PHẠM THỊ HIỀN NGHIÊN cứu bán TỔNG hợp một số dẫn CHẤT CURCUMIN NHẰM cải THIỆN độ TAN TRONG nước HƯỚNG ỨNG DỤNG TRONG dược PHẨM LUẬN án TIẾN sĩ dược học

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI PHẠM THỊ HIỀN NGHIÊN CỨU BÁN TỔNG HỢP MỘT SỐ DẪN CHẤT CURCUMIN NHẰM CẢI THIỆN ĐỘ TAN TRONG NƯỚC HƯỚNG ỨNG DỤNG TRONG DƯỢC PHẨM LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ DƯỢC PHẨM & BÀO CHẾ THUỐC MÃ SỐ: 62720402 Người hướng dẫn khoa học: GS TS Nguyễn Đình Luyện TS Nguyễn Văn Hải HÀ NỘI, NĂM 2022 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng hướng dẫn GS TS Nguyễn Đình Luyện TS Nguyễn Văn Hải Các số liệu, kết nêu luận án trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Nghiên cứu sinh Phạm Thị Hiền LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới GS.TS Nguyễn Đình Luyện TS Nguyễn Văn Hải, hai người Thầy tận tình dìu dắt, bảo, hướng dẫn giúp đỡ để tơi có động lực, kiến thức kỹ cần thiết để hồn thành luận án Tơi xin trân trọng gửi lời cảm ơn đến GS TS Thái Nguyễn Hùng Thu, GS TS Nguyễn Ngọc Chiến, PGS TS Đinh Thị Thanh Hải toàn thể thầy cô giáo, đồng nghiệp Viện Công nghệ Dược phẩm Quốc gia Bộ môn Công nghiệp Dược - Trường Đại Học Dược Hà Nội hỗ trợ, động viên tạo điều kiện tốt cho suốt q trình nghiên cứu hồn thiện luận án Tôi xin gửi lời cảm ơn đến anh chị Quý quan: Viện Hóa học hợp chất tự nhiên, Viện Hóa học, Viện Cơng nghệ Sinh học - Viện Hàn lâm khoa học Công nghệ Việt Nam, Khoa hóa học - Đại học Khoa học tự nhiên - Đại học Quốc gia Hà Nội giúp đỡ công tác chuyên môn trình thực luận án Tơi xin chân thành cảm ơn Đảng ủy, Ban Giám hiệu, Phòng Sau Đại học, Phịng chức năng, Bộ mơn Chun ngành Cơng nghệ Dược phẩm Bào chế thuốc Trường Đại học Dược Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi, giúp đỡ tơi q trình học tập hồn thành luận án Tôi xin chân thành cảm ơn đến học viên cao học, hệ sinh viên dược K65, K66, K67, K68, K69, K70, K71 làm việc để hoàn thành kết luận án Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến chồng hai tôi, bố mẹ gia đình hai bên nội ngoại, người thân, bạn bè đồng hành bên tôi, động lực giúp phấn đấu để hoàn thành luận án Hà Nội, ngày 19 tháng 04 năm 2022 Nghiên cứu sinh Phạm Thị Hiền MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ .1 CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ CURCUMIN .3 1.1.1 Cấu trúc hóa học tính chất curcumin 1.1.2 Độ ổn định curcumin 1.1.3 Tác dụng sinh học curcumin 1.1.4 Nghiên cứu dược động học curcumin 11 1.1.5 Sinh khả dụng curcumin .13 1.2 CÁC HƯỚNG NGHIÊN CỨU BIẾN ĐỔI CẤU TRÚC CURCUMIN 14 1.2.1 Hướng nghiên cứu biến đổi chuỗi bên aryl 15 1.2.2 Hướng nghiên cứu biến đổi cầu nối β-dicetonheptadien 25 1.3 CÁC PHƯƠNG PHÁP HÓA HỌC CẢI THIỆN ĐỘ TAN CỦA MỘT DƯỢC CHẤT .31 1.3.1 Phương pháp acyl hóa với anhydrid diacid 31 1.3.2 Phương pháp phosphat hóa 32 1.3.3 Phương pháp hydroxyethyl hóa 34 1.3.4 Phương pháp liên hợp với L-valin 35 1.3.5 Phương pháp sulfonat hóa 36 1.3.6 Phương pháp sulfat hóa .37 1.4 ĐỊNH HƯỚNG NGHIÊN CỨU TRONG LUẬN ÁN 39 CHