Hoạt tính kháng khuẩn của cao chiết rễ bạch hoa xà đối với escherichia coli gây bệnh trên gia cầm

CHĂN NUÔI ĐỘNG VẬT VÀ CÁC VẤN ĐỀ KHÁC HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA CAO CHIẾT RỄ BẠCH HOA XÀ ĐỐI VỚI ESCHERICHIA COLI GÂY BỆNH TRÊN GIA CẦM Vũ Ngọc Minh Thư1*, Hồ Thị Việt Thu1, Lâm Kim Yến2, Lê Minh Khánh1, Kha Thanh Thư1, Trần Minh Hoàng1 Nguyễn Trần Phước Chiến1 Ngày nhận báo: 10/02/2022 - Ngày nhận phản biện: 20/02/2022 Ngày báo chấp nhận đăng: 11/03/2022 TÓM TẮT Nghiên cứu này đánh giá hoạt tính kháng khuẩn của cao chiết rễ bạch hoa xà Plumbago zeylanica đối với E coli gây bệnh gia cầm (Avian pathogenic E.coli - APEC) Các bệnh phẩm thu được từ vịt nghi bệnh colibacillosis tiến hành phân lập và định danh vi khuẩn E coli bằng phương pháp PCR, nhằm xác định mức độ đề kháng kháng sinh, sự hiện diện của gen độc lực và đánh giá hoạt tính kháng khuẩn của cao rễ bạch hoa xà các chủng APEC phân lập được Kết quả phân lập và định danh bằng gen uidA được 16 chủng vi khuẩn E coli các mẫu bệnh phẩm khác của vịt bệnh, đó có chủng APEC mang từ gen độc lực trở lên hlyF, iroN, iss, iutA ompT Kết quả kiểm tra kháng sinh đồ 16 chủng cho thấy đề kháng cao với ampicillin (93,75%), colistin (93,75%) trimethoprim/sulfamethoxazone (87,5%), vẫn còn nhạy cảm fosfomycin (100%) và doxycyline (75%) Kết quả thử nghiệm hoạt tính kháng khuẩn của cao rễ bạch hoa xà (5mg) cho hoạt tính kháng lại APEC với đường kính vòng vô khuẩn >20mm Qua đó cho thấy cao rễ bạch hoa xà có hiệu quả tất cả các chủng APEC Nghiên cứu này cho thấy tiềm của cao rễ bạch hoa xà kháng APEC gia cầm Từ khóa: E coli, Plumbago zeylanica, kháng sinh ABSTRACT Evaluation for antimicrobial activity of Plumbago zeylanica root extract against avian pathogenic Escherichia coli This study evaluated antimicrobial activity of Plumbago zeylanica root extract against avian pathogenic E coli - APEC Lesions obtained from ducks diagnosed with colibacillosis were used to isolate and identify E coli by PCR method, assess for their antibiotic resistance, identify virulence associated genes and assess antimicrobial activity of P zeylanica root extract against obtained APEC Results on isolation and identification of bacteria obtained 16 E coli isolates in different lesions of affected ducks, among these isolates included APEC isolates containing or more of virulence associated genes hlyF, iroN, iss, iutA ompT Antibiotic resistance tesing on 16 isolates provided that antibiotics showed high percentage of resistance including ampicillin (93.75%), colistin (93.75%) and trimethoprim/sulfamethoxazone (87.5%) An antibiotic that showed very high percentage of sensitivity included fosfomycin (100%), mediate percentage of sensitity included doxycyline (75%) Results on antimcriobial activity of P zeylanica root extract (5mg) showed its efficacy toward all APEC tested with inhibition zone diameter of above 20mm This study illustrates the potential of P zeylanica root extract against APEC Key words: E coli, Plumbago zeylanica, antibiotics ĐẶT VẤN ĐỀ Bệnh vi khuẩn E coli gia cầm hay gọi colibacillosis Trường Đại học Cần Thơ Trường