Phân lập và tuyển chọn một số chủng xạ khuẩn có khả năng sinh tổng hợp enzyme ngoại bào và đối kháng vi sinh vật

BỘ CÔNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC THỰC PHẨM BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC KẾT QUẢ THỰC HIỆN ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP TRƯỜNG TÊN ĐỀ TÀI PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN MỘT SỐ CHỦNG XẠ KHUẨN CÓ KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP ENZYME NGOẠI BÀO VÀ ĐỐI KHÁNG VI SINH VẬT Mã số đề tài 19 2TP04SV Chủ nhiệm đề tài Đặng Bích Ngân Hứa Trường Chinh Đơn vị thực hiện Viện Công nghệ Sinh học và Thực Phẩm THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, 2020 1 LỜI CẢM ƠN Đề tài “Phân lập và.

BỘ CÔNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH VIỆN CƠNG NGHỆ SINH HỌC & THỰC PHẨM BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC KẾT QUẢ THỰC HIỆN ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP TRƯỜNG TÊN ĐỀ TÀI PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN MỘT SỐ CHỦNG XẠ KHUẨN CÓ KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP ENZYME NGOẠI BÀO VÀ ĐỐI KHÁNG VI SINH VẬT Mã số đề tài: 19.2TP04SV Chủ nhiệm đề tài: Đặng Bích Ngân Hứa Trường Chinh Đơn vị thực hiện: Viện Công nghệ Sinh học Thực Phẩm THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, 2020 LỜI CẢM ƠN Đề tài “Phân lập tuyển chọn số chủng xạ khuẩn có khả sinh tổng hợp enzyme ngoại bào đối kháng vi sinh vật” nội dung chúng em chọn để thực đề tài nghiên cứu cấp trường Để thực tốt đề tài nghiên cứu này, chúng em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Ban giám hiệu, phịng Quản lí Khoa học Hợp tác Quốc tế trường Đại học Công nghiệp TP.HCM tạo môi trường học tập nghiên cứu thân thiện hỗ trợ mặt kinh phí chúng em phát huy khả nghiên cứu khoa học Chúng em xin gửi lời cảm ơn đến Ban lãnh đạo Viện Công nghệ Sinh học Thực phẩm hỗ trợ, giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi sở trang thiết bị cho chúng em trình thực đề tài nghiên cứu Chúng em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến TS Nguyễn Thị Diệu Hạnh Cảm ơn bảo, hướng dẫn em tận tình, cung cấp cho chúng em kiến thức sâu rộng suốt trình thực đề tài nghiên cứu Chúng em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến TS Phạm Tấn Việt, TS Nguyễn Ngọc Ẩn cho em lời khun, lời góp ý hữu ích, giúp cho chúng em tích lũy thêm nhiều kiến thức, có nhìn sâu sắc vấn đề nghiên cứu sống, giúp chúng em hoàn thành tốt nghiên cứu Chúng em xin gửi lời cảm ơn ba mẹ ln u thương, quan tâm chăm sóc tạo động lực tiếp bước cho đường học vấn Chúng em xin gửi lời cảm ơn đến anh chị, bạn bè tập thể Lab vi sinh ủng hộ, giúp đỡ chúng em suốt khoảng thời gian thực đề tài nghiên cứu Mặc dù cố gắng hoàn thành nghiên cứu phạm vi cho phép khả kinh nghiệm thân có hạn, nên nghiên cứu chắn không tránh khỏi tồn tại, hạn chế thiếu sót Chúng em mong nhận thơng cảm, góp ý tận tình bảo q thầy bạn PHẦN I THƠNG TIN CHUNG I Thơng tin tổng quát 1.1 Tên đề tài: Phân lập tuyển chọn số chủng xạ khuẩn có khả sinh tổng hợp enzyme ngoại bào đối kháng vi sinh vật 1.2 Mã số: 19.2TP04SV 1.3 Danh sách chủ trì, thành viên tham gia thực đề tài Họ tên TT (học hàm, học vị) TS Nguyễn Thị Diệu Hạnh Hứa Trường Chinh Đặng Bích Ngân Đơn vị công tác Viện Công nghệ Sinh học Thực phẩm ĐHSH12A, Viện Công nghệ Sinh học Thực phẩm ĐHSH12A, Viện Công nghệ Sinh học Thực phẩm 1.4 Đơn vị chủ trì: Viện Cơng nghệ Sinh học & Thực phẩm 1.5 Thời gian thực hiện: Vai trò thực đề tài Cố vấn khoa học Chủ nhiệm đề tài Chủ nhiệm đề tài 1.5.1 Theo hợp đồng: từ tháng 10 năm 2019 đến tháng năm 2020 1.5.2 Gia hạn (nếu có): tháng 1.5.3 Thực thực tế: từ tháng 10 năm 2019 đến tháng năm 2020 1.6 Những thay đổi so với thuyết minh ban đầu (nếu có): Khơng có 1.7 Tổng kinh phí phê duyệt đề tài: 05 triệu đồng (số tiền chữ: Năm triệu đồng) II Kết nghiên cứu Đặt vấn đề Xạ khuẩn nhóm vi khuẩn gram dương, hiếu khí, sống hoại sinh, thường có tỷ lệ GC DNA cao 55% Trong chu trình sống, chúng thường sinh trưởng dạng sợi khơng có vách ngăn Xạ khuẩn phân bố rộng rãi tự nhiên đất, nước chất hữu Chúng xem sinh vật trung gian nấm vi khuẩn vừa có đặc điểm giống nấm, vừa giống vi khuẩn Chúng có vai trị quan trọng chu trình tuần hồn vật chất tự nhiên, tạo độ phì nhiêu cho đất đảm nhận nhiều chức việc làm màu mỡ thêm cho đất, tham gia tích cực vào q trình chuyển hóa phân giải nhiều hợp chất hữu phức tạp cellulose, tinh bột, lignin,… chúng có khả sinh tổng hợp nhiều loại enzyme ngoại bào amylase, cellulase,… ứng dụng rộng rãi xử lí chất thải cơng nghiệp có chứa hàm lượng tinh bột hay cellulose cao [1], [2] Xạ khuẩn có khả sinh tổng hợp nhiều sản phẩm trao đổi chất quan trọng, đặc biệt hợp chất kháng sinh Các chất kháng sinh có nguồn gốc từ xạ khuẩn có phổ kháng rộng nên ứng dụng rộng rãi nhiều lĩnh vực đời sống nông nghiệp, công nghiệp thực phẩm, y tế, Trong trình trao đổi chất, xạ khuẩn có khả sinh hợp chất hữu vitamin nhóm B (B1, B2, B6), số acid hữu acid lactic, acid acetic nhiều acid amin glutamic, methionin,… Một số khác cịn có khả tạo thành chất kích thích sinh trưởng thực vật [3], [4] Hiện tượng kháng kháng sinh gia tăng loại bệnh mối quan tâm lớn cộng đồng Việc nghiên cứu lựa chọn tác nhân từ tự nhiên có khả đối kháng với mầm bệnh ưu tiên hàng đầu, xạ khuẩn vi sinh vật tiềm Xạ khuẩn loài sinh vật có tính đa dạng cao, có khả sinh tổng hợp nhiều loại enzyme ngoại bào hợp chất chuyển hóa thứ cấp đa dạng có khả đối kháng với nhiều mầm bệnh khác Hiện nay, việc sử dụng chất kháng sinh có nguồn gốc từ xạ khuẩn ứng dụng rộng rãi việc kháng khuẩn, kháng nấm, kháng khối u, kháng virus [5], [6] Do đó, đề tài nghiên cứu “Phân lập tuyển chọn số chủng xạ khuẩn có khả sinh tổng hợp enzyme ngoại bào đối kháng vi sinh vật” thực với mục đích làm sở đáp ứng nhu cầu sống Mục tiêu nghiên cứu Phân lập tuyển chọn chủng xạ khuẩn có hoạt tính sinh học cao (khả sinh tổng hợp enzyme ngoại bào, kháng khuẩn, kháng mốc) Nội dung nghiên cứu - Phân lập chủng xạ khuẩn từ nguồn khác - Tuyển chọn chủng xạ khuẩn có hệ enzyme ngoại bào mạnh: amylase, cellulase, protease - Tuyển chọn chủng xạ khuẩn đối kháng với vi khuẩn nấm mốc gây bệnh Phương pháp nghiên cứu 4.1 Phương pháp lấy mẫu Chọn điểm thu mẫu đất: mẫu đất lấy khu vực khác (đất gị cao, khu vực có nhiều gỗ bị hoai mục, đất khu vực ẩm ướt, bờ ruộng, khu vực xung quanh chuồng gà, chuồng lợn,…) thuộc tỉnh Bến Tre Long An Cách lấy mẫu: dùng dao lấy khoảng 10-15g đất độ sâu 10-15 cm vị trí trên, cho vào túi nilon khử trùng, buộc kín, ghi ngày vị trí lấy mẫu Mẫu đất bảo quản 4°C, sau ngày tiến hành phân lập xạ khuẩn [7], [8] 4.2 Phân lập xạ khuẩn từ đất Các mẫu đất pha lỗng thập phân đến nồng độ thích hợp (10-2, 10-3 10-6) nước cất nước muối sinh lí vơ trùng Từ nồng độ pha lỗng, hút 100µl dịch mẫu pha loãng chuyển sang đĩa Petri chứa môi trường Gause I Dùng que trang trải ủ nhiệt độ phòng ngày Tiến hành nhận diện khuẩn lạc đặc trưng xạ khuẩn Từ khuẩn lạc nhận diện, tiến hành làm chúng cách cấy ria môi trường Gause I, đến nhận khuẩn lạc khiết Bảo quản giống °C giữ giống glycerol 40% -60°C để thực thí nghiệm [9], [10] 4.3 Quan sát đặc điểm hình thái xạ khuẩn Quan sát đại thể: Xạ khuẩn cấy ria mơi trường Gause I nhiệt độ phịng, quan sát đặc điểm đại thể sau ngày cấy: kích thước, hình dạng, đặc điểm bề mặt, rìa, màu sắc khuẩn lạc mặt trên, mặt dưới, sắc tố xạ khuẩn tiết môi trường nuôi cấy Quan sát vi thể: Xạ khuẩn nuôi cấy môi trường Gause I theo phương pháp tiêu phịng ẩm Sau 5-7 ngày ni nhiệt độ phịng, đặc điểm vi thể xạ khuẩn quan sát kính hiển vi quang học với độ phóng đại 1000 lần [11] 4.4 Khảo sát khả sinh tổng hợp enzyme ngoại bào xạ khuẩn Nguyên tắc: nguồn chất cảm ứng có mơi trường ni cấy bị phân giải có enzyme thích hợp Sau đó, nhận biết khả phân hủy chất enzyme thuốc thử đặc trưng Xác định hoạt tính enzyme thơng qua kích thước vịng phân giải chất Khảo sát khả sinh tổng hợp amylase, cellulase ngoại bào: chủng xạ khuẩn cấy chấm điểm mơi trường Gause I có chứa nguồn chất cảm ứng tương ứng tinh bột CMC (carboxy methyl cellulose) Kiểm tra hoạt tính amylase, cellulase cách nhuộm thuốc thử Lugol đo kích thước vịng phân giải chất sau ngày ni ủ nhiệt độ phịng [12]–[14] Khảo sát khả sinh tổng hợp protease: chủng xạ khuẩn cấy chấm điểm mơi trường có bổ sung nguồn chất cảm ứng casein Kiểm tra hoạt tính protease bằng TCA (Trichlo acetic acid) 10% đo kích thước vịng phân giải chất sau ngày ni ủ nhiệt độ phịng [15] 4.5 Sàng lọc, tuyển chọn chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với vi khuẩn gây bệnh Các chủng xạ khuẩn vi khuẩn tăng sinh môi trường tương ứng Gause I broth LB broth Phương pháp khuếch tán đĩa thạch sử dụng để kiểm tra khả kháng khuẩn xạ khuẩn Dịch nuôi cấy vi khuẩn cấy trải vào đĩa Petri chứa môi trường LB agar tiến hành khoan giếng thạch Nhỏ 100µl dịch tăng sinh xạ khuẩn sau ngày ni cấy vào giếng thạch khoan Đem đĩa cấy ni ủ kiểm tra hoạt tính đối kháng xạ khuẩn với vi khuẩn thị sau 24h [16] 4.6 Sàng lọc, tuyển chọn chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với nấm mốc gây bệnh Từ ống thạch nghiêng, giống xạ khuẩn cấy chuyền sang ống nghiệm chứa 5ml môi trường Gause I broth nuôi lắc 150 rpm ngày nhiệt độ phịng Hoạt tính đối kháng với nấm mốc dịch nuôi xạ khuẩn xác định phương pháp khuếch tán đĩa thạch Trên môi trường PGA, cm2 thạch chứa tơ nấm cắt đặt vào phía đối diện lỗ thạch khoan Hút 100µl dịch ni cấy xạ khuẩn nhỏ vào lỗ thạch Để nhiệt độ phòng, sau đến ngày tiến hành kiểm tra kết dựa vào kích thước vịng đối kháng (D-d, mm) Trong D đường kính vịng đối kháng