ĐỖ hữu TUYỂN NGHIÊN cứu mức độ NHIỄM nấm mốc TRÊN dược LIỆU NGŨ vị tử (FRUCTUS SCHISANDRAE) THU THẬP từ một số HIỆU ĐÔNG dược tại hà nội KHÓA LUẬN tốt NGHIỆP dược sĩ

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐỖ HỮU TUYỂN Mã sinh viên: 1701651 NGHIÊN CỨU MỨC ĐỘ NHIỄM NẤM MỐC TRÊN DƯỢC LIỆU NGŨ VỊ TỬ (FRUCTUS SCHISANDRAE) THU THẬP TỪ MỘT SỐ HIỆU ĐÔNG DƯỢC TẠI HÀ NỘI KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS Trần Trịnh Công Nơi thực hiện: Bộ môn Vi sinh Sinh học HÀ NỘI – 2022 LỜI CẢM ƠN Trước trình bày nội dung nghiên cứu khóa luận tốt nghiệp mình, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến với người suốt thời gian qua hỗ trợ động viên em hồn thành đề tài cách tốt Đầu tiên, với lịng kính trọng biết ơn sâu sắc, em muốn gửi lời cảm ơn chân thành tới người Thầy em - TS Trần Trịnh Công - Giảng viên Bộ môn Vi sinh Sinh học, Trường Đại học Dược Hà Nội, người ln tận tâm hướng dẫn em q trình thực đề tài, hết lòng giúp đỡ, tạo điều kiện, động viên em cố gắng học tập hồn thành khóa luận Em xin cảm ơn tồn thể thầy giáo, cô giáo, chị kỹ thuật viên môn Vi sinh Sinh học, Trường Đại học Dược Hà Nội nhiệt tình giúp đỡ em thời gian làm khóa luận Bộ mơn Nhân đây, em xin trân trọng cảm ơn Ban Giám hiệu nhà trường tồn thể thầy trường Đại học Dược Hà Nội tham gia đào tạo, trang bị kiến thức cho em giúp đỡ em suốt thời gian học tập trường Em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới gia đình, bạn bè, người ln cổ vũ, động viên em sống trình học tập hồn thành khóa luận Cuối cùng, em xin kính chúc thầy giáo sức khỏe dồi để gặt hái nhiều thành công nghiệp sống Hà Nội, ngày 23 tháng năm 2022 Sinh viên Tuyển Đỗ Hữu Tuyển MỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH ĐẶT VẤN ĐỀ PHẦN 1: TỔNG QUAN 1.1 Các chi nấm quan trọng 1.1.1 Chi Aspergillus 1.1.2 Chi Penicillium 1.2 Đôi nét mycotoxin 1.3 Tình hình nghiên cứu mức độ nhiễm nấm mốc dược liệu giới 1.4 Tình hình nghiên cứu mức độ nhiễm nấm mốc dược liệu nước 11 1.5 Đôi nét dược liệu Ngũ vị tử 12 PHẦN 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 Nguyên vật liệu thiết bị 14 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 14 2.1.2 Môi trường phân lập xác định nấm mốc 14 2.1.3 Thiết bị sử dụng nghiên cứu 14 2.2 Nội dung nghiên cứu 15 2.3 Phương pháp nghiên cứu 15 2.3.1 Phương pháp lấy mẫu 15 2.3.2 Phương pháp xác định hàm ẩm dược liệu 15 2.3.3 Phương pháp phân lập nấm mốc 16 2.3.4 Phương pháp phân loại nấm mốc 16 2.3.5 Các số đánh giá mức độ nhiễm nấm mốc 17 PHẦN 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 18 3.1 Hàm ẩm mẫu dược liệu Ngũ vị tử nghiên cứu 18 3.2 Mức độ nhiễm nấm mốc mẫu Ngũ vị tử nghiên cứu 18 3.2.1 Kết phân lập phân loại 18 3.2.2.