ĐỀ CƯƠNG bài GIẢNG THỰC HÀNH hóa SINH THỰC PHẨM

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ HỐ Bộ mơn Cơng nghệ thực phẩm ……………&…………… ĐỀ CƯƠNG BÀI GIẢNG THỰC HÀNH HÓA SINH THỰC PHẨM Giảng viên biên soạn: Đỗ Thị Hạnh, Đặng Thị Hường Hà Nội, năm 2021 TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com moi nhat FORM VIẾT BÁO CÁO THỰC HÀNH Bìa viết báo cáo TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP HÀ NỘI KHOA CƠNG NGHỆ HỐ BÁO CÁO THỰC TẬP MƠN: Giáo viên hướng dẫn: Sinh viên: Lớp: Hà Nội, tháng … năm … Nội dung báo cáo 2.1 Dụng cụ, hoá chất Trình bày hố chất sử dụng dạng bảng biểu 2.2 Quy trình phân tích Viết quy trình phân tích dạng sơ đồ 2.3 Trả lời câu hỏi Trả lời câu hỏi có đề cương thực hành 2.4 Kết phân tích nhận xét - Tổng hợp kết phân tích dạng bảng biểu Nhận xét kết (độ xác kết quả, so sánh với nhóm khác, so sánh với tiêu chuẩn (nếu có)) TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com moi nhat MỤC LỤC Nội dung 1: Định tính, định lượng axit amin protein Nội dung 2: Xác định hoạt độ enzyme glucoamylase Nội dung 3: Định tính, định lượng glucid Nội dung 4: Xác định số số đánh giá chất lượng chất béo TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com moi nhat NỘI DUNG 1: ĐỊNH TÍNH, ĐỊNH LƯỢNG PROTEIN A Phản ứng Biure I Lý thuyết: Cơ sở lý thuyết phản ứng biure: Đây phản ứng dùng để phát liên kết peptit (CO-NH-) Phản ứng xảy chất chứa từ hai liên kết peptit trở lên Tùy thuộc vào R1, R2, Rn mà màu phản ứng xanh tím, tím hồng Trong mơi trường kiềm, chất có chứa từ hai liên kết -CO-NH- trở lên phản ứng với 2+ ion Cu , tạo thành phức chất có màu xanh Phân tử chứa nhiều liên kết peptid -CO-NH-cũng 2+ tạo thành phức chất màu xanh với ion Cu mơi trường kiềm, ví dụ protein Người ta gọi phản ứng phản ứng biure biure có chứa liên kết -CO-NH- Cơ chế phản ứng biểu diễn qua giai đoạn: + Phản ứng thứ nhất: phản ứng tạo biure Biure tạo thành từ ure điều kiện nhiệt độ cao N ure C=O NH ure C=O + Phản ứng thứ hai: tạo phức màu với Cu Hai phân tử Biure liên kết với ion Cu theo phản ứng sau: 2+ 2+ + Na + hai Na để tạo thành phức hợp có màu OH C=NH NHH + C=NH OH ONa C=NH NH O C=NH Trong môi trường kiềm mạnh, protein phản ứng với CuSO4 tạo thành phức chất có màu (tím, tím xanh tím đỏ) 4 TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com moi nhat Cường độ màu phức hợp phụ thuộc vào độ dài mạch peptid (số lượng liên kết peptid) có dung dịch Vì cường độ màu phụ thuộc vào mạch polypeptid dài hay ngắn nên phản ứng biure sử dụng để định lượng protein phương pháp so màu II Thực hành Chuẩn bị nguyên liệu, hóa chất: - Albumin (dung dịch 1%); - Gelatin 1%; - Ure tinh thể; - NaOH 10%; - CuSO4 1% - Nước cất - Giấy pH Chuẩn bị dụng cụ: - Ống nghiệm: - Giá để ống nghiệm: - Pipet 5ml: - Lọ chứa NaOH 10%: lọ - Lọ có nắp cơng tơ hút chứa CuSO4 1%: lọ Cách tiến hành: - Lần lượt cho vào ống nghiệm khơ sạch: + Ống 1: Ure tinh thể, đun nhẹ tới nóng chảy, khơ cứng tạo thành biure có NH3 bay hơi, nhận biết mùi