Thực hành hóa sinh Y học

ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH KHOA Y PHÂN MÔN HÓA SINH Lớp 20DYK1C Nhóm thực hành 3 Nhóm nhỏ 3 4 BÁO CÁO CUỐI KỲ MÔN THỰC HÀNH HÓA SINH Họ và tên học viên Lê Thị Minh Huệ MSSV 2000002762 Số ĐT 0931301873 E.

ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH KHOA Y PHÂN MƠN HĨA SINH Lớp: 20DYK1C Nhóm thực hành: Nhóm nhỏ: 3-4 BÁO CÁO CUỐI KỲ MƠN THỰC HÀNH HĨA SINH Họ tên học viên: Lê Thị Minh Huệ MSSV: 2000002762 Số ĐT: 0931301873 Email: lethiminhhue552002@gmail.com TP Hồ Chí Minh, 12/2021 MỤC LỤC NỘI DUNG BUỔI 1: ĐỊNH LUẬT CƠ BẢN VỀ SỰ HẤP THU ÁNH SÁNG - PHƯƠNG PHÁP ĐO QUANG 1.1 ĐỊNH LUẬT CƠ BẢN VỀ SỰ HẤP THU ÁNH SÁNG 1.1.1 Định luật Beer – Lambert 1.1.2 Ứng dụng định luật Beer – Lambert 1.1.3 Phương pháp định lượng đo quang 1.2 NGUYÊN TẮC XÉT NGHIỆM HÓA SINH LÂM SÀNG THƯỜNG DÙNG QUA PHƯƠNG PHÁP ĐO QUANG 1.2.1 Phương pháp đo điểm cuối (End - point method) 1.2.2 Phương pháp đo động học (Kinetic method) BUỔI 2: LIPID 2.1 ĐỊNH LƯỢNG TRIGLYCERID 2.2 ĐỊNH LƯỢNG CHOLESTEROL TOÀN PHẦN 13 2.3 ĐỊNH LƯỢNG HDL-C 17 2.4 ĐỊNH LƯỢNG LDL-C 20 BUỔI 3: PROTID 23 3.1 XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH GOT 23 3.2 XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH GPT 27 3.3 ĐỊNH LƯỢNG URE 31 3.4 ĐỊNH LƯỢNG CREATININ 34 BUỔI 4: ACID NUCLEIC VÀ HEMOGLOBIN 39 4.1 ĐỊNH LƯỢNG ACID URIC 39 4.2 ĐỊNH LƯỢNG BILIRUBIN TOÀN PHẦN 43 4.3 ĐỊNH LƯỢNG BILIRUBIN TRỰC TIẾP 47 BUỔI 5: GLUCID 50 5.1 XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH CỦA AMYLASE 50 5.2 ĐỊNH LƯỢNG GLUCOSE 56 BUỔI 6: PHÂN TÍCH NƯỚC TIỂU VỚI GIẤY THỬ 11 THƠNG SỐ 62 6.1 Đại cương nước tiểu 62 6.2 Mục đính xét nghiệm 62 6.3 Nguyên tắc đo lường giá trị tham khảo 63 6.4 Thuốc thử đặc tính hiệu 67 6.5 Bảo quản độ ổn định thuốc thử 68 6.6 Lấy bảo quản mẫu 69 6.7 Cách tiến hành 70 6.8 Diễn giải kết 70 6.9 Ưu điểm hạn chế xét nghiệm 70 TÀI LIỆU THAM KHẢO 72 NỘI DUNG BUỔI 1: ĐỊNH LUẬT CƠ BẢN VỀ SỰ HẤP THU ÁNH SÁNG - PHƯƠNG PHÁP ĐO QUANG 1.1 ĐỊNH LUẬT CƠ BẢN VỀ SỰ HẤP THU ÁNH SÁNG 1.1.1 Định luật Beer – Lambert - Khi chiếu chùm tia đơn sắc có bước sóng  cường độ Io vào dung dịch màu đồng có nồng độ C, chiều dày lớp dung dịch mà ánh sáng chiếu qua (nghĩa bề dày vật liệu chứa dung dịch ví dụ ống nghiệm, cóng đo, cuvette.) ký hiệu L - Khi qua dung dịch: phần ánh sáng bị hấp thu (Ih) phần ánh sáng bị phản xạ (Ip) Phần lại (I) qua dung dịch Ih Io = Ih + Ip + I Mà Ip khơng đáng kể nên coi như: Io = Ih + I Chiều dày L (cm) - Theo định luật Beer – Lambert, ta có: 𝐼 𝐼0 = 10 -kLC = T (transmittance): Độ truyền quang hay độ thấu quan, tính theo % Độ truyền quang tỉ lệ phần trăm ánh sáng qua dung dịch so với lượng ánh sáng ban đầu chiếu vào mẫu thử k: hệ số hấp thu, phụ thuộc vào chất màu dung mơi, bước sóng chùm tia nhiệt độ log 𝐼 𝐼0 = kLC = OD = A = D → Mật độ quang (OD - optic density) hay độ hấp thụ (A - absorbance) dung dịch Lưu ý: OD, A, D, ABS hay DO quy ước ký hiệu cho mật độ quang dung dịch Khi chiếu chùm tia đơn sắc có cường độ Io qua dung dịch ngồi việc có phần ánh sáng qua dung dịch, phần bị phản xạ lại cịn có phần ánh sáng bị dung dịch hấp thụ lại Mật độ quang khả hấp thụ phần ánh sáng bị hấp thụ  Mật độ quang tỷ lệ thuận với hệ số hấp thu k, nồng độ C dung dịch, chiều dày L lớp dung dịch mà ánh sáng chiếu qua; tỷ lệ nghịch với độ truyền quang Lưu ý: Định định luật Beer - Lambert với chùm tia đơn sắc, nồng độ chất dung dịch nhỏ 1.1.2 Ứng dụng định luật Beer – Lambert - Tính chất hấp thụ ánh sáng dùng để đo nồng độ chất có màu hay cho phản ứng màu - Các giai đoạn phương pháp đo màu: ▪ Thực dung dịch có màu chứa chất cần định lượng với nồng độ biết trước (Co) ▪ Tiến hành phản ứng tương tự với mẫu thử có nồng độ chưa biết (C) ▪ Đọc mật độ quang mẫu chuẩn mẫu thử ▪ Tính nồng độ chất cần phân tích Trong điều kiện thí nghiệm (có k L),mật độ quang tỷ lệ thuận với nồng độ dung dịch, so sánh (C) (Co), áp dụng quy tắc tam suất ta có: D = kLC Do = kLCo  C C0 = D D0  C= D.C0 D0 1.1.3 Phương pháp định lượng đo quang - Dựa sở mật độ quang D dung dịch với chất có nồng độ C Ta xác định D máy đo quang (photometer hay spectrophotometer) - Đặc điểm máy đo quang: Tia sáng sau qua dung dịch chiếu lên tế bào quang điện (detector) để chuyển thành dịng điện  cường độ đo nhờ điện kế nhạy, khuếch đại chuyển sang phận ghi kết - Các phận máy: Nguồn sáng (ánh sáng trắng) Bộ đơn sắc (kính lọc hay cách tử) → lọc chùm tia đơn sắc Buồng đo: chứa cóng đo riêng máy Đầu dò (detector, tế bào quang điện) Bộ phận khuyếch đại Bộ phận hiển thị kết quả: thị kim, số, mode đo, Các hệ thống vi xử lý, chương trình cài đặt, → Máy sinh hóa bán tự động, máy sinh hóa tự động, - Trong phép định lượng đo quang, thông thường thông qua kỹ thuật xét nghiệm, ta chuyển chất