Đặc điểm khuẩn lạc, vi học số loài nấm quan trọng phân lập từ mẫu Ngũ vị tử nghiên cứu 28 3.3 Bàn luận 29 3.3.1 Về hàm ẩm dược liệu 29 3.3.2 Chi nhiễm nhiều 30 3.3.3 Loài sinh độc tố 30 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 32 Kết luận 32 Đề xuất 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC PL.1 Hình ảnh số lồi nấm khác phân lập từ mẫu Ngũ vị tử nghiên cứu DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT AFPA : Aspergillus Flavus Parasiticus Agar CFU : Colony-Forming Unit CREA : Creatine Sucrose Agar CYA : Czapek Yeast Agar DĐVN V : Dược điển Việt Nam V DGM : Dichloran Glycerol Medium Base HPLC : High Performance Liquid Chromatography LÔ : Phố Lãn Ông MEA : Malt Extract Agar MS : Mass Spectrometry PDA : Potato Dextrose Agar UPLC : Ultra Performance Liquid Chromatography A aculeatus : Aspergillus aculeatus A corymbifera : Absidia corymbifera A foetidus : Aspergillus foetidus A fumigatus : Aspergillus fumigatus A niger : Aspergillus niger A versicolor : Aspergillus versicolor C sphaerospermum : Cladosporium sphaerospermum R stolonifer : Rhizopus stolonifer DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Thiết bị sử dụng nghiên cứu 14 Bảng Hàm ẩm mẫu Ngũ vị tử nghiên cứu 18 Bảng Số lượng chi, loài chủng nấm phân lập từ 10 mẫu Ngũ vị tử nghiên cứu 19 Bảng 3 Đặc điểm khuẩn lạc số loài nấm quan trọng phân lập từ mẫu Ngũ vị tử nghiên cứu môi trường Czapek Dox Agar, 27oC, ngày nuôi 28 Bảng Đặc điểm vi học số loài nấm quan trọng phân lập từ mẫu Ngũ vị tử nghiên cứu môi trường Czapek Dox Agar, 27oC, ngày nuôi 29 DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ Biểu đồ Biểu đồ biểu diễn tỷ lệ phần trăm số chủng chi nấm phân lập từ mẫu Ngũ vị tử nghiên cứu 20 Biểu đồ Biểu đồ biểu diễn tỷ lệ phần trăm số chủng loài phân lập từ mẫu Ngũ vị tử nghiên cứu 21 DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Cấu trúc sinh conidi chi Aspergillus Hình 1.2 Hệ sợi cấu trúc sinh conidi chi Penicillium Hình Mẫu dược liệu Ngũ vị tử thu thập 36 LƠ trước phân lập 13 Hình Loài A niger nhiễm dược liệu Ngũ vị tử: 22 Hình Loài A aculeatus nhiễm dược liệu Ngũ vị tử: 24 Hình 3 Lồi A foetidus nhiễm dược liệu Ngũ vị tử: 23 Hình Lồi Penicillium sp1 nhiễm dược liệu Ngũ vị tử: 25 Hình Lồi Penicillium sp2 nhiễm dược liệu Ngũ vị tử: 26 Hình Lồi Penicillium sp3 nhiễm dược liệu Ngũ vị tử: 27 PHỤ LỤC PL-1 Hình 1 Lồi A fumigatus nhiễm dược liệu Ngũ vị tử: PL-1 Hình Lồi A versicolor nhiễm dược liệu Ngũ vị tử: PL-1 Hình Loài Cladosporium sphaerospermum nhiễm mẫu dược liệu Ngũ vị tử: PL-1 Hình Lồi Rhizopus stolonifer nhiễm dược liệu Ngũ vị tử: PL-1 Hình Loài Absidia corymbifera nhiễm dược liệu Ngũ vị tử: ĐẶT VẤN ĐỀ Dược liệu nói chung sản phẩm làm thuốc có nguồn gốc thực vật nói riêng thường dễ bị nấm mốc xâm nhiễm phát triển, điều kiện khí hậu nóng ẩm Việt Nam Khi bị mốc sản phẩm việc bị giảm chất lượng (bị biến đổi thành phần hoá học, biến màu, sinh mùi vị khó chịu,…) thường bị nhiễm độc tố nấm (mycotoxins) Các độc tố gây bệnh cho người động vật, gọi chung bệnh mycotoxin (mycotoxicoses), với tác động từ cấp tính đến mạn tính, dẫn đến quái thai, ung thư,…[10], [17], [19] Ngũ vị tử (Fructus Schisandrae) dược liệu quý, sử dụng phổ biến đông y để hỗ trợ điều trị nhiều chứng bệnh khác ho lâu ngày, hư