thử giấy quỳ hay giấy đo pH Để nguội + Ống 2: 1ml Albumin 1%; TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com moi nhat + Ống 3: 1ml Gelatin 1%; - Thêm vào ống 1ml NaOH 10% đến giọt CuSO4 1% (không nên cho q nhiều CuSO4 màu xanh Cu(OH)2 lấn át màu phản ứng biure); - Lắc đều, quan sát, so sánh, ghi màu, viết phương trình phản ứng B Định lượng protein hịa tan phương pháp Bradford I Lý thuyết Định nghĩa Protein định lượng phương pháp Bradford protein tan dung dịch Vì vậy, muốn xác định hàm lượng protein mẫu ta phải trích ly protein Hàm lượng protein xác định phụ thuộc vào hiệu trích ly (khả hịa tan protein dung mơi trích ly) Nguyên tắc Nguyên tắc: Khi thuốc nhuộm Coomassie Brilliant Blue G 250 kết hợp với protein dung dịch axit, thuốc nhuộm thay đổi màu từ đỏ sang xanh hấp thụ cực đại bước sóng 595nm Sự thay đổi độ hấp thụ bước sóng 595nm tương ứng với nồng độ protein có mẫu Để xác định protein mẫu, cần xây dựng đường chuẩn với dung dịch protein chuẩn biết trước nồng độ Dung dịch protein chuẩn thường bovine serum albumin (BSA) Sau cho dung dịch protein vào dung dịch thuốc nhuộm, màu xuất sau phút bền tới Tiến hành đo mật độ quang hỗn hợp dung dịch máy quang phổ kế Công thức phân tử Coomasie Brilliant Blue G-250 II Thực hành Dụng cụ - hóa chất a) Dụng cụ TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com moi nhat - Máy đo quang phổ - Ống nghiệm (14) - Giá để ống nghiệm - Pipette 5ml, 1ml (có thể thay pipetteman) - Đồng hồ - Giấy lọc - Bình tia đựng cồn b) Hóa chất - Dung dịch protein chuẩn: cân 10 mg albumin cân phân tích, pha ml nước cất, lắc cho tan Giữ -20 C Khi dùng pha lỗng 100 lần, dung dịch có nồng độ 0,1 mg/ml - Dung dịch thuốc thử Bradford: dung dịch thuốc thử có thành phần lít sau: Coomassie Brilliant Blue: 0,05g Ethanol: 50 ml Phosphoric acid 85%: 100 ml Cân 0,1 g Coomasie Brilliant Blue hịa tan 50 ml ethanol, pha lỗng với nước cất thành 500 ml để dược dung dịch (1) đựng chai màu tối có nắp, 100 ml H 3PO4 85% pha loãng thành 500 ml dung dịch (2) Khi cần sử dụng hòa V (1) 1V (2) lọc lấy dịch Cách tiến hành: - Chuẩn bị dịch chiết protein + Dịch (Mẫu 1): dịch chiết có sẵn + Dịch (Mẫu 2): dịch chiết có sẵn - Xây dưng đường chuẩn: Chuẩn bị dãy protein BSA chuẩn với nồng độ tăng dần từ 0, 20, 40, 60, 80, 100µg/ml + Lập dãy ống nghiệm gồm ống theo số thứ tự 0, 1, 2, 3, 4, thêm vào chất theo bảng sau Ống nghiệm Dung dịch BSA chuẩn (µl) Nước cất (µl) TT bradford (ml) Trộn vortex, để yên 20 phút đo độ hấp thụ bước sóng 595nm với mẫu đối chứng mẫu ống nghiệm số TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com moi nhat Thí nghiệm lặp lại lần Tính giá trị trung bình lần lặp lại thí nghiệm Vẽ biểu đồ đường chuẩn BSA thể mối tương quan tuyến tính nồng độ protein (µg/ml) với độ hấp thụ (OD) bước sóng 595nm - Định lượng protein có mẫu Hàm lượng protein có mẫu tiến hành đo đồng thời với việc dựng đường chuẩn Lấy 500µl mẫu cho thêm 2.5 ml thuốc thử Ghi nhận kết quả, lấy giá trị trung bình ống Từ phương trình