Thẩm định quy trình phân tích đồng phân quang học Lansoprazol bằng HPLC sử dụng pha động chứa dẫn xuất Beta-Cyclodextrin

NTTU-NCKH-04 CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc Đơn vị chủ trì: Trường Đại học Nguyễn Tất Thành BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐÈ TÀI NCKH DÀNH CHO CÁN Bộ - GIẢNG VIÊN 2021 Tên đề tài: THẤM ĐỊNH QUY TRÌNH PHÂN TÍCH ĐỒNG PHÂN QUANG HỌC LANSOPRAZOL BẢNG HPLC sử DỤNG PHA ĐỘNG CHÚA DẢN XUẤT BETA-CYCLODEXTRIN Số hợp đồng: 2021.01.74 Chủ nhiệm đề tài: NGUYỄN THẢO HẠNH NGÂN Đơn vị công tác: Khoa Dược - Đại học Nguyễn Tất Thành Thời gian thực hiện: 4/2021 - 12/2021 TP Hồ Chí Minh, thảng 12 năm 2021 MỤC LỤC MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TÁT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH ẢNH MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỐNG QUAN TÀI LIỆU 10 1.1 TÓNG QUAN VÈ LANZOPRAZOL 10 1.2 ĐẠI CƯƠNG VÈ ĐỒNG PHÂN ĐỐI QUANG 13 1.3 SẮC KÝ LỎNG HIỆU NÀNG CAO Error! Bookmark not defined 1.3 PHA ĐỘNG ĐỐI QUANG TRONG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NÀNG CAO (CHIRAL ADDITIVE MOBILE PHASE) 16 1.3 MỘT só PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG DEXLANSOPRAZOL 18 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 20 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN cứu 20 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 22 2.3 PHƯƠNG PHÁP CHUẦN BỊ MẦU 25 CHƯƠNG KÉT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 26 3.1 KHAO SÁT CỘT SẮC KÝ 26 3.2 KHẢO SÁT TÁC NHÂN ĐỐI QUANG 28 3.3 KHẢO SÁT PHA ĐỘNG 31 3.4 THẦM ĐỊNH QUY TRÌNH PHÂN TÍCH .37 CHƯƠNG KÉT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 52 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIÉT TÁT Từ viết tắt Tên tiếng Anh ACN Acetonitril CE Capillary electrophoresis CM-//-CD Carboxymethyl-beta-cyclodextrin CSPs Chiral stationary phases Tên tiếng Việt Pha tĩnh bất đối Đối chiếu ĐC EMEA European Medicines Evaluation Agency FDA Food and Drug Administration HPLC High performance liquid Sắc ký lỏng hiệu cao chromatography HP-/LCD Hydroxypropyl-beta-cyclodextrin IR Infrared Phổ hồng ngoại LOD Limit of detection Giới hạn phát LOQ Limit of quantification Giới hạn định lượng M-/7-CD Methyl-beta-cyc lodextrin MeOH Methanol MS Mass spectrometry RP-HPLC Reversed phase- High performance Sắc ký lỏng hiệu cao liquid chromatography pha đảo SBE-/7-CD SKĐ Sulfo butylether- beta-cyclodextrin Sắc ký đồ DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Tính chất số pha động sắc ký lỏngError! Bookmark not defined Bảng 2.1 Danh mục chất đối chiếu 20 Bảng 2.2 Danh mục hóa chất thuốc thử 21 Bảng 2.3 Danh mục trang thiết bị 21 DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Công thức cấu tạo lansoprazol 10 Hình 1.2 Cơng thức cấu tạo dexlansoprazol 10 Hình 3.1 SKĐ khảo sát thay đoi loại cột sắc ký khác 27 Hình 3.2 Đồ thị ảnh hưởng cột sắc ký HPLC lên phân tách đồng phân lansoprazol 27 Hình 3.3 SKĐ khảo sát thay đổi tác nhân đối quang khác 29 Hình 3.4 SKĐ khảo sát thay đoi nồng độ tác nhân đối quang 