d đường kính lỗ thạch [9] Mức độ đối kháng xạ khuẩn với nấm mốc gây bệnh đánh giá dựa theo nghiên cứu Nguyễn Thới An (2014) mức độ kháng mạnh, kháng trung bình kháng yếu với kính thước vịng đối kháng là: ≥ 20 mm, ≥ 15 mm ≥ 10 mm [17] 4.7 Phương pháp xử lí số liệu Sử dụng phần mềm Excel để tổng hợp tính tốn số liệu từ kết thu nhận trình thực thí nghiệm Tổng kết kết nghiên cứu Đề tài “Phân lập tuyển chọn số chủng xạ khuẩn có khả sinh tổng hợp enzyme ngoại bào đối kháng vi sinh vật” số kết sau: + 40 chủng xạ khuẩn phân lập làm + 19/40 chủng xạ khuẩn có khả sinh tổng hợp amylase ngoại bào, chủng ghi nhận có hoạt tính cao + 21/40 chủng xạ khuẩn ghi nhận có khả sinh tổng hợp cellulase ngoại bào, chủng có hoạt tính cellulase ngoại bào mạnh + 20/40 chủng xạ khuẩn ghi nhận có khả sinh tổng hợp protease ngoại bào, chủng có hoạt tính protease ngoại bào mạnh + 5/40 chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với Bacillus subtilis, 12/40 chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với Bacillus cereus, 1/40 chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với Escherichia coli 4/40 chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với Staphylococcus aureus + 15/40 chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với Fusarium sp., 7/40 chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với Fusarium equiseti, 12/40 chủng có khả đối kháng với nấm Neoscytaidium dimidiatum, 9/40 chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với Aspergilus sp., 5/40 chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với Aspergilus fumigatus, 8/40 chủng xạ khuần có khả đối kháng với Colletotrichum sp có 9/40 chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với Penicillum chermesinum Đánh giá kết đạt kết luận Các chủng xạ khuẩn có khả sinh tổng hợp enzyme ngoại bào cao sở để ứng dụng sản xuất enzyme thương mại có nguồn gốc từ vi sinh vật, đáp ứng nhu cầu sử dụng enzyme Bên cạnh đó, chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với vi khuẩn nấm mốc gây bệnh có tiềm ứng dụng việc sản xuất hợp chất đối kháng có nguồn gốc từ tự nhiên, ứng dụng rộng rãi lĩnh vực đời sống Tóm tắt kết Tóm tắt: Xạ khuẩn thuộc nhóm vi sinh vật có khả sinh tổng hợp đa dạng loại enzyme ngoại bào hợp chất chuyển hóa thứ cấp có hoạt tính sinh học cao Từ mẫu đất thu nhận tỉnh Bến Tre Long An, 40 chủng xạ khuẩn phân lập làm Hơn 50% số có khả sinh tổng hợp loại enzyme ngoại bào: amylase, cellulase, protease chitinase Dịch nuôi cấy 17 chủng xạ khuẩn thể hoạt tính đối kháng với Bacillus subtilis, Bacillus cereus, Escherichia coli Staphylococcus Trong đó, dịch ni cấy 22 chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với chủng nấm mốc kiểm định: Fusarium oxysporum, Fusarium equiseti, Neoscytalidium dimidiatum, Aspergillus sp., Aspergillus fumigatus, Colletotrichum siamence Penicillium chermesinum Nghiên cứu cho thấy tiềm ứng dụng hợp chất chuyển hóa từ xạ khuẩn sản xuất công nghiệp, đối kháng với vi khuẩn gây bệnh quản lý nấm bệnh trồng, góp phần bảo vệ mơi trường sức khỏe người Abstract: Actinomycetes belong to a group of microorganisms that can be producing a variety of extracellular enzymes, and secondary metabolic compounds with high biological activity From soil samples collected in two provinces of Ben Tre and Long An, forty strains actinomycetes were isolated More than 50% of them are capable of biosynthesizing of extracellular enzymes: amylase, cellulase, protease, and chitinase The crude extract of 17 strains actinomycetes showed antagonistic activity against Bacillus subtilis, Bacillus cereus, Escherichia coli, and Staphylococcus Meanwhile, the crude extract of 22 strains actinomycetes was able to resistant to tested microfungi strains: Fusarium oxysporum, Fusarium equiseti, Neoscytalidium dimidiatum, Aspergillus sp., Aspergillus fumigatus, Colletotrichum siamence, and Penicillium chermesinum This study showed the potential for the application of antibacterial metabolites in industrial production, in antagonism with pathogenic bacteria, and managing fungi caused disease in plants, contributing to environmental protection and health people Sản phẩm đề tài, công bố kết đào tạo Yêu cầu khoa học hoặc/và tiêu kinh tế - kỹ thuật Tên sản phẩm TT Đăng ký + Phân lập 20 chủng xạ khuẩn + Đã phân lập làm đươc 20 chủng xạ khuẩn đăng kí + Thu chủng xạ khuẩn có khả sinh tổng hợp enzyme ngoại bào cao Đạt + Đã sàng lọc, tuyển chọn đươc chủng xạ khuẩn có khả sinh tổng hợp ezyme ngoại bào cao Giống xạ khuẩn + Thu chủng xạ khuẩn có khả kháng khuẩn + Đã sàng lọc, tuyển chọn chủng xạ khuẩn kháng khuẩn mạnh + Thu chủng xạ khuẩn có khả kháng mốc + Đã sàng lọc, tuyển chọn chủng xạ khuẩn kháng mốc mạnh Tình hình sử dụng kinh phí T Nội dung chi T A Chi phí trực tiếp Thuê khốn chun