KHẢO sát hàm LƢỢNG PROGESTERONE TRONG sữa BẰNG kỹ THUẬT ELISA để CHẨN đoán MANG THAI sớm, CHẬM ĐỘNG dục HOẶC PHỐI NHIỀU lần KHÔNG đậu TRÊN bõ CHO sữa

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC  KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT HÀM LƢỢNG PROGESTERONE TRONG SỮA BẰNG KỸ THUẬT ELISA ĐỂ CHẨN ĐOÁN MANG THAI SỚM, CHẬM ĐỘNG DỤC HOẶC PHỐI NHIỀU LẦN KHÔNG ĐẬU TRÊN BÕ CHO SỮA TẠI CÔNG TY CỔ PHẦN BÕ SỮA LONG THÀNH VÀ CÁC HỘ LÂN CẬN TỈNH ĐỒNG NAI Ngành học: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Niên khóa: 2003 – 2007 Sinh viên thực hiện: ĐẶNG SỸ KHA Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 8/2007 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC NƠNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC *********************** KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT HÀM LƢỢNG PROGESTERONE TRONG SỮA BẰNG KỸ THUẬT ELISA ĐỂ CHẨN ĐOÁN MANG THAI SỚM, CHẬM ĐỘNG DỤC HOẶC PHỐI NHIỀU LẦN KHÔNG ĐẬU TRÊN BÕ CHO SỮA TẠI CÔNG TY CỔ PHẦN BÕ SỮA LONG THÀNH VÀ CÁC HỘ LÂN CẬN TỈNH ĐỒNG NAI Giáo viên hƣớng dẫn: Sinh viên thực hiện: TS DƢƠNG NGUYÊN KHANG ĐẶNG SỸ KHA BSTY LÊ THỊ THU HÀ Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 8/2007 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LỜI CẢM ƠN Trƣớc tiên xin chân thành cảm ơn công lao sinh thành, dạy bảo tất tốt đẹp mà cha mẹ dành cho để có đƣợc nhƣ ngày hơm Và với tất lịng thành, xin chân thành cảm ơn: Ban Giám hiệu trƣờng Đại Học Nơng Lâm thành phố Hồ Chí Minh, Ban chủ nhiệm Bộ Môn Công Nghệ Sinh Học, tất quý thầy cô truyền đạt kiến thức cho tơi suốt q trình học trƣờng TS Dƣơng Nguyên Khang hết lòng hƣớng dẫn, động viên giúp đỡ suốt thời gian thực tập tốt nghiệp Ban Giám đốc, nhân viên phòng kỹ thuật đội ngũ chăn nuôi Công ty cổ phần bị sữa Đồng Nai nhiệt tình giúp đỡ tơi suốt thời gian thực tập BSTY Lê Thị Thu Hà quan tâm tận tình giúp đỡ tơi suốt thời gian thực tập Các hộ gia đình huyện Long Thành, Đồng Nai nhiệt tình giúp đỡ suốt thời gian thực tập Xin bày tỏ lòng cảm ơn đến ngƣời bạn gắn bó, động viên chia sẻ khó khăn với suốt ngày tháng ngồi ghế giảng đƣờng đại học Sinh viên Đặng Sỹ Kha iii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com TÓM TẮT KHÓA LUẬN Đề tài “Khảo sát hàm lƣợng progesterone sữa kỹ thuật ELISA để chẩn đoán mang thai sớm, chậm động dục phối nhiều lần không đậu bị cho sữa Cơng ty cổ phần bị sữa Long Thành hộ lân cận tỉnh Đồng Nai” đƣợc thực từ tháng 03/2007 đến tháng 07/2007 Số liệu ghi nhận đƣợc bị sữa sinh sản bình thƣờng, bò sữa sau sinh 90 ngày trở lên mà khơng có biểu động dục phối nhiều lần khơng đậu Khảo sát 20 bị sinh sản bình thƣờng 20 bò chậm động dục phối nhiều lần không đậu, tiến hành lấy mẫu sữa xét nghiệm hàm lƣợng progesterone kỹ thuật ELISA vào ngày 0, 7, 14, 21 24 sau phối Kết xét nghiệm hàm lƣợng progesterone chẩn đốn tình trạng mang thai sớm bị kiểm tra tình trạng chậm sinh sản kết nhƣ sau:  Bò sinh sản bình thƣờng Hàm lƣợng progesterone sữa trung bình theo nhóm cao bị ngày gieo tinh 0,61 ng/ml tăng lên 2,31 ng/ml vào ngày thứ 21 Chẩn đoán mang thai 60 ngày khám qua trực tràng đạt 80%; 20% bị bị tồn hồng thể Hàm lƣợng progesterone sữa trung bình theo nhóm thấp bò ngày gieo tinh 0,34 ng/ml, tăng từ ngày đến ngày 14 lần lƣợt 0,58 1,12 ng/ml; sau giảm xuống vào ngày thứ 21 0,87 ng/ml  Bò chậm động dục phối nhiều lần không đậu Hàm lƣợng progesterone sữa trung bình theo nhóm cao bị ngày gieo tinh 0,46 ng/ml tăng lên 2,34 ng/ml vào ngày thứ 21 Chẩn đoán mang thai 60 ngày khám qua trực tràng đạt 60%; 40% bị tồn hoàng thể Hàm lƣợng progesterone sữa trung bình theo nhóm thấp bị ngày gieo tinh 0,21 ng/ml, tăng từ ngày đến ngày 14 lần lƣợt 0,61 0,87 ng/ml; sau giảm xuống vào ngày thứ 21 0,68 ng/ml Bị có buồng trứng chƣa hoạt động trở lại bị u nang noãn Tp.HCM, ngày 15 tháng 08 năm 2007 Bộ môn Công Nghệ Sinh Học iv LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com MỤC LỤC CHƢƠNG TRANG Trang tựa Lời cảm tạ iii Tóm tắt iv Mục lục .v Danh sách chữ viết tắt viii Danh sách hình ix Danh sách bảng x Chƣơng MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề…………………………………………………………………1 1.2 Mục đích yêu cầu 1.2.1 Mục đích……………………………………………………………2 1.2.2 Yêu cầu……………………………………………………… .2 Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Sơ lƣợc cơng ty cổ phần bị sữa Đồng Nai …………………………3 2.1.1 Quá trình hình thành……………………………………………….3 2.1.2 Nhiệm vụ công ty 2.1.3 Tổ chức sản xuất cấu đàn bị……………………………… 2.1.4 Phƣơng pháp chăm sóc, ni dƣỡng ……………………………………… …………………………5 2.2 Vài nét tình hình chăn ni nơng hộ …………………………8 2.2.1 Nguồn gốc đàn bò ……………………………………………….8 2.2.2 Đặc điểm đồng cỏ 2.2.3 Đặc điểm chuồng trại ……………………………………… 2.2.4 Phƣơng thức chăn ni ……………………………………… ……………………………………………….8 2.3 Sơ lƣợc giống bị sữa Holstein Friesian (HF) 2.4 Chu kỳ động dục ……………………… 10 …………………………………………………… 11 2.5 Hiện tƣợng chậm sinh chậm động dục sau sinh ……………… 14 v LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 2.5.1 Bệnh ấu trĩ (hay gọi chứng thiểu sinh dục) ……….14 2.5.2 Hiện tƣợng Free – matin 2.5.3 Buồng trứng teo giảm …………………………… 15 2.5.4 U nang buồng trứng ……………………………………………16 2.5.5 Thối hóa buồng trứng …………………………………….15 …………………………………….16 2.6 Vai trò progesterone sinh sản …………………………… 17 2.6.1 Nguồn gốc progesterone …………………………………….17 2.6.2 Bản chất, khối lƣợng phân tử, cấu trúc phân tử ………………17 2.6.3 Vận chuyển chuyển hóa progesterone tác dụng progesterone ………………………………………………………………………….18 2.6.4 Động thái progesterone chu kỳ động dục bình thƣờng, mang thai ………………………………………………………………… 19 2.6.5 Các định ứng dụng xét nghiệm progesterone sữa ………………………………………………………………………….21 2.7 Nguyên lý Kỹ thuật ELISA (Progesterone – Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay) ……………………………………………………………22 Chƣơng NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP TIẾN HÀNH 25 3.1 Thời gian địa điểm thực đề tài …………………………………25 3.1.1 Thời gian ……………………………………………………….25 3.1.2 Địa điểm ……………………………………………………….25 3.2 Đối tƣợng khảo sát ……………………………………………………… 25 3.3 Nội dung khảo sát ……………………………………………………….25 3.4 Phƣơng pháp tiến hành ……………………………………………… 25 3.4.1 Bố trí số mẫu sữa khảo sát theo nhóm máu ………………….26 3.4.2 Bố trí số mẫu sữa khảo sát theo lứa đẻ ………………….26 3.4.3 Lấy mẫu sữa ly tâm 3.4.4 Kỹ thuật ELISA ……………………………………… 27 ……………………………………………….27 3.5 Phƣơng pháp xử lý số liệu ……………………………………………….30 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 31 vi LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 4.1 Hàm lƣợng progesterone sữa bị sinh sản bình thƣờng ……………31 4.1.1 Hàm lƣợng progesterone sữa bị theo nhóm máu ………………… 34 4.1.2 Hàm lƣợng progesterone sữa bò theo lứa đẻ ………………… 36 4.2 Hàm lƣợng progesterone sữa bò chậm động dục phối nhiều lần không đậu ……………………………………………………………………….41 4.2.1 Hàm lƣợng progesterone sữa bị chậm động dục phối nhiều lần khơng đậu theo nhóm máu 50 75% HF ………………………………….43 4.2.2 Hàm lƣợng progesterone sữa bò chậm động dục phối nhiều lần không đậu theo lứa đẻ ……………………………………………………… 46 Chƣơng KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 52 5.1 