suyễn, mộng tinh, di tinh, hoạt tinh, đái dầm, tiêu chảy kéo dài, tân dịch hao tổn, háo khát, mạch hư, nội nhiệt, đánh trống ngực, ngủ, … [1] Tuy nhiên, có thông báo quốc tế nước mức độ nhiễm nấm mốc mycotoxin thảo dược Để góp phần nâng cao chất lượng thuốc, đảm bảo an toàn hiệu điều trị thảo dược nói chung, dược liệu Ngũ vị tử nói riêng, đề tài: “Nghiên cứu mức độ nhiễm nấm mốc dược liệu Ngũ vị tử (Fructus Schisandrae) thu thập từ số hiệu đông dược Hà Nội” thực với hai mục tiêu sau: Phân lập chủng nấm mốc nhiễm số mẫu Ngũ vị tử Phân loại chủng nấm phân lập đến cấp chi loài PHẦN 1: TỔNG QUAN 1.1 Các chi nấm quan trọng Giới Nấm (Kingdom Fungi) theo phân loại truyền thống chia thành ngành nhóm, gồm: Ngành nấm roi (Chitridiomycota), ngành nấm tiếp hợp (Zygomycota), ngành nấm túi (Ascomycota), ngành nấm đảm (Basidiomycota) nhóm nấm bất tồn (Deuteromycetes hay Fungi Imperfecti) [6], [25] Trong đó, nhóm nấm bất tồn giữ vai trò quan trọng đời sống kinh tế y dược nhiều lồi có khả lây nhiễm lương thực, thực phẩm, sản phẩm có nguồn gốc thực vật thảo dược… gây hư hỏng đặc biệt sinh sản phẩm chuyển hóa thứ cấp (mycotoxins) gây độc người động vật [25] Trong phạm vi có hạn khóa luận Aspergillus Penicillium, chi điển hình thuộc nhóm nấm bất tồn, có khả sinh nhiều mycotoxin gây nguy hại đến sức khỏe người đề cập 1.1.1 Chi Aspergillus Chi Aspergillus Micheli mô tả năm 1729, sau năm 1832 Fries chấp nhận theo luật quốc tế danh pháp thực vật, chi Aspergillus thức mang tên Aspergillus Micheli ex Fries Sau Fries lại xem xét bổ sung nhà phân loại học công nhận nên mang tên Aspergillus Fries ex Fries [6] Về mặt phân loại học, chi Aspergillus có đặc điểm sau [6], [7], [23]: - Hệ sợi nấm: Gồm sợi ngăn vách, phân nhánh, không màu, màu nhạt số trường hợp có màu nâu hay nâu sẫm khác vùng định khuẩn lạc - Tế bào chân (foot-cell): Là tế bào có đường kính lớn hơn, màng dày đoạn lân cận sợi nấm Bộ máy mang bảo tử trần phát triển từ - Giá bào tử trần: Phát triển từ tế bào chân, nhánh sợi nấm, gần thẳng góc với trục tế bào chân thường mặt chất Giá bào tử không phân nhánh, khơng có (hoặc có) vách ngang - Bọng đỉnh giá (vesicle): Là phần phình to đỉnh giá bào tử trần Chúng phình to thành bọng hình chùy, hình elip, hình gần cầu hay hình cầu, khơng có vách ngăn Trên bọng mang cuống thể bình thể bình - Thể bình (phialide) cuống thể bình (metula): Thể bình tế bào trực tiếp sinh conidi, nằm bọng đỉnh giá Các thể bình song song họp thành cụm phần đỉnh bọng, xếp thành hình tia sát tồn bề mặt bọng Thể bình sinh trực tiếp từ bọng gọi thể bình lớp (uniseriate), sinh từ cuống thể bình xuất phát từ bọng gọi thể bình hai lớp (biseriate) Việc xác định lớp thể bình đơi khó lớp cuống thể bình thường bé dễ bị che khuất bào tử lớp thể bình thứ cấp - Các bào tử trần: tạo thành nối tiếp miệng thể bình, thành chuỗi hướng gốc (bào tử gần miệng non nhất, xa già), không phân nhánh, không ngăn vách, thay đổi hình dạng, kích thước, màu sắc, dấu vết mặt ngồi tùy lồi (Hình 1.1) - Khối