Giáo trình Miễn dịch học cung cấp những kiến thức cơ bản về hệ thống miễn dịch của cơ thể: miễn dịch không đặc hiệu và miễn dịch đặc hiệu, các cơ chế đáp ứng miễn dịch, bệnh lý miễn dịch và ứng dụng miễn dịch trong phòng bệnh và chẩn đoán bệnh. Mời các bạn cùng tham khảo!
UỶ BAN NHÂN DÂN TỈNH ĐỒNG THÁP TRƯỜNG CAO ĐẲNG CỘNG ĐỒNG ĐỒNG THÁP GIÁO TRÌNH MƠN HỌC: MIỄN DỊCH HỌC NGÀNH, NGHỀ: DỊCH VỤ THÚ Y TRÌNH ĐỘ: CAO ĐẲNG (Ban hành kèm theo Quyết định Số:…./QĐ-CĐCĐ-ĐT ngày… tháng… năm 2017 Hiệu trưởng Trường Cao đẳng Cộng đồng Đồng Tháp) Đồng Tháp, năm 2017 TUYÊN BỐ BẢN QUYỀN Tài liệu thuộc loại sách giáo trình nên nguồn thơng tin phép dùng ngun trích dùng cho mục đích đào tạo tham khảo Mọi mục đích khác mang tính lệch lạc sử dụng với mục đích kinh doanh thiếu lành mạnh bị nghiêm cấm i LỜI GIỚI THIỆU Miễn dịch học lĩnh vực khoa học tương đối mẻ sinh học, y học có ý nghĩa quan trọng ngành thú y nói riêng y học nói chung Miễn dịch học khơng cung cấp kiến thức chế sinh lý bệnh lý diễn trình tạo sức đề kháng thể động vật chống lại vi sinh vật bệnh chúng gây ra, mà ứng dụng rộng rãi lĩnh vực chẩn đốn, phịng điều trị bệnh truyền nhiễm cho người vật nuôi Dựa nguyên lý miễn dịch ngành khoa học khác có liên quan, thú y chế tạo chế phẩm sinh học phục vụ cho việc chẩn đoán huyết học nhằm phát sớm vi sinh vật gây bệnh, ứng dụng thực tiễn cơng tác thú y Trong q trình chỉnh sửa biên soạn, chúng tơi có nhiều tham khảo tác giả khác cố gắng hệ thống hóa hiểu biết miễn dịch, thể tính bản, khoa học đại môn học, song không tránh khỏi sai sót Chúng tơi mong nhận đóng góp ý kiến bạn đồng nghiệp để giáo trình hồn thiện Đồng Tháp, ngày… tháng năm 2017 Chủ biên/Tham gia biên soạn Chủ biên: Ths.Cao Thanh Hoàn Trần Thị Kiều Oanh ii MỤC LỤC Trang LỜI GIỚI THIỆU ii CHƯƠNG ĐẠI CƯƠNG VỀ MIỄN DỊCH HỌC 1 Khái niệm miễn dịch học 1.1 Miễn dịch tự nhiên 1.2 Miễn dịch thu 2 Tổng quan sức đề kháng thể động vật 2.1 Những yếu tố đề kháng biểu mô 2.2 Những yếu tố đề kháng bên Sức đề kháng phi đặc hiệu 3.1 Hàng rào vật lý (hàng rào học) 3.2 Hàng rào hoá học 3.3 Hàng rào tế bào 3.4 Hàng rào thể chất 3.5 Phản ứng viêm không đặc hiệu Sức đề kháng đặc hiệu (miễn dịch đặc hiệu) 4.1 Khái niệm 4.2 Phân loại tượng miễn dịch 10 CHƯƠNG 11 CÁC CƠ QUAN VÀ TẾ BÀO MIỄN DỊCH 11 Tổng quan máy miễn dịch 11 Vai trò quan dạng lympho trung ương 12 2.1 Khái niệm 12 2.2 Vai trò 12 Vai trò quan dạng lympho ngoại vi 15 3.1 Khái niệm 15 3.2 Vai trò 15 Vai trò tế bào tham gia đáp ứng miễn dịch 17 4.1 Neutrophil (Bạch cầu trung tính) 17 4.2 Monocyte (Bạch cầu đơn nhân lớn) 18 4.3 Lymphocyte (Tế bào lympho) 19 4.4 Basophil (Bạch cầu kiềm) 21 4.5 Eosinophil (Bạch cầu toan) 21 iii 4.6 Các tế bào khác 21 CHƯƠNG 24 KHÁNG NGUYÊN 24 Định nghĩa 24 Đặc tính kháng nguyên 24 2.1 Tính sinh miễn dịch 24 2.2 Tính đặc hiệu 25 Phân loại kháng nguyên 26 3.1 Dựa vào cấu trúc hóa học 26 3.2 Dựa vào nguồn gốc 26 Mẫn cảm 27 Thực hành 28 CHƯƠNG 29 KHÁNG THỂ 29 Định nghĩa chất kháng thể 29 1.1 Định nghĩa 29 1.2 Bản chất 30 Đặc tính kháng thể 30 Các lớp kháng thể 30 3.1 IgG 30 3.2 IgM 31 3.3 IgA 31 3.4 IgD 31 3.5 IgE 32 Quy luật hình thành kháng thể đặc hiệu 33 Các yếu tố ảnh hưởng đến khả hình thành kháng thể 34 5.1 Ảnh hưởng kháng nguyên 34 5.2 Ảnh hưởng kháng thể 36 5.3 Ảnh hưởng yếu tố ngoại cảnh 36 Thực hành 36 CHƯƠNG 38 PHẢN ỨNG KẾT HỢP KHÁNG NGUYÊN - KHÁNG THỂ 38 Nguyên lý ứng dụng phản ứng kháng nguyên-kháng thể 38 Phân loại phản ứng KN-KT 39 iv 2.1 Nhóm phản ứng loại đơn giản 39 2.2 Nhóm phản ứng loại phức tạp 39 Phản ứng kết tủa 40 3.1 Phản ứng kết tủa môi trường lỏng 40 3.2 Phản ứng kết tủa môi trường đặc 41 Phản ứng ngưng kết 43 4.1 Phản ứng ngưng kết hồng cầu HA 44 4.2 Phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu HI 45 Thực hành 46 CHƯƠNG 47 VẮC-XIN VÀ HUYẾT THANH 47 Ðịnh nghĩa lịch sử nghiên cứu phát triển vắc-xin 48 1.1.