ảnh hưởng của sự nhiễm vi khuẩn edwardsiella ictaluri và thuốc trừ sâu cyrus lên sự thay đổi một số chỉ tiêu huyết học cá tra (pangasianodon hypophthalmus)

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THỦY SẢN TRẦN THỊ PHƯƠNG THẢO ẢNH HƯỞNG CỦA SỰ NHIỄM VI KHUẨN Edwardsiella ictaluri VÀ THUỐC TRỪ SÂU CYRUS LÊN SỰ THAY ĐỔI MỘT SỐ CHỈ TIÊU HUYẾT HỌC CÁ TRA (Pangasianodon hypophthalmus) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP CAO HỌC NGÀNH NUÔI TRỒNG THỦY SẢN 2010 i TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THỦY SẢN TRẦN THỊ PHƯƠNG THẢO ẢNH HƯỞNG CỦA SỰ NHIỄM VI KHUẨN Edwardsiella ictaluri VÀ THUỐC TRỪ SÂU CYRUS LÊN SỰ THAY ĐỔI MỘT SỐ CHỈ TIÊU HUYẾT HỌC CÁ TRA (Pangasianodon hypophthalmus) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP CAO HỌC NGÀNH NUÔI TRỒNG THỦY SẢN CÁN BỘ HƯỚNG DẪN PGs. Ts. ĐỖ THỊ THANH HƯƠNG Ts. PHẠM MINH ĐỨC 2010 ii LỜI CẢM TẠ Tôi xin trân trọng gởi lời cảm ơn sâu sắc nhất đến PGs. Đỗ Thị Thanh Hương và Ts. Phạm Minh Đức đã dành nhiều thời gian hướng dẫn, quan tâm, động viên và tạo điều kiện thuận lợi cho tôi trong suốt thời gian thực hiện đề tài. Xin gởi lời cảm ơn đến các bạn Nguyễn Thị Kim Hà, Nguyễn Văn Toàn đã giúp đỡ và hỗ trợ về trang thiết bị trong suốt quá trình làm việc tại phòng thí nghiệm. Xin gởi lời cảm ơn đến các em sinh viên lớp liên thông Nuôi trồng Thủy sản K34 và K35 đã nhiệt tình giúp đỡ trong thời gian thực hiện đề tài. Chân thành cảm ơn dự án Physcam đã hỗ trợ kinh phí và tạo điều kiện cho tôi trong quá trình thực hiện đề tài. Cuối cùng, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến gia đình, những người thân và bạn bè đã chia sẽ, giúp đỡ và động viên tôi trong suốt thời gian học tập và nghiên cứu tại trường. Xin chân thành cảm ơn! iii TÓM TẮT Đề tài được thực hiện nhằm tìm hiểu sự nhiễm bệnh và hóa chất lên một số chỉ tiêu huyết học của cá tra. Thí nghiệm được bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên với 2 thí nghiệm: thí nghiệm 1 cá nhiễm thuốc trừ sâu với nồng độ cypermethrin (LC 50 -96 giờ, 1/2 LC 50 -96 giờ) và đối chứng, thí nghiệm 2 cá nhiễm bệnh do vi khuẩn Edwardsiella icaluri ở mật độ 3,5x10 4 cfu/ml, 3,5x10 2 cfu/ml và đối chứng tiêm nước muối sinh lý. Kết quả cho thấy cypermethrin có độ độc cao đối với cá tra (LC 50 -96 giờ là 0,072 mg/L). Số lượng hồng cầu và tỷ lệ huyết cầu giảm khi cá tiếp xúc thuốc, sau 6, 9 giờ có dấu hiệu tăng nhẹ và tiếp tục giảm sau đó. Số lương bạch cầu có dấu hiệu giảm khi cá nhiễm cypermethrin đến 96giờ mới có dấu hiệu tăng nhưng vẫn thấp hơn so với đối chứng. MCV, MCH, MCHC có biến động nhưng không đáng kể so với đối chứng. Đối với thí nghiệm cá nhiễm vi khuẩn E. ictaluri kết quả phân tich một số chỉ tiêu huyết học cho thấy số luợng hồng cầu cá tra ở các nghiệm thức nhiễm vi khủẩn E. ictaluri dao động từ 1,4-1,51 triệu tế bào/mm 3 giảm có ý nghĩa thống kê so với cá khỏe (1,85 triệu tế bào/mm 3 ). Số lượng bạch cầu dao động từ 14,94-16,02 nghìn tế bào/mm 3 giảm có ý nghĩa thống kê so với cá khỏe (18,08 nghìn tế bào/mm 3 ). Trong đó, tế bào lympho và tiểu cầu giảm nhưng số bạch cầu đơn nhân và bạch cầu trung tính tăng. Kết quả nhiên cứu của đề tài cung cấp thông tin có giá trị