Cao đẳng Cộng đồng Đồng Tháp * Tác giả liên hệ: TS Vũ Ngọc Minh Thư - Khoa Nông Nghiệp, Trường Đại học Cần Thơ, Khu II, đường 3/2, phường Xuân Khánh, quận Ninh Kiều, TP Cần Thơ Điện thoại: 0903685759 Email: vnmthu@ctu.edu.vn KHKT Chăn nuôi số 277 - tháng năm 2022 bệnh phổ biến gây thiệt hại nghiêm trọng cho ngành chăn nuôi gia cầm (Bùi Thị Lê Minh ctv, 2016; Lê Thị Thùy Trang và ctv, 2017) Kháng sinh giải pháp để điều trị bệnh vi khuẩn (Nguyễn Tấn Đạt Nguyễn Bá Tiếp, 2016) Tuy nhiên, tình trạng đề kháng kháng sinh E coli xảy ra, làm giảm hiệu kháng sinh việc điều trị bệnh (Bùi 77 CHĂN NUÔI ĐỘNG VẬT VÀ CÁC VẤN ĐỀ KHÁC Thị Lê Minh ctv, 2016; Hồ Thị Việt Thu ctv, 2019) Từ nhược điểm cho thấy cần tìm kiếm chế phẩm phối hợp thay kháng sinh điều trị Việc nghiên cứu chiết xuất thực vật để diệt khuẩn ức chế tính kháng kháng sinh vi khuẩn có ưu điểm Thứ nhất, thực vật cho sản xuất chất kháng khuẩn chế bảo vệ chúng khỏi tác hại vi khuẩn môi trường sống (Gibbons, 2008) Thứ hai, nguồn gốc nhiều kháng sinh tìm từ vi khuẩn nấm, đó, chất diệt khuẩn có nguồn gốc từ thực vật chế diệt khuẩn khác biệt cho hiệu (Gibbons, 2008; Cheesman và ctv, 2017) Thứ ba, số chiết xuất thực vật có khả giảm thiểu tính kháng kháng sinh nhiều loại vi khuẩn (Buckner và ctv, 2018) Một vài liệu pháp sử dụng chiết xuất thực vật kết hợp kháng sinh để điều trị bệnh dùng lâm sàng cho kết đầy hứa hẹn (Cheesman và ctv, 2017) Bằng chứng từ việc sử dụng chiết xuất từ thực vật giúp tăng cường hoạt tính kháng khuẩn kháng sinh thông thường, đề xuất cho việc tái sử dụng hợp chất thay (Cheesman và ctv, 2017) Bạch hoa xà  (P zeylanica) thuộc loại thuốc sử dụng theo truyền thống.  Bạch hoa xà  thường biết đến với tên Doctorbush Ceylon Leadwort loại bán leo bụi mọc khắp Châu Á, Úc, Châu Phi Ceylon sử dụng rộng rãi y học cổ truyền (Teshome và ctv, 2008) Trong y học cổ truyền Ethiopia, P zeylanica dùng nhiều chất chống oxy hóa khả kháng khuẩn nó (Getaneh và ctv,  2014) Đến nay, Việt Nam chưa có nhiều kết nghiên cứu tác dụng Bạch hoa xà, lĩnh lực chăn nuôi Do đó, đề tài “Hoạt tính kháng khuẩn của cao chiết từ rễ bạch hoa xà P zeylanica đối với E coli gây bệnh gia cầm” được thực hiện 78 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu * Nguồn vi khuẩn Vi khuẩn E coli được phân lập từ vịt có triệu chứng và bệnh tích của bệnh colibacillosis * Các loại đĩa kháng sinh để làm kháng sinh đồ các chủng vi khuẩn E coli đã phân lập gồm: Amoxicillin/clavulanic acid (Ac) 20/10µg, colistin (Co) 10µg, gentamycin (Ge) 10µg, doxycycline (Dx) 30µg, ampicillin (Am) 10µg, trimethoprim/sulfamethoxazole (Bt) 1,25/23,75µg, cefuroxime (Cu) 30µg, fosfomycin (Fo) 200mg, kanamycin (Kn) 30mg và ciprofloxacin (Ci) 5mg (Công ty Nam Khoa, Việt Nam) * Nguồn thảo dược Rễ bạch hoa xà (P Zeylanica) được thu vào tháng 7/2021, tại Đồng bằng sông Cửu Long * Các môi trường và hóa chất chính được sử dụng MacConkey agar (Merck, Đức) GoTaq Green master mix 2X (Promega, Mỹ), mồi (primer) (Phu Sa Biochem, Việt Nam), agarose (Phu Sa Biochem, Việt Nam), dung dịch điện di 1X TBE có công thức: 0,13M tris base, 45mM boric acid và 2,5mM EDTA 2.2 Bố trí thí