30 Hình 3.5 Đồ thị ảnh hưởng nồng độ tác nhân đối quang SBE-yổ-CD lên phân tách đồng phân lansoprazol 30 Hình 3.6 SKĐ khảo sát tách đồng phân thay đổi pH pha động 32 Hình 3.7 Đồ thị ảnh hưởng pH pha động lên phân tách đồng phân lansoprazoL 32 Hình 3.8 SKĐ khảo sát tách đồng phân thay đổi nồng độ đệm NaH2PO4 33 Hình 3.9 Đồ thị ảnh hưởng nồng độ đệm NaH2PO4 lên phân tách đồng phân lansoprazol 34 Hình 3.10 SKĐ khảo sát tách đồng phân thay đối tỷ lệ pha động 35 Hình 3.11 Đồ thị ảnh hưởng tỷ lệ pha động lên phân tách đồng phân lansoprazol 36 TÓM TẮT KỂT QUẢ NGHIÊN cứu Kết quà đạt Công việc thực STT Khảo sát điều kiện phân tích đồng Điều kiện phân tích phù họp với tiêu phân quang học họp chất chí lựa chọn lansoprazol phương pháp HPLC sử dụng pha động chứa dần xuất P-cyclodextrin Thẩm định quy trình phân tích Quy trình phân tích thấm định xây dựng STT Sản phẩm đăng ký 01 quy trình phân tích đồng phân 01 quy trình phân tích đồng phân lansoprazol sử dụng pha động lansoprazol sử dụng pha động chứa chứa tác nhân đối quang tác nhân đối quang thẩm định thẩm định theo hướng dần ICH theo hướng dẫn ICH 01 báo khoa học đăng tạp 01 báo khoa học đăng tạp chí Sản phẩm đạt chí Thịi gian đăng ký : từ tháng 4/2021 đến tháng 12/2021 Thời gian nộp báo cáo: ngày 30/12/2021 MỞ ĐÀU Ngày nay, bên cạnh việc nghiên cứu tổng hợp hợp chất việc phân tách hợp chất đối quang từ hỗn hợp racemic quan tâm Các hợp chất đối quang khơng khác tính chất vật lý hóa học khác cấu trúc khơng gian dẫn đến khác biệt tác dụng sinh học Vì vậy, quan quản lý Thuốc Thực phẩm Hoa Kỳ (FDA) đà khuyến cáo việc sản xuất chế phẩm thuốc dạng đong phân riêng lẻ Với phát triển cùa phương pháp phân tích đồng phân quang học xuất không ngừng chế phẩm thuốc với dạng đồng phân riêng lẻ thị trường, địi hỏi phải có quy trình kiểm tra độ tinh khiết đồng phân thuốc thành phẩm Nhóm thuốc ức che bơm proton (PPI) sử dụng điều trị loét dày- tá tràng có nhiều thành tựu bên cạnh nhóm thuốc kháng acid, thuốc bao phủ niêm mạc dày, thuốc kháng thụ the histamin H2 kháng sinh diệt vi khuan Helicobacter pylori Nhừng năm gần đây, nhóm thuốc có hoạt chất biết đến nhiều như: omeprazol, pantoprazol, lansoprazol, rabeprazol, Nhóm thuốc ngồi định cho bệnh lt dày- tá tràng cịn có the sử dụng cho bệnh nhân mắc bệnh trào ngược dày thực quản (GERD), hội chứng Zollinger-Ellison Bên cạnh việc nghiên cứu hoạt chất mới, nhóm thuốc tập trung vào tổng hợp dạng đối quang hoạt chất có esomeprazol, dexlansoprazol, dexrabeprazol, ưu điếm liều dùng giảm, tác dụng chuyên biệt receptor, độc tính giảm so với dạng thuốc racemic Hiện nay, chế phẩm thuốc đối quang cùa nhóm PPI (esomeprazol, dexlansoprazol, dexrabeprazol) chưa sản xuất nhiều Việt Nam, thành phẩm nhập có giá thành lại đắt Với nhu cầu thị trường ngày lớn, công ty dược Việt Nam nghiên cứu sản xuất chế phẩm thuốc đối quang ke Vì vậy, cần phải xây dựng quy trình tách đồng phân đối quang hoạt chất đe từ có the kiếm độ tinh khiết đồng phân Trong nhóm thuốc PPI, lansoprazol dạng đồng phân đối quang dexlansoprazol phát minh sau nên tạp chí