Kết luận ………………………………………………………………52 5.2 Đề nghị ………………………………………………………………53 TÀI LIỆU THAM KHẢO 54 PHỤ LỤC 57 vii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT ELISA = Enzyme-linked immunosorbent assay FSH = Follicle Stimulating Hormone GnRH = Gonadotropin Releasing Hormone HF = Holstein Friesian LH = Luteinizing Hormone PGF2 = Prostaglandin F2 RIA = Radio Immuno Assay viii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH SÁCH CÁC HÌNH HÌNH TRANG Hình 2.1 Sự thay đổi hàm lƣợng kích thích tố máu chu kỳ động dục bình thƣờng bị 12 Hình 2.2 Cơ chế tiêu hồng thể PGF2 chu kỳ động dục 14 Hình 2.3 Động thái progesterone chu kỳ động dục bình thƣờng bị 20 Hình 2.4 Động thái progesterone giúp chẩn đốn sớm có thai 21 Hình 4.1 Hàm lƣợng progesterone sữa bị sinh sản bình thƣờng 32 Hình 4.2 Hàm lƣợng progesterone sữa bị theo nhóm máu 50% 34 Hình 4.3 Hàm lƣợng progesterone sữa bị theo nhóm máu 75% 35 Hình 4.4 Hàm lƣợng progesterone sữa bò theo lứa 37 Hình 4.5 Hàm lƣợng progesterone sữa bị theo lứa 38 Hình 4.6 Hàm lƣợng progesterone sữa bò theo lứa 39 Hình 4.7 Hàm lƣợng progesterone sữa bò theo lứa 40 Hình 4.8 Hàm lƣợng progesterone sữa bị chậm động dục phối nhiều lần không đậu 42 Hình 4.9 Hàm lƣợng progesterone sữa bị chậm động dục phối nhiều lần khơng đậu theo nhóm máu 50% 44 Hình 4.10 Hàm lƣợng progesterone sữa bị chậm động dục phối nhiều lần khơng đậu theo nhóm máu 75% 45 Hình 4.11 Hàm lƣợng progesterone sữa bò chậm động dục phối nhiều lần không đậu theo lứa 47 Hình 4.12 Hàm lƣợng progesterone sữa bị chậm động dục phối nhiều lần không đậu theo lứa 48 Hình 4.13 Hàm lƣợng progesterone sữa bò chậm động dục phối nhiều lần không đậu theo lứa 49 Hình 4.14 Hàm lƣợng progesterone sữa bị chậm động dục phối nhiều lần khơng đậu theo lứa 50 ix LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH SÁCH CÁC BẢNG BẢNG TRANG Bảng 2.1 Bảng cấu đàn bị cơng ty Bảng 2.2 Bảng định mức thức ăn cho đàn bò năm 2007 Bảng 3.1 Số mẫu sữa khảo sát bò sinh sản bình thƣờng 26 Bảng 3.2 Số mẫu sữa khảo sát bò chậm động dục 26 Bảng 3.3 Số mẫu sữa khảo sát theo lứa đẻ bò sinh sản bình thƣờng 26 Bảng 3.4 Số mẫu sữa khảo sát theo lứa đẻ bò chậm động dục 27 Bảng 4.1 Hàm lƣợng progesterone sữa bị sinh sản bình thƣờng 31 Bảng 4.2 Hàm lƣợng progesterone sữa bị theo nhóm máu 34 Bảng 4.3 Hàm lƣợng progesterone sữa bò theo lứa đẻ 37 Bảng 4.4 Hàm lƣợng progesterone sữa bò chậm động dục phối nhiều lần không đậu 41 Bảng 4.5 Hàm lƣợng progesterone sữa bò chậm động dục phối nhiều lần khơng đậu theo nhóm máu 43 Bảng 4.6 Hàm lƣợng progesterone sữa bị chậm động dục phối nhiều lần khơng đậu theo lứa đẻ 46 x LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Hàm lượng progesterone (ng/ml) Cao 2,76 Thấp 2,5 2,39 1,81 1,53 1,5 1,08 0,84 0,73 0,72 0,5 0,56 0,17 0 14 Ngày lấy mẫu 21 24 Hình 4.9 Hàm lƣợng progesterone sữa bị chậm động dục phối nhiều lần khơng đậu theo nhóm máu 50% Qua Bảng 4.5 Hình 4.9 cho thấy nhóm bị có hàm lƣợng progesterone cao cho hàm lƣợng progesterone trung bình vào ngày thụ tinh nhân tạo thấp 0,56 ng/ml, tăng nhanh từ ngày thứ đến ngày thứ 14 lần lƣợt 1,53 1,81 ng/ml tiếp tục tăng từ ngày thứ 21 đến ngày thứ 24 lần lƣợt 2,39 2,76 ng/ml Tỷ lệ thụ thai khám qua trực tràng nhóm bị 50% có hàm lƣợng progesterone cao đạt 50% Kết hợp với việc xác định hàm lƣợng progesterone ngày thứ 21 24 kiểm tra thai qua trực tràng cho thấy bị động dục, có rụng trứng, thể vàng hình thành tiết progesterone Ở nhóm bị có hàm lƣợng progesterone thấp có hàm lƣợng progesterone trung bình thời điểm lấy mẫu lúc