đường chuẩn suy hàm lượng protein dung dịch đo Tính kết quả: - Vẽ đường tuyến tính nồng độ protein (µg/ml) với mật độ quang OD595 - Dựa vào phương trình đường tuyến tính nồng độ protein (µg/ml) với mật độ quang OD595 xác định hàm lượng protein mẫu phân tích III Bài nộp Vẽ đường chuẩn protein theo Bradford Tìm phương trình đường chuẩn y = ax +b Tính R Xác định hàm lượng protein mẫu X1, X2 IV Câu hỏi Định lượng protein hòa tan phương pháp Bradford áp dụng protein nào? Phương pháp cho phép định lượng xác nồng độ protein khoảng bao nhiêu? Hãy trình bày phương pháp khác để định lượng protein? TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com moi nhat NỘI DUNG 2: XÁC ĐỊNH HOẠT ĐỘ ENZYME GLUCOAMYLASE (Theo phương pháp DNS) I Cơ sở lý thuyết Phương pháp dựa sở thủy phân tinh bột enzyme glucoamylase có chế phẩm nghiên cứu Xác định lượng glucose tạo thành tính hoạt độ enzyme Lượng glucose xác định sở phản ứng tạo màu đường khử với thuốc thử acid dinitrosalicylic (DNS) môi trường kiềm Cường độ màu hỗn hợp phản ứng tỉ lệ thuận với nồng độ đường khử phạm vi định Phương trình phản ứng tạo màu đường khử DNS sau: Acid dinitrosalicylic (Màu vàng) 3-amino, 5- dinitrosalicylic acid (Màu đỏ da cam) Đơn vị hoạt độ glucoamylase định nghĩa lượng enzyme cần thiết thời o gian 30 C tác dụng lên dung dịch tinh bột tan giải phóng mg glucose II Thực hành Chuẩn bị hóa chất, dụng cụ - Hóa chất: Dung dịch glucose gốc: 0,5 mg/ml Nước cất o Thuốc thử DNS: Cách pha: Hịa tan hồn tồn 5g DNS 300ml nước cất 50 C 50ml NaOH 4N (Tức 8g NaOH tinh thể), 150g muối Tartat kép, 4g Na 2S205, định mức lên thể tích 500ml nước cất, sau đến ngày lọc cặn lấy dịch Chuẩn 3ml thuốc thử DNS HCl 0,1N với chất thị phenolphtalein, hết 6ml HCl - Dụng cụ: Ống nghiệm thủy tinh; Bếp điện; Máy đo OD Cách tiến hành: - Xây dựng đường chuẩn glucose Chuẩn bị dãy glucose chuẩn với nồng độ tăng dần từ 0; 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5mg/ml Chuẩn bị dãy ống nghiệm (6 ống) Thí nghiệm lặp lại lần Hịa hóa chất với lượng tương ứng bảng sau: TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com moi nhat Ống nghiệm Dung dịch glucose gốc (ml) Nước cất (ml) Chuẩn bị ống nghiệm (sạch, khô) Thực phản ứng: Ống nghiệm Dung dịch glucose Ci mg/ml (ml) Dung dịch DNS (ml) Trộn đều, đun sôi cách thủy phút (khi nồi cách thủy sôi cho mẫu vào), làm lạnh nhanh nước lạnh Trộn vortex đo độ hấp phụ bước sóng 540nm với mẫu trắng nước cất u cầu: tính tốn, đo điền số liệu vào bảng vẽ đồ thị đường chuẩn Nồng độ glucose (mg/ml) OD540 nm Xác định hoạt độ glucoamylase theo phương pháp DNS Nguồn enzyme: chế phẩm Distillase (Genenco) PTN cung cấp Cơ chất: dung dịch hồ tinh bột 1% - Xác định hoạt độ (Làm song song mẫu thí nghiệm mẫu kiểm chứng) Các bước tiến hành Bước 1: phản ứng xúc enzyme Bước 2: định lượng phẩm thành TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com moi nhat đối ngược với mẫu kiểm chứng Thí nghiệm lặp lại lần Sinh viên sử dụng đường chuẩn glucose dựng để