bào tử trần (conidial head): tất chuỗi bào tử trần tạo thành từ thể bình bọng đỉnh giá, hợp thành khối bào tử trần đỉnh bọng Khối bào tử trần đỉnh bọng có hình cột, hình cầu hình tia tỏa trịn Một số lồi có bào tử túi (ascospore) thể kín (cleistothecium) Hình 1.1 Cấu trúc sinh conidi chi Aspergillus (Ghi chú: Conidie: bào tử; phialide: thể bình; métule: cuống thể bình; vésicule: bọng đỉnh giá; conidiophore: cấu trúc sinh bào tử; hyphe: sợi nấm) *Nuôi cấy để nhận diện: Các chủng nấm nuôi cấy đơn điểm môi trường Czapek MEA 2% ủ 25 – 27oC Đối với lồi nấm ưa khơ A penicillioides số lồi khác sử dụng môi trường Czapek MEA với 20 – 40% đường kính (sucrose) Ni cấy chủng điểm môi trường, sử dụng đĩa Petri thủy tinh tốt đĩa Petri chất dẻo Hầu hết lồi hình thành bào tử vịng ngày Màu cấu trúc khối conidi (dạng cột phóng xạ) quan sát kính hiển vi [22] Nhiều loài nấm mốc thuộc chi Aspergillus phân bố rộng rãi chất khác nhau, loại chất có nguồn gốc thực vật loại hạt lương thực, thảo dược sản phẩm chế biến từ nguồn chất [23] (a) (b) (c) (d) Hình 3.3 Lồi Penicillium sp2 nhiễm dược liệu Ngũ vị tử: (a): Loài Penicillium sp2 nhiễm mẫu 51 LƠ (mơi trường PDA); (b): Khuẩn lạc lồi sau ngày ni, 27oC (môi trường Czapek-Dox); (c) (d): Cấu trúc chổi sinh conidi tầng conidi loài 26 (a) (b) (c) (d) Hình 3.4 Lồi Penicillium sp3 nhiễm dược liệu Ngũ vị tử: (a): Loài Penicillium sp3 nhiễm mẫu 30 LƠ (mơi trường PDA); (b): Khuẩn lạc lồi sau ngày ni, 27oC (mơi trường Czapek-Dox); (c) (d): Cấu trúc chổi sinh conidi tầng conidi loài 27 3.2.2 Đặc điểm khuẩn lạc, vi học số loài nấm quan trọng phân lập từ mẫu Ngũ vị tử nghiên cứu Đặc điểm khuẩn lạc vi học chủng nấm khảo sát nuôi cấy đơn điểm đĩa Petri chứa môi trường chuẩn Czapek Dox Agar ủ 27oC – ngày [22] Nuôi cấy điểm theo nguyên tắc pha loãng lấy đơn bào tử cho phép xác định rõ đặc điểm khuẩn lạc (đường kính, màu sắc mặt trên, mặt khuẩn lạc hay chất tiết từ khuẩn lạc…) Các đặc điểm khuẩn lạc nói chung khơng định việc phân loại chủng đến cấp độ loài, song yếu tố quan trọng thiếu định danh chủng nấm phương pháp hình thái Bảng 3.3 trình bày đặc điểm khuẩn lạc số chủng thuộc loài nấm quan trọng phân lập từ mẫu Ngũ vị tử nghiên cứu Bảng 3.3 Đặc điểm khuẩn lạc số loài nấm quan trọng phân lập từ mẫu Ngũ vị tử nghiên cứu môi trường Czapek Dox Agar, 27oC, ngày nuôi Tên lồi Màu sắc khuẩn lạc Đường kính Mặt trước Mặt sau khuẩn lạc (cm) Đen Vàng nhạt 4,0 – 6,0 A fumigatus Xanh xám Không màu 4,5 – 5,5 A aculeatus Nâu tím Trắng xám 4,5 – 6,0 A foetidus Nâu đen Trắng xám 4,5 – 5,0 Trắng – vàng nâu Vàng nhạt 1,5 – 3,0 A niger A versicolor Bên cạnh đặc điểm khuẩn lạc, để phân loại chủng đến cấp lồi, cơng việc khơng thể thiếu có tính chất định việc khảo sát điểm vi học chủng Công việc đòi hỏi nhiều kỹ từ kỹ thuật làm tiêu bản, sử dụng thuốc nhuộm (Lactophenol Cotton Blue _ LCB) khả thành thạo việc sử dụng kính hiển vi gắn máy ảnh Dưới đặc điểm vi học chủng thuộc số loài nấm quan trọng phân lập từ mẫu Ngũ vị tử nghiên cứu trình