Định nghĩa 48 1.2 Lịch sử phát triển 48 Phân loại vắc-xin 48 2.1 Vắc-xin sống 49 2.2 Vắc-xin chết 49 2.3 Vắc-xin đại phân tử tinh chế 49 2.4 Vắc-xin đại 49 Phương pháp bảo quản sử dụng vắc-xin 49 Chương trình tiêm chủng vắc-xin 51 Huyết 53 Thực hành 55 TÀI LIỆU THAM KHẢO 56 v GIÁO TRÌNH MƠN HỌC Tên mơn học: MIỄN DỊCH HỌC Mã mơn học: CNN265 Vị trí, tính chất, ý nghĩa vai trị mơn học: - Vị trí môn học: Là môn học sở quan trọng cho người học ngành Cao đẳng Dịch vụ thú y Mơn học bố trí học sau mơn học khác để bổ trợ kiến thức lẫn kỹ năng: vi sinh đại cương_CNTY, sinh lý bệnh, dược lý thú y, - Tính chất mơn học: Mơn học cung cấp kiến thức hệ thống miễn dịch thể: miễn dịch không đặc hiệu miễn dịch đặc hiệu, chế đáp ứng miễn dịch, bệnh lý miễn dịch ứng dụng miễn dịch phịng bệnh chẩn đốn bệnh - Ý nghĩa vai trị mơn học: Giáo trình có ý nghĩa giảng dạy học tập, góp phần quan trọng chương trình mơn học ngành Giúp sinh viên hiểu rỏ đáp ứng miễn dịch thể gia súc gia cầm Mục tiêu môn học: - Về kiến thức: + Phát biểu khái niệm, định nghĩa liên quam đến miễn dịch học + Nhận biết đề kháng tự nhiên thể động vật; vai trò chức hệ thống miễn dịch thể; trình đáp ứng miễn dịch thể; chế hoạt động hệ thống miễn dịch; trạng thái miễn dịch thể; đáp ứng miễn dịch thể chống vi sinh vật gây bệnh - Về kỹ năng: + Phân biệt dạng miễn dịch xảy + Nhận biết quan, tế bào có vai trò đáp ứng miễn dich ứng dụng thực tiễn;Ứng dụng kháng thể thực tiễn sản xuất + Ứng dụng loại kháng nguyên khác thực tế sản xuất + Vận dụng hiểu biết khoa học miễn dịch công tác sử dụng vắc xin chế phẩm miễn dịch + Có khả nghiên cứu, chế tạo vắc xin chế phẩm miễn dịch sử dụng phòng, trị bệnh cho động vật, ứng dụng kiến thức miễn dịch điều trị, chẩn đốn phịng bệnh cho gia súc, gia cầm + Ứng dụng miễn dịch học thú y thực tiễn sản xuất đời sống vi - Về lực tự chủ trách nhiệm:thực việc lấy mẫu bệnh phẩm để chẩn đoán huyết học, thận trong việc lấy mẫu để xét nghiệm Nội dung môn học: Thời gian (giờ) SốTT Thực hành, Kiểm tra Tổng Lý thí nghiệm, (định kỳ)/Ơn số thuyết thảo luận, thi, Thi kết tập thúc môn học Tên chương, mục Chương1: Đại cương miễn dịch học 2 Chương 2: Các quan tế bào miễn dịch 2 Chương 3: Kháng nguyên (Antigen) 11 Chương 4: Kháng thể (Antibodies) 11 Chương 5: Phản ứng kết hợp kháng nguyên-kháng thể 6 Chương 6: Vắc-xin huyết 10 Ôn thi Thi kết thúc môn học Cộng 1 45 vii 14 28 1 CHƯƠNG ĐẠI CƯƠNG VỀ MIỄN DỊCH HỌC MH15-01 Giới thiệu: Hệ thống miễn dịch đóng vai trị vơ quan trọng đấu tranh sinh tồn bảo vệ toàn vẹn thể người động vật chống lại tác nhân có hại trình sống Miễn dịch tự nhiên dựa vào hàng rào ngăn cách tự nhiên, hoạt hóa số hệ thống phân tử huyết tương bổ thể, đông máu, hoạt động loại tế bào máu mô bào để loại trừ yếu tố có hại Miễn dịch đặc hiệu phát triển loài động vật máu nóng, vận dụng khả Mục tiêu: - Kiến thức: + Hiểu khái niệm miễn dịch học + Phân tích yếu tố đề kháng hay cần thiết cho thể trình miễn dịch - Kỹ năng: Phân biệt dạng miễn dịch xảy - Năng lực tự chủ trách nhiệm: Rèn luyện tính cẩn thận, tỉ mỉ công tác miễn dịch Khái niệm miễn dịch học ‘Miễn dịch khả đề kháng sinh vật chống lại sinh vật khác chất mang thân chúng dấu hiệu thông tin truyền ngoại lai Tính miễn dịch hình thành q trình tiến hố sinh vật’ ‘Miễn dịch trang thái bảo vệ đặc biệt thể chống lại yếu tố gây bệnh (các vi sinh vật độc tố chúng, phân tử lạ…) chúng xâm nhập vào thể’ Hệ thống miễn dịch thể sinh vật chia làm hai nhóm: miễn dịch tự nhiên (miễn dịch khơng đặc hiệu) miễn dịch thu (miễn dịch đặc hiệu) 1.1 Miễn dịch tự nhiên Miễn dịch tự nhiên qui định đặc tính giống, lồi sinh vật Loại miễn dịch có sẳn thể sinh di truyền từ hệ sang hệ khác Hoặc loại miễn dịch có sẳn thể sinh di truyền từ hệ sang hệ khác Trong miễn dịch tự nhiên người ta chia ra: - Miễn dịch tự nhiên tuyệt đối: loại MD mà điều kiện khả MD khơng bị phá Thậm chí đưa vào thể số lượng lớn mầm bệnh thể khơng mắc bệnh Ví dụ: bị khơng mắc bệnh dịch tả heo -Miễn dịch tự nhiên tương đối: loại MD mà điều kiện định, thể không cảm thụ với mầm bệnh Nhưng điều kiện khác tính MD bị phá hoại, thể lại cảm nhiễm với bệnh Các điều kiện thay đổi điều kiện sống, sức đề kháng 1.2 Miễn dịch thu Là loại miễn dịch mà thể tiếp thu trình sống Miễn dịch thu chia làm hai loại: miễn dịch chủ động miễn dịch thụ động 1.2.1 Miễn dịch thụ động Là loại miễn dịch mà thể tiếp thu từ bên ngồi MD thụ động tự nhiên: Nếu q trình tiếp thu miễn dịch xảy hoàn toàn tự nhiên trường hợp thú tiếp thu kháng thể từ thú mẹ qua sữa đầu gia cầm tiếp nhận kháng thể từ gia cầm mẹ qua lòng đỏ trứng MD thụ động nhân tạo: miễn dịch có người tạo trường hợp tiêm truyền kháng huyết để phòng trị bệnh 1.2.2 Miễn dịch chủ động Miễn dịch chủ động loại miễn mà tự thân thể sinh vật tạo thể tiếp xúc với kháng nguyên MD chủ động tự nhiên: MD chủ động thể tiếp thu môi trường sống, trường hợp xảy thú qua khỏi trận dịch, có khả khơng mắc lại bệnh tái chủng MD chủ động nhân tạo: miễn dịch chủ động mà có tham gia ngưòi trường hợp chủng ngừa vaccin để phòng bệnh Phản ứng kết tủa thạch phiến kính đĩa petri (kỹ thuật Ouchterlony) Thực chất phản ứng kết tủa khuếch tán thạch kép, dễ làm, hay sử dụng (Phản ứng AGP: Agar gel precipitation) Trên phiến kính hộp petri, đổ lớp thạch mỏng - 2mm Khi thạch đông lại, đục lỗ trịn: đường kính lỗ - 5mm, khoảng cách từ lỗ trung tâm với lỗ xung quanh; - 6mm Lỗ 1: Kháng nguyên biết Lỗ 2: Kháng thể tương ứng Lỗ 3, 4, 5, 6: Kháng thể chưa biết Kháng nguyên kháng thể cách khoảng thạch, chúng khuếch tán phía, xa lỗ, nồng độ lỗng nơi kháng nguyên, kháng thể tương ứng xuất đường tủa Có thể dùng hỗn hợp kháng thể để phát nhiều kháng nguyên dung dịch Lúc đõ xuất nhiều đường tủa, đường tủa cặp đặc hiệu kháng nguyên - kháng thể Có thể thấy nhiều loại kết quả: Phản ứng giống hệt nhau: Khi kháng nguyên y hệt nhau, thi đường kết tủa nối liền Phản ứng không giống hệt: Khi kháng nguyên khác nhau, kết hợp riêng rẽ với kháng thể, hai đường tủa cắt chéo Phản ứng kết tủa khuếch tán điện Là kết hợp phản ứng kết tủa với di chuyển điện trường Đây cải tiến có ý nghĩa Dùng điện trường để đẩy nhanh tốc độ phản ứng kháng nguyên - kháng thể Kháng thể điện trường di chuyển cực âm Kháng nguyên chất bị hút cực dương, chúng di chuyển gặp nhanh (1 - thay vi 24 - 48 giờ) Phản ứng xảy nhạy (nhờ điện trường 90% kháng nguyên, kháng thể ngược chiều để gặp nhau, thay vi khuếch tán tứ phía có 25% gặp Miễn dịch