ngồi nước có so lượng nghiên cứu chúng Đại học Nguyễn Tất Thành hạn chế Hai phương pháp phân tích đồng phân quang học thường sử dụng phương pháp điện di mao quản (CE) phương pháp sắc kí lỏng hiệu cao (HPLC) với diem thuận lợi khó khăn khác Vì lẽ đó, với mong muốn xây dựng quy trình phân tích lansoprazol với nhiều khả ứng dụng vào thực tiền, đề tài “Thẩm định quy trình phân tích đồng phân quang học lansoprazol HPLC sử dụng pha động chứa dần xuất beta-cyclodextrin” thực với mục tiêu sau: Xây dựng quy trình phân tích đồng phân quang học lansoprazol kỳ thuật sắc ký lỏng hiệu cao Thẩm định quy trình phân tích đồng phân quang học lansoprazol kỳ thuật sắc kí lỏng hiệu cao xây dựng Đại học Nguyễn Tất Thành CHƯƠNG TÓNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TĨNG QUAN VÈ LANZOPRAZOL Lansoprazol có tên khoa học đầy đủ 2-[3-Methyl-4-(2,2,2-trifluoroethoxy)-2- pyridinyl]methylthio-lH-benzimidazole (C|6H14F3N3OS) với khối lượng phân tử 353,363 g/mol Công thức cấu tạo lansoprazol sau: Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo lansoprazol Nhận xét cấu trúc: VỊ trí nguyên tử lưu huỳnh (S) trung tâm tạo nên nhóm sulfoxid vị trí xác định nên hai đồng phân lập the (R) (S) Chúng có cơng thức phân tử cơng thức cấu tạo hồn tồn giống phân bố mặt phăng không gian lại khác nhau, dần đến khác biệt tác dụng dược lý Dexlansoprazol đồng phân (R) lansoprazol, có cơng thức cấu tạo sau: Hình 1.2 Cơng thức cấu tạo dexlansoprazol Đại học Nguyễn Tất Thành 1.1.1 Tính chất vật lý [1] Bột kết tinh màu trắng hay nâu nhạt, không mùi Dễ tan ethyl acetat, ethanol tuyệt đối, tan ether, acetonitril khơng tan hexan nước 1.1.2 Tính chất hóa học [1] Nhân thơm : Hấp thụ uv Nhóm chức este: Các phản ứng thủy phân Nhóm -NH2: Tính khử tính base Nhân dihydropyridin: Tính base tính khử 1.1.3 Tác dụng dược lý Năm 1999, lansoprazol tổng hợp lần thương mại hóa rộng rãi Lansoprazol nằm nhóm ức chế bơm proton (PPI) với chế gây bất hoạt bơm H7K - ATPase Các thuốc PPI có điếm chung bào chế dạng tiền dược base yếu hoạt tính Trong mơi trường acid tế bào thành tiết ra, PPI chuyển sang dạng có hoạt tính q trình ion hóa gồm bước sau: Bước 1: PPI proton hóa lần đầu vịng pyridin tích lũy tiếu quản chế tiết Tình trạng yếu tố quan trọng định đến khả tác dụng thuốc phụ thuộc vào nồng độ PPI máu Bước 2: Các PPI proton hóa lần vòng benzymidazol tạo thành dẫn xuất sulfonamid acid sulfenic Các phức họp ưa lưu huỳnh có tính phản ứng cao nên kết hợp với nhóm SH cùa acid amin cystein enzym để tạo nên cầu nối disulfid tương đối ốn định, trạng thái bơm H+, K7ATPase bị bất hoạt khơng cịn khả vận chuyển ion H+ Dexlansoprazol đồng phân quang học dạng (R)-lansoprazol, nghiên cứu có tác dụng dược lý hãn so với đồng phân (S)-lansoprazol tác dụng làm lành vết loét có ảnh hưởng quan trọng lên cytocrom CYP2C19 Dexlansoprazol bị chuyến hóa chậm so với đồng phân (S)-lansoprazol, thời gian tác dụng thuốc kéo dài Đại học Nguyễn Tất Thành methanol đên vạch, lăc đêu, lọc qua màng lọc Kêt thào luận PTFE 0,45 pm 3.1 Ket khảo sát - Dung dịch mẫu thử lansoprazol dung 3.1.1 Khảo sát tác nhân đối quang dịch mau thử dexlansoprazol: cân 20 viên Bảng Khăo sát tác nhân đoi quang [4],[11],[6] nang dexlansoprazol, xác định khối lượng trung bình thuốc nang Cân lượng thuốc Điều nghiền mịn tương ứng với khoảng 30 mg kiện hoạt chất, cho vào bình định mức 50 mL, Tác nhân đối quang yổ-cyclodextrin (yổ-CD) Methyl-yổ-cyclodextrin (M-yổ-CD) Hydroxylpropyl-/?