X (chất cần xác định nồng độ, khơng màu) thành hợp chất RX có màu thuốc thử R đặc hiệu Sau đo mật độ quang hợp chất RX, có độ hấp thụ bước sóng xác định nhờ máy đo quang Lưu ý: - Dung dịch đo quang phải suốt - Xác định nồng độ C chưa biết chất: ✓ Bằng cách làm song song với ống chuẩn có nồng độ C0 biết: C = ✓ Bằng cách lập biểu đồ dùng hệ số factor: F = D.C0 D0 C0 D0 - Dùng mẫu trắng: Khi dung dịch đo có chứa chất khác hấp thụ tia sử dụng ▪ Pha mẫu trắng giống chuẩn bị dung dịch đo (cho thuốc thử tạo màu không cho chất cần xác địch vào) ▪ Đo mật độ quang D dung dịch đo đối chiếu với mẫu trắng - Để xác định nồng độ C chất X xác, cần có: ✓ Ống đo: chứa dung dịch chất X cần xác định nồng độ C + thuốc thử R  Dt ✓ Ống chuẩn: chứa dung dịch chất X có nồng độ Co + thuốc thử R  Do ✓ Ống trắng: thường có thuốc thử R  Dtr Ta có cơng thức: C = Dt D0 C0 → Điều chỉnh lại cơng thức có Dtr : C = Dt − Dtr Co Do − Dtr - Bảng màu bổ sung: Để chọn kính lọc màu hay tia đơn sắc phương pháp đo quang ta cần biết phổ hấp thụ dung dịch Bảng Bảng màu bổ sung Màu dung dịch phân tích Tím Chàm Chàm ánh lục Lục ánh chàm Lục Lục ánh vàng Vàng Da cam Đỏ Vùng bước sóng gần (nm) 400 - 450 450 - 480 480 - 490 490 - 500 500 - 560 560 - 575 575 - 590 590 - 625 625 - 750 Màu kính lọc thích hợp Lục ánh vàng Vàng Da cam Đỏ Tía Tím Chàm Chàm ánh lục Lục ánh chàm Vùng bước sóng gần kính lọc ( nm) 560 - 575 575 - 590 590 - 625 625 - 750 400 - 450 450 - 480 480 - 490 490 - 500 Ví dụ: - Chúng ta nhìn thấy dung dịch có màu lục ánh chàm dung dịch hấp thu màu đỏ (màu bổ sung đối xứng với vịng trịn màu) Do để đo mật độ quang D dung dịch có màu lục ánh chàm cần điều chỉnh vùng bước sóng kính lọc khoảng 625 – 750 nm 1.2 NGUYÊN TẮC XÉT NGHIỆM HÓA SINH LÂM SÀNG THƯỜNG DÙNG QUA PHƯƠNG PHÁP ĐO QUANG 1.2.1 Phương pháp đo điểm cuối (End - point method) - Là phép đo mật độ quang D dung dịch chất thử mà trình thực phản ứng xảy hoàn toàn từ thời điểm t0 bắt đầu tới thời điểm t kết thúc phản ứng - Có thể đo tính kết cách: ✓ So với chuẩn: cách tính cho kết xác C0 ✓ So với hệ số factor (F = ΔA ) ✓ So với biểu đồ mẫu Đồ thị đường chuẩn A = f(C) - Kỹ thuật thực hiện: a) Phương pháp hóa học - Dùng phản ứng hóa học đặc hiệu cho chất cần xác định - Ví dụ: ✓ Creatinin: phản ứng Jaffe, a.picric ✓ Ure: kỹ thuật Bousquet , dùng DAM (diacetyl monoxim) ✓ Protein : phản ứng biuret , dùng sulfat đồng/môi trường kiềm ✓ Cholesterol: phản ứng Liebermann - Burchard ✓ Glucose: dùng ortho - toluidine ph̉ản ứng khử Somogyi - Nelson … b) Phương pháp enzyme - Dùng enzyme thuốc thử tác dụng đặc hiệu, chuyên biệt chất xác định  Cho kết xác, xác thực phương pháp cổ điển, hóa học, tiến hành nhanh, vi định lượng nên áp dụng phổ biến - Ví dụ: Dùng glucose oxidase, urease, cholesterol oxidase, Để định lượng chất tương ứng glucose, ure, cholesterol, 1.2.2 Phương pháp đo động học (Kinetic method) Là phương pháp theo dõi động học, cách liên tục trình diễn tiến phản ứng, qua thời điểm t0, t1, t2, khoảng tuyến tính phản ứng a) Phương pháp động học so chuẩn (Standard kinetic) - kỹ thuật động học điểm (fixed time) - Nồng độ chất phản ứng tính so với mẫu chuẩn làm song song loạt phản ứng - Thường dùng đo hoạt độ enzym: ✓ Không tạo phức màu ✓ Đo độ đục (vận tốc tạo thành sản phẩm khoảng thời gian xác định thích hợp từ thời điểm t0 đến t1) ✓ Thường sử dụng bước sóng vùng tử ngoại A ✓ Tính hiệu số mật độ quang trung bình phút: C = A Co o b) Kỹ thuật động học enzyme Đo vận tốc tạo thành sản phẩm từ thời điểm t0, t1, t2, Hoạt tính enzyme tính cách nhân trung bình ΔD/phút với hệ số riêng phản ứng (F) kết số đơn vị UI/L  Xác định hoạt tính thơng số enzyme (GOT, GPT, ALP, amylase, ) Ví dụ: Giảm ABS: Xác định hoạt tính GOT, GPT Tăng ABS: Xác định hoạt tính amylase **Lưu ý: trị số đối chiếu (giá trị tham khảo) thơng số có tùy thuộc vào loại kỹ thuật xét nghiệm, điều kiện tiến hành, nhiệt độ, ̣… ngồi biến thiên sinh lý cũng có gây ảnh hưởng lên kết xét nghiệm Vì vậy, nhận định kết nên lưu ý đến yếu tố -BUỔI 2: LIPID 2.1 ĐỊNH LƯỢNG TRIGLYCERID → Phương pháp đo điểm cuối enzyme (Kỹ thuật CHOD – PAP) 2.1.1 Đại cương - Triglycerid (TG) hay cịn gọi chất béo trung tính, ester glycerol với acid béo - Vai trò: ✓ Dự trữ lượng thể ✓ Cách nhiệt (tạo lớp mỡ da giúp giữ nhiệt) ✓ Tạo lớp mỡ bao quanh số quan → có tác dụng bảo vệ, đệm học chống va đập - Lý tính: ✓ Tính hịa tan: Khơng tan nước, khơng tạo nhũ tương bền ether, acol nóng, chloroform, benzen, ✓ Không màu, không mùi, không vị - TG có hai nguồn gốc: ngoại sinh (thức ăn) nội sinh (do gan tổng hợp) *Lipoprotein - Lipid liên kết với protein đặc hiệu – gọi apoprotein (apo) tạo nên phân tử lipoprotein (LP) có khả hòa tan nước dạng vận chuyển triglycerid cholesterol este hóa máu, qua lại mơ - Các LP có tỷ lệ lipit protein khác nên chúng có tỉ trọng độ di chuyển điện di khác → tách riêng phân loại LP phương pháp siêu ly tâm điện di thu kết hình bên Cấu tạo loại lipoprotein Phân loại LP phương pháp siêu ly tâm điện di CM VLDL Pre  LP LDL  LP HDL  LP Tỷ trọng < 0,95 0,95 -1,006 1,006 - 1,063 1,063 - 1, 210 Kích thước (nm) > 120 30 - 100 21 - 25 - 15 80 - 95 1-3 2-4 3-6 1-2 B48, AI, CI, CII, CIII, E 55 - 65 10 15 - 20 10 B100, CI, CII, CIII, E 10 27 22 25 B100 14 28 45 - 55 AI, AII, CI Tính chất thành phần Lipit (%) - Triglyceride - Cholesterol tự - Cholesterol ester - Phospholipid Protein (%) Apo - TG dự trữ mô mỡ Khi nguồn lượng từ glucose khơng cịn → thể thủy phân glycogen nguồn dự trữ glycogen hết → thể chuyển sang lấy nguồn lượng cung cấp từ acid amin TG mô mỡ ✓ Tại mô mỡ, tác dụng lipase, triglycerid bị thủy phân thành glycerol acid béo Sau đó, acid béo tự vận chuyển máu đưa đến tế bào sử dụng AMPv từ ATP AMPv hoạt hóa proteinkinase thành dạng hoạt động (protein kinase A) Sau hàng loạt phản ứng (xem sơ đồ) - Thyroxin: hormone tuyến giáp tiết → tăng hấp thu glucose ruột, tăng phân giải glycogen gan - Glucocorticoid: vỏ thượng thận tiết → tăng hấp thu glucose ruột, tăng phân giải glycogen gan, tăng tân tạo glucose, giảm tiêu dùng glucose mơ ngồi gan - ACTH (adrenocorticotropic hormone): thùy trước tuyến yên tiết ra, kích thích vỏ thượng thận tiết glucocorticoid ** Hormone làm giảm đường huyết: Insulin tế bào , đảo Langerhans tuyết tụy tiết → tăng tính thấm màng tế bào glucose, tăng tổng hợp glycogen tăng hoạt glycogen synthase làm giảm phân ly glycogen gan, → giảm đường huyết Đối với lipit, insulin làm tăng tổng hợp acid béo từ glucose, tổng hợp lipit dự trữ mô mỡ 5.2.2 Nguyên tắc định lượng - Glucose bị oxy hóa glucose oxidase (GOD) có mặt oxy để tạo thành gluconolactone H2O2 tạo thành phản ứng với phenol 4-Aminophenazone xúc tác peroxidase thành chất thị màu đỏ tím quinoneimine - Phương trình phản ứng: 58 - Cường độ màu quinoneimine tỷ lệ thuận với nồng độ glucose ban đầu có mẫu 5.2.3 Thuốc thử - Thuốc thử R: ▪ Đệm Phosphate (pH=7.5) 0.1 mol/l ▪ 4-Aminoantipyrine 0.3 mmol/l ▪ Phenol mmol/l ▪ Glucose oxidase >20 KU/l ▪ Peroxidase > 1.5 KU/l ▪ Chất ổn định - Dung dịch glucose chuẩn: 100 mg/dl Lưu ý: Thuốc thử niêm phong bền đến hết hạn sử dụng bao bì bảo quản 2-8oC Thuốc thử mở, phải tránh nhiễm bẩn, độ bền khoảng 28 ngày 18-22oC 5.2.4 Khoảng tuyến tính – Cách tiến hành Khoảng tuyến tính - Thử nghiệm tuyến tính với nồng độ đường lên đến 400mg/dl 22,2mmol/l - Nếu nồng độ glucose mẫu vượt giới hạn pha lỗng mẫu 1+2 nước muối sinh lý (0,9%) lặp lại xét nghiệm Nhân kết với - Phạm vi đo lường: 1,1 - 400 mg/dl Cách tiến hành - Bước sóng 500 nm 546nm - Nhiệt độ: 25 37°C - Đo đối chiếu với mẫu trắng - Chỉ cần mẫu trắng thuốc thử cho đợt xét nghiệm 59 - Dùng Pipet cho vào cuvet (1cm): Ống đo Ống trắng Ống chuẩn 1000µl 1000µl 1000µl - - 10µl 10µl - - Thuốc thử R Dung dịch glucose chuẩn Huyết - Trộn đều, ủ 15 phút 25oC 10 phút 37oC Đo mật độ quang ống chuẩn A(STANDARD) ống đo A(SAMPLE) so với ống trắng A(RBL) vịng 60 phút 5.2.5 Cách tính tốn kết So với chuẩn - Cơng thức tính nồng độ glucose: C = 100 C = 5,55 A( S ) A( STD ) A( S ) A( STD ) = 100 A( SAMPLE ) − A( RBL ) A( STANDARD ) − A( RBL ) = 5, 55 A( SAMPLE ) − A( RBL ) A( STANDARD ) − A( RBL ) (mg / dl ) (mmol / l ) - Trong đó: C: Nồng độ glucose huyết (mg/dl) A(SAMPLE): Mật độ quang ống đo (chứa huyết thuốc thử R) A(STANDARD): Mật độ quang ống chuẩn (chứa dung dịch glucose chuẩn có nồng độ 100 mg/dl 5,55 mmol/l thuốc thử R) A(RBL): Mật độ quang ống trắng (chứa thuốc thử R) 5.2.6 Giá trị tham khảo (trích từ kit Centronic GmbH) Huyết thanh/ huyết tương (nhịn ăn) mg/dl mmol/l Trẻ sơ sinh 40-80 2.22-4.44 Trẻ em 60-110 3.3.-6.11 70-105 3.89-5.83 >60 tuổi 80-115 4.44-6.83 > 70 tuổi 83-110 4.61-6.11 Người lớn 5.2.7 Biện luận - Đại cương Glucose (đã trình bày mục 5.2.1) 60 - Ý nghĩa lâm sàng: định lượng glucose máu cho phép phát rối loạn chuyển hóa glucose, đóng vai trị quan trọng chẩn đốn bệnh lý đái tháo đường, phòng tránh tai biến mạch máu não, đột quỵ - Trong thể bình thường, chuyển hóa glucose ln điều hịa theo nhu cầu thể thể quan trọng rõ rệt điều hòa đường huyết hormone - Giá trị đường huyết bình thường (theo Y tế Việt Nam): ▪ Người lớn: 3.9 – 6.4 mmol/l ▪ Trẻ em: 3.3 – 5.6 mmol/l ▪ Trẻ sơ sinh: 2.2 – 4.4 mmol/l **Đường huyết ổn định nhờ cân nguồn: ▪ Bổ sung, cung cấp glucose vào máu Nguồn glucid ngoại sinh từ thức ăn, nguồn nội sinh phân giải glycogen tân tạo glucose khoảng bữa ăn ▪ Sử dụng glucose tổ chức, quan trọng mô cơ, mô mỡ, mô thần kinh tổng hợp glycogen dự trữ tất tổ chức (nhiều gan cơ) ▪ Glucose liên tục lọc qua quản cầu thận tái hấp thu hoàn toàn qua ống thận Khi lượng glucose