gieo tinh, 7, 14, 21 v 24 ngày sau gieo tinh thấp lần lƣợt 0,17; 0,73; 1,08; 0,84 0,72 ng/ml Kết hợp với việc xác định hàm lƣợng progesterone ngày thứ 21 24 kiểm tra thai qua trực tràng cho thấy nhóm bị có rụng trứng, thể vàng hình thành tiết progesterone, song thể vàng bị tiêu biến 44 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Hàm lượng progesterone (ng/ml) Cao Thấp 2,5 2,51 2,32 1,83 1,5 1,29 0,57 0,5 0,43 0,40 0,28 0,45 0,41 0 14 Ngày lấy mẫu 21 24 Hình 4.10 Hàm lƣợng progesterone sữa bị chậm động dục phối nhiều lần khơng đậu theo nhóm máu 75% Qua Bảng 4.5 Hình 4.10 cho thấy nhóm bị có hàm lƣợng progesterone cao cho hàm lƣợng progesterone trung bình vào ngày thụ tinh nhân tạo thấp 0,40 ng/ml, tăng nhanh từ ngày thứ đến ngày thứ 14 lần lƣợt 1,29 1,83 ng/ml tiếp tục tăng từ ngày thứ 21 đến ngày thứ 24 lần lƣợt 2,32 2,51 ng/ml Tỷ lệ thụ thai khám qua trực tràng nhóm bị 50% có hàm lƣợng progesterone cao đạt 66,66% Kết hợp với việc xác định hàm lƣợng progesterone ngày thứ 21 24 kiểm tra thai qua trực tràng cho thấy nhóm bị có động dục, rụng trứng, thể vàng hình thành Ở nhóm bị có hàm lƣợng progesterone thấp có hàm lƣợng progesterone trung bình thời điểm lấy mẫu lúc gieo tinh, 7, 14, 21 24 ngày sau gieo tinh thấp lần lƣợt 0,28; 0,43; 0,57; 0,45 0,41 ng/ml Kết hợp khám qua trực tràng động thái progesterone cho thấy, nhóm bị có buồng trứng khơng rụng trứng, dẫn đến khơng vàng nên hàm lƣợng progesterone thấp Trong trƣờng hợp không rụng trứng buồng trứng chƣa hoạt động trở lại bị u nang noãn 45 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Bảng 4.5 cho thấy, tính tổng số bị khảo sát thấy bị nhóm máu 50% có tỷ lệ đậu thai 20% thấp so với bị sữa nhóm máu 75% 40% Kết khảo sát cao kết Nguyễn Thanh Linh (2006) khảo sát hàm lƣợng progesterone sữa để chẩn đoán mang thai nhóm bị chậm động dục phối nhiều lần không đậu 0% 4.2.2 Hàm lƣợng progesterone sữa bị chậm động dục phối nhiều lần khơng đậu theo lứa đẻ Khảo sát hàm lƣợng progesterone trung bình sữa qua thời điểm kiểm tra bò chậm động dục phối nhiều lần không đậu theo lứa 1, 2, 3, đƣợc trình bày Bảng 4.6 Hình 4.11, 4.12, 4.13, 4.14 Bảng 4.6 Hàm lƣợng progesterone sữa bò chậm động dục phối nhiều lần khơng đậu theo lứa đẻ Chẩn đốn Hàm lƣợng progesterone (ng/ml) ngày Hàm lƣợng Lứa progesterone mang thai 60 ngày khám n theo nhóm 0,13 1,31 14 0,19 1,62 21 0,05 2,02 24 0,02 2,23 qua trực tràng 0,13 n % 33,33 0 Cao 0,33 Thấp Cao 0,53 0,27 1,23 0,46 1,57 0,50 2,43 0,62 2,71 0,62 33,33 Thấp 0,20 0,09 0,51 0,34 0,92 0,67 0,74 0,53 0,64 0,45 0 Cao 0,66 0,03 1,86 0,02 2,22 0,33 2,44 0,28 2,92 0,13 100 Thấp 0,13 0,05 0,31 0,25 0,70 0,39 0,57 0,41 0,39 0,19 0 Cao 0,36 0,14 1,27 0,01 2,10 0,76 2,60 0,76 2,72 0,66 100 Thấp 0,33 0,27 0,86 0,12 0,91 0,05 0,66 0,22 0,63 0,21 0 0,11 0,86 0,92 0,74 0,70 46 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 2,5 Hàm lượng progesterone (ng/ml) Cao 2,23 2,02 Thấp 1,62 1,5 1,31 0,92 0,86 0,74 0,70 0,5 0,33 0,11 14 Ngày lấy mẫu 21 24 Hình 4.11 Hàm lƣợng progesterone sữa bò chậm động dục phối nhiều lần khơng đậu theo lứa Qua Bảng 4.6 Hình 4.11 cho thấy nhóm bị có hàm lƣợng progesterone cao có hàm lƣợng progesterone trung bình vào ngày thụ tinh nhân tạo thấp 0,33 ng/ml, tăng nhanh từ ngày thứ đến ngày thứ 14 lần lƣợt 1,31 1,62 ng/ml tiếp tục tăng từ ngày thứ 21 đến ngày thứ 24 lần lƣợt 2,02 2,23 ng/ml Chứng tỏ bị động dục có rụng trứng, thể vàng hình thành, tỷ lệ thụ thai đạt 33,33% Ở nhóm bị có hàm lƣợng progesterone thấp có hàm lƣợng progesterone trung bình thời điểm lấy mẫu lúc