điện di 42 Dùng điện trường để di chuyển hỗn hợp kháng nguyên thành dải kháng nguyên Sau cho kháng thể vào rãnh song song với hàng kháng nguyên Chúng khuếch tán, gặp nhau, đường tủa nằm cách xa nhau, thay nằm tập trung vào vùng chật hẹp Vì dễ quan sát nhận định Miễn dịch điện di cho phép phát kháng nguyên có 30 loại protein thay - điện di thường Phản ứng kết hợp bổ thể (Phản ứng cố định bổ thể, phản ứng tiêu thụ bổ thể) Là phản ứng huyết học, có thành phần tham gia: kháng nguyên, kháng thể bổ thể Kháng thể phản ứng thuộc lớp IgM, IgG có khả hoạt hố bổ thể Khi kháng nguyên kết hợp với kháng thể tạo thành phức hợp kháng nguyên kháng thể, có mặt bổ thể bổ thể hoạt hoá gắn vào tạo thành: kháng nguyên - kháng thể - bổ thể Phản ứng dùng để phát kháng thể có khả hoạt hố bổ thể định lượng bổ thể có huyết Phản ứng thực nhờ hai hệ thống: dung khuẩn, dung huyết tham gia bổ thể Hiện tượng dung khuẩn (Bacteriolysin) Thí nghiệm Faifơ (Pfaifer) Năm 1894 ơng dùng vacxin phẩy khuẩn tả (vibrio cholerae) tiêm cho chuột lang để gây miễn dịch Đồng thời dùng chuột lang khác làm đối chứng không tiêm vacxin Sau - tuần dùng phẩy khuẩn tả cường độc tiêm vào phúc mạc cho loại chuột lang với liều gây chết Sau 15 phút, 30 phút, giờ, ông rút nước phúc mạc kiểm tra vi khuẩn kính hiển vi ni cấy vào mơi trường lỏng để quan sát tính chất mọc thi thấy: Phản ứng ngưng kết Nguyên lý phản ứng: có số loại kháng nguyên ( virus )có khả gây ngưng kết với hồng cầu Ví dụ virus dịch tả gà (Newscatle) gây ngưng kết hồng cầu ngựa, mèo, chuột, bò, heo, gà, vịt 43 Lợi dụng tính chất gây ngưng kết mà người ta tiến hành phản ứng ngưng kết để chẩn đốn chứng minh có mặt virus xác định hiệu giá virus gây phản ứng ngưng kết Còn phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu xác định hàm lượng kháng thể chống bệnh Newscatle gà Chuẩn bị hồng cầu gà, kháng nguyên kháng huyết thanh: Chế hồng cầu gà 1%: Dùng ống tiêm (seringe) tráng qua dung dịch thuốc chống đông Citrat Natri 5% Lấy 10 ml máu tỉnh mạch gà khỏe (gà không tiêm vaccin không nằm ổ dịch ) bơm vào ống nghiệm có chứa sẵn thuốc chống đông, trộn đêù ly tâm với vận tốc 1000 vòng/phút phút Gạn bỏ phần nước phía trên, sau cho lượng nước sinh lý mặn 9% o tương đương vào Trộn đem ly tâm tiếp tục Làm khoảng 2_3 lần cho hồng cầu Hồng cầu pha thành dung dịch 1% nước sinh lý mặn 9%o dung dich hồng cầu để tủ lạnh sử dụng tuần Chuẩn bị kháng nguyên (virus ): chuẩn bị nước trứng có virus Newscatle Thường sử dụng giống virus Newcastle chủng Lasota (chủng F, chủng B1) Lấy vaccin Newscatle pha thành dung dịch 1/10 tiêm 0,1ml vào xoang niệu mô trứng gà ấp 10 ngày tuổi, sau 2-3 ngày phôi chết, để tủ lạnh -40C Mổ phôi gà hút lấy nước trứng giữ tủ đá sử dụng dần (3 tháng) Kháng huyết thanh: Là huyết gà cần xét nghiệm Máu cho vào ống nghiệm nằm nghiêng, đem để nhiệt độ phòng 40 C Sau máu đông tách lấy phần huyết Nếu có lẫn hồng cầu đem ly tâm để tách huyết riêng + Tiến hành phản ứng Muốn tiến hành phản ứng HI phải tiến hành phản ứng HA trước để chuẩn độ kháng nguyên cho phản ứng HI 4.1 Phản ứng ngưng kết hồng cầu HA Phản ứng tiến hành ống nghiệm nhựa (tấm kính) có lỗ sẵn Phản ứng dương tính: hồng cầu ngưng kết lợn cợn, thành quầng rạn nứt đáy ống nghiệm Phản ứng âm tính, hồng cầu lắng xuống đáy ống nghiệm thành cục tròn giống ống số (ống đối chứng) 44 Hình 5.2: Phản ứng ngưng kết hồng cầu Lưu ý : Khi đọc kết kkhông cầm lên làm xáo trộn ngưng kết Sau có kết ngưng kết ghi hiệu giá ngưng kết ống cuối ký hiệu n để sau tiến hành phản úng HI người ta sử dụng kháng nguyên có hiệu giá n-3 để có kết chắn Sau hồng cầu ngưng kết tượng bị phá hủy dần theo thời gian nên cần phải theo dõi chặt chẽ 4.2 Phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu HI Cũng tiến hành tương tự phản úng khác chỗ kháng nguyên kháng thể tác động với thành phức hợp kháng nguyên-kháng thể làm hồng cầu khơng cịn kháng ngun tự để gây tượng ngưng kết lắng xuống đáy ống nghiệm Trong phản ứng kháng nguyên dùng kháng nguyên có hiệu giá (n-3) kháng thể pha loãng theo sơ đồ phản ứng sau Bảng 5.1: Phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu 0,5ml 0,5ml bỏ Ống nghiệm số (ĐC) Kháng thể (ml) 0,1 - - 45 - - - - - Nước sinh lý (ml) Độ pha loãng KT Kháng nguyên (ml) 0,9 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 1/10 1/20 1/40 1/80 _ _ 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 _ 0,5 _ 0,5 0,5 0,5 Lắc - để yên 15 - 30 phút cho kháng nguyên tác động với kháng thể HC gà 1% (ml) 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 Tổng số dd (ml) 1,5 1,5 1,5 1,5 1,5 1,5 1,5 1,5 1,5 Trộn đều, để yên 15 -30 phút, đọc kết Phản ứng dương tính: Hồng cầu lắng xuống đáy thành cục trịn Phản ứng âm tính: Hồng cầu bị ngưng kết lợn cợn đáy ống nghiệm thành quầng rạn nứt giống ống đối chứng số Lưu ý : Nếu kết phản ứng không rõ tăng lượng kháng thể lên gấp đơi để trung hịa hết với kháng ngun bị dư phản ứng Kết phản ứng HI chạy ngược chiều với HA Thực hành - Phản ứng ngưng kết hồng cầu (HA) - Phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu (HI) 5.1 Chuẩn bị dụng cụ mẫu vật Hồng cầu gà, kháng nguyên kháng huyết 5.2 Phương pháp tiến hành Giáo viên hướng dẫn cho sinh viên cách thực 5.3 Nội dung thực hành Thực bước theo hướng dẫn giáo viên 5.4 Tổng kết nhận xét đánh giá Đánh giá kết thực hành dựa vào việc kiểm tra lại kiến thức sinh viên ghi nhận buổi thực hành 46 Ghi chép đầy đủ, xác thơng tin cần thiết Sinh viên tham gia đầy đủ Tinh thần thái độ học tập nghiêm túc Viết phúc trình CÂU HỎI ƠN TẬP Ngun lý ưng dụng phản ứng kháng nguyên-kháng thể? Phân loại phản ứng KN-KT? Phản ứng kết tủa môi trường lỏng, Phản ứng kết tủa môi trường đặc? Phản ứng ngưng kết nhanh Phản ứng ngưng kết chậm? CHƯƠNG VẮC-XIN VÀ HUYẾT THANH MH15-06 Giới thiệu: Vaccine chế phẩm sinh học có tính kháng ngun, có nguồn gốc từ vi sinh vật (có thể tồn thân phần có cấu trúc tương tự) dùng để tạo miễn dịch đặc hiệu chủ động, nhằm tăng sức đề kháng thể số tác nhân gây bệnh cụ thể Huyết miễn dịch hay kháng huyết gọi globulin miễn dịch hay immunoglobulin lượng kháng thể có nguồn gốc từ người động vật, giúp cho thể có kháng thể để dự phịng, điều trị bệnh, điều trị phối hợp điều trị thay để chống lại bệnh nguy hiểm, bệnh truyền nhiễm Mục tiêu: -Kiến thức: + Trình bày định nghĩa Vắc-xin huyết + Giải thích phương pháp sử dụng, bảo quản chương trình tiêm chủng vắc-xin cho gia súc gia cầm -Kỹ năng: 47 + Ứng dụng tiêm Vắc-xin, huyết thực tế + Phân loại nhận biết vắc-xin, huyết cho gia súc gia cầm -Năng lực tự chủ trách nhiệm: Rèn luyện tính cẩn thận, tỉ mỉ công tác miễn dịch Ðịnh nghĩa lịch sử nghiên cứu phát triển vắc-xin 1.1 Định nghĩa Vaccine chế phẩm sinh học mà chứa mầm bệnh cần phịng cho bệnh truyền nhiễm (mầm bệnh vi khuẩn, vi rus, độc tố vật liệu di truyền AND, ARN…) làm giảm độc lực hay vơ độc tác nhân vật lý, hố