máu vượt ngưỡng thận (khoảng 180mg/dl) glucose thải qua nước tiểu (đường niệu) **Cơ chế điều hòa đường huyết: ▪ ▪ Gan đóng vai trị quan trọng điều hòa đường huyết nhờ chức glycogen gan Ngoài gan, cũng tham gia vào trình điều hịa đường huyết Có nhiều yếu tố ảnh hưởng đến đường huyết, yếu tổ tác động trước hết đến chức glycogen gan chuyển hóa glucid mơ khác Hệ thống nội tiết điều hịa xác nhanh chóng qua hệ thân kinh trung ương, gồm hai hệ thống đối lập nhau: Làm giảm đường huyết: chủ yếu insulin, lao động nặng Làm tăng đường huyết: chủ yếu glucagon, adrenalin hormon tuyến khác (tuyến giáp trạng, vỏ thượng thận, thùy trước tuyến yên) - Biểu tăng đường huyết thiếu insulin hay thừa hormon tăng đường huyết (cường tuyến tương ứng, giảm đường huyết thừa insulin hay thiểu tuyển tương ứng) - Các rối loạn chuyển hóa glucid qua lâm sàng xét nghiệm Các nghiệm pháp động học nhằm thăm dò khả đáp ứng hệ thống điều chỉnh đường huyết ta gây tăng giảm đường huyết (nghiệm pháp tăng đường huyết, nghiệm pháp tiêm adrenalin ) nhằm đánh giá chức chuyển hóa chuyên biệt quan (nghiệm pháp galactose niệu) - Thay đổi đường huyết sinh lý: ▪ Tăng đường huyết: sau ăn, sau tập thể dục ▪ Hạ đường huyết: Khi đói, có thai, cho bú, sau luyện tập kéo dài 61 - Thay đổi đường huyết bệnh lý: ▪ Glucose máu tăng trường hợp bệnh lý: + Đái tháo đường + Viêm tuỵ, ung thư tuỵ + U tuỷ thượng thận + Cường giáp ▪ Glucose máu giảm trong trường hợp bệnh lý: + Suy tuyến yên, suy tuyến giáp + Bệnh Insulinoma + Thiếu dinh dưỡng - BUỔI 6: PHÂN TÍCH NƯỚC TIỂU VỚI GIẤY THỬ 11 THƠNG SỐ (Que thử nước tiểu Mission® Urinalysis Reagent Strips) 6.1 Đại cương nước tiểu - Hệ tiết niệu gồm phận thận, niệu quản, bàng quang niệu đạo Hệ tiết niệu có vai trị loại bỏ chất độc, cân nước điện giải, điều hòa huyết áp, tạo máu điều hịa chuyển hóa Canxi-photpho Nước tiểu sản phẩm hệ tiết niệu, thường vô trùng đào thải khỏi thể qua đường niệu đạo Trong trình trao đổi chất bên thể tạo số sản phẩm không tốt cho sức khỏe, cần loại bỏ khỏi máu chất đào thải qua nước tiểu - Cơ thể người có hai thận, ngày thận lọc khoảng 1400 lít máu tạo khoảng 170 lít nước tiểu đầu Tuy nhiên nhờ có q trình tái hấp thu mà lượng nước tiểu tạo thành khoảng - 1,5 lít - Nước tiểu theo niệu quản tập trung bàng quang Khi lượng nước tiểu bàng quang đạt đến ngưỡng định tạo cảm giác muốn tiểu, sau nước tiểu qua đường niệu đạo tiết - Ý nghĩa xét nghiệm phân tích nước tiểu: thành phần nước tiểu thay đổi suốt giai đoạn bệnh rối loạn chức thể trước thành phần máu thay đổi tới mức rõ rội Phân tích nước tiểu quy trình hữu ích, số phản ảnh sức khỏe tình trạng bệnh phần kiểm tra sức khỏe định kỳ Que thử nước tiểu Mission Urinalysis® Reagent Strips (Urine) 11 thơng số dùng để đánh giá tổng quan sức khỏe hỗ trợ chẩn đốn, theo dõi q trình chuyển hóa bệnh thể gây ảnh hưởng đến chức thận, rối loạn nội tiết bệnh rối loạn đường tiết niệu 6.2 Mục đính xét nghiệm - Que thử nước tiểu dạng nhựa mỏng bề mặt có vùng phủ sẵn thuốc thử riêng biệt Được dùng phát định tính bán định lượng vài chất cần phân tích sau 62 nước tiểu: Ascorbic acid, Glucose, Bilirubin, Ketone, tỷ trọng, máu, pH, Protein, Uroblinogen, Nitrite bạch cầu Que thử nước tiểu Mission Urinalysis® Reagent Strips (Urine) sử dụng cho xét nghiệm chỗ phòng thí nghiệm - Tham khảo nhãn hộp để biết danh mục chất cần phân tích cụ thể, so sánh màu chất cần phân tích với màu bảng màu để đọc kết Que thử nước tiểu Mission Urinalysis® Reagent Strips (Urine) sử dụng đọc mắt thường đọc với máy phân tích nước tiểu Mission sử dụng cho mục đích chuyên nghiệp 6.3 Nguyên tắc đo lường giá trị tham khảo 6.3.1 Ascorbic acid (ASC) - Xét nghiệm liên quan đến bay màu chất Tillman - Sự có mặt axit ascorbic gây thay đổi màu từ xanh dương - xanh sang màu cam - Bệnh nhân với chế độ ăn đầy đủ tiết 2-10 mg/dL hàng ngày - Sau tiêu thụ lượng lớn axit ascorbic, nồng độ khoảng 200 mg/dL - Việc đánh giá mức độ acid ascorbic nước tiểu giúp làm giảm nguy sai lệch kết số bệnh Acid ascorbic nồng độ cao nước tiểu gây âm tính giả số chất (glucose, nitrite bilirubin) tế bào (hồng cầu, bạch cầu) xét nghiệm nước tiểu que thử - Chỉ số bình thường: 5-10 mg/dL 0.28-0.56 mmol/L 6.3.2 Glucose (GLU) - Xét nghiệm dựa phản ứng enzym xảy glucose oxidase, peroxidase chất tạo màu Glucose oxi hóa tạo thành axit gluconic hydrogen peroxide với diện glucose oxidase - Hydrogen peroxide phản ứng với chất tạo màu postassium iodide với diện peroxidase Mức độ oxi hóa chất tạo màu xác định màu sắc hình thành, khoảng từ xanh tới nâu - Glucose thường không phát thấy nước tiểu có phụ nữ mang thai Lượng nhỏ glucose nước tiểu tiết thận - Nồng độ glucose thấp 100 mg/dl xem bất thường kết xác 6.3.3 Bilirubin - Xét nghiệm dựa phản ứng cặp azo bilirubin với dazotized dichloroanline