nghiệm * Phân lập vi khuẩn E coli Các chủng vi khuẩn được phân lập từ não, túi khí, khí quản, gan, lách, tim, phổi, da và khớp Dịch khuẩn sau phân lập tiến hành định danh vi khuẩn E coli bằng phản ứng PCR lồng Phản ứng PCR lồng này khuếch đại đoạn gen uidA đặc hiệu cho E coli và Shigella này (Juck và ctv, 1996) Các dịch khuẩn được xác định là E coli được trữ glycerol 40% ở nhiệt độ -20°C * Ly trích DNA vi khuẩn E coli Dựa theo Cerna và ctv (2003) tiến hành ly trích DNA E coli từ phương pháp nhiệt sau: DNA chiết xuất từ mẫu vi khuẩn cách đun sôi ống bể ổn KHKT Chăn nuôi số 277 - tháng năm 2022 CHĂN NUÔI ĐỘNG VẬT VÀ CÁC VẤN ĐỀ KHÁC nhiệt 10 phút Sau ly tâm 12.000 vòng/phút 15 phút phần phía chứa DNA chuyển sang ống bảo quản -20°C sử dụng để thực hiện PCR Cho dịch DNA vào ống eppendorf thực phản ứng với máy PCR định danh vi khuẩn E coli * Thành phần phản ứng PCR Phản ứng PCR lồng thực lần Lần thực đầu tiên, dùng mẫu DNA mẫu DNA ly trích từ dịch khuẩn với cặp mồi Mồi 1-F Mồi 1-R Lần thực thứ hai, dùng mẫu DNA sản phẩm lần thực PCR đã pha loãng 50 lần và sử dụng cặp mồi Mồi 2-F Mồi 2-R Thành phần của phản ứng PCR: Go Taq® Green Master Mix 2X (5µl), mời xi 10µM (0,24µl), mời ngược 10µM (0,24µl), nước PCR (3,52µl) và mẫu DNA (1µl) trình tự cặp mồi được trình bày ở bảng Bảng Trình tự primer sử dụng phản ứng PCR Mồi Mồi 1-F Mồi 1-R Mồi 2-F Mồi 2-R Trình tự 5’-ATCACCGTGGTGACGCATGTCGC-3’ 5’-CACCACGATGCCATGTTCACTGCC-3’ 5’-TATGAACTGTGCGTCACAGCC-3’ 5’-CATCAGCACGTTATCGAATCC-3’ * Thiết lập chu trình nhiệt phản ứng PCR Chu trình nhiệt của phản ứng PCR lồng lần có vòng tiền biến tính với nhiệt độ 950C phút, 25 vòng biến tính với nhiệt dộ 950C 30 giây, bắt cặp 600C phút, kéo dài 720C phút, và vòng kéo dài cuối cùng 720C phút Chu trình nhiệt của phản ứng PCR lồng lần có vòng tiền biến tính với nhiệt độ 950C phút, 25 vòng biến tính với nhiệt độ 950C 30 giây, bắt cặp với nhiệt độ 600C 30 giây, kéo dài với nhiệt độ 720C 15 giây và vòng kéo dài cuối cùng với nhiệt độ 720C phút Kích thước (bp) 486bp Ng̀n tham khảo Juck và ctv (1996) 186bp * Quy trình điện di sản phẩm PCR Pha gel agarose với nồng độ 1% TBE 1X, điện di 100V 30 phút Chụp gel máy ảnh tia UV * Xác định chủng E coli gây bệnh gia cầm (Avian pathogenic E coli - APEC) bằng phương pháp PCR Các chủng APEC xác định cách sử dụng PCR đa mồi mô tả Johnson và ctv (2008a) cách xác định có xuất gen độc lực số gen độc lực sau: hlyF, iroN, iss, iutA ompT (Bảng 2) Bảng Trình tự nucleotide mồi phản ứng PCR Mồi iroN-F 5Ò-AATCCGGCAAAGAGACGAACCGCCT-3Ò Trình tự nucleotide iroN-R 5Ò-GTTCGGGCAACCCCTGCTTTGACTTT-3Ò ompT-F 5Ò-TCATCCCGGAAGCCTCCCTCACTACTAT-3Ò ompT-R 5’Ò-TAGCGTTTGCTGCACTGGCTTCTGATAC-3Ò hlyF-F 5’Ò-GGCCACAGTCGTTTAGGGTGCTTACC-3Ò hlyF-R 5Ò-GGCGGTTTAGGCATTCCGATACTCAG-3Ò iss-F 5Ò-CAGCAACCCGAACCACTTGATG-3Ò iss-R 5Ò-AGCATTGCCAGAGCGGCAGAA-3Ò iutA-F 5Ò-GGCTGGACATCATGGGAACTGG-3Ò iutA-R 5Ị-CGTCGGGAACGGGTAGAATCG-3Ị KHKT Chăn ni số 277 - tháng năm 2022 Kích cỡ (bp) Nguồn tham khảo 553 Johnson và ctv (2006) 496 Johnson và ctv (2006) 450 Morales và ctv (2004) 323 Johnson và ctv (2008b) 302 Johnson và ctv (2008a) 79 CHĂN NUÔI ĐỘNG VẬT VÀ CÁC VẤN ĐỀ KHÁC