gieo tinh, 7, 14, 21 24 ngày sau gieo tinh thấp lần lƣợt 0,11; 0,86; 0,92; 0,74 0,70 ng/ml Kết hợp khám qua trực tràng động thái progesterone cho thấy, nhóm bị có buồng trứng khơng rụng trứng, dẫn đến khơng vàng nên hàm lƣợng progesterone thấp Trong trƣờng hợp khơng rụng trứng buồng trứng chƣa hoạt động trở lại bị u nang noãn 47 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Hàm lượng progesterone (ng/ml) Cao Thấp 2,5 2,71 2,43 1,57 1,5 1,23 0,92 0,5 0,74 0,51 0,53 0,64 0,20 0 14 Ngày lấy mẫu 21 24 Hình 4.12 Hàm lƣợng progesterone sữa bị chậm động dục phối nhiều lần không đậu theo lứa Qua Bảng 4.6 Hình 4.12 cho thấy nhóm bị có hàm lƣợng progesterone cao có hàm lƣợng progesterone trung bình vào ngày thụ tinh nhân tạo thấp 0,53 ng/ml, tăng nhanh từ ngày thứ đến ngày thứ 14 lần lƣợt 1,23 1,57 ng/ml tiếp tục tăng từ ngày thứ 21 đến ngày thứ 24 lần lƣợt 2,43 2,71 ng/ml Chứng tỏ bò động dục có rụng trứng, thể vàng hình thành, tỷ lệ thụ thai đạt 33,33% Ở nhóm bị có hàm lƣợng progesterone thấp có hàm lƣợng progesterone trung bình thời điểm lấy mẫu lúc gieo tinh, 7, 14, 21 24 ngày sau gieo tinh thấp lần lƣợt 0,20; 0,51; 0,92; 0,74 0,64 ng/ml Kết hợp khám qua trực tràng động thái progesterone cho thấy, nhóm bị có buồng trứng khơng rụng trứng, dẫn đến khơng vàng nên hàm lƣợng progesterone thấp Trong trƣờng hợp không rụng trứng buồng trứng chƣa hoạt động trở lại bị u nang noãn 48 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Hàm lượng progesterone (ng/ml) 3,5 Cao Thấp 2,92 2,44 2,5 2,22 1,86 1,5 0,5 0,70 0,66 0,57 0,31 0,39 0,13 0 14 Ngày lấy mẫu 21 24 Hình 4.13 Hàm lƣợng progesterone sữa bị chậm động dục phối nhiều lần khơng đậu theo lứa Qua Bảng 4.6 Hình 4.13 cho thấy nhóm bị có hàm lƣợng progesterone cao có hàm lƣợng progesterone trung bình vào ngày thụ tinh nhân tạo thấp 0,66 ng/ml, tăng nhanh từ ngày thứ đến ngày thứ 14 lần lƣợt 1,86 2,22 ng/ml tiếp tục tăng từ ngày thứ 21 đến ngày thứ 24 lần lƣợt 2,44 2,92 ng/ml 2,17 ng/ml Chứng tỏ bò động dục có rụng trứng, thể vàng hình thành, tỷ lệ thụ thai đạt 100% Ở nhóm bị có hàm lƣợng progesterone thấp có hàm lƣợng progesterone trung bình thời điểm lấy mẫu lúc gieo tinh, 7, 14, 21 24 ngày sau gieo tinh thấp lần lƣợt 0,13; 0,31; 0,70; 0,57 0,39 ng/ml Kết hợp khám qua trực tràng động thái progesterone cho thấy, nhóm bị có buồng trứng khơng rụng trứng, dẫn đến khơng vàng nên hàm lƣợng progesterone thấp Trong trƣờng hợp khơng rụng trứng buồng trứng chƣa hoạt động trở lại bị u nang noãn 49 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Hàm lượng progesterone (ng/ml) Cao 2,60 Thấp 2,5 2,72 2,10 1,5 1,27 0,86 0,5 0,91 0,63 0,66 0,36 0,33 0 14 Ngày lấy mẫu 21 24 Hình 4.14 Hàm lƣợng progesterone sữa bị chậm động dục phối nhiều lần không đậu theo lứa Qua Bảng 4.6 Hình 4.14 cho thấy nhóm bị có hàm lƣợng progesterone cao có hàm lƣợng progesterone trung bình vào ngày thụ tinh nhân tạo thấp 0,36 ng/ml, tăng nhanh từ ngày thứ đến ngày thứ 14 lần lƣợt 1,27 2,10 ng/ml tiếp tục tăng từ ngày thứ 21 đến ngày thứ 24 lần lƣợt 2,60 2,72 ng/ml Chứng tỏ bị động dục có rụng trứng, thể vàng hình thành, tỷ lệ thụ thai đạt 100% Ở nhóm bị có hàm lƣợng progesterone thấp có hàm lƣợng progesterone trung bình thời điểm lấy mẫu lúc gieo tinh, 7, 14, 21 24 ngày sau gieo tinh thấp lần lƣợt 0,33; 0,86; 0,91; 0,66 0,63 ng/ml Kết hợp khám qua trực tràng động thái progesterone cho thấy, nhóm bị có buồng trứng khơng rụng trứng, dẫn đến khơng vàng nên hàm lƣợng progesterone thấp Trong trƣờng hợp không rụng trứng buồng trứng chƣa hoạt động trở