môi trường axit mạnh - Mức bilirubin thay đổi tạo màu hồng nhạt tỉ lệ thuận với nồng độ nước tiểu Trong nước tiểu bình thường, khơng thể phát bilirubin kể phương pháp nhạy 63 - Các kết khơng điển hình (màu sắc khác với mẫu màu âm tính dương tính bảng màu) sắc tố có nguồn gốc bilirubin có mẫu nước tiểu giấu phản ứng bilirubin - Billirubin bình thường khơng tìm thấy nước tiểu với xét nghiệm giấy thử Giấy thử đo lương bilirubin > 0,4 mg/dl Billirubin xuất nước tiểu, có loại bil TT (gặp bệnh lý vàng da gan sau gan) 6.3.4 Ketone (KET) - Xét nghiệm dựa phản ứng ketones với nitropursside axit acetoacatic tạo thành màu thay đổi từ hồng nhạt cho kết âm tính tới hồng đậm tím cho kết dương tình - Bình thường ketone khơng có nước tiểu Một lượng ketone phát xuất nước tiểu bị stress sinh lý đói, mang thai vận động gắng sức thường xuyên - Trong chế độ ăn kiêng tình trạng chuyển hoá carbohydrate bất thường, ketone xuất nước liều với nồng độ cao mức trước ketone huyết tăng lên.Bình thường, nồng độ ketone máu 1mg/dl - Đây chất thải đường tiểu, dấu hiệu nhận biết thai phụ thai nhi thiếu dinh dưỡng mắc chứng tiểu đường Nếu kết xét nghiệm nước tiểu phát lượng ketone, kèm theo dấu hiệu chán ăn, mệt mỏi, thai phụ nên bác sĩ định truyền dịch dùng thuốc Để giảm hết lượng ketone, thai phụ nên thư giãn, nghỉ ngơi cố gắng không bỏ bữa ăn 6.3.5 Tỷ trọng (Specific Gravity - SG) - Xét nghiệm dựa thay đổi pKa rõ ràng số polylectrolytes tiền xử lý liên quan lới nồng độ ionic - Chất thị có nước tiểu số làm màu thay đổi từ xanh dương - xanh đậm nước tiểu nồng độ ionic thấp sang màu xanh vàng - xanh nước tiểu có ionic tăng cao - Mẫu nước tiểu lấy ngẫu nhiên có tỷ trọng thay đổi khoảng 1.003 - 1.035 Mẫu nước tiểu 24 từ người khỏe mạnh với chế độ ăn uống bình thường có tỷ trọng 1016 1.022 Trong trường hợp tổn thương thận nặng, tỷ trọng cố định 1.010 giá trị lọc cầu thận - Tỷ trọng nước tiểu định nghĩa lượng chất hòa tan hòa tan nước tiểu so với nước (=1.000) - Chỉ số bình thường: 1.015 - 1.025 - Tỷ trọng tăng bệnh đái tháo đường, giảm bệnh đái tháo nhạt Tỷ trọng thấp kéo dài cũng thường gặp suy thận 6.3.6 Máu (Blood - BLO) 64 - Xét nghiệm dựa phản ứng giống peroxidase hemoglobin, gây xúc tác phản ứng diisoproprylebenzen dihydroperoxide 3,3’5,5’ - tetramethylbenzidine Giấy thử thường biểu thị hai dạng đốm lầm chấm màu thay đổi màu (hồng cầu tươi biểu thị ô thuốc thử xuất đốm lấm chấm tương ứng su thay đổi màu) Một hợp đốm lấm chấm xảy có 250 hồng cầu/ml - Bình thường nước tiểu khơng có máu Trong số trường hợp bệnh lý, tiểu Hb như: thiếu enzym G6PD, truyền nhầm nhóm máu, sốt rét,… tiểu máu nhưsỏi đường tiểu, lao đường tiểu, ung thư bàng quang, ung thư thận,… - Âm tính giả xét nghiệm tìm hemoglobin gia tăng formalin diện mẫu thử Dương tính giả thường gặp lây nhiễm mẫu thử nước tiểu từ máu kinh nguyệt phu nữ, tỉ trọng nước tiểu cao (do làm thay đổi nồng độ hồng cầu gia tăng nồng độ hemoglobin), tập thể dục nặng nước nhiều, vitamin có khả tạo chất oxy hóa với nồng độ cao - Độ nhạy giấy thử thường 90%, xét nghiệm cho kết dương tính mẫu thử có từ - hồng cầu quang trường Điều phàn ảnh xét nghiệm có kết âm tính giả thấp, vậy, tỉ lệ dương tính giả cao Dùng giấy thử để tầm soát trường hợp tiêu máu, bệnh đường tiểu, bệnh ác tính 6.3.7 pH - Xét nghiệm dựa hệ thống số kép, mang lại khoảng màu rộng bao gồm toàn khoảng pH nước tiểu Khoảng màu từ da cam đến vàng xanh đến xanh dương - Khoảng giá trị mong đợi mẫu nước tiểu bình thường từ trẻ sơ sinh pH – Khoảng giá trị mong đợi cho mẫu nước tiểu đối tượng khác pH 4.5 - 6, với kết trung bình pH - Dùng để đánh giá nước tiểu có tính chất acid hay bazơ Khi pH = có nghĩa nước tiểu có tính acid mạnh, pH = trung tính (không phải acid, cũng bazơ) pH = có nghĩa nước tiểu có tính bazơ mạnh - Khi xét nghiệm nước tiểu pH tăng nghĩa có nhiễm khuẩn thận (tăng có lúc giảm), suy thận mạn, hẹp môn vị, nôn mửa; giảm nhiễm ceton tiểu đường, tiêu chảy nước 6.3.8 Protein (PRO) - Phản ứng dựa tượng biết với tên gọi "protein error" số pH, nơi mà số có độ đệm cao thay đổi màu có diện protein (anion) số giải phóng ion hydrogen thành protein - Thận bình thường tiết nước tiểu lượng protein khoảng 150mg/24 giờ, 95% protein lọc qua cầu thận tái hấp thu trờ lại ống thận - Những thuốc thử giấy thử phản ứng nhạy với albumin globulin, hemoglobin, protein Bence Jones mucoprotein Phản ứng có độ nhạy với lượng protein khoảng 65 10mg/dl Do nước tiểu người bình thường khơng phản ứng với giấy thử tìm protein - Tại giá trị pH không đổi, đổi màu xanh so màu vàng (gốc) liên quan đến có mặt protein mẫu bệnh phẩm Khoảng màu từ vàng đến vàng - xanh cho kết âm tính xanh đến xanh dương cho kết dương tính - Phản ứng dương tính giả xảy với mẫu nước tiểu kiềm (pH > 9), dùng phenazopyridine (pyridium azogantrisin), số chất sát trùng, tỉ trọng nước tiểu cao, mẫu thử sau xoa bóp tuyến tiền liệt, máu nhân tạo (truyền polyvinyl pyrrolidon), penicillin liều cao, tolbutamid, acid paraaminosalicylic - Phản ứng âm tính giả xảy protein niệu có chất khơng phải albumin protein Bence Jones - Bình thường không phát protein nước tiểu 6.3.9 Urobilinogen (URO) - Xét nghiệm dựa phản ứng Ehrlich sửa đổi p-diethyl-aminobenzaldehyde urobilinogen môi trường acid mạnh để tạo màu hồng - Urobilinogen bình thường tiết nước tiểu khoảng từ – mg/24 Urobilinogen tạo thành thoái hoá bilirubin liên hợp ruột từ vi khuẩn - Trong chuyển hoá, 50% urobilinogen đào thải theo đường phân tên stercobilinogen, sau đó, bị oxi hố khơng khí thành stercobilin, phần lại tái hấp thu trở lại huyết tương, gan để gan biến đổi thành bilirubin liên hợp tạo nên chu trình gan ruột, lượng nhỏ thoát khỏi biến đổi gan, lưu thơng tuần hồn tiết thận theo đường tiểu - Khoảng giá trị mong đợi xét nghiệm với nước tiểu 0.2 – 10 mg/dL (3.7 - 17 μmol/L) - Đây xét nghiệm giúp chẩn đoán bệnh lý gan hay túi mật Urobilinogen sản phẩm tạo từ thối hóa bilirubin Urobilinogen có nước tiểu dấu hiệu bệnh gan (xơ gan, viêm gan), dòng chảy mật bị tắc nghẽn 6.3.10 Nitrite (NIT) - Xét nghiệm tùy thuộc vào chuyển đổi nitrate thành nitrite hoạt động vị khuẩn gram âm nước tiểu Trong môi trường axit, nitrit nước tiểu phản ứng với axit p-arsanilic tạo thành hợp chất diazonium Hợp chất diazonium tạo cặp với N(1-naphthyl)-ethylenediamine để tạo thành màu hồng Nitrit + axit p-arsanilic → diazonium + N-(1-naphthyl)-ethylenediamine - Nitite không tìm thấy nước tiểu bình thường - Vùng nitrite dương tính số trường hợp nhiễm trùng, tùy thuộc vào thời gian mẫu nước tiểu lưu giữ bàng quang trước lấy mẫu 66 - Tìm kiếm trường hợp dương tính với khoảng xét nghiệm nitrite dao động khoảng 40% trường hợp thời gian ủ nhiễm khuẩn bảng quang đến khoảng 80% thời gian ủ bàng quang diễn - Vi khuẩn Gram âm gây nhiễm trùng đường tiết niệu tạo loại enzyme có khả chuyển nitrate niệu thành nitrite Do kết xét nghiệm nước tiểu tìm thấy nitrite có nghĩa có nhiễm khuẩn đường tiết niệu Nếu dương tính có nhiễm khuẩm Gram âm vi khuẩn E Coli 6.3.11 Bạch cầu (Leukocytes - LEU) - Xét nghiệm cho biết có mặt enzyme granulocyte esterases Các esterases tách dẫn xuất ester axit amin pyrazole sinh để giải phóng dẫn xuất hydroxy pyrazole Sau pirazole phản ứng với muối diazonium tạo thành màu be - hồng đến tím - Mẫu nước tiểu thơng thường cho kết âm tính (Bình thường: Âm tính) - Khi xét nghiệm nước tiểu có chứa bạch cầu, thai phụ bị nhiễm khuẩn nấm (có giá trị gợi ý nhiễm trùng tiểu không khẳng định được) Trong trình chống lại vi khuẩn xâm nhập, số hồng cầu chết đào thải qua nước tiểu Bạn cần xét nghiệm nitrite để xác định loại vi khuẩn gây viêm nhiễm - Xét nghiệm không bị ảnh hưởng diện vi khuẩn, Trichomonas hồng cầu (< 1.000/dl) Tuy nhiên, độ nhạy xét nghiệm giảm theo thời gian san lấy mẫu, ly giải bạch cầu Nguyên nhân thường thấy làm cho xét nghiệm men esterase bạch cầu dương tính giả nhiễm bẩn mẫu thử, formaldehyde màu nước tiểu Kết âm tính giả xảy nhiều yếu tố tăng trọng, glucose niệu (2g/dl), protein niệu (500 mg/dl), diện urobilinogen, thuốc (rifampin, nitrofurantoin, phenazopyridine), vitamin C 6.4 Thuốc thử đặc tính hiệu Thuốc thử Thời gian đọc Thành phần Diễn giải Phát acid ascorbic từ nồng độ – 10 mg/dl (0.28 – 0.56 mmol/l) Ascorbic acid (ASC) 30 giây 2,6dichlorophenolindopheno, đệm thành phần không phản ứng Glucose (GLU) 30 giây Glucose oxidase, peroxidase, potassium iodide, đệm, thành phần không phản ứng Phát glucose từ nồng độ 50 - 100mg/dl (2.5 – mmol/l) Bilirubin 30 giây 2,4-dichloroaniline, đệm thành phần không phản ứng Phát bilirubin từ nồng độ 0.4 - mg/dl (6.8 – 17 μmol/l) Ketone (KET) 40 giây Sodium nitroprusside, đệm Phát acid acetoacetic từ nồng độ 2.5 – mg/dl (0.25 – 0.5 mmol/l) 67 45 giây Chất thị màu bromthymol, đệm thành phần không phản ứng, poly (methyl vinyl ether/maleic anhydride), sodium hydroxide Xác định tỷ trọng SG nước tiểu khoảng từ 1000 - 1030 Sai số so với giá trị thu phương pháp số khúc xạ giới hạn ± 0,005 60 giây 3,3’5,5’-tetramethylbenzidine (TMB), diisopropylbenzene dihydroperoxide, đệm thành phần không phản ứng Phát hemoglobin tự từ nồng độ 0.018 – 0.06 mg/dl - 10 Ery/µl mẫu nước tiểu có nồng độ acid ascorbic < 50 mg/dl pH 60 giây Muối natri methyl đỏ, Cho phép phân biệt định bromthymol xanh, thành phần lượng giá trị pH không phản ứng khoảng - Protein (PRO) 60 giây Tetrabromophenol xanh, đệm thành phần không phản ứng Phát albumin từ nồng độ 7.5 – 15 mg/dl (0.075 -0.15 g/l) Urobilinogen (URO) 60 giây p-diethylaminobenzaldehyde, đệm thành phần không phản ứng Phát urobilinogen từ nồng độ 0.2 – mg/dl (3.7 - 17 μmol/l) 60 giây Acid p-arsanilic, N-(1naphthyl)-ethylenediamine, thành phần không phản ứng Phát sodium nitrite từ nồng độ 0.05 – 0.1 mg/dl nước tiểu với tỷ trọng thấp 30 mg/dl, acid ascorbic 120 giây Dẫn xuất ester acid pyrrole amino, muối diazonlum, đệm thành phần không phản ứng Phát leukocytes từ nồng độ - 15 tế bào bạch cầu Leu/μl nước tiểu lâm sàng Tỷ trọng (SG) Máu (BLO) Nitrite (NIT) Bạch cầu (LEU) 6.5 Bảo quản độ ổn định thuốc thử - Bảo quản lọ đóng kín nắp nhiệt độ phòng bảo quản lạnh (2-30oC) Tránh ánh nắng mặt trời - Que thử giữ ổn định khoảng hạn sử dụng in nhãn lọ - Không lấy túi hạt chống ẩm lọ - Lấy lượng que thử vừa đủ dùng ngay, đậy chặt nắp lọ sau lấy que thử - TRÁNH ĐĨNG BĂNG Khơng sử dụng hết hạn Chú ý: Một mở lọ, que thử lại giữ ổn định đến tháng Độ ổn định giảm điều kiện độ ẩm cao 68 6.6 Lấy bảo quản mẫu **Cách lấy mẫu: Lấy mẫu vào buổi sáng tốt Lấy vào lọ nhựa 50 ml theo mẫu qui định Vệ sinh đường tiểu Tiểu bỏ phần nước tiểu đầu Tiểu trực tiếp vào lọ qua thông tiểu Lượng nước tiểu 20ml Mang tới phòng xét nghiệm vòng 2-3 giờ, muốn để lâu phải bảo quản - 80oC không bảo quản đông **Bảo quản mẫu - Mẫu nước tiểu phải chứa dụng cụ đựng mẫu khô, phải xét nghiệm nhanh tốt - Không ly tâm Khơng sử dụng nước tiểu có chứa chất bảo quản - Nếu xét nghiệm không thực vòng sau lấy mẫu, bảo quản lạnh mẫu để mẫu đạt nhiệt độ phòng trước xét nghiệm - Để mẫu nước tiểu không bảo quản lâu nhiệt độ phịng dẫn tới tăng nhanh vi khuẩn kết thay đổi độ pH Sự thay đổi thành alkaline pH gây kết dương tính giả với xét nghiệm protein - Nước tiểu chứa đường glucose làm giảm độ pH vị sinh tính vật chuyển hóa glucose - Mẫu nước tiểu nhiễm bẩn với chất tẩy rửa da chứa chlorhexidine ảnh hưởng đến kết protoin (và mức độ thấp hơn, specific gravity bilirubin) **Kỹ thuật lấy mẫu nước tiểu dòng: - Mẫu nước tiểu dịng có nghĩa khơng thu thập phần phần cuối nước tiểu chảy Điều làm giảm nguy mẫu bị nhiễm vi khuẩn từ: bàn tay, da quanh niệu đạo, ống dẫn nước tiểu khỏi thể - Sử dụng xét nghiệm nuôi cấy nước tiểu, nước tiểu 10 thông số - Cách lấy: Vệ sinh trước lấy Tiểu tiểu bỏ phần nước tiểu đầu tiên, sau tiểu vào lọ phần Lượng nước tiểu cần lấy 20ml Mang tới phòng xét nghiệm vòng 2-3 69 6.7 Cách tiến hành Để que thử, mẫu phẩm và/hoặc dung dịch chứng đạt nhiệt độ phòng (15 – 30oC) trước làm xét nghiệm Lấy que thử khỏi lọ sử dụng nhanh tốt Đóng chặt nắp lọ sau lấy lượng que thử đủ dùng theo yêu cầu Nhúng hoàn toàn vùng phản ứng que thử vào mẫu nước tiểu sạch, lắc lấy que thử để tránh thuốc thử bị hòa tan Khi lấy que thử khỏi nước tiểu, trượt cạnh que thử lên miệng dụng cụ đựng nước tiểu để loại bỏ nước tiểu dư thừa Giữ que thử nằm ngang để cạnh que thử tiếp xúc với vật liệu thấm nước để tránh hóa chất vùng phản ứng bị trộn lẫn làm bẩn tay So sánh vùng thuốc thử với ô màu tương ứng nhãn lọ đựng que thử thời gian đọc loại thuốc thử Giữa que thử gần ô màu so khớp màu cẩn thận Chú ý: Kết đọc vịng phút sau thời gian đọc tương ứng loại thuốc thử 6.8 Diễn giải kết - Kết thu cách so sánh trực tiếp ô màu in thân lọ que thử Ô màu đại diện cho giá trị danh nghĩa, giá trị thực tế thay đổi gần với giá trị danh nghĩa - Trong trường hợp kết không mong đợi nghi vấn, thực bước sau: ▪ Khẳng định qua thù xét nghiệm hạn sử dụng in nhân lọ ▪ So sánh kết với dung dịch chứng âm chứng dương biết trước nồng độ ▪ Lặp lại xét nghiệm que thử 6.9 Ưu điểm hạn chế xét nghiệm Que thử nước tiểu bị ảnh hưởng chất làm cho nước tiểu có màu bất thường thuốc thử chứa thuốc nhuộm azo (ví dụ: Pyridium, Azo Gantrisin, Azo Gantanol), nitrofurantoin (Microdatin, Furadantin) riboflavin Màu phát kiểm tra bị che giấu tạo phản ứng màu gây kết sai Ascorbic acid: Khơng có tượng nhiễu biết đến Glucose: Vùng thuốc thử không phản ứng với đường lactose, galactose, fructose chất chuyển hóa khác, chất làm giảm chuyển hóa thuốc (VD: salicylates acid nalidixic) Độ nhạy giảm mẫu phẩm với tỉ trọng cao (> 1.025) với nồng độ acid ascorbic ≥ 25 mg/dl Nồng độ ketone cao ≥ 100 mg/dl gây kết âm tính giả cho mẫu phẩm chứa lượng nhỏ glucose (50 - 100mg/dl) Bilirubin: Bilirubin khơng có mặt nước tiểu thơng thường nên kết dương tính bao gồm dương tính vết, tình trạng bệnh lý cần điều tra thêm Phản ứng xảy với mẫu nước tiểu chứa lượng lớn chlorpromazine rifampin gây nhầm lẫn với dương tính bilirubin Sự có mặt sắc tố mật có gốc bilirubin che giấu phản 70 ứng bilirubin Hiện tượng đặc tả phản ứng màu ô kiểm tra không tương quan với màu bảng màu Nồng độ cao acid ascorbic làm giảm độ nhạy Ketone: Xét nghiệm không phản ứng với acetone hydroxybutyrate Mẫu nước tiểu có sắc tố cao chất khác có chứa nhóm sulfhydryl đơi cho phản ứng mạnh bao gồm vết (±) Tỷ trọng: Ketoacidosis protein cao 300 mg/dl làm tăng kết Kết không bị ảnh hưởng