháp có độ xác cao nồng độ khảo sát, với hiệu suất thu hồi từ 80 - 120% độ lệch chuẩn tương đối (RSD) thấp 20% Giới hạn định lượng phương pháp 0,01 mg/kg cho hai chất, hoàn toàn đáp ứng yêu cầu với giới hạn dư lượng tối đa cho phép (MRL) châu Âu (EU) cho mẫu thực phẩm ngưỡng 0,01 mg/kg Phương pháp áp dụng cho việc kiểm soát qui trình sản xuất mì gói, với 125 mẫu ngun liệu (gia vị, rau sấy, dầu, bao bì), mì gói thực phẩm khác Trong số đó, có 13 mẫu nguyên liệu phát 2-CE, mẫu gia vị phát đồng thời hai chất, chiếm tỷ lệ 11,2% Tất mẫu phát vượt ngưỡng MRL EU Từ khoá: Ethylene oxide (EO), 2-chloroethanol (2-CE), GC-MS/MS, QuEChERS, d-SPE ĐẶT VẤN ĐỀ Ethylene oxide (EO) có cơng thức hố học C2H4O, có tên IUPAC epoxyethane với tên gọi khác oxiran, dimethylene oxide, oxacyclopropane EO hợp chất hữu thường tìm thấy dạng khí khơng màu, dễ cháy nhiệt độ phòng EO sử dụng chủ yếu hai ngành cơng nghiệp là: i) cơng nghiệp sản xuất hoá chất, dùng làm chất trung gian sản xuất ethylene glycol (chất chống đông), hàng dệt, sợi polyester, bọt polyurethane, thuốc, nguyên liệu cho sản xuất nhựa Polyethylene terephthalate (PET) sản phẩm khác; ii) hun trùng, khử trùng cho thiết bị y tế, sản phẩm thực phẩm, gia vị (đặc biệt bột ớt, hành sấy, tiêu, …) Với cấu trúc dạng vòng linh hoạt, sau tiếp * Điện thoại: 0908293434 310 Email: kietlt@case.vn Vietnam Journal of Food Control - vol 5, no 2, 2022 Dương Nguyên Nguyễn Nữ, Trương Văn Nhân, Lê Thanh Tâm,…Nguyễn Văn Đông xúc với thực phẩm, hợp chất EO dễ dàng tạo thành chất chuyển hoá với có mặt phân tử nước, ion chloride bromide ethylene glycol, 2-chloroethanol (2-CE) 2-bromoetanol tương ứng Q trình xảy hun trùng suốt trình sản xuất chế biến nguyên liệu Đối với 2-CE, sản phẩm phân huỷ EO, chưa có đủ chứng đặc điểm gây ung thư 2-CE Tuy nhiên, có nhiều thí nghiệm cho thấy khả gây độc gen, mức độ phơi nhiễm phụ thuộc vào liều lượng, thời gian công việc tiếp xúc [1-2] Cục Bảo vệ Môi trường Hoa kỳ (USEPA) kết luận đặc tính EO chất gây ung thư người cao, giá trị đơn vị rủi ro hít phải (IUR) cao cơng bố × 10-3 µg/m3, IUR cao dự đoán khả gây ung thư đáng báo động môi trường, sở sử dụng tiếp xúc EO [3] Ngày nay, có nhiều phương pháp xác định EO kỹ thuật sắc ký khí khác GC-ECD, GC-FID, GC-MS, GC-MS/MS [4-6] Bên cạnh đó, việc kiểm định EO thực phẩm tiến hành dựa hai phương pháp Một phương pháp phân tích GC-MS [5] dựa chuyến hoá EO thành 2-CE, định lượng qui 2-CE, ưu điểm phương pháp khả ổn định, xác cao, thiết bị tương đối phổ biến dễ sử dụng nhược điểm tốn thời