lại bị u nang noãn Theo Chung Anh Dũng (2002) lứa đẻ gia tăng tỷ lệ thụ thai tăng lên Điều bò đẻ từ lứa trở lên, máy sinh sản hoạt động điều hòa giúp bò dễ dàng thụ thai Cavestany (2001, dẫn liệu Chung Anh Dũng, 2002) cho rằng: việc phát động dục bò rạ đạt hiệu cao so với bò tơ 50 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com (67,8% 33,3%, tƣơng ứng) Đây yếu tố giúp cho phối giống đạt tỷ lệ thụ thai cao bò rạ Tỷ lệ thụ thai đạt mức tốt nhóm bị đẻ lứa 80% Tuy nhiên, bò lớn tuổi, khả sinh sản giảm dần khả thụ thai giảm xuống nhóm bị đẻ lứa thứ 62,5% Kết khảo sát phù hợp với nhận định lứa đẻ gia tăng tỷ lệ thụ thai tăng lên Tỷ lệ thụ thai lứa 1, 2, lần lƣợt 33,33%; 33,33%; 100% 100% Từ kết khảo sát so sánh với kết kiểm tra nhiều tác giả trƣớc đó, chúng tơi kết luận kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang ELISA xác định hàm lƣợng progesterone sữa có độ xác cao giúp tìm hiểu động thái progesterone thú đồng thời cịn giúp chẩn đốn mang thai sớm, chậm động dục phối nhiều lần không đậu, buồng trứng phát triển, tồn hồng thể…để từ đề khuynh hƣớng điều trị xác nhằm hạn chế tình trạng sinh sản 51 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Chƣơng KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Qua thời gian thực đề tài khảo sát hàm lƣợng progesterone sữa kỹ thuật ELISA để chẩn đoán mang thai sớm, chậm động dục phối nhiều lần khơng đậu bị cho sữa Cơng ty Cổ Phần bị sữa Long Thành hộ lân cận tỉnh Đồng Nai, rút số kết luận sau: Kỹ thuật ELISA xét nghiệm hàm lƣợng progesterone sữa đánh giá xác tình trạng sinh sản bị sữa khơng có mang thai Kỹ thuật giúp xác định xác bị khơng mang thai ngày 21 sau phối, lúc kỹ thuật xác định hàm lƣợng progesterone cao sữa bò mang thai tồn hồng thể Do muốn biết đƣợc bị tồn hồng thể phải kiểm tra thai qua trực tràng 60 ngày sau Kết luận lại, kỹ thuật ELISA cơng cụ tốt cho q trình chẩn đốn bò mang thai sớm, chậm lên giống phối nhiều lần không đậu Hàm lƣợng progesterone sữa diễn biến nhƣ sau:  Bị sinh sản bình thƣờng Hàm lƣợng progesterone sữa trung bình theo nhóm cao bị ngày gieo tinh 0,61 ng/ml tăng lên 2,31 ng/ml vào ngày thứ 21 Chẩn đoán mang thai 60 ngày khám qua trực tràng đạt 80%; 20% bò bị tồn hồng thể Hàm lƣợng progesterone sữa trung bình theo nhóm thấp bị ngày gieo tinh 0,34 ng/ml, tăng từ ngày đến ngày 14 lần lƣợt 0,58 1,12 ng/ml; sau giảm xuống vào ngày thứ 21 0,87 ng/ml Hàm lƣợng progesterone sữa trung bình theo nhóm cao lứa đẻ dao động từ 0,56 ng/ml đến 2,89 ng/ml theo nhóm máu dao động từ 0,58 ng/ml đến 2,66 ng/ml 52 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Hàm lƣợng progesterone sữa trung bình theo nhóm thấp lứa đẻ dao động từ 0,16 ng/ml đến 1,00 ng/ml theo nhóm máu dao động từ 0,16 ng/ml đến 1,29 ng/ml  Bị chậm động dục phối nhiều lần khơng đậu Hàm lƣợng progesterone sữa trung bình theo nhóm cao bò ngày gieo tinh 0,46 ng/ml tăng lên 2,34 ng/ml vào ngày thứ 21 Chẩn đoán mang thai 60 ngày khám qua trực tràng đạt 60%; 40% bị tồn hoàng thể Hàm lƣợng progesterone sữa trung bình theo nhóm thấp bị ngày gieo tinh 0,21 ng/ml, tăng từ ngày đến ngày 14 lần lƣợt 0,61 0,87 ng/ml; sau giảm xuống vào ngày thứ 21 0,68 ng/ml Bị có buồng trứng chƣa hoạt động trở lại bị u nang nỗn Hàm lƣợng progesterone sữa trung bình theo nhóm cao lứa đẻ dao động từ 0,33 ng/ml đến 2,92 ng/ml theo nhóm máu dao động từ 0,40 ng/ml đến 2,76 ng/ml Hàm lƣợng progesterone sữa trung bình theo nhóm thấp lứa đẻ dao động từ 0,11 ng/ml đến 0,92 ng/ml theo nhóm máu dao động từ 0,17 ng/ml đến 1,08 ng/ml 5.2 Đề nghị Khuyến