Phản ứng PCR đa mồi được thực hiện các chủng vi khuẩn đã được xác định là E coli để tìm xem có gen độc lực xuất hiện từng chủng vi khuẩn Mẫu DNA là các dịch vi khuẩn E coli đã được ly trích DNA bằng phương pháp đun sôi đã nhắc đến ở Thành phần của phản ứng PCR đa mời với tởng thể tích là 10µl gờm; Go Taqđ Green Master Mix 2X (5àl), DNA mõu (1àl), nước PCR (2,8µl) và thành phần mời phản ứng ở bảng với nờng đợ 10µM, thể tích 0,12µl Chu trình nhiệt phản ứng PCR đa mời có vòng tiền biết tính với nhiệt độ 950C phút, 25 vòng biến tính với nhiệt độ 950C 30 giây, gắn mồi với nhiệt độ 630C 30 giây, kéo dài với nhiệt độ 680C phút và vòng kéo dài cuối cùng với nhiệt độ 720C 10 phút * Khảo sát sự đề kháng kháng sinh vi khuẩn E coli: Các chủng E coli phân lập được kiểm tra sự đề kháng kháng sinh đối với một số loại kháng sinh bằng phương pháp khuếch tán đĩa thạch của Bauer và ctv (1966) và đánh giá kết quả theo tiêu chuẩn của Viện Nghiên cứu Tiêu chuẩn phòng thí nghiệm và lâm sàng (CLSI, 2020) Điều chế cao chiết: Sau thu về, rễ bạch hoa xà được làm sạch và sấy khô ở nhiệt độ 550C Rễ bạch hoa xà khô được thái nhỏ và xay thành mẫu bột nguyên liệu Bột nguyên liệu được cho vào túi vải và ngâm A dầm ethanol 99.5% Mẫu được ngâm lần, mỗi lần ngâm khoảng 24 giờ, dịch chiết từ các lần ngâm được gom lại, cô quay đuổi dung môi thu được cao rễ bạch hoa xà chiết xuất bằng dung môi ethanol * Đánh giá tác dụng kháng khuẩn cao rễ bạch hoa xà chiết xuất dung môi ethanol Thí nghiệm đánh giá tác dụng kháng khuẩn của cao thực vật chiết xuất bằng dung môi ethanol được làm theo phương pháp của Beg và Ahmad (2000) với một vài thay đổi sau Từ thạch LB chứa các chủng E coli, tiến hành thu khuẩn lạc và pha loãng dung dịch muối sinh lý 0,85% và so sánh với ống McFarland 0,5 để thu được dịch khuẩn tương đương 108 CFU/ml Huyễn dịch này được pha loãng với nước muối sinh lý 0,85% đến 100 lần để đạt nồng độ khuẩn 106 CFU/ml Dịch khuẩn này được phết lên thạch LB sử dụng tăm vô trùng và sau đó thạch được đục với kích thước giếng 8mm đường kính 50ml của cao rễ bạch hoa xà đã được hòa tan với DMSO (100mg/ml) được để vào giếng Đồng thời, 50ml DMSO (đối chứng) cũng được để vào giếng thạch LB Thêm vào đó, đĩa kháng sinh colistin (10mg) cũng được đặt vào đĩa để làm đối chứng dương Đĩa thạch LB này được ủ 24 giờ ở 370C KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Kết phân lập định danh vi khuẩn E coli quan vị bệnh B Hình 1: Hình gel kết thực PCR để khuếch đại gen uidA: lần (A), lần (B) L: Thang DNA, 37,39-53 sản phẩm PCR thực từ sản phẩm DNA E coli 37, 39-53, ĐC: đối chứng âm Các quan bệnh tích được cấy môi trường MacConkey ủ 24 giờ ở 370C Một đến 80 hai khuẩn lạc rời rạc, màu hồng đậm được chọn để thực hiện phản ứng PCR lồng nhằm KHKT Chăn nuôi số 277 - tháng năm 2022 CHĂN NUÔI ĐỘNG VẬT VÀ CÁC VẤN ĐỀ KHÁC định danh khuẩn lạc này Kết quả PCR lồng cho thấy qua lần chạy PCR tất cả mẫu phân lập đều cho vạch sáng đúng kích thước lần lượt là (486 và 186bp) tương ứng với uidA đặc trưng cho E coli và Shigella (Hình 1) Do Shigella thông thường là những vi khuẩn không có khả sử dụng lactose (Dekker và Frank, 