gian, điều kiện chuyển hoá phức tạp Phương pháp khác sử dụng kỹ thuật GC-MS/MS phân tích đồng thời EO 2-CE phương pháp QuEChERS EN 15662:2008 [6-8] Ưu điểm bật phương pháp xử lí mẫu đơn giản, nhanh chóng, tiết kiệm thời gian, phân tích đồng thời hai chất (EO 2CE) với độ nhạy cao Điểm đáng lưu ý sử dụng phương pháp tính ổn định, nhầm lẫn phân tách EO acetaldehyde, chất đồng phân EO Trong nghiên cứu này, tiến hành xây dựng quy trình xác định đồng thời EO 2-CE gói mì (như gia vị, dầu, vắt mì, bao bì thực phẩm) phương pháp QuEChERS kết hợp với kỹ thuật sắc ký khí ghép khối phổ ba tứ cực GC-MS/MS Phương pháp thẩm định với thông số độ hiệu suất thu hồi, độ lặp lại độ tái lập, độ phân giải acetaldehyde EO Bên cạnh đó, giới hạn định lượng phương pháp thẩm định nhằm đánh giá khả đáp ứng quy định mức giới hạn dư lượng tối đa cho phép (MRL) chung cho EO 2-CE thị trường khác (Bảng 1), thị trường châu Âu đưa tiêu chuẩn nghiêm ngặt cho tổng EO mức 0,01 mg/kg Bảng Giới hạn dư lượng tối đa cho phép (MRL) Ethylene oxide số loại thực phẩm số nước [9] Thị trường Hợp chất MRL (mg/kg) Châu Âu [10] Tổng EO 2-CE, quy theo EO 0,01* - 0,1 (tùy loại) EO Mỹ Canada [11-12] 2-CE 940 (*) Mức giới hạn 0,01 mg/kg áp dụng cho mẫu khơng có EC 396/2005 châu Âu Tạp chí Kiểm nghiệm An toàn thực phẩm - tập 5, số 2, 2022 311 Xác định đồng thời ethylene oxide 2-chloroethanol thực phẩm… ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu Các mẫu gia vị (hỗn hợp bột nêm rau sấy), dầu, vắt mì, bao bì lựa chọn để phân tích dư lượng EO 2-CE, nhằm kiểm sốt dư lượng tồn dư mì thành phẩm 125 mẫu kiểm sốt dư lượng EO 2-CE cơng ty gửi đến phịng thí nghiệm năm 2021; bao gồm 90 mẫu gia vị (chiếm 72%), 13 mẫu dầu (10,4%), 10 mẫu mì (8%), mẫu bao bì (7,2%), mẫu thực phẩm khác (chả giị tơm sấy, 2,4%) 2.2 Hóa chất, chất chuẩn, thiết bị Các hố chất loại tinh khiết dùng phân tích: acetonitrile, methanol, acetone, ethylacetate, dichloromethane, acetaldehyde, muối sodium chloride ≥ 99%, muối magie sulfate khan ≥ 99% hãng Merck, nước cất lần loại ion d-SPE (150 mg MgSO4, 50 mg C18, 50 mg PSA, 50 mg GCB) hãng CNW Chuẩn ethylene oxide (EO) ≥ 99,5% (Product No: CRM 48891, Lot No: LRA7352), chuẩn 2-choloroethanol (2-CE) ≥ 99,6% (Product No: CRM 48085, Lot No: LRAC9961) Sigma Dung dịch chuẩn gốc EO (2000 mg/L dichloromethane) 2-CE (2000 mg/L methanol) chứa ống riêng Dung dịch chuẩn trung gian hỗn hợp (gồm EO 2-CE) nồng độ 100 mg/L (Ctg1 Ctg2, tương ứng) pha từ chuẩn gốc acetonitrile Đường chuẩn hỗn hợp hai chất pha loãng từ dung