-cyclodextrin thêm khoảng 35 mL methanol, siêu âm 10 phút, lắc đều, đe nguội, thêm methanol vừa đủ đến vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc PTFE 0,45 pm (HP-/?- CD) - Dung dịch mẫu placebo: chuẩn bị dung dịch mầu thử thay lượng bột thuốc lượng tá dược tương ứng mầu thử Sulfobutyl ether /?-cyclodextrin (SBE/?-CD) - Dung dịch mẫu trắng: Dung mơi hịa tan mẫu methanol /?-cyclodextrin (/?-CD) Methyl-/?-cyclodextrin (M-/?-CD) Đại học Nguyễn Tất Thành Tl.lcd uV _ T3.lcd = i= 1000000- 500000- o— LL -■ - < - > I - -J > - I - 25 Sulfobutyl ether yổ-cyclodextrin (SBE-/?Hydroxylpropyl-/?-cyclodextrin (HP-/7-CD) CD) Hình Minh họa săc kí đô khảo sát tách đông phân thay đôi tác nhân Nhận xét 3.1.2 Khảo sát nồng độ tác nhân đối quang - Điều kiện 1, 2, 3: không phân biệt đươc Bảng Khảo sát nong độ tác nhân đoi quang [4],[5],[6] dạng đồng phân Điều kiện • Nồng độ tác nhân đối quang - Điều kiện 4: hai peak đồng phân tách hoàn toàn với Rs = 1,7 Trên cột Germini NX C18 (150 X 4,6 mm; 5pm) với tác nhân khảo sát, có tác nhân sulfobutyl ethercyclodextrin phù họp đế tách đồng phân 2,5 mM SBE-yổ-CD 5,0 mM SBE-yổ-CD 7,5 mM SBE-yổ-CD 10,0 mM SBE-/7-CĐ 15,0 mM SBE-yổ-CD quang học lansoprazol Do đó, tác nhân lựa chọn sulfobutyl ether-/?-cyclodextrin Đại học Nguyễn Tất Thành SBE 5.0.led SBE-/7-CD 2,5 mM SBE-^-CD 5,0 mM SBE-/7-CD 7,5 mM SBE-yổ-CD 10,0 mM SBE-/7-CD 15,0 mM Hình Minh họa sắc ký kí đồ khảo sát tách đồng phân thay đối nồng độ tác nhân Đại học Nguyễn Tất Thành ráiTUt ttt nuxu Nhận xét chọn nồng độ SBE-/7-CD 10,0 mM để tiếp tục - Điều kiện 1, 2, 3: không phân biệt khảo sát quy trình phân tích dạng đồng phân 3.1.3 Khảo sát pH pha động - Điều kiện 4, 5: hai peak đong phân tách hoàn toàn với RS 1,8 1,9 Nồng độ sulfobutyl ether-yổ-cyclodextrin Bảng Khâo sát pH pha động [4],[5],[6] Điều pH pha động kiện (SBE-/7-CD) khảo sát tăng dần từ 2,5 mM đến 15,0 mM cho thấy khả phân tách đồng phân tăng dần Đồng thời, thời gian lưu pH = 2,5 pH = 3,0 pH = 4,0 pH = 5,0 tăng dần từ 18 phút lên 25 phút Hai peak đồng phân tách hoàn toàn tăng từ 10,0 mM lên 15,0 mM Đồng thời thấy thời gian phân tích tăng đáng kể (gần phút) xuất hiện tượng dỗng peak Vì vậy, pH = 2,5 pH = 5,0 Đại học Nguyễn Tất Thành pH = 3,0 pH = 4,0 Hình Sắc kí đồ khảo sát tách đồng phân thay đối pH pha động Nhận xét - Điều kiện 1, 2: hai peak đong phân tách Acetonitril: dung dịch đệm SBE-/7-CD (30:70) hoàn toàn với RS 1,8 1,9 - Điều kiện 3, 4: không phân biệt Acetonitril: dung dịch đệm SBE-/7-CD (25:75) dạng dồng phân pH dung dịch từ 2,2 đến 3,0 cho độ phân giải lớn 1,5 pH 4,0 pH 5,0 Acetonitril: dung dịch đệm SBE-/Í-CD (20:80) khơng có phân tách peak đồng