2015) nên không thể cho màu hồng đậm môi trường MacConkey Do đó, các chủng phân lập được định danh là E coli Kết quả phân lập và định danh vi khuẩn E coli thu được 16 chủng các bệnh phẩm khác của vịt Tổng số chủng E coli phân lập các mẫu bệnh phẩm được trình bày ở bảng Bảng Kết phân lập định danh vi khuẩn quan vịt bệnh Bệnh phẩm Não Các chủng E coli 37 và 40 Khí quản 39, 42, 48 và 49 Lách 41, 45, 50 và 53 Khớp 43, 51 và 52 Gan 44 Phổi 46 và 47 3.4 Tình hình đề kháng kháng sinh vi khuẩn E coli Kết khảo sát đề kháng kháng sinh vi khuẩn E coli phân lập với 10 loại kháng sinh thể hiện bảng cho thấy các chủng E coli phân lập được có tỷ lệ đề kháng cao ampicillin (93,75%), colistin (93,75%) trimethoprim/sulfamethoxazone (87,5%) Những kháng sinh nhạy cảm fosfomycin (100%), nhạy cảm trung bình doxycyline (75%) Nghiên cứu Nguyễn Thị Hiên (2012) cho thấy E coli có tính nhạy cảm cao với doxycycline (100%), colistin (97%) Nghiên cứu gần của Lê Thị Thùy Trang và ctv (2017) cho thấy tất cả các chủng E coli khảo sát đều nhạy cảm với fosfomycin (100%) Trong khảo sát này, tất cả các chủng E coli đều nhạy cảm với fosfomycin, nhiên việc nhạy cảm với doxycyline (75%) chỉ ở mức KHKT Chăn nuôi số 277 - tháng năm 2022 trung bình, thậm chí còn có hiện tượng kháng lại colistin (93,75%) Theo Salyers và Cuevas (1997) cho vi khuẩn tiếp xúc với các loại kháng sinh dùng thời gian dài mơi trường định có thể thay đổi hình thái nhạy cảm Bảng Đề kháng kháng sinh của vi khuẩn E coli Nhạy Kháng Hàm lượng, Sớ Tỷ lệ Sớ Tỷ lệ µg lượng (%) lượng (%) Ampicillin 10 6,25 15 93,75 Amoxicillin 20/10 11 68,75 31,25 Ciprofloxacin 5 31,25 11 68,75 Colistin 10 6,25 15 93,75 Cefuroxime 30 25 12 75 Doxycyline 30 12 75 25 Fosfomycin 30 16 100 0 Gentamicin 10 11 68,75 31,25 Kanamycin 30 56,25 43,75 Trimethoprim 1,25/23,75 12,5 14 87,5 Kháng sinh khảo sát 3.3 Phát hiện các chủng APEC Mười sáu chủng E coli đã phân lập được xác định có chứa các gen độc lực đặc trưng cho chủng APEC bằng phương pháp PCR đa mồi Theo Johnson và ctv (2008a), các chủng APEC có chứa gen độc lực sau: hlyF, iroN, iss, iutA ompT Kết quả điện di cho thấy chủng 37 có chứa gen độc lực, các chủng 41, 47, 48, 49 đều có chứa gen độc lực (Hình 2) Như vậy, chủng 37, 41, 47, 48 và 49 là các chủng E coli có khả gây bệnh cho gia cầm (APEC) Ý kiến cho bệnh colibacillosis gia cầm bệnh thứ cấp APEC vi khuẩn hội chấp nhận rộng rãi Tuy nhiên, ngày có nhiều chứng hầu hết APEC thu nhận được những yếu tố giúp chúng dễ gây bệnh Từ đó, các bệnh nhiễm trùng APEC được cho rằng lúc hội thứ phát sau số tình trạng bệnh đã mắc trước Chắc chắn APEC, thu nhận gen cách chuyển ngang mã hóa yếu tố độc lực, giúp phân biệt APEC với chủng đồng loại (Nolan và ctv, 2019) 81 CHĂN NUÔI ĐỘNG VẬT VÀ CÁC VẤN ĐỀ KHÁC A B Hình Hình gel kết thực PCR để khuếch đại gen độc lực hlyF, iroN, iss, iutA ompT từ các chủng 37, 39-45 (A), từ chủng 46-53 (B), L: Thang DNA và ĐC: Đối chứng Năm gen độc lực đặc trưng cho APEC được đề xuất bởi Johnson và ctv (2008a) có các đặc điểm đóng góp vào việc gây bệnh colibacillosis gia cầm hlyF là một yếu tố độc lực lần đầu tiên được tìm thấy vi khuẩn E coli ở