dịch Ctg2 (1 mg/L) dung môi acetonitrile gồm nồng độ: 4, 10, 25, 50, 100, 200 µg/L Tất dung dịch chuẩn bảo quản nhiệt độ mát (4 - °C) Hệ sắc ký khí ghép khối phổ hai lần (GC-MS/MS, Thermo Fisher) bao gồm máy sắc kí khí Trace 1310 nối với detector khối phổ ba tứ cực TSQ 9000 vận hành chế độ ion hóa điện tử (electron ionization mode, 50 eV) EO 2-CE tách ct DB-624 (60 m ì 0,32 mm ì 1,8 àm) Các thiết bị phụ trợ gồm cân phân tích số (A&D, GH200), máy vortex (Talboys), máy lắc (IKA, KS 4000i), máy siêu âm (Elma, Elmasonic S), máy ly tâm (Hettich, Universal 320) 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Phương pháp xử lý mẫu (tham khảo có bổ sung [6]) Đồng mẫu: EO hợp chất dễ bay nên phải bảo quản mẫu điều kiện thích hợp để tránh mẫu Với mẫu dạng lỏng phải lắc, trộn kỹ trước phân tích Các mẫu dạng rắn lưu -20°C 60 phút trước đồng mẫu máy xay Chiết làm sạch: Cân khoảng g xác đến 0,1 mg; thêm mL acetonitrile/nước (95/5, v/v), vortex lắc 15 phút; ly tâm (5 phút, 7000 vòng/phút); mL dung dịch lớp làm d−SPE, vortex, ly tâm (3 phút, 7000 vòng/phút); lọc dung dịch sau ly tâm qua màng lọc PTFE 0,22 µm vào vial; bảo quản °C đến phân tích thiết bị GC-MS/MS 312 Tạp chí Kiểm nghiệm An toàn thực phẩm - tập 5, số 3, 2022 Dương Nguyên Nguyễn Nữ, Trương Văn Nhân, Lê Thanh Tâm,…Nguyễn Văn Đơng 2.3.2 Phương pháp phân tích EO 2-CE tách cột sắc ký DB-624 phát detector khối phổ hai lần theo chế độ SRM (Selected Reaction Monitoring), chi tiết trình bày Bảng Bảng Bảng Thông số cài đặt GC MS/MS dành cho phân tích EO 2-CE GC Khối phổ MS/MS - Tốc độ dòng: 1,5 mL/phút - Tốc độ quét: 7scan/ giây - Thể tích tiêm mẫu: µL, chia dịng (1:10) - Nhiệt độ transferline: 240°C - Nhiệt độ cổng tiêm: 250°C - Nhiệt độ nguồn ion: 270°C - Chương trình nhiệt độ: 45°C (giữ phút), - Chế độ ion hoá: EI tăng 15°C/phút đến 150°C/phút, tăng - Năng lượng ion hoá: 50 eV 20°C/phút đến 240°C (giữ phút) 2.3.3 Đánh giá ảnh hưởng Các mẫu trắng (vắt mì, gia vị, dầu, bao bì) sau chiết mẫu Mục 2.3.1 dung dịch mẫu trắng Dùng dung dịch để pha dung dịch chuẩn hỗn hợp 100 µg/L so sánh với dung dịch chuẩn tương ứng pha dung mơi ACN Hiệu ứng (ME) tính theo cơng thức sau: ME (%) = (As’/As) ×100 Với: As diện tích peak chuẩn pha dung mơi As’ diện tích peak chuẩn pha dung dịch chiết mẫu trắng Phương pháp đánh giá không bị ảnh hưởng ME nằm khoảng 80 - 120% [13] 2.3.4 Thẩm định phương pháp Phương pháp phân tích EO 2-CE tiến hành thẩm định theo hướng dẫn tiêu chuẩn SANTE/11945/2015 gồm thơng số khoảng tuyến tính (R2 ≥ 0,99), độ xác (thơng qua hiệu suất thu hồi khoảng 70 - 120%, độ tái lập độ lặp lại với RSD ≤ 20%), giới hạn định lượng Các mẫu dùng để thẩm định gồm vắt mì, gói gia vị, dầu, bao bì Các mẫu khơng chứa EO 2-CE dùng làm mẫu trắng, thêm chuẩn hỗn hợp nồng độ 0,01; 0,03; 0,05 mg/kg (mỗi nồng độ chuẩn bị 12 mẫu/nền, phân tích kiểm nghiệm viện ngày khác nhau) LOQ thẩm định nồng độ 0,01 thông qua hiệu suất thu hồi độ tái lập, phải thỏa tiêu chí định lượng (độ thu hồi (Recovery) khoảng 70 - 120%, RSDR nhỏ 20%) Tạp chí Kiểm nghiệm An tồn thực phẩm - tập 5, số 2, 2022 313 Xác định đồng thời ethylene oxide 2-chloroethanol thực phẩm… KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1 Tối ưu thông số detector điều kiện sắc ký Nhằm tối ưu thông số MS/MS EO 2-CE, dung dịch chuẩn 1,0 ppm chất sử dụng với phần mềm AutoSRM (Thermo Sciectific) nhằm tối ưu thông số ion mẹ, ion con, lượng phân mảnh Kết trình bày Bảng Tên Ethylene oxide Ethylene oxide 2-Chloroethanol 2-Chloroethanol ∗: ion định lượng Bảng Thông số cài đặt khối phổ GC-MS/MS Thời gian lưu Ion mẹ (m/z) Ion (m/z) (phút) 4,78 44,1 14,1 4,78 44,1 29,1∗ 9,27 80,1 31,1∗ 9,27 80,1 43,1 Năng lượng phân mảnh (eV) 20 5 Trong nghiên cứu này, khó khăn việc đặt hàng, không sử dụng nội chuẩn EO-D4 2-CE-D4, nội chuẩn đồng vị tương ứng cho EO 2-CE Đối với phương pháp GC-MS/MS, việc sử dụng nội chuẩn đồng vị có hai mục đích: (1) hiệu chỉnh hệ số đáp ứng tín hiệu trường hợp xảy mát cổng tiêm GC và/hoặc q trình ion hóa detector khối phổ, dẫn đến phương trình hồi quy khơng tuyến tính; (2) hiệu chỉnh hiệu suất thu hồi trình chiết mẫu khơng hồn tồn Tuy nhiên, qua khảo sát khoảng tuyến tính (R2 > 0,99 cho hai chất) hiệu suất thu hồi (trong khoảng từ 80 - 120% cho mẫu khảo sát), chúng tơi nhận thấy phương pháp chấp nhận không sử dụng nội chuẩn đồng vị cho mục đích định lượng 3.2 Khảo sát thể tích tiêm mẫu EO hợp chất dễ bay hơi, phân tách cột sắc ký khí, xuất vùng hợp chất hữu dễ bay hơi, có diện acetonitrile Do đó, nghiên cứu kỹ thuật chia dòng (split) sử dụng để tránh tượng tạp dung mơi q nhiều vào cột phân tích Bên cạnh đó, chúng tơi tiến hành nghiên cứu thể tích tiêm khác (0,5; µL) để đảm bảo đạt yêu cầu mặt đối xứng peak, độ nhạy phương pháp Kết trình bày Hình Kết (Hình 1) cho thấy tiêm vào thể tích lớn µL, tạo thể tích dung mơi lớn nên peak bị bè rộng, kéo đuôi EO đổ đầu peak 2-CE, kết chất bị giữ lại nhiều cổng tiêm (injector) trước hóa vào đầu cột sắc kí khí Khi giảm thể tích tiêm xuống cịn 0,5 µL, độ đối xứng peak EO 2CE cải thiện đáng kể, peak đối