phân Tuy nhiên, nồng độ pH 2,5 thời gian phân (15:85) tích ngan Vì vậy, tác nhân sulfobutyl ether-0-cyclodextrin với nồng độ pH 2,5 phù hợp với quy trình phân tích Acetonitril: dung dịch đệm SBE-^Ổ-CD Acetonitril: dung dịch đệm SBE-/7-CD (10:90) 3.1.4 Khảo sát ti lệ pha động Bảng Các tỷ lệ pha động khảo sát [4],[8],[9] Điều Tỉ lệ pha động kiện Đại học Nguyễn Tất Thành ACN SBE 30 70-Icd ACN SBE 25 75.led ACN: dung dịch đệm SBE-^-CD (25:75, ACN: dung dịch đệm SBE-/ACD (30:70, tt/tt) tt/tt) ACN: dung dịch đệm SBE-^-CD (20:80, ACN: dung dịch đệm SBE-yỔ-CD (15:85, tt/tt) tt/tt) ACN: dung dịch đệm SBE-yổ-CD (10:90, tt/tt) Hình Minh họa sac ký đo khão sát tách đồng phân thay đối tí lệ pha động Đại học Nguyễn Tất Thành Nhận xét - Cột sắc kí Germini NX C18 (150 mm X 4,6 - Điều kiện 1, 2: hai peak đồng phân không mm; pm) tách hoàn toàn - Pha động acetonitril - dung dịch đệm - Điều kiện 3, 4, 5: hai peak đồng phân tách NaH2PO4 10 mM có chứa 10,0 mM SBE-/T CD, pH = 2,5 (20:80, tt/tt) hoàn toàn với Rs > 1,5 Tì lệ pha động ACN: dung dịch đệm SBE-p- - Tốc độ dòng ImL/phút CD (20:80, tt/tt) có thời gian lưu ngắn - Nhiệt độ 30 °C độ phân giải hợp lí Do đó, ti lệ pha động - Thể tích tiêm mầu 10 pL lựa chọn acetonitril: dung dịch đệm - Bước sóng phát 285 nm SBE-/TCD (20:80, tt/tt) 3.2 Thẩm định phương pháp [ 10],[ 11 ] Điều kiện sắc kí lựa chọn: 3.2.1 Khảo sát tính phù họp hệ thống Bảng Ket khào sát tính phù hợp hệ thống phương pháp sữ dụng pha động chứa tác nhân SBE-//-CD mầu chuẩn lansoprazol (n = 6) Diện tích pic s Thời gian lưu Tr (mAU) (phút) (RSD < (RSD < 2%) STT DEX 69-LAN 18107072 17961092 2%) Hệ số bất đối As giải Rs 22,713 LAN 24,388 Rs>l,5 (S)- (S)DEX Độ phân 0,8 < As 10.000) 18463759 22,805 0,935 32494 18481977 22,839 0,930 32492 giá trị độ phân giải (Rs) lớn hon 1,5 hệ số 18481692 22,864 0,930 32458 đối xứng (As) nằm khoảng 0,8 - 2,0 18514936 22,604 0,934 32873 Vậy phương pháp đạt tính phù hợp hệ 18494889 22,567 0,933 32634 thống 18490172 22,492 1,017 32916 thơng số thời gian lưu (Rt) diện tích peak (S) mồi peak đồng phân có RSD < 2%; Tính đặc hiệu Đại học Nguyễn Tất Thành Tiến hành sắc kí mầu trắng, mẫu placebo, - Thời gian lưu peak mầu thử mẫu chuẩn mầu thử dexlansoprazol tưong ứng với thời gian lưu Nhận xét: - Kết cho thấy mầu trắng, mẫu placebo khơng có peak trùng với peak chất phân tích peak mẫu chuẩn dexlansoprazol - Phổ tử ngoại peak thời gian lưu peak mẫu thử giống phố tử - Mầu chuẩn lansoprazol xuất hai peak đồng phân có độ phân giải >1,5 Trong hai peak đong phân peak có thời gian lưu ngắn hon peak đong ngoại peak mầu chuẩn Độ tinh khiết cùa peak lớn 99% Hai peak hai dạng đồng phân có phố uv giống phân Vậy phương pháp có tính đặc hiệu dexlansoprazol trùng với thời gian lưu peak mẫu chuẩn dexlansoprazol Hình Sắc ký kí đồ mẫu chuẩn Hình Sắc ký kí đồ mầu chuẩn lansoprazol dexlansoprazol ứo lừ i;DA Miln »0 un Đại học Nguyễn Tất Thành Khoảng tuyến tính TT-900 18,80 20 930 27 762 864 TT-1200 24,90 20 240 37 079 068 Bảng Kết khảo sát tỉnh tuyến tính mẫu chuẩn dexlansoprazol Khối lượng Thế