gia cầm vào năm 2004 (Morales và ctv, 2004), là một gen tương đồng với một gen độc lực Salmonella Vai trị APEC được cho là gây trình tự thực bào các tế bào nhân thực (Murase và ctv, 2016) Gen iss là yếu tố bảo vệ vi khuẩn kháng lại các bổ thể được mô tả đầu tiên bởi Binns và ctv (1979), nó thường xuyên được tìm thấy ở các chủng APEC và rất ít gặp ở các chủng E coli hội sinh khác (Binns và ctv, 1979) Khả thu nhận được iron được xem là quan trọng chế gây bệnh colibacillosis gia cầm (Nolan và ctv, 2019) Gen iutA và iroN là yếu tố giúp thu nhận iron, gen này được tìm thấy rất nhiều ở APEC rất ít gặp ở các chủng E coli hội sinh khác (Rodriguez‐Siek và ctv, 2005) Gen ompT được cho là cần thiết cho khả bám dính, xâm nhập, nhân lên thể vật chủ của các chủng APEC (Hejair và ctv, 2017) 3.5 Hoạt tính kháng khuẩn của cao rễ bạch hoa xà các chủng APEC phân lập Kết quả thử hoạt tính kháng khuẩn của cao rễ bạch hoa xà các chủng APEC phân lập được thể hiện qua bảng và hình Cao rễ bạch hoa xà được chiết xuất từ dung môi ethanol và thu hồi bằng phương pháp cô quay 82 Để thử hoạt tính kháng khuẩn, cao này được pha vào DMSO Kết quả thử nghiệm hoạt tính kháng khuẩn của cao rễ bạch hoa xà các chủng APEC phân lập cho cao này (5mg) cho hoạt tính kháng lại APEC với đường kính vòng vô khuẩn 20mm Trong khi, DMSO không có khả kháng lại các chủng APEC Kháng sinh colistin (10mg) cho hoạt tính kháng lại APEC với vòng vô khuẩn 14-17mm Bảng 5: Hoạt tính kháng khuẩn đối với các chủng APEC (n=5) Chủng E coli 37 41 47 48 49 Đường kính vòng vô khuẩn (mm) DMSO Colistin Cao rễ Bạch hoa (50ml) (10mg) xà (5mg) 14 24 15 26 17 23 17 22 16 21 Kết quả này cũng tương tự một nghiên cứu trước về hiệu quả kháng khuẩn của cao rễ bạch hoa xà với E coli (Ahmad và Aqil, 2007) Cao rễ bạch hoa xà đã được chứng minh nghiên cứu trước có khả kháng lại E coli sinh β-lactamase phổ rộng với đường kính vòng vô khuẩn dao động 13-24mm Thêm vào đó, cao này còn được chứng minh có tác dụng các vi khuẩn khác chẳng hạn Shigella dysenteriae và S sonnei với đường kính vòng vô khuẩn lần lượt 23 và 19mm (Ahmad và Aqil, 2007) KHKT Chăn nuôi số 277 - tháng năm 2022 CHĂN NUÔI ĐỘNG VẬT VÀ CÁC VẤN ĐỀ KHÁC Hình Hoạt tính kháng vi khuẩn APEC của cao rễ bạch hoa xà A: Chủng 37, B: Chủng 41, C: Chủng 47, D: Chủng 48, E: Chủng 49 KẾT LUẬN Cao rễ bạch hoa xà (P zeylanica) có hoạt tính kháng khuẩn đối với tất cả các chủng APEC khảo sát Cụ thể, đường kính vòng vô khuẩn 20 mm Do đó, thông qua các kết quả đạt được, cao rễ bạch hoa xà có thể sử dụng một chất có khả kháng khuẩn APEC và có tiềm là nguồn dược liệu giúp gia cầm tăng cường khả kháng APEC TÀI LIỆU THAM KHẢO Ahmad I and Aqil F (2007) In vitro efficacy of bioactive extracts of 15 medicinal plants against ESbetaL-producing multidrug-resistant enteric bacteria. Microbiol Res., 162(3): 264-75 Bauer A.W., Sherris J.C and Turck M (1966) Antibiotic susceptibility testing by a standardized single disk method Am J Clinic, 45: 493-96 Beg A.Z and Ahmad I (2000) Effect of Plumbago zeylanica extract and certain curing agents on multidrug resistant bacteria of clinical origin. World J Microbiol