tính tốn hoạt độ glucoamylase Hoạt độ glucoamylase tính số đơn vị hoạt độ/ml chế phẩm (U/ml chế phẩm) A= A: Hoạt độ glucoamylase (U/ml chế phẩm) a: Số mg glucose tạo thành sau thủy phân 60: Hệ số chuyển đổi thành t: Thời gian phản ứng (10 phút) V: Thể tích enzyme (ml) BI Bài nộp Vẽ đường chuẩn glucose cho phương pháp DNS Tìm phương trình đường chuẩn y = ax +b Tính R Tính hoạt độ glucoamylase theo phương pháp DNS 11 TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com moi nhat NỘI DUNG 3: ĐỊNH TÍNH, ĐỊNH LƯỢNG GLUCID Phản ứng màu tinh bột với Iod Cơ sở lý thuyết Tinh bột polysaccharide bao gồm amylose amylopectin Amylose chuỗi mạch thẳng phân tử α-D-glucose liên kết với liên kết (1-4) glucozid Chuỗi mạch thẳng cuộn lại thành hình xoắn lị xo nên có khả hấp thụ phân tử chất khác vào lòng vòng xoắn để tạo nên dạng phức đặc biệt Khi phân tử tinh bột hấp thụ vào vòng xoắn amylose, phân tử Iod tạo nên phức chất có màu xanh đen đặc trưng Đây phản ứng đặc trưng tinh bột thường dùng để phát có mặt tinh bột đối tượng nghiên cứu Nguyên liệu, Hóa chất Tinh bột 1%; Thuốc thử Lugol Hòa tan 2,5g KI 20ml nước cất, thêm 1g iod, lắc cho tan hết, thêm nước cất đến 100ml Nước cất Trang thiết bị, dụng cụ Cân điện tử Ống nghiệm Đèn cồn Các dụng cụ khác như: Kẹp gỗ; Pipet loại 5ml, 10ml; Giá đựng (ống nghiệm, pipet) Các bước tiến hành - Cho vào ống nghiệm 1ml tinh bột 1% thêm vào vài giọt dung dịch lugol; - Đun sôi dung dịch ống nghiệm, quan sát màu dung dịch; - Để nguội, quan sát tượng ghi lại kết thí nghiệm Kết nhận xét Giải thích tượng, nhận xét, đánh giá kết thu Phân biệt đường khử (glucose) đường không khử (saccharose) Cơ sở lý thuyết Trong môi trường kiềm đường khử khử oxit đồng (II) thành oxit đồng I (Cu 2+ 1+ thành Cu ) Kết tủa Cu2O có màu đỏ gạch Nguyên liệu, Hóa chất Glucose 1% Sacarose 1% Thuốc thử Fehling: Cách pha Fehling A: 40 g CuSO4 hòa tan 1l nước cất 12 TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com moi nhat Fehling B: Hòa tan 200g muối Seignet, 100g NaOH hòa tan đến 1l Trước dùng trộn Fehling A với Fehling B theo tỷ lệ 1:1 Trang thiết bị, dụng cụ Ống nghiệm Giá đựng ống nghiệm Pipet 5ml Các bước tiến hành Lấy ống nghiệm, cho vào ống 1: 1ml glucose 1%, ống 2: 1ml sacarose 1% Thêm vào ống ml thuốc thử Fehling, đun sôi phút Quan sát, so sánh kết giải thích Định lượng đường khử phương pháp Bertrand Cơ sở lý thuyết 2+ Trong môi trường kiềm đường khử khử oxit đồng (II) thành oxit đồng I (Cu 1+ thành Cu ) Kết tủa Cu2O có màu đỏ gạch Định lượng Cu 2O KMnO4 1/30N, sau cho Cu2O phản ứng với Fe2(SO4)3 Dung dịch Fehling hỗn hợp Fehling A với Fehling B theo tỷ lệ 1:1 Khi trộn Fehling A Fehling B, tạo thành Cu(OH)2 có màu xanh da trời CuSO4 + 2NaOH → Cu(OH)2 + Na2SO4 Sau Cu(OH)2 tác dụng với muối Seignett tạo thành muối phức hịa tan, dung dịch có màu xanh thẫm Như muối Seignet giữ cho ion Cu+ môi trường kiềm không bị kết tủa dạng Cu(OH)2 Muối phức khơng bền, đường có chứa nhóm andehit xeton dễ dàng khử Cu 2+ + thành Cu , tạo