mơn Ngun liệu + Tinh bột + Khoai tây + Agar + KNO3 + MgSO4.7H2O + FeSO4.7H2O + NaCl + Casein + CMC (Carboxymethyl cellulose) + TCA (Triclo acetic acid) + Cồn + Yeast extract + Meat extract + Peptone + Glucose Thiết bị, dụng cụ + Ống nghiệm + Đĩa Petri + Bơng gịn khơng thấm / thấm + Curvet nhựa + Đầu típ xanh 1ml + Đầu típ vàng 0,1ml + Chai thủy tinh Cơng tác phí Dịch vụ th ngồi Hội nghị, hội thảo,thù lao nghiệm thu Kinh phí Kinh phí duyệt thực (triệu đồng) (triệu đồng) 2,51 2,51 2,15 2,15 Ghi Gottleib (1966) [11], [18] Các chuỗi bào tử trần bào tử Thermoactinomyces, Saccharomonospora, Promicromonospora, có bào tử Microbispora, chuỗi bào tử ngắn chi Nocardia, Pseudonocardia, Streptoverticilium, Sporichthya, Actinomadura, Microtetraspora, chuỗi bào tử dài chi Kibdelosporangium, Kitasatosporia, Saccharothrix, bào tử trần nằm bó sợi, tương tự bó sợi nấm chi Actinosynnema, Actinomadura Các chuỗi bào tử thẳng, xoắn, dạng lượn sóng, mọc đơn hay mọc vòng Cuống sinh bào tử cuống sinh nang bào tử riêng rẽ phân nhánh Các đặc điểm hình thái quan trọng tiến hành định danh xạ khuẩn [1] Hình 1.3 Hình dạng bào tử số chi xạ khuẩn [8] (A) Micromonospora sp.; (B) Thermobifida alba; (C) Saccharomonospora viridis; (D) Thermoactinomyces daqus; (E) Microbispora rosea; (F) Nocardia brevicatena, (G) Catellatospora sp Hình 1.4: Đặc điểm hình thái chuỗi bào tử chi Streptomyces [44] 20 1.2 Đặc điểm sinh lý-sinh hóa xạ khuẩn Trong đất, bào tử chi Streptomycetes trạng thái nghỉ khoảng thời gian dài chúng bắt đầu nảy mầm có diện chất dinh dưỡng Các bào tử Streptomycete phân tán mặt đất có tác nhân bên ngồi tác động vào gió mưa Việc bổ sung có chủ ý vơ tình vật liệu chất lạ vào đất người ảnh hưởng đến xuất hoạt tính xạ khuẩn Giống nhiều vi khuẩn đất, hầu hết xạ khuẩn ưa nhiệt độ trung bình, với tăng trưởng tối ưu mức nhiệt từ 25-30°C Tuy nhiên, nghiên cứu giới số lồi xạ khuẩn sinh trưởng phát triển tối ưu mức nhiệt cao lên đến 40°C (chẳng hạn Nocardiae phân lập vùng đất New Zealand) Đa số xạ khuẩn đất hoạt động phổ pH rộng từ 5,0-9,0, chủ yếu phát triển tối ưu pH trung tính Độ ẩm yếu tố tác động đến phân bố hoạt tính xạ khuẩn Xạ khuẩn chứng minh sinh vật nhạy cảm với nồng độ CO2 cao nồng độ O2 thấp, điều xảy đất bị ngập nước [27] 1.3 Vai trò ứng dụng xạ khuẩn  Vai trị xạ khuẩn Xạ khuẩn có vai trị quan trọng giới tự nhiên đời sống người Chúng đảm nhận nhiều chức khác như: làm màu mỡ thêm cho đất, có tiềm chuyển hóa phân giải nhiều hợp chất hữu phức tạp, cải thiện chất thải nông nghiệp chất thải đô thị không sử dụng thành sản phẩm có giá trị cao, cải thiện mơi trường sống Nhiều lồi xạ khuẩn có giá trị sản xuất cơng nghiệp có lợi cho người [11] Xạ khuẩn trọng nghiên cứu nhóm vi sinh vật chúng có khả sản xuất kháng sinh, 75% thuốc kháng sinh có nguồn gốc từ xạ khuẩn Bên cạnh đó, chúng cịn chứng minh có khả sản xuất đa dạng hợp chất chuyển hóa thứ cấp có hoạt tính sinh học cao chất chống ung thư, thuốc ức chế miễn dịch enzyme, chất chuyển hóa có tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm, chống oxy hóa, chống ung thư, chống giun sán, chống sốt rét chống viêm,… Các sản phẩm 21 tạo từ xạ khuẩn ứng dụng rộng rãi nhiều lĩnh vực bao gồm nông nghiệp, công nghiệp, thú y y tế… [7], [28]  Ứng dụng xạ khuẩn công nghệ sản xuất kháng sinh Fusarium chi nấm lớn có khả gây bệnh nhiều loại trồng Hiện nay, có khoảng 17 lồi phát có khả gây bệnh thực vật, phá hoại mùa màng tạo độc tố mycotoxin có hại cho người, động vật loại nông sản [29] Trong vài thập kỉ qua, việc kiểm soát nấm bệnh trồng chủ yếu dựa vào thuốc hóa học Tuy nhiên, hầu hết loại thuốc trừ sâu, thuốc diệt nấm tổng hợp bị cấm ảnh hưởng xấu đến sức khỏe người, gây độc tế bào có tác động xấu với mơi trường, nguồn nước ngầm lồi vi sinh vật có ích đất Vì lo ngại chất lượng môi trường thực phẩm năm trở lại đây, biện pháp sinh học thân thiện với môi trường người áp dụng Việc sử dụng vi sinh vật có ích để quản lí nấm bệnh trồng mang đến thay hấp dẫn việc sử dụng chất hóa học tổng hợp Trong xạ khuẩn biết đến sinh vật tiềm [30] Các chương trình nghiên cứu để phát kháng sinh chất chuyển hóa có hoạt tính sinh học cao có nguồn gốc từ vi sinh vật mang lại số lượng hợp chất ấn tượng 50 năm qua, ứng dụng mạnh mẽ y học nông nghiệp Xạ khuẩn loại sinh vật có khả sản xuất hợp chất kháng sinh phong phú Hầu hết kháng sinh phát từ xạ khuẩn thơng qua q trình sàng lọc từ mơi trường sống tự nhiên đất vùng nước Vào thời điểm tại, hàng nghìn chất chuyển hóa xạ khuẩn mô tả, chiếm phần đáng kể chất chuyển hóa vi sinh vật Trong số đó, Streptomyces chi phổ biến [31], [32] Việc phát phân tử từ xạ khuẩn đánh dấu kỷ nguyên nghiên cứu kháng sinh phát triển hóa trị liệu kháng sinh Kể từ phát Streptomycin, số lượng lớn kháng sinh tìm thấy bao gồm amino glycoside, chloramphenicol, tetracyclines, macrolide