xứng đảm bảo cho việc định lượng xác Ngồi ra, tiêm µL cịn đảm bảo độ nhạy thiết bị (diện tích EO 2-CE lớn tiêm với 0,5 µL), giới hạn phát giới hạn định lượng đáp ứng ngưỡng MRL qui định thị trường Vì kỹ thuật tiêm chia dịng (1 : 10) với thể tích tiêm µL phù hợp cho ứng dụng nghiên cứu 314 Tạp chí Kiểm nghiệm An toàn thực phẩm - tập 5, số 3, 2022 Dương Nguyên Nguyễn Nữ, Trương Văn Nhân, Lê Thanh Tâm,…Nguyễn Văn Đơng Hình Sắc ký đồ Ethylene oxide (4,77 phút) 2-Chloroehthanol (9,27 phút) dung dịch chuẩn 100 µg/L tiêm với thể tích khác nhau: 0,5 µL (màu đen), µL (màu đỏ), µL (màu xanh lá) Với nghiên cứu công bố giới, cổng tiêm mẫu PTV MMI ưu tiên sử dụng khả tiêm mẫu thể tích lớn (2 - µL) để đảm bảo độ nhạy thiết bị Tuy nhiên với kỹ thuật chiết mẫu QuEChERS, dung môi cuối để định mức ACN, dung môi hữu với thể tích giản nở lớn, có ảnh hưởng tiêu cực đến cột phân tích sợi filament Thơng thường, việc phân tích dư lượng thuốc trừ sâu kỹ thuật QuEChERS GC-MS/MS, dung dịch chiết mẫu sau thường thổi khô định mức lại ethyl acetate (dung môi phù hợp với hệ GC-MS/MS) Tuy nhiên, EO làm hợp chất dễ bay nên dung dịch chiết ACN sau thổi khô, mà phải tiêm trực tiếp vào hệ thống GC Do đó, tiêm nhiều thể tích dung dịch mẫu, làm tăng độ nhạy chất phân tích, làm giảm tuổi thọ cột phân tích sợi filament Trong nghiên cứu này, hệ sắc ký khối phổ tứ cực Thermo (TSQ 9000) với cải tiến nguồn AEI (Advanced Electron Ionization) với kỹ thuật ion hóa “mềm” 50 eV (thay 70 eV), giúp giữ lại nhiều mảnh ion mẹ cho trình phân mảnh, làm tăng độ nhạy thiết bị [14] Chính vậy, chúng tơi áp dụng kỹ thuật tiêm mẫu kỹ thuật chia dịng : 10 (thể tích tiêm µL), nhằm đẩy dung môi ACN khỏi hệ thống, đảm bảo phát EO 2-CE nồng độ 0,01 mg/kg mẫu (Hình 2) 3.3 Khảo sát khả phân tách acetaldehyde EO Acetaldehyde (AA) hợp chất hữu với công thức hoá học C2H4O, đồng phân EO, tồn phổ biến tự nhiên hay sản xuất công nghiệp Trong thực phẩm, đặc biệt mè có chứa AA hàm lượng cao, dễ hình thành nhiệt độ cao từ EO 2-CE nên gây nhầm lẫn với EO phân tích sắc ký đồ AA EO thường có chung ion mẹ ion điều kiện khối phổ hai lần (44,1 > 29,1), việc tách biệt chất cột sắc ký khí thời gian lưu điều kiện bắt buộc [6] Trong điều kiện sắc ký, khối phổ trình bày Mục 2.2.2 thông số điều kiện chạy SRM (Bảng 3), hai hợp chất AA EO tách biệt định danh chất (Hình 3) Tạp chí Kiểm nghiệm An toàn thực phẩm - tập 5, số 2, 2022 315 Xác định đồng thời ethylene oxide 2-chloroethanol thực phẩm… Hình Độ chọn lọc chuẩn acetaldehyde (4,47 phút) ethylene oxide (4,77 phút) 11/05/21 02:04:53 RT: 3.00 - 7.00 SM: 7B RT: 4.78 AA: 8401 SN: 59 100 50 NL: 6.78E3 TIC F: + c EI SRM ms2 44.100@cid5.00 [29.095-29.105] MS ICIS Spices_LOQ_01 GIA VỊ 4.89 5.10 R e l a ti v e A b u n d a n c e RT: 4.78 AA: 6110 SN: 53 100 NL: 6.19E3 TIC F: + c EI SRM ms2 44.100@cid5.00 [29.095-29.105] MS ICIS oil_loq_01 DẦU 4.92 5.14 50 RT: 4.78 AA: 8401 SN: 59 100 50 NL: 6.78E3 TIC F: + c EI SRM ms2 44.100@cid5.00 [29.095-29.105] MS ICIS noodles_loq_01 MÌ GĨI 4.89 5.10 RT: 4.79 AA: 9737 SN: 66 100 BAO BÌ THỰC PHẨM 4.92 5.19 50 3.0 NL: 5.35E3 TIC F: + c EI SRM ms2 44.100@cid5.00 [29.095-29.105] MS ICIS plastic_loq_01 3.5 4.0 4.5 5.0 Time (min) RT: 7.00 - 9.70 SM: 7B 8.93 8.98 50 RT: 9.28 AA: 1218 SN: 58 100 9.02 50 6.0 6.5 7.0 9.55 100 8.93 8.98 50 NL: 4.15E2 TIC F: + c EI SRM ms2 80.100@cid5.00 9.69 [31.095-31.105] MS 9.61 ICIS noodles_loq_01 RT: 9.26 AA: 750 SN: 58 100 7.0 NL: 5.26E2 TIC F: + c EI SRM ms2 80.100@cid5.00 [31.095-31.105] MS 9.70 ICIS oil_loq_01 RT: 9.26 AA: 857 SN: 42 50 5.5 NL: 4.15E2 TIC F: + c EI SRM ms2 80.100@cid5.00 [31.095-31.105] MS 9.61 9.69 ICIS Spices_LOQ_01 RT: 9.26 AA: 857 SN: 42 100 R e l a ti v e A b u n d a n c e d:\data_2022\ \plastic_loq_01 7.5 8.0 8.5 Time (min) 9.00 9.47 9.0 9.5 NL: 5.13E2 TIC F: + c EI SRM ms2 80.100@cid5.00 [31.095-31.105] MS ICIS plastic_loq_01 Hình Sắc ký đồ LOQ mẫu gia vị, dầu, mì gói, bao bì thêm chuẩn nồng độ 0,01 mg/kg; EO (bên trái) 2-CE (bên phải) 316 Tạp chí Kiểm nghiệm An tồn thực phẩm - tập 5, số 3, 2022 Dương Nguyên Nguyễn Nữ, Trương Văn Nhân, Lê Thanh Tâm,…Nguyễn Văn Đông 3.4 Khảo sát ảnh hưởng mẫu Tạp chất dung dịch chiết mẫu sau ảnh hưởng lớn đến việc định lượng chất phân tích Dung dịch chiết mẫu không làm để loại bỏ tạp chất gây việc nhận danh sai (đối với sắc ký thường) làm tăng, giảm cường độ tín hiệu sắc ký chất phân tích (đối với detector khối phổ), biết đến hiệu ứng (matrix effect, ME) [13] Kết đánh giá hiệu ứng tương ứng với mẫu (Mục 2.3.3) trình bày Bảng Kết tổng hợp Bảng cho thấy ME EO 2-CE nằm khoảng 80 - 120% theo tiêu chuẩn SANTE [13], cho thấy hai chất bị ảnh hưởng 04 mẫu Vì vậy, sử dụng đường chuẩn dung dịch để định lượng cho EO 2CE cho 04 loại mẫu So với dựng đường chuẩn mẫu, đường chuẩn dung môi tiện nhiều giảm thời gian chuẩn bị đường chuẩn áp dụng đường chuẩn tất Bên cạnh đó, mẫu phát hàm lượng EO 2-CE vượt khoảng đường chuẩn, ta pha lỗng mẫu dung mơi ACN, hồn tồn khơng ảnh hưởng đến kết định lượng so với việc xây dựng đường chuẩn mẫu Riêng mẫu mì, ME EO 2-CE 81,35 