kết tủa oxit đồng (Cu2O) có màu đỏ Để định lượng Cu2O tạo thành, trước hết oxi hóa sunfat sắt III môi + 2+ 3+ 2+ trường axit sunfuric, Cu bị oxi hóa trở lại thành Cu , Fe bị khử thành Fe Cu2O + Fe2(SO4)3 + 2H2SO4 = 2CuSO4 + FeSO4 + H2O 2+ Tiếp lượng Fe tạo thành xác định cách oxi hóa dung dịch KMnO chuẩn độ môi trường axit 13 TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com moi nhat 10FeSO4 + KMnO4 + 8H2SO4 = 5Fe2(SO4)3 + 2MnSO4 + K2SO4 + H2O Từ lượng KMnO4 0,1N tiêu tốn chuẩn độ đem nhân với 6,36 ta lượng mg Cu, sau tra bảng Bertrand (phụ lục 12, 13 Giáo trình phương pháp phân tích ngành cơng nghệ lên men) ta biết lượng đường khử chứa mẫu Nguyên liệu, Hóa chất Quả chín (Xồi, hồng xiêm…) Na2SO4 bão hịa Pb(CH3COO)2 10% Dung dịch Fehling A Dung dịch Fehling B Dung dịch Fe2(SO4)3 axit sunfuric: Hòa tan 50g Fe 2(SO4)3 108ml H2SO4 đậm đặc nước cất, định mức tới 1l KMnO4 0,1N: cân 3,16g KMnO4, hòa tan 1l nước cất, đun nóng Nồng độ KMnO xác định axit oxalic ngày sau pha Trang thiết bị, dụng cụ Cân phân tích Buret loại 25ml Chày cối sứ Bình tam giác 50ml, 250ml Bình định mức 100ml Pipet 10ml, 25ml Ống đong 50ml Cốc thủy tinh có mỏ 100ml, 250ml Đũa thủy tinh Bếp điện Bể ổn nhiệt Các bước tiến hành Chuẩn bị dung dịch thí nghiệm Ngun liệu khơng chứa nhiều tinh bột inulin Cân - g mẫu nguyên liệu khô (cây, khô) - 10 g nguyên liệu tươi có hàm ẩm cao (rau, tươi); sau đó, cho mẫu vào cối sứ nghiền thật o nhỏ với bột thủy tinh cát 30ml nước cất nóng 70 - 80 C Chuyển toàn hỗn o hợp vào bình định mức dung tích 100ml Đun cách thủy 70-80 C 35-40 phút, kết tủa protein dung dịch chì axetat 10% Tránh dùng dư chì axetat (dùng 2-5 ml chì axetat) Loại bỏ chì dư dung dịch Na 2SO4 bão hòa, để yên hỗn hợp 10 phút Thêm nước cất tới vạch mức đem lọc qua giấy lọc Dịch lọc dùng làm dung dịch thí nghiệm Nguyên liệu chứa nhiều tinh bột hay inulin (khoai lang, sắn, khoai tây) 14 TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com moi nhat o Trích ly đường ethanol 70 - 80 C; đun cách thủy hỗn hợp bình có lắp ống sinh hàn khơng khí; trường hợp khơng cần kết tủa protein lượng protein chuyển vào dung dịch không đáng kể Nguyên liệu chứa nhiều acid hữu (cà chua, dứa, chanh, khế,…) Trong trình trích ly đường, sucrose bị thủy phân phần có mặt acid hữu có sẵn nguyên liệu, cần xác định riêng đường khử đường sucrose Trước đun cách thủy hỗn hợp phải trung hòa acid hữu dung dịch NaOH 5% hay Na2CO3 bão hòa tới pH 6,4-7 Nghiền nhỏ nguyên liệu cối chày sứ với nước cất Nhỏ giọt thị methyl red cho từ từ giọt NaOH 5% đến xuất màu hồng nhạt Tiếp tục trích ly nhiều lần o nước nóng 70 – 80 C, lọc bỏ phần bã phần nước lọc thu dịch đường khử cần định lượng Tiến hành thí nghiệm Lấy 10 ml dung dịch thí nghiệm có chứa khoảng 0,8-40mg đường cho vào bình tam giác 250 ml - Thêm 10ml dung dịch fehling Đậy bình đĩa đồng hồ - Đun sôi hỗn hợp phút (kể từ lúc xuất bọt sôi đầu tiên) Sau đun sơi, dung dịch cịn màu xanh đặc trưng có lớp kết tủa Cu 2O màu đỏ gạch Nếu dung dịch màu hoàn toàn chứng tỏ lượng dung dịch Fehling cho vào khơng đủ để oxy hóa hồn tồn lượng đường có dung dịch mẫu thí nghiệm Trường hợp phải làm lại thí nghiệm với lượng dung dịch đường pha lỗng dung dịch đường Ngược lại, khơng có lớp kết tủa Cu2O màu đỏ gạch phải tăng lượng dung dịch đường - Để lắng kêt tủa, lọc vào bình lọc chân khơng Buchner (qua phễu lọc xốp G4 chuyên dùng để định lượng đường) - - Rửa bình phễu lọc nước cất nóng 3-4 lần Cần ý cho kết tủa Cu 2O phễu lọc phủ lớp nước nóng Hịa tan kết tủa Cu2O vào bình tam giác 50 ml cách cho lượng nhỏ (5ml) dung dịch Fe2(SO4)3 môi trường H2SO4 dùng đũa thủy tinh khuấy thật cẩn thận để hòa tan hoàn toàn kết tủa Cu2O phễu lọc - Tráng phễu lọc 3-4 lần nước cất nóng - Chuẩn độ dung dịch thu KMnO4 0,1N xuất màu hồng nhạt bền 20-30 giây - Biết lượng KMnO4 dùng định phân, tra bảng để suy lượng đường có mẫu Song song làm thí nghiệm đối chứng cách thay dung dịch đường nước cất Tính kết Hàm lượng đường khử tính theo cơng thức sau - 15 TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com moi nhat X= Trong đó: X: Hàm lượng đường khử tính theo % a: Số g glucose tìm tra bảng ứng với số ml KMnO4 0,1N dùng để chuẩn độ mẫu thí nghiệm trừ số ml KMnO4 0,1N chuẩn độ mẫu đối chứng V1: Thể tích mẫu lấy đem xác định đường khử V: Thể tích bình định mức (số ml dung dịch mẫu pha loãng) g: Khối lượng mẫu thí nghiệm (g) 100: Hệ số tính chuyển thành % 1000: Hệ số đổi g thành mg 16 TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com moi nhat NỘI DUNG 4: XÁC ĐỊNH MỘT SỐ CHỈ SỐ ĐÁNH GIÁ CHẤT LƯỢNG CỦA CHẤT BÉO Xác định số axit (Av) Cơ sở lý thuyết: Chỉ số acid số mg KOH cần thiết để trung hòa lượng acid béo tự có 1gam chất béo Chỉ số axit dự báo khả bảo quản sản phẩm cho biết mức độ bị thuỷ phân chất béo RCOOH + KOH RCOOK + H2O Từ phương trình phản ứng, tính toán lượng KOH sử dụng số Av Nguyên liệu, Hóa chất Dầu thực vật o Dung dịch cồn 96 - ete (3:1) Dung dịch phenolphtalein 1% cồn 96 o o Dung dịch KOH 0,1N cồn 96 Trang thiết bị, dụng cụ Cân điện tử Bình tam giác 250ml có nút đậy Buret loại 25ml Ống đong 25ml & 50ml Pipet 5ml Các bước tiến hành - Cho vào bình tam giác cổ nhám 250ml gam chất béo (dầu lạc) - Thêm vào 20 ml hỗn hợp cồn-ete (tỷ lệ 3:1) để hòa tan chất béo, lắc Nếu chất béo chưa tan hết đun nhẹ hỗn hợp nồi cách thủy, lắc đều, làm nguội - Cho 2-5 giọt thị phenolphtalein chuẩn độ hỗn hợp dung dịch KOH 0,1N cồn xuất màu hồng tươi (trường hợp chất béo có màu thẫm dùng thị tymolphtalein 1% cồn, chuẩn độ màu xanh) - Lặp lại thí nghiệm chuẩn độ thêm lần đế lấy giá trị trung bình nhằm tăng tính xác kết thí nghiệm Tính kết Chỉ số acid dầu thực vật tính theo cơng thức sau: AV= Trong đó: V- Số ml KOH 0,1N dùng để chuẩn độ f - Hệ số điều chỉnh KOH 0,1N m – Lượng mẫu thí nghiệm (g) 5,611: Số mg KOH tương đương với 1ml KOH 0,1N 17 TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com moi nhat Chú ý: Khối lượng mẫu thử đem xác định tùy theo số axit dầu mỡ dự kiến sau: Chỉ số axit dự kiến