Biotech., 16(8): 841-44 Binns M.M., Davies, D.L and Hardy K.G (1979) Cloned fragments of the plasmid ColV, I‐K94 specifying virulence and serum resistance Nature, 279: 778-81 Buckner M.M.C., Ciusa M.L and Piddock L.J.V (2018) Strategies to combat antimicrobial resistance: KHKT Chăn nuôi số 277 - tháng năm 2022 anti-plasmid and plasmid curing FEMS Microbiol Rev., 42(6): 781-04 Cerna J.F., Nataro J.P and Garcia T.E (2003) Multiplex – PCR for detection of three plasmid borne genes of enteroaggregative Escherichia coli strains J Clin Microbiol., 42: 2138-40 Cheesman M.J., Ilanko A., Blonk B and Cock I.E (2017) Developing New Antimicrobial Therapies: Are Synergistic Combinations of Plant Extracts/ Compounds with Conventional Antibiotics the Solution? Pharmacogn Rev., 11(22): 57-72 CLSI (2020) Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing 30th Edition CLSI guideline M100 Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute Dekker J.P and Frank K.M (2015) Salmonella, Shigella, and yersinia. Clinics in laboratory medicine, 35(2): 22546 10 Nguyễn Tấn Đạt Nguyễn Bá Tiếp (2016) Đánh giá hiệu suất chiết tác dụng cao chiết từ gỗ tô mộc (Caesalpinia sappan L.) dung mơi ethanol với vi khuẩn Escherichia coli Tạp chí KHNN Việt Nam, 14(9): 1368-76 11 Getaneh G., Zemede A., Abiy E and Nagappan R (2014).  Ethnobotanical study of traditional medicinal plants and their conservation status in Mecha Wereda, West Gojjam zone of Ethiopia Int J Pharmaceut Health Care Res., 2: 137-54 12 Gibbons S (2008) Phytochemicals for bacterial resistance-strengths, weaknesses and opportunities Pla Med., 74(6): 594-02 83 CHĂN NUÔI ĐỘNG VẬT VÀ CÁC VẤN ĐỀ KHÁC 13 Hejair H., Ma J., Zhu Y., Sun M., Dong W., Zhang Y., Pan Z., Zhang W and Yao H (2017) Role of outer membrane protein T in pathogenicity of avian pathogenic Escherichia coli. Res Vet Sci., 115: 109-16 14 Johnson T.J., Siek K.E., Johnson S.J and Nolan L.K (2006) DNA sequence of a ColV plasmid and prevalence of selected plasmid-encoded virulence genes among avian Escherichia coli strains J Bacteriol., 188: 745-58 15 Johnson T.J., Wannemuehler Y., Doetkott C., Johnson S.J., Rosenberger S.C and Nolan L.K (2008a) Identification of minimal predictors of avian pathogenic Escherichia coli virulence for use as a rapid diagnostic tool. J Clinical Microbiol., 46(12): 3987-96 16 Johnson T.J., Wannemuehler Y.M and Nolan L.K (2008b) Evolution of the iss gene in Escherichia coli Appl Env Microbiol., 74: 2360-69 17 Juck D., Ingram J., Prévost M., Coallier J and Greer C (1996) Nested PCR protocol for the rapid detection of Escherichia coli in potable water. Can J Microbiol., 42(8): 862-66 18 Bùi Thị Lê Minh, Lưu Hữu Mãnh Nguyễn Nhựt Xuân Dung (2016) Tình hình nhiễm Escherichia coli sinh beta-lactamase phổ rộng gà bệnh tỉnh Vĩnh Long Tạp chí KH Trường Đại học Cần Thơ Số chuyên đề: Nông nghiệp, 2: 6-10 19 Morales, C., Lee, M.D., Hofacre, C., and Maurer, J.J (2004) Detection of a novel virulence gene and a Salmonella virulence homologue among Escherichia coli isolated from broiler chickens Foodborne Pathog Dis., 1: 160-65 20 Murase K., Martin P., Porcheron