bày Bảng 3.4 28 Bảng 3.4 Đặc điểm vi học số loài nấm quan trọng phân lập từ mẫu Ngũ vị tử nghiên cứu môi trường Czapek Dox Agar, 27oC, ngày ni Tên lồi Cấu trúc sinh conidi Đường Cuống Thể (Conidial head) kính bọng thể bình bình (μm) (μm) 15-27 x 6,5-10 x 4-6 3-4,5 Dạng Số tầng (μm) A niger R 45-105 A aculeatus R 35-100 A fumigatus C 18-32 G-R 25-40 (50) R 12-18 A foetidus A versicolor Conidi (μm) 3,5-5 6-10 x 3-4 x 3-5 4-5 5,5-8 x 2-3,5 7-12 x 7-11 x 3-5 2,5-4 5-7,5 x 5-8 x 2- 2-3 2,5-3 4-5 2-3,5 (Ghi chú: R: dạng phóng xạ; C: dạng cột; G: dạng cầu) 3.3 Bàn luận 3.3.1 Về hàm ẩm dược liệu Về hàm ẩm dược liệu, trình bày phần kết quả, hàm ẩm yếu tố quan trọng ảnh hưởng tới mức độ nhiễm nấm mốc chất nói chung, thảo dược nói riêng Từ kết xác định hàm ẩm mẫu ngũ vị tử nghiên cứu (Bảng 3.1) cho thấy: tất mẫu nghiên cứu, có hàm ẩm ≤ 13% đạt yêu cầu DĐVN V hàm ẩm không thuận lợi cho phát triển nấm mốc, bị nhiễm nấm (Bảng 3.2) Điều bất hợp lý mẫu thảo dược nghiên cứu có nguồn gốc khác (được trồng địa phương khác nhau, với điều kiện thổ nhưỡng, canh tác, trình thu hái, chế biến, bảo quản khác nhau), bị nhiễm nấm trước, trình thu hoạch, vận chuyển trước lưu hành hiệu đông dược Từ thực tế đặt cho nhà quản lý, nuôi trồng, sản xuất phải có biện pháp thu hoạch, chế biến, bảo quản hợp lý sau thu hoạch suốt trình lưu hành thị trường tay người tiêu dùng; đồng thời phải có qui định chặt chẽ nguồn gốc, xuất xứ dược liệu để thuận lợi cho việc kiểm tra, giám sát chất lượng, trước đưa đến người sử dụng 29 3.3.2 Chi nhiễm nhiều Từ kết phân lập, phân loại nấm từ 10 mẫu nghiên cứu trình bày Bảng 3.2 Biểu đồ 1, Biểu đồ cho thấy: Các mẫu ngũ vị tử bị nhiễm đa dạng loài, đặc biệt loài nấm mốc thuộc chi Aspergillus Đây chi nấm bảo quản (storage fungi) thường nhiễm sản phẩm bảo quản sau thu hoạch đặc biệt có nhiều lồi nấm sinh độc tố nguy hại cho sức khỏe người, độc tố aflatoxin Kết phân lập, phân loại phù hợp với kết nghiên cứu tác giả nước [4], [7], [11] Các chi nấm khác bao gồm: Penicillium, Cladosporium hai chi nấm tiếp hợp Absidia, Rhizopus chiếm tỷ lệ số chủng phân lập không cao chi có ý nghĩa quan trọng thực tiễn [6], [22], [25] 3.3.3 Loài sinh độc tố Trong loài thuộc chi Aspergillus Bảng 3.2, A niger loài phân lập nhiều số chủng mẫu có mặt: RD = 62,06%, FQ = 90% Điều cho thấy tính đặc trưng loài dược liệu ngũ vị tử Các mẫu ngũ vị tử (đặc biệt mẫu 10 LƠ, 32 LƠ, 57 LƠ) có nguy cao nhiễm ochratoxin A, độc tố gây hại thận độc tố khác Bởi loài A niger xuất tự nhiên sinh độc tố, điển hình ochratoxin A fumonisin B2 nhiều chất có nguồn gốc thực vật ngũ cốc, thảo dược loại gia vị [17], [19], [25] Các loài khác thuộc chi Aspergillus khác gồm A foetidus, A fumigatus, A aculeatus, A versicolor có xuất mẫu nghiên cứu, nhiên với mật độ không cao khơng phải lồi đặc trưng chất - Lồi A foetidus có RD = 6,74% (19/282) FQ = 60% (6/10) Loài A aculeatus với số RD FQ 4,61% (13/282) 40% (4/10) Hai loài A aculeatus A foetidus (đều thuộc nhóm lồi A niger) lồi có khả sinh