làm cơ sở cho nghiên cứu ứng dụng trong chuẩn đóan và phòng trị bệnh ở cá tra nuôi. iv ABSTRACT The aim of this study was to investigate the effects of pesticide and bacteria on hematological parameters of Tra fish. There was 2 experiments: the first experiment was randomly designed with 2 different concentrations of cypermethrin (LD 50 -96 hours and 1/2 LD 50 -96 hours) and control. The second experiment were infected with bacteria Edwardsiella ictaluri on Tra fish. The result showed cypermethrin was highly toxic to Tra fish (LC50-96h is 3,89 mg/L). The erythrocyte quantity and hematocrit value decreased after administration of cypermethrin. MCV, MCH and MCHC were changed lightly and non-significant with control. Results from haematological analysis evealed a significant reduction in total number red blood cell in infected striped catfish (ranged from 1,4-1,51 milion cells/mm 3 ) compared to the healthy one (1,85 milion cells/mm 3 ). The number of white blood cell in infectedstriped catfish ranged from 14,94-16,02 thousand cells/mm 3 which was signficant lower than the number of white cells in health striped catfish (18,08 thousand cells/mm 3 ). Of these, the number of lymphocyte and thrombocyte decreased but the monocyte and neutrophil increased. Results from this study provide valuable basic information for further applied study diagnosis, and effective method for antibacterial in striped catfish farming. v LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam kết, luận văn này được hoàn thành dựa trên các kết quả nghiên cứu của tôi trong khuôn khổ dự án Physcam, các kết quả này chưa dùng cho bất cứ luận văn cùng cấp nào. Dự án có quyền sử dụng kết quả của luận văn này để phục vụ cho dự án. Tác giả luận văn Trần Thị Phương Thảo vi MỤC LỤC LỜI CẢM TẠ i TÓM TẮT ii ABSTRACT iii LỜI CAM ĐOAN iv MỤC LỤC v DANH SÁCH BẢNG vii DANH SÁCH HÌNH vii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT viii CHƯƠNG 1: 1 ĐẶT VẤN ĐỀ 1 1.1 Giới thiệu 1 1.2 Mục tiêu của đề tài 2 1.3 Nội dung của đề tài 2 1.4 Thời gian thực hiện đề tài 2 CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 2.1 Tổng quan về cá tra 3 2.1.1 Phân lọai 3 2.1.2 Đặc điểm sinh học 3 2.2 Sinh lý máu và huyết học của cá 4 2.2.1 Chức năng của máu 4 2.2.2 Thành phần và đặc tính lý hóa học của máu 4 2.3 Một số nghiên cứu về huyết học ở cá 6 2.4 Tổng quan tình hình bệnh, sử dụng thuốc và hóa chất trong nuôi trồng thủy sản 7 2.4.1 Tình hình bệnh cá tra ở Đồng bằng sông Cửu Long 7 2.4.2 Tình hình sử dụng thuốc và hóa chất trong nuôi trồng thủy sản 9 2.5 Tổng quan thuốc trừ sâu Cyrus (chứa hoạt chất cypermethrin) 10 2.5.1 Cypermethrin: 10 2.6 Một số nghiên cứu về vi khuẩn Edwardsiella ictaluri 8 CHƯƠNG 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 12 3.1 Vật liệu nghiên cứu 12 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu 12 3.1.2 Dụng cụ thí nghiệm 12 3.1.3 Hóa chất 12 3.1.4 Vi khuẩn 13 3.2 Phương pháp bố trí thí nghiệm: 13 3.2.1 Thí Nghiệm 1: Xác định LC 50 của Cypermerthrin 13 3.2.2 Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng của vi khuẩn E. ictaluri lên một số chỉ tiêu huyết học của cá tra giống 14 3.2.3 Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng của Cypermerthrin lên một số chỉ tiêu chỉ tiêu huyết học của cá tra giống 15 3.3 Phương pháp thu mẫu 15 vii 3.3.1 Thời gian thu mẫu 15 3.4 Phương pháp phân tích các chỉ tiêu huyết học 16 3.5 Phương pháp xử lý số liệu 17 CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 18 4.1 Giá trị LC50 của thuốc trừ sâu Cyrus 25EC chứa hoạt chất cypermethrin lên cá tra 18 4.2 Ảnh hưởng của thuốc trừ sâu Cyrus chứa hoạt chất cypermethrin lên chỉ tiêu huyết học 19 4.2.1 Số lượng hồng cầu 19 4.2.2 Số lượng bạch cầu 21 4.2.3 Hàm lượng huyết sắc tố (Hemoglobin, mmol/l) 22 4.2.4 Tỷ lệ huyết cầu (%) 23 4.2.5 Thể tích hồng cầu (MCV) 24 4.2.6 Khối lượng trung bình của huyết sắc tố trong hồng cầu (MCH) 25 4.3 Ảnh hưởng của vi khuẩn Edwardsiella ictaluri lên chỉ tiêu huyết học cá tra 27 4.3.1 Số lượng hồng cầu 28 4.3.2 Số lượng bạch cầu 29 CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 32 5.1 Kết luận 32 5.2 Đề xuất 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO 33 Phụ lục 1 39 Phụ lục 2 40 Phụ lục 3 42 Phụ lục 4 43 Phụ lục 5 45 Phụ lục 6 54 Phụ lục 7 54 Phụ lục 8 55 Phụ lục 9 55 Phụ lục 10 56 Phụ lục 11 56 Phụ lục 12 57 Phụ lục 13 57 viii DANH SÁCH BẢNG Bảng 4.1: Số lượng hồng cầu thí nghiệm cá nhiễm cypermethrin 31 Bảng 4.2: Số lượng bạch cầu thí nghiệm cá nhiễm cypermethrin 32 Bảng 4.3: Hàm lượng huyết sắc tố (mmol/l) thí nghiệm cá nhiễm cypermethrin . 33 Bảng 4.4: Tỷ lệ huyết cầu (%) thí nghiệm cá nhiễm cypermethrin 34 Bảng 4.5: Thể tích hồng cầu thí nghiệm cá nhiễm cypermethrin 34 Bảng 4.6: MCH (pg) thí nghiệm cá nhiễm cypermethrin 35 Bảng 4.7: MCHC (%) thí nghiệm cá nhiễm cypermethrin 36 Bảng 4.8: Các chỉ tiêu huyết học thí nghiệm cá tiêm vi khuẩn E.ictaluri 37 ix DANH SÁCH HÌNH Hình 2.7: Cấu tạo Cypermethrin 10 Hình 4.1 Cá bệnh mủ gan 27 Hình 4.2 Các loại bạch cầu 30 [...]... sự khác biệt như thế nào về một số chỉ tiêu huyết học của cá tra khi có sự tác động của tác nhân sinh học và hóa học Chính vì những lý do trên mà đề tài: Ảnh hưởng của sự nhiễm vi khuẩn Edwardsiella ictaluri và thuốc trừ sâu Cyrus lên sự thay đổi một số chỉ tiêu huyết học cá tra (Pangasianodon hypophthalmus) được thực hiện 1.2 Mục tiêu của đề tài Xác định một số yếu tố huyết học của cá tra khỏe và. .. và cá nhiễm bệnh do vi khuẩn và hóa chất từ đó đánh giá sự biến đổi một số chỉ tiêu huyết học của cá nhiễm bệnh và hóa chất nhằm cung cấp dẫn liệu khoa học cho vi c chẩn đoán và đánh giá sức khỏe ở cá nuôi 1.3 Nội dung của đề tài - Xác định LC50-96 giờ của thuốc trừ sâu Cyrux 25EC (hoạt chất cypermethrin) trên cá tra giống - Ảnh hưởng của vi khuẩn Edwardsiella ictaluri CT 258 lên một số chỉ tiêu huyết. .. huyết học (hồng cầu, bạch cầu, hematorite và hemoglobin) của cá tra giống - Ảnh hưởng của thuốc trừ sâu Cyrux 25EC lên một số chỉ tiêu chỉ tiêu huyết học (hồng cầu, bạch cầu, hematorite và hemoglobin) của cá tra giống 1.4 Thời gian thực hiện đề tài Từ tháng 8/2009 đến tháng 12/2010 2 CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Đặc điểm sinh học cá tra 2.1.1 Phân loại: cá tra là một trong số 11 lòai thuộc họ cá tra. .. trường thay đổi bất lợi có thể được phản ánh trong hệ thống tuần hòan (Mulcahy, 1975) Có một vài