gần nhóm βlactam cephamycin có nguồn gốc từ Streptomyces Streptoverycillium [33] 22 Bảng 1.1: Sự đa dạng hợp chất kháng sinh phát sản phẩm Streptosporangium spp [33] 23  Ứng dụng xạ khuẩn phân hủy hợp chất biopolymer Hệ sinh thái đất nơi diễn trình sinh học phức tạp, điều chỉnh hệ vi sinh vật Sự có mặt chất lạ môi trường đất dẫn đến biến động chất lượng số lượng vi sinh vật, ảnh hưởng đến cân sinh thái đất Do đó, quần thể vi sinh vật phản ánh thay đổi mơi trường coi số để đánh giá tác động phần tử ngoại sinh Một số nghiên cứu báo cáo tác dụng nhiều loại thuốc diệt cỏ vi khuẩn số nhóm nấm cụ thể Tuy nhiên, tác động chúng lên xạ khuẩn có đất cịn khám phá Trên thực tế, xạ khuẩn có tiềm đáng kể biến đổi phân hủy sinh học thuốc trừ sâu, khả sản xuất 24 enzyme ngoại bào hợp chất chuyển hóa thứ cấp Do đó, chúng có khả làm thay đổi làm giảm chất ô nhiễm phức tạp tồn dư mơi trường khác [34] Bên cạnh xạ khuẩn có khả làm giảm loạt hydrocarbon, hợp chất thơm aliphatic (các hợp chất khơng vịng) Xạ khuẩn cịn có khả phân hủy hồn tồn thuốc trừ sâu DDT (dichloro-diphenyl-trichloroethane), simazinem phá hủy cấu trúc hóa học hợp chất gây độc chcloride hữu cơ, phosphate hữu cơ, s-triazines, triazinone, carbamate, acetanilides, sulfonylureas Ngồi ra, chúng có vai trị quan trọng việc phân hủy thuốc trừ cỏ sử dụng trồng trọt Alachlor, Sulfonylurea, Granstar 75 DF…, dư lượng loại thuốc trừ cỏ tích lũy đất chảy ao, hồ, sông mà khơng xử lý gây ngộ độc ung thư cho người [10], [34], [35] Trong nghiên cứu chủng xạ khuẩn phân lập từ đất có khả phân hủy hợp chất alachlor Lara D Sette cộng (2005) báo cáo rằng: 53 chủng xạ khuẩn phân lập từ đất xử lý alachlor có 16 chủng chứng minh có khả chịu nồng độ cao thuốc diệt cỏ alachlor lên tới 720 mg.L-1, chủng số phát triển làm giảm ≥ 50% alachlor (72 mg.L-1) mơi trường muối khống Phân tích hình thái phát sinh lồi dựa vùng trình tự 16S rRNA hầu hết chủng thuộc chi Streptomyces [10]  Ứng dụng xạ khuẩn sản xuất enzyme chế phẩm sinh học Trong số lồi vi sinh vật xạ khuẩn có tính đa dạng cao có khả sinh tổng hợp nhiều loại enzyme ngoại bào phong phú Nếu amylase có chức thủy phân tinh bột-có vai trị quan trọng ngành cơng nghiệp thực phẩm cellulase có nguồn gốc từ xạ khuẩn lại có tầm quan trọng số ngành công nghiệp sản xuất giấy Lipase sản xuất từ nhiều loại xạ khuẩn có ứng dụng rộng rãi ngành công nghiệp chất tẩy rửa, thực phẩm, hóa dầu, thiết lập chẩn đốn ngành cơng nghiệp dược phẩm [3], [36] Nhiều lồi xạ khuẩn đất S griseus, S karnatakensis, S albidoflavus Nocardia sp có khả sản xuất L-asparaginase-một enzyme quan trọng thường sử dụng điều trị số bệnh ung thư người, chủ yếu điều trị bệnh bạch cầu lymphoblastic cấp tính [37] 25 Enzyme có nguồn gốc từ xạ khuẩn thường hoạt động tốt nhiệt độ cao Trong nghiên cứu Stamford cộng (2001) cho thấy α-amylase sản xuất từ chủng xạ khuẩn Nocardiopsis sp hoạt động nhiệt độ tối ưu 70°C [38] Trong nghiên cứu “sàng lọc, xác định nhiệt độ tối ưu cho khả hoạt động protease ngoại bào sản xuất từ chủng xạ khuẩn AH-4” Debananda S Ningthoujam cộng (2009) cho thấy rằng: protease từ chủng xạ khuẩn hoạt động tốt nhiệt độ tối ưu 55°C [39] Ngày nay, chế phẩm sinh học áp dụng mạnh mẽ để thúc đẩy thực hành nông nghiệp tốt (GAP) kết hợp với ứng dụng quản lý dịch hại tổng hợp (IPM), với mục đích làm giảm hóa chất độc hại sản phẩm nơng nghiệp tạo cho môi trường xung quanh phát triển bền vững Các chế phẩm sinh học bao gồm phân hữu sinh học, mùn sinh học, phân hữu vi sinh dạng lỏng tạo để cải thiện độ phì nhiêu đất thúc đẩy tăng trưởng thực vật Hầu hết sản phẩm thiếu diện xạ khuẩn Bên cạnh chúng có khả hình thành mối liên hệ cộng sinh với rễ cây, chúng cịn kích thích sinh trưởng phát triển thông qua việc sản sinh số hormon tăng trưởng thực vật Một số chủng xạ khuẩn có hoạt tính đối kháng chống lại mầm bệnh thực vật, điều hữu ích kiểm sốt sinh học Ngồi ra, xạ khuẩn vi sinh vật góp phần thúc đẩy nhanh trình lên men, trình ủ phân hữu chúng có hệ enzyme ngoại bào mạnh, rút ngắn thời gian lên men, biến chất hữu thải có thành phần phức tạp thành nguồn phân hữu có thành phần chất dinh dưỡng đơn giản, thúc đẩy phát triển trồng, tăng suất sản xuất cải tạo độ phì nhiêu cho đất [19], [40] Ứng dụng xạ khuẩn việc đối kháng vi khuẩn nấm mốc gây bệnh Trong nông nghiệp: Nấm bệnh gây hậu nghiêm trọng trồng toàn giới, đặc biệt vùng nhiệt đới cận nhiệt đới Hai loại nấm Colletotrichum gloeosporioides Sclerotium rolfsii nguyên nhân gây bệnh thán thư, bệnh bạc bệnh thối thân nhiều loại nông nghiệp Thuốc diệt nấm hóa học sử dụng tràn lan nông nghiệp làm suy giảm sức khỏe người, gây ô nhiễm môi trường làm tăng khả kháng thuốc nấm bệnh Do đó, việc sử dụng kháng sinh hợp chất lên men từ chủng xạ khuẩn phương pháp thay hiệu để bảo vệ thực vật, phụ thuộc