87,03%, tương đương với sai lệch ảnh hưởng gần 19 13% Do đó, mẫu mì phát gần điểm định lượng (8 - 12 µg/kg), cần phải xây dựng đường chuẩn dung dịch mẫu để đảm bảo kết xác Bảng Kết ME EO 2-CE mẫu khảo sát ME (%) Loại mẫu EO 2-CE Gia vị 91,17 86,50 Dầu 91,21 108,76 Mì 81,35 87,03 Bao bì 82,66 97,04 3.5 Thẩm định phương pháp 3.5.1 Đường chuẩn Đường chuẩn xây dựng chuẩn dung dịch gồm điểm, có nồng độ nằm khoảng - 200 µg/L cho phương trình hồi quy Y = 1446X - 4646 EO, Y = 78.38X + 299 2-CE (Hình 4) Hệ số tương quan (R2) 0,9998 cho hai chất, cao tiêu chuẩn 0,99 [13] Bên cạnh đó, % độ chệch điểm chuẩn nhỏ 15% chất, đáp ứng với tiêu chuẩn đường chuẩn định lượng [15] Do đó, thiết bị GC-MS/MS cho thấy khoảng tuyến tính tốt hai chất khoảng nồng độ khảo sát, phù hợp cho mục đích định lượng 3.5.2 Độ thu hồi, độ lặp lại, độ tái lập Các mẫu mì gói, gia vị, dầu, bao bì thêm chuẩn nồng độ 0,01; 0,03; 0,05 mg/kg nhằm đánh giá độ lặp lại (RSDr, n = 6, ngày), độ tái lập (RSDR, n = 12, ngày), độ thu hồi (Recovery, n = 12, ngày) Kết trình bày Bảng Tạp chí Kiểm nghiệm An tồn thực phẩm - tập 5, số 2, 2022 317 Xác định đồng thời ethylene oxide 2-chloroethanol thực phẩm… Hình Đường chuẩn (bên trái) độ chệch điểm chuẩn (bên phải) Ethylene oxide (trên) 2-Chloroethanol (dưới) pha dung môi acetonitrile nồng độ 4, 10, 25, 50, 100 200 µg/L Bảng Kết độ thu hồi, độ lặp lại độ tái lập Mẫu Mì gói Gia vị Dầu Bao bì Chất phân tích EO 2-CE EO 2-CE EO 2-CE EO 2-CE 0,01 Recovery RSDr (%) (%) Nồng độ thêm mẫu (mg/kg) 0,03 0,05 RSDR Recovery RSDr RSDR Recovery RSDr (%) (%) (%) (%) (%) (%) RSDR (%) 92,77 101,32 89,90 94,50 94,15 103,51 90,71 104,81 7,40 3,18 7,60 6,90 9,27 5,22 6,78 2,94 3,44 4,61 2,94 3,11 3,06 2,11 5,50 7,55 9,36 2,29 7,10 4,60 11,15 5,75 5,63 1,74 86,92 89,24 88,47 91,36 90,88 90,41 87,73 91,41 5,03 5,97 2,62 3,84 4,40 3,68 4,55 7,74 5,04 4,78 3,46 3,87 4,82 4,18 6,88 6,55 90,47 89,71 93,38 92,72 89,09 89,48 88,99 89,88 4,88 4,68 3,73 3,92 2,94 1,14 5,62 7,70 Ghi chú: Recovery, RSDr, RSDR tính với n 12, 6, 12 (tương ứng) Kết Bảng cho thấy phương pháp có độ chụm cao (RSDr RSDR nhỏ 20%), độ xác cao (hiệu suất thu hồi khoảng 80 - 120%) theo hướng dẫn tiêu chuẩn SANTE/11945/2015 [13] Việc phương pháp chiết mẫu QuEChERS với dung môi acetonitrile (Kow = - 0,34), phù hợp để chiết EO (Kow = - 0,3) 2-CE (Kow = 0,14) khỏi pha nước Hơn nữa, bước làm giai đoạn thổi khơ dung mơi, 318 Tạp chí Kiểm nghiệm An tồn thực phẩm - tập 5, số 3, 2022 Dương Nguyên Nguyễn Nữ, Trương Văn Nhân, Lê Thanh Tâm,…Nguyễn Văn Đông hạn chế việc giảm nồng độ EO (là chất dễ bay hơi, nhiệt độ sôi 10,4°C, áp suất bay 1,45 bar 20°C) Bên cạnh đó, nghiên cứu sử dụng hỗn hợp ACN/nước với tỷ lệ 95/5 thay 1/1 phương pháp EN 15662 Lý EO tan hoàn toàn nước Kow thấp (- 0,34) nên khó chuyển lên pha hữu tỷ lệ nước cao Các khảo sát ban đầu nhóm tỷ lệ 1/1 cho thấy hiệu suất thu hồi EO thấp, thường nhỏ 10% Chính vậy, hỗn hợp ACN/nước với tỷ lệ 95/5 (v/v) dùng làm dung môi chiết, đảm bảo cho việc hydrat hóa mẫu khơ giai đoạn chiết chuyển pha dung môi cho EO giai đoạn tách pha 3.5.3 Giới hạn định lượng (MQL) Theo SANTE/11945/2015 [13], MQL nồng độ nhỏ chất phân tích mà phương pháp định lượng với độ lặp lại, độ tái lập nhỏ 20%, hiệu suất thu hồi đạt từ 80 - 120% Ngoài ra, phương pháp có ý nghĩa MQL nhỏ giới hạn tối đa cho phép qui định tổ chức giới FAO, EU Theo kết trình bày phần 3.5.2, nồng độ 0,01 mg/kg, EO 2-CE đáp ứng qui định Vậy MQL cho hai chất 0,01 mg/kg, hoàn toàn đáp ứng yêu cầu với giới hạn dư lượng tối đa cho phép (MRL) thị trường trình bày Bảng 3.6 Kiểm sốt dư lượng EO 2-CE qui trình sản xuất mì gói Kết phân tích 125 mẫu nguyên liệu, thành phẩm mì thực phẩm khác (Bảng 6) khách hàng gửi đến Trung tâm Dịch vụ phân tích thí nghiệm thành phố Hồ Chí Minh (CASE) cho thấy có 14 mẫu nguyên liệu phát tổng ethylene oxide, chiếm tỷ lệ 88,8% (Bảng 7) Đa số mẫu phát 2-CE, có mẫu gia vị phát đồng thời 2-CE EO Điều cho thấy EO chuyển hóa hồn tồn sang 2-CE q trình bảo quản, kết tổng EO vượt ngưỡng qui định 0,01 mg/kg thị trường Châu Âu Do đó, khả cao sản phẩm mì gói sử dụng ngun liệu không đáp ứng qui định dư lượng tồn dư EO thực phẩm châu Âu Bảng Thống kê số lượng 125 mẫu theo mẫu phân tích dư lượng EO 2-CE CASE năm 2021 Nền mẫu Số lượng Gia vị 54 Phụ gia thực phẩm 18 Dầu 13 Rau sấy 10 Bao bì Nơng sản Bột mì Mì gói Thực phẩm sấy Thực phẩm khác Tổng 125 Tạp chí Kiểm nghiệm An toàn thực phẩm - tập 5, số 2, 2022 319 Xác định đồng thời ethylene oxide 2-chloroethanol thực phẩm… Bảng Kết 14 mẫu nguyên liệu phát tổng Ethylene oxide, tổng số 125 mẫu (tỷ lệ 11,2%) Đối tượng 2Ethylene Tổng Ethylene Mã mẫu mẫu Chloroethanol oxide oxide* (mg/kg) (mg/kg) (mg/kg) MM12109_00181 Rau sấy 0,987 0,539 MM12109_00182 Rau sấy 0,768 0,419 MM12109_00320 Gia vị 0,384 0,210 Gia vị 0,056 0,031 MM12109_00330 MM12109_00341 Gia vị 1,053 0,116 0,695 MM12109_00357 Dầu 0,101 0,056 Rau sấy 0,421 0,230 MM12109_00362 Thực phẩm MM12109_00363 sấy 0,065 0,036 MM12109_00364 Rau sấy 0,103 0,056 MM12109_00365 Rau sấy 0,702 0,384 MM12109_00369 Bột mì 0,042