thành phần nước tiểu khơng ion glucose Nếu nước tiểu có pH ≥ 7, cộng 0.005 vào kết tỷ trọng hiển thị bảng màu Blood: Một màu xanh dương đồng thể có mặt myoglobin, hemoglobin hồng cầu bị tán huyết Các điểm màu xanh rải rác dày đặc cho thấy hồng cầu nguyên vẹn Để tăng độ xác, huyết sắc tố hồng cầu có thang màu riêng biệt Kết dương tính với xét nghiệm thường thấy mẫu nước tiểu từ phụ nữ kỳ kinh nguyệt Các báo cáo cho thấy nước tiểu có pH cao làm giảm độ nhạy nồng độ acid ascorbic từ trung bình đến cao gây ức chế hình thành màu Vi khuẩn Peroxidase, liên quan đến nhiễm trùng đường tiết niệu phản ứng gây kết dương tính giả Xét nghiệm với hemoglobin tự myoglobin có độ nhạy so với hồng cầu nguyên vẹn pH: Nếu không tuân thủ quy trình xét nghiệm nước tiểu dư thừa cịn đọng que thử xảy tượng “runover”, acid đệm từ thuốc thử protein chạy sang vùng pH gây kết pH thấp giả Đọc kết pH không bị ảnh hưởng khác nồng độ đệm niệu Protein: Bất kỳ màu xanh cho thấy có mặt protein nước tiểu Xét nghiệm có độ nhạy cao với albumin thấp với hemoglobin, globulin, mucoprotein Kết âm tính khơng loại trừ có mặt protein khác Có thể nhận kết dương tính giả với nước tiểu có độ kiềm cao Mẫu nước tiểu nhiễm hợp chất amoni bậc chất tẩy rửa da chứa chlorhexidine cho kết dương tính giả Mẫu nước tiểu có tỉ trọng cao cho kết âm tính giả Urobilinogen: Tất kết thấp mg/dl, urobilinogen phải diễn giải bình thường Kết âm tính khơng phải lúc cũng loại trừ có mặt urobilinogen Vùng thuốc thử phản ứng với chất gây nhiễu có phản ứng với thuốc thử Ehrlich’s acid p-aminosalicylic sulfonamides Có thể gặp kết âm tính giả có formalin Xét nghiệm không dùng để phát porphobilinogen Nitrite: Xét nghiệm đặc hiệu với nitrite không phản ứng với chất thông thường khác tiết nước tiểu Bất kỳ màu đồng từ hồng đến đổ phải diến giả dương tính, cho thấy có mặt nitrite Cường độ màu khơng tỉ lệ với số lượng vi khuẩn có mẫu nước tiểu Các chấm vạch màu hồng không diễn giải kết dương tính So sánh với vùng thuốc thử phản ứng màu trắng hỗ trợ phát nồng độ thấp nitrite bị bỏ qua Acid ascorbic 30 mg/dl gây âm tính giả nước tiểu chứa 0.05 mg/dl nitrite ion Độ nhạy xét nghiệm giảm với mẫu nước tiểu có chứa đệm kiềm nồng độ cao tỷ trọng cao Kết âm tính khơng phải lúc cũng loại trừ khả nhiễm khuẩn niệu Kết âm tính xảy lây nhiễm tiết niệu từ vi sinh vật không chứa men chuyển nitrate thành nitrite; nước tiểu không giữ thận đủ thời 71 gian (ít giờ) để giảm nitrate thành nitrite; điều trị kháng sinh chế độ ăn khơng có nitrate Leukocytes: Kết phải đọc khoảng 60 - 120 giây để phản ứng màu xảy hoàn toàn Cường độ màu tỉ lệ thuận với số lượng leukocytes có mẫu nước tiểu Tỷ trọng cao nồng độ glucose tăng cao (≥ 2000 mg/dl) gây kết thấp giả Sự có mặt cephalexin, cephalothin nồng độ cao acid oxalic gây kết thấp giả Tetracycline làm giảm phản ứng nồng độ cao thuốc gây âm tính giả Protein niệu cao làm suy giảm cường độ phản ứng màu Xét nghiệm không phản ứng với hồng cầu vi khuẩn phổ biến nước tiểu Lưu ý thực xét nghiệm: Chỉ sử dụng cho chẩn đoán in-vitro Không dùng que thử hết hạn sử dụng Que thử phải bảo quản lọ đóng kín sủ dụng Khơng chạm vào phần chứa thuốc thử que Hủy bỏ que thử màu bị hỏng Tất mẫu phẩm phải xem có nguy độc hại xử lý tác nhân gây bệnh Que thử sau sử dụng phải hủy theo quy định TÀI LIỆU THAM KHẢO Sách thực tập Hóa Sinh Y học - PGS TS BS Lê Xuân Trường - Nhà xuất Y học 2017 Sách Hóa Sinh Y học - PGS TS BS Lâm Vĩnh Niên - Nhà xuất Y học 2020 Sách Hóa Sinh - GS BS Tạ Thành Văn - Nhà xuất Y học Hà Nội 2019 Hướng dẫn sử dụng kit thuốc thử hãng Centronic GmbH Hướng dẫn sử dụng nước tiểu hãng Mission® Urinalysis Reagent Strips Các slide giảng lý thuyết Hóa Sinh TS Đường Thị Hồng Diệp https://123docz.net/document/5499096-cac-dang-lipid-van-chuyen-trong-mau-va-y-nghiatrong-thuc-hanh-lam-sang.htm Thông tin sức khỏe trang web bệnh viện Vinmec: https://www.vinmec.com/ https://kcb.vn/wp-content/uploads/2015/07/H%C3%B3a-sinh.pdf 10 https://tailieutuoi.com/tai-lieu/bai-thuyet-trinh-bao-cao-thuc-hanh-hoa-sinh 11 https://www.iitg.ac.in/stud/vinay.2015/Bilirubin%20Review.pdf 12 Một số hình ảnh lấy từ trang web đáng tin cậy internet HẾT 72 ... sinh (cơ thể): tổng hợp chủ y? ??u từ gan, phần mô mỡ, tuyến thượng thận; vận chuyển LDL, IDL, VLDL… 2.2.2 Nguyên tắc định lượng - Cholesterol định lượng sau th? ?y phân enzyme oxy hóa tạo H2O2 Hydrogen... thứ thay lysine enzyme transaminase tạo thành aldimine Liên kết đôi dịch chuyển isomer hóa tạo ketimine Th? ?y phân ketimine tạo thành oxoacid acid amin thứ hai pyridoxamine phosphate Đ? ?y phản... khỏi globin, hem bị oxy hóa nhờ hệ thống enzym hem oxygenase (enzym microsom gắn với cyt P450) hệ võng nội mô với có mặt oxy NADPH mở câu nối methenyl  vòng pyrol I II để tạo thành biliverdin có