nghiên cứu khoa học về ảnh hưởng của các loại thuốc trừ sâu lên chỉ tiêu huyết học cá (Srivastava, 1988; Khattak and Hafeez, 1996; Tavares et al., 1999; Svoboda et al., 2001) Nghiên cứu sự thay đổi các chỉ tiêu huyết học và chức năng đào thải ở từng giai đoạn và nồng độ thuốc trừ sâu khác nhau của cá rô phi... khi nghiên cứu ảnh hưởng của thuốc Deltamthrin lên huyết học và enzime của cá Ancisstrus multipinis ở cả 2 nồng độ 0,1 và 0,3mg/kg đều tăng hồng cầu và bạch cầu Theo Đỗ Thị Thanh Hương 6 (1998) khi nghiên cứu ảnh hưởng của Basudin lên huyết học của cá chép, cá rô phi và mè vinh thì thấy số lượng hồng cầu tăng 1,3 lần ở cá chép, 1,5 lần ở cá rôphi, 1,6 lần ở cá mè vinh sau khi tiếp xúc với thuốc 12 giờ... các bể được sục khí nhẹ và liên tục và không thay nước Theo dõi và ghi nhận số cá chết sau 3, 6, 9, 12, 24, 48, 72 và 96 giờ sau thí nghiệm Khi phát hiện cá chết sẽ được loại ra khỏi bể thí nghiệm để hạn chế ảnh hưởng đến kết quả thí nghiệm Giá trị LC50 được xác định dựa vào phương pháp Probit (Finey, 1971) 3.2.3 Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng của vi khuẩn E ictaluri lên một số chỉ tiêu huyết học của cá tra. .. NT3: Nghiệm thức cá được tiêm với vi khuẩn E ictaluri với nồng độ 10% LD50 3.2.4 Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng của Cypermerthrin lên một số chỉ tiêu chỉ tiêu huyết học của cá tra giống Bố trí thí nghiệm: gồm 3 nghiệm thức và mỗi nghiệm thức lặp lại 3 lần Bể đối chứng chứa cá không gây cảm nhiễm thuốc Chọn cá đồng cỡ và không cho ăn một ngày trước khi bố trí thí nghiệm Cá được cân trọng lượng và đo chiều dài... hóa học của máu: máu cá có tỉ trọng bình quân 1,032- 1,051 (Đỗ Thị Thanh Hương và Trần Thị Thanh Hiền, 2000) Độ dẫn điện cá nước ngọt thấp hơn so với động vật bậc cao và áp suất thẩm thấu biến động tùy lòai (Đỗ Thị Thanh Hương và Trần Thị Thanh Hiền, 2000) 2.3 Một số nghiên cứu về huyết học ở cá Benli và Yildiz (2004) đã có nghiên cứu là có sự thay đổi các chỉ tiêu huyết học của cá rô phi nhiễm Edwardsiella. .. 3.1.4 Vi khuẩn Nguồn vi khuẩn thuần chủng CT258 trữ trong tủ -800C của Bộ môn Sinh học và Bệnh thủy sản, Khoa thủy sản, Trường Đại học Cần Thơ Phục hồi và nuôi tăng sinh vi khuẩn: Vi khuẩn được phục hồi trên môi trường TSA ở 280C Sau 24-48h quan sát hình dạng, màu sắc khuẩn lạc, nhuộm Gram kiểm tra tính thuần của vi khuẩn Chuẩn bị vi khuẩn thí nghiệm: Nuôi tăng sinh vi khuẩn: sau khi có được đĩa vi khuẩn. .. tổn thương các tế bào biểu bì mang, làm đông đặc chất nhầy tạo thành một màng bao bọc bề mặt hô hấp, ngăn cản quá trình trao đổi khí giữa cá và nước và cá sẽ chết ngạt Ngoài ra, các chất độc cũng có thể làm tổn thương cơ quan hô hấp phụ như da, cơ quan trên mang và ruột 4.2 Ảnh hưởng của thuốc trừ sâu Cyrus chứa hoạt chất cypermethrin lên chỉ tiêu huyết học 4.2.1 Số lượng hồng cầu Bảng 4.1 Số lượng hồng . tài: Ảnh hưởng của sự nhiễm vi khuẩn Edwardsiella ictaluri và thuốc trừ sâu Cyrus lên sự thay đổi một số chỉ tiêu huyết học cá tra (Pangasianodon hypophthalmus) . ictaluri lên một số chỉ tiêu huyết học của cá tra giống 14 3.2.3 Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng của Cypermerthrin lên một số chỉ tiêu chỉ tiêu huyết học của