độc tố ochratoxin A acid secalonic D [22], [25] Do vậy, dược liệu cho thấy tiềm ẩn nguy phơi nhiễm độc tố nấm khác ochratoxin A - Hai loài A versicolor A fumigatus với số RD = 2,48% (với A versicolor) 2,13% (với A fumigatus), FQ = 50% lồi Trong đó, A versicolor, lồi có khả sinh độc tố sterigmatocystin, nidulotoxin; với A fumigatus, lồi vừa có khả sinh số độc tố (gliotoxin, verrucologen, fumitremorgin A & B) vừa lồi có khả gây bệnh nấm hội người động vật cao, cần phịng tránh q trình tiếp xúc, người có địa suy nhược suy giảm miễn dịch [22], [30] 30 - Chi Penicillium với 16 chủng nấm (thuộc loài chưa xác định) nhóm có nhiều lồi sinh độc tố (chỉ xếp sau chi Aspergillus) botryodiploidin, acid cyclopiazonic, roquefortinc C, citrinin [25] - Chi Cladosporium ghi nhận 23 chủng thuộc loài Cladosporium sphaerospermum với mật độ RD = 8,16% (23/282) tỷ lệ có mặt FQ = 50% (5/10) - Các chi nấm tiếp hợp phân lập loài Rhizopus stolonifer Absidia corymbifera với số RD 3,19% 4,96%; FQ = 50% lồi Đây nhóm nấm hoại sinh mạnh, gây giảm chất lượng thảo dược, đồng thời có khả gây bệnh nấm hội, bệnh nhân bị tiểu đường béo phì (mặc dầu phổ biến lồi A fumigatus), nên cần có biện pháp phịng tránh để vừa đảm bảo chất lượng dược liệu vừa ngăn ngừa lây nhiễm [30] 31 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Kết luận Qua trình phân lập phân loại chủng nấm nhiễm 10 mẫu Ngũ vị tử thu thập từ 10 cửa hiệu đông dược địa bàn Hà Nội, có số kết luận sau: - 282 chủng nấm thuộc 11 loài chi gồm Aspergillus, Penicillium, Rhizopus, Absidia Cladosporium phân lập - Chi Aspergillus có lồi gồm: • A niger, xếp thứ với số: RD = 62,06% (175/282) FQ = 90% (9/10) • A foetidus, xếp thứ hai với số: RD = 6,74% (19/282) FQ = 60% (6/10) • A aculeatus, xếp thứ ba với mật độ RD = 4,61% (13/282) FQ = 40% (4/10) • A versicolor tiếp sau với số: RD = 2,48% (7/282) FQ = 50% (5/10) • A fumigatus xếp cuối với mật độ RD = 2,13% (6/282) FQ = 50% (5/10) - Chi Penicillium với 16 chủng nấm (thuộc loài chưa xác định) với RD FQ 1,77% (5/282) 20% (2/10); 1,42% (4/282) 30% (3/10); 2,48% (7/282) 40% (4/10) - Chi Cladosporium ghi nhận 23 chủng thuộc loài Cladosporium sphaerospermum xuất mẫu nghiên cứu với mật độ RD = 8,16% (23/282) - Các chi nấm tiếp hợp phân lập loài Rhizopus stolonifer Absidia corymbifera với số RD FQ 3,19% (9/282) 50% (5/10); 4,96% (14/282) 50% (5/10) Đề xuất - Tiếp tục nghiên cứu mức độ nhiễm nấm mốc dược liệu ngũ vị tử việc mở rộng phạm vi nghiên cứu số mẫu vùng địa lý - Triển khai đánh giá mức độ nhiễm độc tố ochratoxin A dược liệu - Tiếp tục nghiên cứu định danh loài thuộc chi Penicillium để đưa khuyến cáo thích hợp sử dụng dược liệu 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Bộ Y tế (2017), Dược điển Việt Nam V, Nhà xuất Y học Hà Nội Trần Trịnh Công (2003), Nghiên cứu mức độ nhiễm nấm mốc khả sinh aflatoxin nhóm Aspergillus flavus số dược liệu đông dược lưu hành địa bàn Hà Nội, Luận văn Thạc sỹ Dược học, Đại học Dược Hà Nội Trần Trịnh Công cộng (2003), Nghiên