tích Nồng độ Diện tích STT (mg) (mL) (gg/ II1L) dexlansoprazol TT-150 3,12 20 155 561 240 TT-300 6,20 20 310 164 370 TT-600 12,50 20 615 18 463 759 Đại học Nguyễn Tất Thành Nhận xét: Phương pháp phân tích đạt độ với tỹ tỉ lệ phục hồi nằm khoảng cho phép 98 % -102 % Độ xác - Độ lặp lại Bang 10 Ket quã khảo sát độ lặp lại viên nén dexlansoprazol Diện tích Hàm lượng dexlansoprazol (%) 17588872 98,86 17582882 98,46 17590664 98,14 17591239 97,59 17586962 98,38 17580150 97,77 TB 17586795 98,20 Số lẩn Độ đủng Bảng Ket khảo sát độ viên nén dexlansoprazol (n=9) Tỷ lệ chất Lượng chuẩn dexlansoprazol Diện tích peak thêm (%) thêm (pg/mL) 481,68 80 488,58 486,85 621,97 Lượng tìm lại phục hồi (Jlg/ I11L) 14867978 15008228 14992509 18917605 Tỷ lệ (%) 483,52 99.62 488,04 100,11 487,54 99,86 614,23 101,26 RSD (%) 100 120 614,41 18773947 609,60 100,79 611,83 18778872 609,76 100,34 729,79 22398570 726,60 100,44 722,27 22300425 723,43 99,84 0,42 (n=6) Nhận xét: Phương pháp phân tích đạt độ lặp lại RSD mầu phân tích khơng q % 725,61 22260622 722,14 100,48 - Độ xác trung gian Trung bình 100,31 RSD% 0,49 Đại học Nguyễn Tất Thành Bảng 11 Ket quâ khảo sát độ xác trung gian cũa viên nén dexlansoprazol Kỹ thuật viên Kỹ thuật viên Số Diện tích Hàm lượng Diện tích dexlansoprazol (%) dexlansoprazol 17588872 97,58 18396991 97,86 17582882 97,33 18348727 97,98 17590664 97,16 18390432 97,71 17591239 96,83 18388848 98,51 17586962 97,30 18393776 97,54 17580150 96,92 18394980 97,87 TB 17586795 97,19 18385626 97,91 lần Hàm lượng (%) RSD (%) (n=6) 0,42 RSD (%) (n=12) Nhận xét: Phương pháp phân tích đạt độ xác trung gian RSD không % hai ngày thực khác phịng thí nghiệm, thiết bị phân tích thay đối người phân tích 0,30 0,39 Giới hạn phát Giới hạn phát xác định dựa vào phương pháp pha loãng nồng độ lansoprazol là: 0,50; 0,20; 0,10; 0,05; 0,025 pg/mL Hình 12 SK.Đ mẫu chuẩn Lansoprazol nồng độ 1,00 pg/mL Đại học Nguyễn Tất Thành Hình 13 SKĐ mầu chuẩn Lansoprazol nồng độ 0,50 pg/mL Hình 14 SK.Đ mẫu chuẩn Lansoprazol nồng độ 0,20 pg/mL Hình 15 SKĐ mầu chuẩn Lansoprazol nồng độ 0,10 pg/mL Hình 16 SKĐ mầu chuẩn Lansoprazol nồng độ 0,05 pg/mL tích đồng phân quang Nồng độ thấp peak đồng phân mà trình phân phát 0,10 pg/mL lansoprazol, với điều kiện sau: cột Kết luận sắc kí Germini NX C18, chiều dài 150 mm, Bằng phương pháp HPLC sử dụng pha tĩnh bất đối, tiến hành xây dựng quy học đường kính 4,6 mm, kích thước hạt pm Pha động hệ acetonitril - dung dịch Đại học Nguyễn Tất Thành đệm NaH2PO4 lOmM có chứa 10,0mM SBE- yổ-CD, pH 2,5 (20:80, tt/tt), tốc độ dòng mL/phút, nhiệt độ 30 °C, thể tích tiêm mầu 20 pL, bước sóng phát 285 nm Giới hạn phát 0,10 pg/ mL Độ lệch chuấn tương đối phương pháp nhỏ 2% Phạm vi định lượng cho hai đồng phân quang học từ 150 đến 1200 pg/ mL (n = 6) Độ phục hồi từ 98 đến 102% Phương pháp đạt yêu cầu thấm định theo hướng dần ICH (International Council for Harmonisation) Lời cảm ơn Nghiên cứu tài trợ Quĩ phát triên Khoa học Công nghệ - Đại học Nguyễn Tất Thành, mã đề tài 2020.01.090/HĐ-KHCN Đại học Nguyễn Tất Thành Tài