cáo ngƣời chăn nuôi lấy mẫu sữa kiểm tra hàm lƣợng progesterone 21 ngày khám thai qua trực tràng ngày 60 sau phối nhằm chẩn đốn bị mang thai sớm, chậm lên giống phối nhiều lần không đậu 53 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Lê Xuân Cƣơng, 1990 Báo cáo kết điều tra bị sữa TP.HCM Chƣơng trình hợp tác nghiên cứu giữa: Viện KHKTNNMN, Cơng ty trâu bị sữa, thịt miền Nam, Cơng ty bị sữa TP.HCM Chi cục thú y TP.HCM Lê Xuân Cƣơng, Lƣu Văn Tân, Chung Anh Dũng, Trần Tích Cảnh, Nguyễn Duy Hạng, Cao Văn Triều, 1990 Kết ứng dụng kỹ thuật miễn dịch phóng xạ để định lượng progesterone nhằm chẩn đốn sớm có thai trâu bò Việt Nam Chung Anh Dũng, 2002 Sử dụng kỹ thuật miễn dịch phóng xạ số biện pháp kỹ thuật để nâng cao hiệu gieo tinh nhân tạo bò lai hướng sữa Luận án Tiến Sĩ Nông Nghiệp Viện Khoa Học Nông Nghiệp Miền Nam Chung Anh Dũng, 2002 Nghiên cứu động thái progesterone kỹ thuật ELISA để chẩn đoán chậm động dục heo hậu bị biện pháp can thiệp kích thích tố Luận án Tiến Sĩ Nơng Nghiệp Viện Khoa Học Nông Nghiệp Miền Nam TP HCM Nguyễn Văn Dũng, 2005 Điều tra tỷ lệ nhiễm phân tích số yếu tố liên quan bệnh Mycobacterium Bovis, Leptospira Brucella bò sữa TP.HCM Luận án Thạc Sĩ Khoa Học Nông Nghiệp Lê Đăng Đảnh, 1996 Nghiên cứu tính sản xuất sữa bò lai 1/2, 3/4 7/8 máu Holstein Friesian ảnh hưởng số biện pháp chăm sóc ni dưỡng đến suất chúng Luận án Phó Tiến sĩ KHNN Hồng Kim Giao, 1997 Cơng nghệ sinh sản chăn ni bị Nhà xuất Nông Nghiệp Nguyễn Ngọc Khánh, 2004 Khảo sát số bị sữa có vấn đề sinh sản sau sinh biện pháp can thiệp CUE – MATA kết hợp PGF2 , Estradiol huyện Củ Chi, TP.HCM Luận văn tốt nghiệp, khoa Chăn Nuôi Thú Y, trƣờng Đại Học Nông Lâm TP.HCM Phan Văn Kiểm, Đào Đức Thà, Trịnh Quang Phong, Đỗ Hữu Hoan, Nguyễn Thị Hoa, Vũ Ngọc Hiệu, Nguyễn Quý Quỳnh Hoa, 2006 Xác định hàm lượng 54 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com progesterone bò lai hướng sữa kỹ thuật miễn dịch enzyme (ELISA) Tạp chí chăn ni 2006 10 Nguyễn Thanh Linh, 2006 Khảo sát hàm lượng progesterone sữa bị kỹ thuật EIA Cơng ty cổ phần bò sữa Đồng Nai Luận văn tốt nghiệp, khoa Chăn Nuôi Thú Y, trƣờng Đại học Nông Lâm TP.HCM 11 Vƣơng Ngọc Long, 2002 Tài liệu tập huấn chăn ni bị sữa, hội thi triển lãm giống bị sữa TP.HCM lần II, 2003 12 Ngơ Phƣơng Nghị, 2003 Chẩn đốn Actino Bacillus pleuropneumoniae dựa bệnh tích phổi, kỹ thuật ELISA nuôi cấy phân lập Luận văn tốt nghiệp, khoa Chăn Nuôi Thú Y, trƣờng Đại Học Nông Lâm TP.HCM 13 Nguyễn Hữu Ninh Bạch Đăng Phong, 1994 Bệnh sản khoa gia súc Nhà xuất Nông Nghiệp 14 Cao Thanh Phú, 2003 Khảo sát động thái progesterone kỹ thuật P – ELISA để ứng dụng chẩn đốn chậm động dục bị cho sữa Luận văn tốt nghiệp, khoa Chăn Nuôi Thú Y, trƣờng Đại Học Nông Lâm TP.HCM 15 Nguyễn Minh Thanh, 2005 Khảo sát động thái progesterone kỹ thuật P – ELISA ứng dụng chẩn đoán chậm động dục bò cho sữa Luận văn tốt nghiệp, khoa Chăn Nuôi Thú Y, trƣờng Đại học Nông Lâm TP.HCM 16 Nguyễn Văn Thành, 2002 Giáo trình sản khoa Tủ sách Đại Học Nông Lâm TP.HCM 17 Nguyễn Văn Tìm, Lê Xn Cƣơng, Trịnh Cơng Thành, 1999 Xây dựng hệ thống quản lý giống bò sữa TP.HCM theo quy trình cơng nghệ tiên tiến để nâng cao phẩm chất giống bị sữa Chƣơng trình hợp tác nghiên cứu giữa: Sở NN&PTNT TP.HCM, Trung tâm ABC, Đại học Nơng Lâm TP.HCM TÀI LIỆU NƢỚC NGỒI 18 Cavestany D., Juanbeltz R., Canclini E., Elhordoy D., Tagle R., Lanzzeri S., Gama S., Martinez E., 2001 “Evaluation of a seasonal-breeding artificial insemination program in Uruguay using milk progesterone radio immunoassay”, Radio