G., Houle S., Helloin E., Penary M., Nougayrede J.P., Dozois C.M., 21 22 23 24 25 26 27 Hayashi T and Oswald E (2016) HlyF produced by extraintestinal pathogenic Escherichia coli is a virulence factor that regulates outer membrane vesicle biogenesis J Infect Dis., 213: 856-65 Nguyễn Thị Hiên (2012) Đặc điểm bệnh lý Escherichia coli ngan biện pháp điều trị Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội Nolan L.K., Vaillancourt J., Barbieri N.L and Logue C.M (2019) Colibacillosis. Diseases of Poultry Rodriguez‐Siek K.E., Giddings C.W., Doetkott C., Johnson T.J and Nolan L.K (2005) Characterizing the APEC pathotype Vet Res., 36: 241-56 Salyers A.A and Amabile-Cuevas C.F (1997) Why are antibiotic resistance genes so resistant to elimination? Antimicrob Agents Chemother, 41: 2321-25 Teshome K., Gebre-Mariam T., Asres K., Perry F and Engidawork E (2008) Toxicity studies on dermal application of plant extract of Plumbago zeylanica used in Ethiopian traditional medicine J Ethnopharmacology, 117(2): 236-48 Ho Thi Viet Thu, Doan Tran Loan Anh and Le Van Dong (2019) Escherichia coli infection in ducks in the Mekong Delta: Bacterial isolation, serogroup distribution and antibiotic resistance Can Tho Uni J Sci., 11(1): 24-29 Lê Thị Thùy Trang, Hồ Thị Việt Thu Lý Thị Liên Khai (2017) Khảo sát lưu hành đề kháng kháng sinh chủng vi khuẩn Escherichia coli gây bệnh vịt tỉnh Hậu Giang Tạp chí KH Trường Đại học Cần Thơ 50b: 44-50 TÌNH HÌNH NHIỄM MỊ ĐỎ Ở GÀ THẢ VƯỜN NUÔI TẠI HUYỆN ĐỒNG HỶ, TỈNH THÁI NGUYÊN Đỗ Thị Vân Giang1*, Nguyễn Thị Bích Ngà1 Vũ Thị Ánh Huyền1 Ngày nhận báo: 21/3/2022 - Ngày nhận phản biện: 05/4/2022 Ngày báo chấp nhận đăng: 21/4/2022 TÓM TẮT Kiểm tra tỷ lệ cường độ nhiễm mị đỏ 1043 gà ni thả vườn xã Cây Thị, Khe Mo, Hóa Thượng Minh Lập, thuộc huyện Đồng Hỷ, tỉnh Thái Nguyên cho thấy: 538 gà bị nhiễm mò đỏ, chiếm tỷ lệ 51,58% Tại địa điểm nghiên cứu thấy gà nhiễm mò đỏ cường độ từ nhẹ đến nặng Tỷ lệ cường độ nhiễm mò đỏ tăng theo tuổi gà Gà mắc bệnh mò đỏ với tỷ lệ cao vào mùa Hè (65,59%) thấp vào mùa Đông (33,84%) Tỷ lệ cường độ nhiễm bệnh gà mái cao so với gà trống Mẫu cặn chuồng, mẫu đất xung quanh chuồng nuôi mẫu đất bề mặt vườn bãi chăn thả gà bị nhiễm mị đỏ Từ khố: Mị đỏ, tỷ lệ, cường độ nhiễm, gà, Thái Nguyên Trường CĐ Kinh tế-Kỹ Thuật-Đại học Thái Nguyên * Tác giả liên hệ: TS Đỗ Thị Vân Giang, Trường Cao đẳng Kinh tế-Kỹ Thuật – ĐHTN Địa chỉ: Tổ 15, Phường Thinh Đán, Thành phố Thái Nguyên, Tỉnh Thái Nguyên Điện thoại: 0904227272; Email: vangiang208@gmail.com 84 KHKT Chăn nuôi số 277 - tháng năm 2022 ... chủ của các chủng APEC (Hejair và ctv, 2017) 3.5 Hoa? ?t tính kháng khuẩn của cao rễ bạch hoa xà các chủng APEC phân lập Kết quả thử hoa? ?t tính kháng khuẩn của cao rễ bạch hoa. .. nghiên cứu tác dụng Bạch hoa xà, lĩnh lực chăn nuôi Do đó, đề tài ? ?Hoa? ?t tính kháng khuẩn của cao chiết từ rễ bạch hoa xà P zeylanica đối với E coli gây bệnh gia cầm? ?? được thực hiện... tính kháng khuẩn, cao này được pha vào DMSO Kết quả thử nghiệm hoa? ?t tính kháng khuẩn của cao rễ bạch hoa xà các chủng APEC phân lập cho cao này (5mg) cho hoa? ?t tính kháng