học, sinh học hay phương pháp sinh học phân tử (vaccine hệ – vaccine công nghệ gen) Lúc chúng khơng cịn khả gây bệnh cho đối tượng sử dụng Nhưng đưa vào thể động vật gây đáp ứng MD làm cho động vật có MD chống lại xâm nhiễm gây bệnh mầm bệnh tương ứng Vaccine chế phẩm sinh học người tạo đưa vào thể động vật để gây MD, tập dượt cho thể thực trình đáp ứng MD chống lại tác nhân gây bệnh 1.2 Lịch sử phát triển Năm 1796, bác sĩ người Anh Edward Jenner thử nghiệm thành công vaccine đậu mùa cách tiêm chủng bệnh nhẹ vào thể cậu bé Đây dạng bệnh đậu mùa thường xuất lồi bị Ông viết thư cho Hiệp hội Y khoa Hoàng gia trình bày chi tiết trình thử nghiệm bị từ chối Các nhà khoa học Viện Nghiên cứu Y khoa Rockefeller New York (Mỹ) tìm hiểu khả miễn dịch cho bệnh bại liệt vào đầu kỷ 20 Vào năm 1890, nhiều nhóm nghiên cứu nỗ lực tìm kiếm vaccine phịng bệnh thương hàn Năm 1931, Max Theiler, nhà virus học Harvard, chứng minh chuột tiêm huyết từ khỉ người mắc bệnh sốt vàng da bảo vệ khỏi bệnh Nhóm nhà khoa học Anh gồm Wilson Smith, Christopher Andrewes Patrick Laidlaw phân lập thành công virus cúm vào năm 1933 Phân loại vắc-xin 48 2.1 Vắc-xin sống Vaccin sống cường độc: vaccine lấy từ chủng vsv có độc lực cao, nhà MD dùng số lượng nhỏ vsv không đủ sức gây bệnh lại gây đáp ứng MD Hiện vaccine khơng sử dụng độ an tồn khơng cao Vaccin sống nhược độc: vaccine chế từ chủng vsv có độc lực thấp chủng có độc lực cao làm yếu để chúng khơng có khả gây bệnh giữ tính kháng nguyên Loại vacin thường cho MD mạnh ổn định, thời gian MD kéo dài dùng có loại cịn gây phản ứng vô hoạt) 2.2 Vắc-xin chết Là vaccine chế mầm bệnh bị giết chết tác nhân lý, hoá học bề mặt chúng giữ ngun protein cịn hoạt tính sinh học kháng nguyên nên giữ nguyên tính kích thích sinh MD Trong vaccine vơ hoạt, người ta thường cho thêm hố chất để giữ cho kháng nguyên ổn định giúp cho kháng nguyên tồn lâu thể, kéo dài thời gian MD Hoá chất gọi chất bổ trợ Vaccine vơ hoạt thường an tồn thời gian MD ngắn hiệu lực 2.3 Vắc-xin đại phân tử tinh chế Các vi sinh vật gây bệnh sau bị giết chết tinh chế lấy thành phần kháng nguyên quan trọng để điều chế vắc-xin 2.4 Vắc-xin đại Vắc-xin tái tổ hợp dùng vi sinh vật sống (virus vi khuẩn) vector để mang gen từ vi sinh vật khác, vi sinh vật dùng vắc-xin cho hai loại vi sinh vật Vắc-xin DNA: đoan DNA tinh khiết gắn vào plasmid (đóng vai trị vector) Vắc-xin peptid tổng hợp: tổng hợp yếu tố định kháng nguyên (một peptid tổng hợp có cấu trúc giống với peptid virus) phương pháp hóa học sử dụng làm vắc-xin Phương pháp bảo quản sử dụng vắc-xin Sử dụng vắc – xin 49 Đường đưa vaccine: tuỳ loại vaccine mà đường đưa vaccine vào thể khác nhau: Tiêm da: đường đưa vaccine phổ biến nhất, áp dụng cho đa số loại vaccine vơ hoạt nhược độc Trâu, bị, ngựa thường tiêm da cổ Lợn thường tiêm da gốc tai Gia cầm thường tiêm da cánh đùi Tiêm bắp: áp dụng cho số vaccine virus nhược độc vaccine nhũ hoá Cho uống, nhỏ mắt, mũi, khí dung: số vaccine virus nhược độc có khả qua niêm mạc Đối tượng sử dụng vắc - xin Vaccine sử dụng để phòng bệnh cho động vật trưởng thành, khoẻ mạnh Không nên dùng cho gia súc non, thận trọng với gia súc mang thai động vật mang thai trạng thái sinh lý có thay đổi nên dùng vaccine dễ gây phản ứng mạnh làm sẩy thai Đặc biệt không nên dùng vaccine sống cho gia súc thai kỳ, vaccine virus nhược độc mà virus xâm nhập vào bào thai Trường hợp gây tượng dung nạp miễn dịch gia súc non sau Liều dùng vaccine: cần sử dụng vaccine theo liều định ghi nhãn lọ thuốc Nếu tiêm thấp liều qui định làm giảm trình đáp ứng miễn dịch, tiêm liều gây tê liệt miễn dịch gây phản ứng Bảo quản Vaccine phải bảo quản điều kiện qui định Đây điểm quan trọng đặc biệt định chất lượng hiệu lực vaccine Các điều kiện bảo quản chủ yếu gồm: Để tủ lạnh phịng lạnh có nhiệt độ +40 0C, dùng bảo quản với vaccine vô hoạt vaccine vi khuẩn nhược độc Để tủ lạnh âm: bảo quản vaccine virus nhược độc dạng tươi đơng khơ đóng Ampoul Khơng để vaccine chổ nóng có ánh sáng mặt trời vaccine hiệu lực 50 Một số lưu ý sử dụng Đọc kỹ hướng dẫn trước sử dụng Vaccin dùng chủ yếu để phòng bệnh cho gia súc - gia cầm chưa mắc bệnh Tiêm vaccin loại phịng bệnh Hiệu qua vaccin phụ thuộc vào tình trạng sức khỏe gia súc MD = KN (vaccin) + phản ứng thể Vaccin cho miễn dịch từ 1-3 tuần sau tiêm (tùy loại vaccin) Vì vậy, thời gian gia súc mắc bệnh (đổ lỗi vaccin) Một số vaccin gây phản ứng (dị ứng) sau tiêm: sốt, run, co giựt, ói, thở gấp gia súc khơng can thiệp Do đó, cần phải theo dõi phản ứng đàn gia súc sau tiêm vaccin từ I-2 Nếu phát phải can thiệp sớm loại thuốc kháng histamin (atropin, adrenalin, phenergen.) Không tiêm cho gia súc non quan miễn dịch chưa hồn thiện có diện kháng thể thụ động từ mẹ truyền sang Thú tiêm vaccin lần đầu cho miễn dịch sơ cấp (đáp ứng miễn dịch chậm, thấp, không bền), tiêm lặp lại lần thứ đáp ứng miễn dịch thứ cấp (sớm, nhanh, mạnh, bền) Khi tiêm kết hợp lúc loại vaccin, khơng có nghĩa pha chung loại vaccin mà tiêm lúc vị trí khác Kỹ thuật bảo quản vaccin định đến chất lượng hiệu lực vaccin, cách tốt để thùng đá tủ lạnh C (20 – 80C) Rút thuốc (vaccin) pha thuốc phải thực kỹ thuật khuyến cáo nhà sản Dụng cụ dùng để tiêm chích phải vơ trùng, riêng vaccin dạng nhược độc (sống) phải tiệt trùng dụng cụ cách đun sơi (100 0C/15 phút) Chương trình tiêm chủng vắc-xin Chương trình vắc-xin gà thịt Bảng 6.1: Vắc-xin gà thịt 51 TUỔI CÔNG DỤNG (Ngày) VACCIN VÀ THUỐC SỬ DỤNG CÁCH DÙNG Vaccin Newcastle - Phòng bệnh dịch tả Nhỏ mắt mũi 14 Vaccin Gumboro Phòng bệnh GUMBORO 21 Vaccin Newcastle + IB - Phòng bệnh dịch tả Cho uống nhỏ miệng Cho uống - Viêm phế quản truyền nhiễm 24 Vaccin Gumboro Phòng bệnh GUMBORO Chương trình vắc-xin heo Bảng 6.2: Vắc-xin heo Chương trình vắc-xin nái hậu bị Bảng 6.3: Vắc-xin nái hậu bị 52 Cho uống Chương trình vắc-xin nái mang thai nuôi Bảng 6.4: Vắc-xin nái mang thai nuôi Huyết Việc sử dụng huyết có chứa kháng thể đặc hiệu (Ig) chống lại virus, vi khuẩn hay độc tố gây bệnh vi sinh vật có từ thời Pasteur Đó phương pháp điều trị huyết (serotherapy) (Huyết phải 53 hiểu huyết có chứa kháng thể đặc hiệu đó) Nguyên lý Khi thể mắc bệnh cấp mà chưa có miễn dịch sử dụng kháng thể có huyết vật khác hay người khác mà đưa vào tạm thời thay để qua khỏi lúc nguy hiểm Đó biện pháp thụ động mang lại hiệu đáng kể có biến chứng nguy hiểm Huyết khác loài Ngày xưa chưa có kháng sinh, người ta dùng huyết ngựa hay cừu siêu mẫn cảm với vi khuẩn gây bệnh điều trị Hay dùng huyết chống uốn ván, chống bạch hầu, chống hoại thư sinh chống nọc loại rắn độc Trị liệu huyết dị loài giúp cứu sống nhiều ca nguy kịch (bạch hầu ác tính, rắn độc cắn, ) Nhưng lần phải dùng nhiều huyết dị loài (200ml/lần) hay sinh biến chứng sốc phản vệ (do hình thành IgE) hay bệnh huyết (do hình thành phức hợp miễn dịch) Sau để giảm lượng tiêm, người ta chiết tách lấy phần γ-globulin Nhưng huyết dị loài nên khả sinh sốc phản vệ cao phải tiêm lần sau mà vô ý không hỏi kỹ để biết mà phòng giải mẫn cảm trước Hiện sử dụng nhiều kháng huyết chống nọc độc rắn Mỗi loại nọc rắn độc cần phải có loại huyết đặc hiệu riêng nước cần tạo loạt huyết chống nọc riêng Huyết lồi Hiện người ta hay dùng γ-globulin chiết tách từ người, trách sốc phản vệ hay bệnh huyết Có loại chế biến từ huyết chung nhiều người gọi γ-globulin đa hố trị, có loại làm từ huyết người khỏi bệnh, hiệu giá kháng thể cao đặc hiệu với bệnh; gọi γ-globulin đặc hiệu Giá thành cao nguyên liệu phải xét nghiệm khơng có loại virus nguy hiểm HBV hay HIV phải xử lý chất bất hoạt virus Dùng huyết điều trị có tác dụng vài tuần thời gian kháng thể tồn γ-globulin đa hoá trị dùng trạng thái suy giảm miễn dịch dịch thể bẩm sinh hay mắc phải γ-globulin giảm xuống 4g/l (bình thường 11g/l) Thường phải tiêm tuần lần với liều khoảng 0,2-3g/kg cân nặng mang lại có IgG Trong trường hợp nhiễm khuẩn sơ sinh vi khuẩn Gram âm tuần phải tiêm mũi (0,5-2g/kg) 54 γ-globulin đặc hiệu lấy từ huyết người vừa khỏi bệnh hay người khoẻ mạnh có hiệu giá kháng thể chống bệnh cao Tuỳ theo nguồn gốc mà gọi chống uốn ván, chống bạch hầu, chống viêm gan B, Chúng đem lại cho bảo vệ tức khắc nên định hoàn cảnh sau: + Cần chữa khỏi hay mang lại thuyên giảm cho bệnh phát triển viêm gan cấp, bạch hầu cấp, + Phòng bệnh chuyển thành dịch cúm, viêm não, Nếu dùng phối hợp huyết lẫn tiêm chủng Trong trường hợp người mẹ Rh - mang thai, muốn tránh có mẫn cảm với hồng cầu Rh+ tiêm kháng thể chống Rh Biện pháp định theo dõi số hồng cầu có HbF máu mẹ Cơ chế chưa rõ song tác dụng phản hồi kìm hãm sinh kháng thể bệnh lý Thực hành Nhận biết phân loại vắc-xin gia súc gia cầm Phương pháp thu giữ huyết 6.1 Chuẩn bị dụng cụ mẫu vật Các loại vắc-xin sử dụng cho gia súc gia cầm 6.2 Phương pháp tiến hành Giáo viên hướng dẫn cho sinh viên cách nhận biết phân loại 6.3 Nội dung thực hành Thực bước theo hướng dẫn giáo viên: Nhận biết phân loại vắc-xin gia súc gia cầm Phương pháp thu giữ huyết 6.4 Tổng kết nhận xét đánh giá Đánh giá kết thực hành dựa vào việc kiểm tra lại kiến thức sinh viên ghi nhận buổi thực hành Ghi chép đầy đủ, xác thơng tin cần thiết Sinh viên tham gia đầy đủ Tinh thần thái độ học tập nghiêm túc Viết phúc trình CÂU HỎI ÔN TẬP Ðịnh nghĩa lịch sử nghiên cứu phát triển vắc-xin? Phân loại vắc-xin? 55 Phương pháp bảo quản sử dụng vắc-xin ? Chương trình tiêm chủng vắc-xin? Huyết TÀI LIỆU THAM KHẢO Trần Ngọc Bích (2012), Miễn dịch học đại cương, NXB Đại học Cần Thơ Phạm Hoàng Phiệt (2014), Miễn dịch – Sinh lý bệnh, Nhà xuất Y học Phạm văn Ty (2012), Miễn dịch học, Đại học quốc gia Hà Nội Bộ môn vi sinh- Khoa Y (2013), Giáo trình Vi khuẩn học- Virus học, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh 56 ... dược lý thú y, - Tính chất môn học: Môn học cung cấp kiến thức hệ thống miễn dịch thể: miễn dịch không đặc hiệu miễn dịch đặc hiệu, chế đáp ứng miễn dịch, bệnh lý miễn dịch ứng dụng miễn dịch phòng... - Kiến thức: + Hiểu khái niệm miễn dịch học + Phân tích y? ??u tố đề kháng hay cần thiết cho thể trình miễn dịch - Kỹ năng: Phân biệt dạng miễn dịch x? ?y - Năng lực tự chủ trách nhiệm: Rèn luyện... THIỆU Miễn dịch học lĩnh vực khoa học tương đối mẻ sinh học, y học có ý nghĩa quan trọng ngành thú y nói riêng y học nói chung Miễn dịch học cung cấp kiến thức chế sinh lý bệnh lý diễn trình