immunoassay and related techniques to improve artificial insemination programmes for cattle reared under tropical and sub-tropical conditions, Proceeding of IAEA final research co-ordination meeting in Uppsala, Sweden, FAO-IAEA, pp 129-146 55 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 19 Henshow T.S., D.V.M., 1990 “Reproductive Herd Health” pp 83-93, and “The estrus cycle of the cow” pp 31 – 34, Bovine Artificial Insemination Technical Manual, CAAB, First Edition, Canada 20 Navy M.J and Cook M.J., 1978 Redistribution of blood flow by PGF2 in the ovary Am J Obst Gynecol 117, pp 381 – 385 21 Mugerwa E M., 1989 A review of reproductive performance of female Bos Indicus (Zebu) cattle International Livestock Centre for Africa ILCA Monograph No 22 Nakao T; Sugihashi A; Tosa E, 1982 An of milk P4 – EIA for early pregnancy diagnosis in cows Pages 267 – 272 Tạp chí chăn ni 5/2006 23 Homeida et al, 2002 Progesterone levels in skim milk in cow with conceived and not conceived v/ after Al Hiroshima University Journal Tạp chí chăn ni 5/2006 24 Kamonpatana M; Srisakwattana K; Sophon S, 1988 Pregnancy diagnosis from milk sample ChualalongKorn University Press Pages 73 – 126 Thailand Tạp chí chăn nuôi 5/2006 56 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com PHỤ LỤC 1: HÀM LƢỢNG PROGESTERONE SỮA BÕ SINH SẢN BÌNH THƢỜNG Nhóm máu Lứa đẻ Ngày Ngày Ngày 14 Ngày 21 Ngày 24 Tình hình đậu thai Có thai 75% 0,73 0,85 1,48 2,14 2,34 50% 0,12 0,43 1,34 0,91 0,85 50% 0,53 0,91 1,43 1,92 1,78 75% 0,81 0,97 1,26 2,05 2,26 50% 0,28 1,14 1,86 2,14 2,28 Có thai 50% 0,92 1,55 2,57 3,58 3,67 Có thai 75% 0,62 0,93 1,27 2,08 2,30 Có thai 75% 0,12 0,46 0,67 0,56 0,55 75% 0,35 0,91 1,37 0,95 0,87 50% 0,08 0,13 0,42 0,09 0,08 50% 0,69 1,15 1,83 2,06 2,41 75% 0,17 0,26 1,21 0,48 0,40 75% 0,16 0,85 1,54 2,35 2,65 Có thai 50% 0,49 1,03 1,94 2,31 2,46 Có thai 75% 0,11 0,26 1,52 1,17 1,09 75% 0,8 0,97 1,2 1,09 0,96 50% 0,16 0,21 0,47 0,34 0,30 50% 0,89 1,43 1,92 2,21 2,54 50% 0,52 0,93 1,26 2,17 2,49 75% 0,72 1,25 1,53 1,19 1,13 Có thai Có thai 57 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com PHỤ LỤC 2: HÀM LƢỢNG PROGESTERONE SỮA BÕ CHẬM ĐỘNG DỤC HOẶC PHỐI NHIỀU LẦN KHƠNG ĐẬU Nhóm máu Lứa đẻ Ngày Ngày Ngày 14 Ngày 21 Ngày 24 Tình hình đậu thai 75% 0,64 0,96 0,86 0,74 0,71 75% 0,48 0,76 1,04 2,01 2,29 75% 0,22 1,12 1,68 2,04 2,16 Có thai 50% 0,82 1,68 2,04 3,14 3,42 Có thai 75% 0,09 0,48 0,67 0,53 0,45 75% 0,26 1,26 2,64 3,13 3,19 75% 0,31 1,49 1,6 2,01 2,15 50% 0,29 1,26 1,64 2,15 2,43 50% 0,21 0,96 1,86 1,48 1,27 50% 0,12 0,9 0,96 0,42 0,39 50% 0,11 0,86 0,92 0,74 0,70 75% 0,09 0,13 0,42 0,28 0,25 50% 0,16 0,48 0,97 0,86 0,52 75% 0,68 1,84 2,45 2,64 3,01 75% 0,31 0,13 0,31 0,24 0,21 50% 0,18 0,48 0,82 0,71 0,64 75% 0,46 1,28 1,56 2,06 2,25 50% 0,47 1,31 1,58 2,02 2,38 50% 0,23 0,72 0,92 0,83 0,79 50% 0,64 1,87 1,99 2,24 2,82 Có thai Có thai Có thai Có thai 58 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ... tiến hành thực đề tài ? ?Khảo sát hàm lƣợng progesterone sữa kỹ thuật ELISA để chẩn đoán mang thai sớm, chậm động dục phối nhiều lần khơng đậu bị cho sữa Cơng ty Cổ Phần bị sữa Long Thành hộ lân... 45 Hình 4.11 Hàm lƣợng progesterone sữa bị chậm động dục phối nhiều lần không đậu theo lứa 47 Hình 4.12 Hàm lƣợng progesterone sữa bò chậm động dục phối nhiều lần không đậu theo lứa ... 48 Hình 4.13 Hàm lƣợng progesterone sữa bị chậm động dục phối nhiều lần không đậu theo lứa 49 Hình 4.14 Hàm lƣợng progesterone sữa bò chậm động dục phối nhiều lần không đậu theo lứa