cứu mức độ nhiễm loài Aspergillus flavus aflatoxin hạt sen số địa điểm Hà Nội, Tạp chí Dược học Trần Trịnh Công cộng (2008), Phân lập nghiên cứu khả sinh độc tố số nấm mốc số dược liệu đông dược Việt Nam, Đề tài NCKH cấp Bộ Y tế Trần Trịnh Cơng cộng (2017), Nghiên cứu tính đa dạng loài chi Aspergillus Fr.: Fr dược liệu ý dĩ (Semen Coicis) lưu hành số hiệu thuốc đông dược thuộc địa bàn Hà Nội, Tạp chí Y học thực hành Bùi Xuân Đồng (2004), Nguyên lý phòng chống nấm mốc mycotoxin, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật Đặng Vũ Hồng Miên (2015), Hệ nấm mốc Việt Nam: Phân loại, tác hại, độc tố, cách phòng chống, NXB Khoa học kỹ thuật Đỗ Tất Lợi (1986), Những thuốc dược liệu Việt Nam, Nhà Xuất khoa học kỹ thuật Hà Nộị Tiếng Anh Al-juraifani A A (2011), “Natural occurrence of fungi and aflatoxins of cinnamon in the Saudi Arabia”, Afr J food Sci., Vol 5(8), pp.460-465 10 Ashiq S., et al (2014), “Natrural occurrence of mycotoxins in medicinal plants: A review”, Fungal genetics and biology 66, pp.1-10 11 Aziz N H et al (1998), “Contamination of some common medicinal plant samples and spices by fungi and their mycotoxins”, Bot Bull Acad Sin., Vol 39, pp.279-285 12 Barnett H L and Hunter B B (1972), “Illustrated Genera of Imperfect Fungi”, Burgess Publishing Company, Third Edition 13 Chen A J et al (2015), “Mycobiota and mycotoxins in traditional medicinal seeds from China”, Toxins 7, pp 3858-3875 14 Chien M-Y et al (2018), “Investigation of aflatoxins contamination in herbal materia medica in a Taiwan pharmaceutiacl factory”, Journal of food and drug analysis 26, pp 1154-1159 15 Didwania N and Joshi M (2013), “Mycotoxins: A critical review on occurrence and significance”, Int Pharm Pharm Sci., Vol 5, Issue 3, pp 1014-1019 16 Do K H et al (2015), “Nation-based occurrence and endogenous biological reduction of mycotoxins in medicinal herbs and spices”, Toxins 7, pp 4111-4130 17 Gautam A K., et al (2016), “Mycotoxins: the silent killers inside herbal drugs A critical review of the literature”, Bio bulletin, Vol 2(1), pp.26-39 18 Gonzalez H H L et al (1999), “Relationship between Fusarium and Alternaria alternate contamination and deoxynivalenol occurrence on Argentinian durum”, Mycopathologia, Vol 144, pp 97-102 19 IARC (2012), “Improving public health through mycotoxin control”, WHO Press 20 Khati P (2014), “Mycoflora and aflatoxin assessment of crude herbal drugs during storage in Haridwar, Uttarakhand, India”, Indian Phytopath., Vol 67(4), pp.407-411 21 Lee et al (2014), “Incidence and level of aflatoxins contamination in medicinal plants in Korea”, Mycobiology, Vol 42(4): 339-345 22 Pitt J I and Hocking A D (2009), “Fungi and Food Spoilage”, Academic Press 23 Raper K B and Fennell D I (1965), “Genus Aspergillus”, Baltimo, Williams and Wilkins, USA 24 Rizzo I., et al (2004), “Assessment of toxigenic fungi on Argentinean medicinal herbs”, Microbiological Research 159, pp.113-120 25 Samson R A et al (1995), “Introduction