vào hóa chất, độc tính thấp, dể phân hủy thân thiện với mơi trường Đặc biệt lồi xạ khuẩn thuộc chi Streptomyces biết đến tác nhân kiểm 26 sốt sinh học có tác dụng ức chế số loại nấm gây bệnh trồng Hoạt tính đối kháng Streptomyces nấm bệnh thường liên quan đến việc sản xuất hợp chất chống nấm enzyme ngoại bào Chitinase β-1,3-glucanase coi enzyme quan trọng trình phân hủy thành tế bào nấm gây bệnh [4] Các chủng xạ khuẩn thuộc chi Streptomyces như: Streptomyces xiamenensis S257, Streptomyces viriabilis S28, Streptomyces iakyrus S233,… có tiềm đối kháng với nấm Pyricularia grisea gây bệnh đạo ôn lúa thông qua chế cạnh tranh chất dinh dưỡng, tạo kháng sinh, tiết enzyme ngoại bào,… [9] Trong thủy sản: Nuôi trồng thủy sản lĩnh vực phát triển nhanh ngành sản xuất lương thực thực phẩm, gần 50% lượng thủy sản sử dụng làm thực phẩm cho người toàn giới Một số loài động vật thủy sinh nhạy cảm với loạt vi khuẩn gây bệnh, bao gồm thành viên chi Aeromonas, Vibrio Pseudomonas Điều dẫn đến việc sử dụng kháng sinh cách thiếu kiểm sốt ni trồng thủy sản, dẫn đến xuất loài vi khuẩn kháng kháng sinh Một vài nghiên cứu kháng kháng sinh Vibrio spp nuôi trồng thủy sản cho thấy Vibrio spp kháng với số loại kháng sinh như: erythromycin, kanamycin, pencillin G streptomycin Năm 1990, Vibrio spp có khả kháng loại kháng sinh, đến năm 2000 chủng kháng gần 20 loại kháng sinh Trong bối cảnh này, probiotics xem giải pháp hữu hiệu nhằm phát huy tác dụng có lợi thể vật chủ chống lại vi sinh vật gây hại cải thiện mơi trường sống Trong số đó, chi Streptomyces có khả sinh tổng hợp nhiều loại kháng sinh coi loại probiotics tiềm để sản xuất chế phẩm sinh học nuôi trồng thủy sản Ngoài ra, Streptomyces chứng minh có khả sản sinh hợp chất chuyển hóa có liên quan đến ức chế hình thành màng sinh học, chống lại tác nhân gây bệnh hoạt động chống độc lực vi khuẩn Vibrio sp Bên cạnh khả ức chế vi khuẩn gây bệnh nuôi trồng thủy sản, Streptomyces ghi nhận có hoạt động chống virus, đặc biệt virus gây hội chứng đốm trắng [41], [42] 27 1.4 Khả đối kháng xạ khuẩn với vi khuẩn nấm mốc gây bệnh 1.4.1 Sự hình thành khả đối kháng xạ khuẩn Xạ khuẩn sinh vật có khả sinh tổng hợp nhiều loại kháng sinh Các chất kháng sinh có nguồn gốc từ xạ khuẩn có tính phổ kháng rộng Khả kháng khuẩn kháng sinh đặc điểm quan trọng để phân loại xạ khuẩn [8] Nhiều chủng xạ khuẩn có khả tổng hợp đồng thời hay nhiều chất kháng sinh có cấu trúc hóa học có tác dụng tương tự Trong nghiên cứu công bố, riêng gene Streptomyces coelcolor có khả mã hóa lượng lớn protein tiết bao gồm: 60 loại protease, 13 loại chitinase chitosanase, loại cellulase endoglucanase, loại amylase Streptomyces có vai trị quan trọng việc phân hủy ban đầu vật liệu hữu cơ, chủ yếu loài hoại sinh [43] Sự đối kháng vi sinh vật đất sở biện pháp sinh học phòng chống bệnh Sự phát triển ứng dụng tác nhân vi sinh vật biện pháp thay Sự có mặt xạ khuẩn đối kháng đất làm giảm rõ rệt tỉ lệ mắc bệnh Thông thường, loại xạ khuẩn đối kháng ức chế vài loại nấm gây bệnh, có lồi hoạt động rộng ức chế nhiều tác nhân gây bệnh có đất Một số chủng Streptomyces ngăn chặn phát triển nấm Botrytis cinerea chứng minh tạo hợp chất kháng sinh phosphazomyzin, albopeptin B, tautomycin, tautomycein ezomycin S Cấu trúc hóa học đa dạng chất chuyển hóa làm giảm hội cho mầm bệnh phát triển đề kháng lại kháng sinh [44] 1.4.2 Cơ chế tác động xạ khuẩn đối kháng vi khuẩn Kháng sinh phân tử ức chế có chọn lọc phát triển vi khuẩn mà không ảnh hưởng đến sinh vật nhân thực Kháng sinh can thiệp vào trình chuyển hóa cần thiết tế bào vi khuẩn mà q trình chuyển hóa khơng có tế bào nhân thực Về bản, thuốc kháng sinh nhắm vào cấu trúc có chức vi khuẩn, chẳng hạn vancomcin ức chế trình sinh tổng hợp thành tế bào, streptomcin ức chế trình dịch mã, rifambicin ức chế trình phiên mã RNA, novobiocin metronidazole ức 28 chế trình chép tổng hợp DNA Nói chung, chất kháng sinh ức chế phát triển vi khuẩn (Hình 1.5) [45] Hình 1.5: Các chất kháng sinh có vai trò ức chế cấu trúc chức tế bào vi khuẩn (chất kháng sinh Actinomycetes nấm tạo biểu thị màu xanh lam màu đỏ) Trong số loại thuốc kháng sinh nhắm mục tiêu vào thành tế bào, nhóm glycopeptide (vancomycin, teicoplanin, telavancin, ramoplanin,…) nhóm vaccine sản xuất xạ khuẩn có khả liên kết với dipeptide D-alanyl - D-alanine thành tế bào vi khuẩn Gram dương, ngăn cản việc bổ sung đơn vị vào peptidoglycan ức chế tổng hợp peptidoglycan [45] Cycloserin sản xuất Streptomyces lanaceus, tác nhân chống lại hoạt động hai enzyme quan trọng giai đoạn tổng hợp peptidoglycan tế bào alanin racemase D-Ala-D-Ala ligase Khi hai enzyme bị ức chế, gốc D-alanin tự hình thành phân tử D alanin hình thành trước khơng thể liên kết với [46] 29 Tetracycline có nguồn gốc từ Streptomyces aureofaciens ức chế liên kết