liệu tham khảo Bộ Y Te (2017), “Lansoprazol”, Dược điển Việt Nam V, Nhà xuất Y học, Hà Nội Trương Thế Kỷ (2006), Hóa hữu cơ- Hợp chất hữu đơn chất đa chức, Nhà xuất Y học, Hà Nội Nguyền Thảo Hạnh Ngân, Lê Thị Thu Cúc (2020), "Thẩm định quy trình phân tích đồng phân quang học lansoprazol cột sắc ký Lux cellulose", Tạp chí Khoa học cơng nghệ Đại học Nguyền Tất Thành (9), 76-83 Dongmeỉ Wang, Fang Li, Zhen Jiang, Li Yu, and Xingjie Guo (2014), “Chiral Recognition Mechanisms of four p-Blockers by HPLC with Amylose Chiral Stationary Phase”, Iran J Pharm Res, 13(2), pp.449-45 Morante-Zarcero s, Sierra I (2012),’’Comparative HPLC methods for p-blockers separation using different types of chiral stationary phases in normal phase and polar organic phase elution modes”, JPharm Biomed Anal., pp.33-41 Radu Cristian Moldovan, Gabriel Som Dascal, Valentin Mire, Ede Bodoki, Radu Oprean (2015),’’Chiral separation of 16 beta blockers on immobilized polysaccharide chiral stationary phases”, Farmacia, Vol.63, pp.909-912 p, Balamurugan et al, (2015), A simple RP-HPLC method for simultaneous estimation of organic impurities and assay of dexlansoprazole, International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, 7(9), 347-352 R Ribeiro et al., (2014), "Enantioseparation of chiral pharmaceuticals in biomedical and environmental analyses: An overvew", Journal of Chromatography B Alberto Cavazzini, Luisa Pasti, Alessandro Massi, Nicola Marchetti, Francesco Dondi (2011), “Recent applications in chiral high performance liquid chromatography: A review”, Analytica Chimica Acta, 706, pp.205-222 10 ICH Harmonised tripartite guideline (2005), “Validation of analytical procedures: text and methodology”, pp.1-13 11 BP (2019), Validation of analytical procedure and chromatographic separation techniques Abstract A high performance liquid chromatographic (HPLC) method was developed for the chiral separation of lansoprazol The two enantiomers were separated on a Germini NX C18 (150 X 4.6 mm; 5pm) column The mobile phase was acetonitril - lOmM phosphate buffer pH 2.5 containing 10,0mM SBE-P-CD as background etrolyte, (20:80, tt/tt) (v/v/v) ƯV detection was at 285 nm Detection limit is 0.10 pg/ml Relative standard deviation of the method is less than 2% The quantification range is from 150 to 1200 g/ml (n = 6) Recovery is from 98 to 102% Keywords: HPLC, dexlansoprazol, chiral separation, enantiomers, cyclodextrin ... tích Quy trình phân tích thấm định xây dựng STT Sản phẩm đăng ký 01 quy trình phân tích đồng phân 01 quy trình phân tích đồng phân lansoprazol sử dụng pha động lansoprazol sử dụng pha động chứa chứa... xây dựng quy trình phân tích lansoprazol với nhiều khả ứng dụng vào thực tiền, đề tài ? ?Thẩm định quy trình phân tích đồng phân quang học lansoprazol HPLC sử dụng pha động chứa dần xuất beta-cyclodextrin? ??... kiện phân tích đồng Điều kiện phân tích phù họp với tiêu phân quang học họp chất chí lựa chọn lansoprazol phương pháp HPLC sử dụng pha động chứa dần xuất P-cyclodextrin Thẩm định quy trình phân tích