to food-borne fungi”, Fourth edition, CBS press 26 Santos L et al (2013), “Mycotoxin in medical/aromatic herbs – a review”, Boletín Latinoamericano y del Caribe de plants medicales y aromáticas 12(2), pp.119-142 27 Sauer D B and Burroughs R (1986), “Disinfection of seed surfaces with sodium hypochlorite”, Phytopathology Vol 76: 745-749 28 Sharma et al (2013), “Investigation on the mycoflora and mycotoxin contamination of dried medicinal leaves of Azadirachta indica A Juss., and Justicia adhatoda Linn., from Jammu and Kashmir state (India)”, International Journal of advanced research, Vol 1, Iss 4, pp.131-138 29 Siddique N A et al (2013), “Determination of aflatoxins in medicinal plants by high-performance liquid chromatography - tandem mass spectometry”, J Pharam Sci., Vol 16(2), pp.321-330 30 Walsh T J., et al (2008), “Treatment of aspergillosis: clinical practice guidelines of the infectous diseases society of America”, Clin Infect Dis., 46, pp 327-360 PHỤ LỤC PL.1 Hình ảnh số loài nấm khác phân lập từ mẫu Ngũ vị tử nghiên cứu (a) (b) (c) (d) PL-1 Hình 1 Lồi A fumigatus nhiễm dược liệu Ngũ vị tử: (a): Loài A fumigatus nhiễm mẫu 69A LƠ (mơi trường phân lập PDA); (b) (c): Mặt trước sau khuẩn lạc loài Czapek Dox (27oC, ngày nuôi); (d): Cấu trúc sinh conidi tầng loài (a) (b) (c) (d) PL-1 Hình Lồi A versicolor nhiễm dược liệu Ngũ vị tử: (a): Loài A versicolor nhiễm mẫu 30 LƠ (mơi trường phân lập PDA); (b): Mặt trước khuẩn lạc Czapek Dox (27oC, ngày nuôi); (c) (d): Cấu trúc sinh conidi tầng conidi loài (a) (b) (c) (d) PL-1 Hình Lồi Cladosporium sphaerospermum nhiễm dược liệu Ngũ vị tử: (a): Loài C sphaerospermum mẫu 30 LƠ (mơi trường phân lập PDA); (b), (c), (d): cấu trúc sinh conidi conidi loài (a) (b) (c) (d) PL-1 Hình Lồi Rhizopus stolonifer nhiễm dược liệu Ngũ vị tử: (a): Loài R stolonifer nhiễm mẫu 10 LƠ (mơi trường phân lập PDA); (b), (c) (d): Đặc điểm vi học (sợi dạng rễ, nang bào tử, sợi khơng vách ngăn) lồi (a) (b) (c) (d) PL-1 Hình Lồi Absidia corymbifera nhiễm dược liệu Ngũ vị tử: (a): Lồi A corymbifera nhiễm mẫu 57 LƠ (mơi trường phân lập PDA); (b), (c) (d): Đặc điểm vi học loài BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐỖ HỮU TUYỂN NGHIÊN CỨU MỨC ĐỘ NHIỄM NẤM MỐC TRÊN DƯỢC LIỆU NGŨ VỊ TỬ (FRUCTUS SCHISANDRAE) THU THẬP TỪ MỘT SỐ HIỆU ĐÔNG DƯỢC TẠI HÀ NỘI KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2022 ... HỮU TUYỂN NGHIÊN CỨU MỨC ĐỘ NHIỄM NẤM MỐC TRÊN DƯỢC LIỆU NGŨ VỊ TỬ (FRUCTUS SCHISANDRAE) THU THẬP TỪ MỘT SỐ HIỆU ĐÔNG DƯỢC TẠI HÀ NỘI KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2022 ... điều trị thảo dược nói chung, dược liệu Ngũ vị tử nói riêng, đề tài: ? ?Nghiên cứu mức độ nhiễm nấm mốc dược liệu Ngũ vị tử (Fructus Schisandrae) thu thập từ số hiệu đông dược Hà Nội? ?? thực với... tục nghiên cứu mức độ nhiễm nấm mốc dược liệu ngũ vị tử việc mở rộng phạm vi nghiên cứu số mẫu vùng địa lý - Triển khai đánh giá mức độ nhiễm độc tố ochratoxin A dược liệu - Tiếp tục nghiên cứu