aminoacyl-tRNA Chloramphenicol erythromycin có nguồn gốc từ chủng xạ khuẩn Streptomyces venezuelae Saccaropolyspora erythraea có khả liên kết với tiểu đơn vị 50S, ngăn chặn hoạt động peptidyl transferase Trong đó, Streptomycin sản xuất từ Streptomyces griseus có khả ngăn chặn hình thành phức hợp khởi đầu cách chèn acid amin khơng thích hợp [45] Rifampicin loại kháng sinh bán tổng hợp sản xuất trình lên men chủng xạ khuẩn Amycolatopsis mediterranei, ứng dụng trị liệu chống bệnh lao Rifampicin ức chế RNA polymerase vi khuẩn cách liên kết với tiểu đơn vị RNAP β kênh DNA/RNA làm ổn định phức hợp DNA-RNA polymeraseoligonucleotide [47] Novobiocin loại kháng sinh aminocoumarin sản xuất xạ khuẩn Streptomyces niveus chất ức chế DNA gyrase vi khuẩn, hoạt động cách nhắm mục tiêu vào tiểu đơn vị GyrB enzyme liên quan đến trình truyền lượng [48] 1.4.3 Cơ chế tác động xạ khuẩn đối kháng nấm mốc Các biện pháp phòng trừ phương pháp sinh học áp dụng phổ biến năm trở lại đây, đặc biệt ứng dụng chitinase có nguồn gốc từ vi sinh vật có lợi để làm suy yếu suy thoái thành tế bào nhiều mầm bệnh Chitinase có vai trị làm tính ổn định lớp biểu bì động vật giáp xác, chống lại sâu bệnh kí sinh trùng gây hại Từ đó, chitinase thể hoạt tính kháng khuẩn, chống nấm diệt côn trùng Chitinase trở thành giải pháp rõ ràng quan trọng việc khắc phục mối nguy hiểm môi trường người sử dụng thuốc trừ sâu thuốc diệt nấm tổng hợp Do đó, vi sinh vật có khả tổng hợp chitinase hứa hẹn thay loại thuốc hóa học tổng hợp có hại việc quản lí phịng bệnh trồng [49], [50] Các nghiên cứu sâu Streptomyces chứng minh xạ khuẩn có khả phân hủy mảnh chitin rắn cách nhanh chóng, phần lớn khả xâm nhập vào chất hệ sợ tơ chúng Chitinase tinh khiết Streptomyces rimosus thể hoạt tính kháng nấm in vitro chống lại Fusarium solani Alternaria alternata Streptomyces 30 có hiệu cao việc phá hủy thành tế bào nấm Rhizoctonia, Colletotrichum, Aspergillus, Fusarium Pythium [51] Đồng thời, chủng xạ khuẩn làm giảm đáng kể phát triển mầm bệnh in vitro chúng có khả sản sinh nhiều chất chuyển hóa kháng nấm Trong số loài Streptomyces phân lập từ rễ, Streptomyces hygroscopicus có khả đối kháng với Colletotrichum gloeosporioides Sclerotium rolfsii Xạ khuẩn phân lập từ mẫu đất Jordan thể hoạt tính diệt nấm in vitro, chúng bắt đầu tổng hợp chitinase chúng có khả chống lại phát triển sợi nấm Sclerotinia sclerotiorum [52] Gherbawy cộng phân lập chủng xạ khuẩn có khả tổng hợp chitinase có đặc tính kháng nấm chống lại nhiều loại nấm gây bệnh trồng như: Fusarium oxysporum, Pythium aristosporum, Colletotrichum gossypii Rhizoctonia Streptomyces cavourensis chứng minh có khả đối kháng với nấm gây bệnh thán thư hạt tiêu, có kết hợp chitinase hợp chất chống nấm 2-furancarboxaldehyd [49] 1.5 Tình hình nghiên cứu ứng dụng đặc tính sinh học xạ khuẩn Hiện nay, việc nghiên cứu ứng dụng đặc tính sinh học xạ khuẩn vào lĩnh vực đời sống phổ biến Việc nghiên cứu ứng dụng không mang lại lợi ích hiệu cao kinh tế mà góp phần tối ưu hóa quy trình sản xuất ngành nông nghiệp, công nghiệp, y tế,… 1.5.1 Xạ khuẩn sinh tổng hợp loại enzyme Xạ khuẩn có khả sản sinh nhiều loại enzyme như: amylase, cellulase, protease, keratinase, xylanase… Năm 2004 Yang C-H cộng tìm chủng xạ khuẩn Thermobifida fusca NTU22 sản sinh α-amylase ứng dụng công nghệ sản xuất rượu bia [53] Năm 2013 Nguyễn Phước Bảo Hoàng Trần Thị Luyến phân lập tuyển chọn chủng xạ khuẩn Micromonospora VTCC-A-1787 sản sinh cellulase ứng dụng thủy phân rong để thu bột rong có chất lượng đáp ứng nhu cầu dinh dưỡng đảm bảo tiêu vi sinh vật dành cho thực phẩm yêu cầu gia nhiệt trước sử dụng 31 Lê Thu Hiền cộng (2012) phân lập tuyển chọn 10 dòng vi khuẩn xạ khuẩn có khả đối kháng cao với nấm Fusarium oxysporum gây bệnh héo vàng cà chua, dưa chuột Hiệu ức chế nấm phịng thí nghiệm đạt 85-86%, hiệu ức chế bệnh héo vàng cà chua, dưa chuột nhà lưới đạt 65-67%, đồng thời chủng có khả sản sinh enzyme ngoại bào có hoạt tính cao như: cellulase, chitinase βGlucanase [54] Năm 2013 Vũ Văn Lợi, Nguyễn Văn Hiếu cộng tìm chủng xạ khuẩn Streptomyces chartreusis CP23X9 có khả sản sinh xylanase ứng dụng ngành công nghiệp giấy 1.5.2 Xạ khuẩn sinh tổng hợp kháng sinh hợp chất đối kháng Hiện tượng kháng thuốc kháng sinh gia tăng loại bệnh mối quan tâm lớn cộng đồng Do đó, việc nghiên cứu lựa chọn tác nhân kháng khuẩn từ tự nhiên ưu tiên hàng đầu nhà khoa học công ty dược phẩm giới Cho đến nay, Thế giới Việt Nam có nhiều cơng trình nghiên cứu khả đối kháng vi sinh vật, xạ khuẩn đối tượng nghiên cứu nhiều đạt số thành tựu định Streptomycin sinh tổng hợp từ Streptomyces griseus có khả kháng vi khuẩn Gram dương, sử dụng điều trị bệnh dịch hạch, ho gà đặc biệt bệnh lao [55] Neomycin có nguồn gốc từ chủng xạ khuẩn Streptomyces fradiae, có khả kháng vi khuẩn Gram dương Gram âm, đặc biệt kháng nhiều loại vi khuẩn kháng penicillin streptomycin [56] Gentamycin sản xuất từ chủng Micromonospora purpurea có khả đối kháng với vi khuẩn Gram dương tụ cầu, phế cầu kháng lại penicillin loại vi khuẩn Gram âm màng não cầu, lậu cầu Trong y học nay, Gentamycin chủ yếu dùng để điều trị bệnh nhiễm Pseudomonas [57] Erythromycin có nguồn gốc từ Streptomyces erythreus, có phổ kháng rộng vi khuẩn Gram dương, sử dụng điều trị viêm phổi Mycoplasma viêm họng liên cầu khuẩn gây [58] Bên cạnh đó, Novobiocin sinh tổng hợp từ Streptomyces spheroides Streptomyces niverus, có khả đối kháng với vi khuẩn Gram dương, đặc biệt kháng tụ cầu kháng penicillin số chất kháng sinh khác [59]… 32 Năm 1999, kháng sinh loposomal HA-92 có nguồn gốc từ xa khuẩn Streptomyces CDRLL312 có tác dụng ngăn chặn tượng cholesterol, tăng sức đề kháng chất độc chuột có khả kháng nấm gây bệnh mạnh Năm 2002, chủng xạ khuẩn Streptomyces sp 201 phân ập từ vùng đất Ấn Độ có khả sinh kháng sinh z-methylheptyl iso-nicotinate, chất kháng sinh có khả kháng nhiều loại nấm gây bệnh Furasium oxysporum, Fusarium solina, Năm 2007 Hàn Quốc, chất kháng sinh laidlomycin thu nhận từ loại xạ khuẩn Streptomyces sp C684 có khả tiêu diệt tụ cầu kháng methicillin cầu khuẩn kháng vancomycin Ở Nhật Bản, số loại thuốc kháng sinh có nguồn gốc từ xạ khuẩn ứng dụng để bảo vệ thực vật biết đến từ lâu Blastisidin S sản xuất từ S griserochromogenes, Kausugamixin từ S kasuganensis, Validamycin từ S hygrocopycus chống bệnh khơ vằn có hiệu Năm 2003, Yatakemycin tách chiết từ xạ khuẩn Streptomyces sp TP-A0356 phương pháp sắc kí cột Kháng sinh có khả kiềm hãm phát triển nấm Aspergillus Candida albicans cịn có khả chống lại tế bào ung thư [60] Năm 2004, Đỗ Thu Hà nghiên cứu tìm xạ khuẩn sinh kháng sinh chống nấm phân lập từ đất Quảng Nam Đà Nẵng phân lập chủng xạ khuẩn Streptomyces nashvillensis QN-23 Streptomyces globosus QN-24 có khả kháng loại nấm kiểm định A niger, P oryzae, F oxysporum Năm 2006 Bùi Thị Việt Hà nghiên cứu tìm chủng xạ khuẩn Streptomyces antimycoticus chống nấm Sclerotium rolfsii gây bệnh mốc trắng cà chua, chủng Streptomyces diastatochromogenes chống bệnh lở cổ rễ thối bắp Rhizoctonia solani gây bắp cải, chủng Streptomyces hygroscopicus chống bệnh khô vằn (Rhizoctonia solani) lúa với hiệu lực gần xấp xỉ validacin [8] Năm 2013, Nguyễn Thanh Sơn Lê Thị Thúy Ái công bố công đề tài “Phân lập tuyển chọn chủng xạ khuẩn có khả sinh tổng hợp hợp chất tự nhiên có hoạt tính sinh học vườn quốc gia Nam Cát Tiên khu sinh thái Cam Ranh” Trong báo cáo này, chủng vi sinh vật sử dụng để thử nghiệm hoạt tính sinh học bao gồm vi khuẩn (Escherichia coli, Bacillus subtilis) nấm (Penicillum sp., Saccharomyces cerevisiae) 33 Kết nghiên cứu phân lập 23 chủng xạ khuẩn có tiềm sản xuất hợp chất thứ cấp có hoạt tính sinh học cao [61] Năm 2013 Hoàng Thị Hồng Nguyễn Ngọc Phương phân lập tuyển chọn chủng xạ khuẩn có khả kháng nấm từ rừng ngập mặn Cần Giờ ứng dụng trồng trọt, kháng nấm họ đậu, bầu bí, ngơ [62] Năm 2014, Trịnh Thới An phân lập tuyển chọn chủng xạ khuẩn có khả sản sinh chất kháng nấm Pythium sp ứng dụng việc tăng tỷ lệ nảy mầm hạt phát triển cải xanh [17] Cũng năm này, Nguyễn Thị Kim Cúc cộng tiến hành phân lập vi sinh vật có khả đối kháng với nấm gây bệnh trồng từ đất rễ tiêu bị bệnh Kết tổng số vi sinh vật phân lập có chủng xạ khuẩn đối kháng với nấm F oxysporum, chủng xạ khuẩn đối kháng với Phytophthora sp Ngồi ra, chúng cịn có khả kích thích phát triển cà chua điều kiện phịng thí nghiệm [60] Năm 2017, Nguyễn Văn Giang cộng tiến hành sàng lọc tuyển chọn chủng xạ khuẩn VS18 có khả đối kháng cao với nấm Corynespora cassiicola gây bệnh vàng lá, rụng trồng từ 86 chủng xạ khuẩn ban đầu Ngồi ra, chủng VS18 cịn có khả tổng hợp chitinase, cellulase có khả đồng hóa nhiều nguồn carbon nitrogen khác [63] Năm 2019, Liu, D cộng nghiên cứu khả đối kháng chủng xạ khuẩn Streptomyces sp NEAU-S7GS2 với nấm Sclerotinia sclerotiorum gây bệnh trồng Kết rằng, chủng xạ khuẩn có khả ức chế 99,1% tốc độ tăng trưởng hệ nấm nảy mầm bào tử S sclerotiorum Đồng thời chủng xạ khuẩn chứng minh có khả làm giảm 77% bệnh rễ đậu nành mà thúc đẩy phát triển đậu nành [64] 34 ... 20 chủng xạ khuẩn đăng kí + Thu chủng xạ khuẩn có khả sinh tổng hợp enzyme ngoại bào cao Đạt + Đã sàng lọc, tuyển chọn đươc chủng xạ khuẩn có khả sinh tổng hợp ezyme ngoại bào cao Giống xạ khuẩn. .. hợp enzyme ngoại bào đối kháng vi sinh vật? ?? số kết sau: + 40 chủng xạ khuẩn phân lập làm + 19/40 chủng xạ khuẩn có khả sinh tổng hợp amylase ngoại bào, chủng ghi nhận có hoạt tính cao + 21/40 chủng. .. Phân lập xạ khuẩn 39 3.2 Khảo sát khả sinh tổng hợp enzyme ngoại bào xạ khuẩn 41 3.2.1 Khả sinh tổng hợp amylase ngoại bào xạ khuẩn 42 3.2.2 Khả sinh tổng hợp cellulase ngoại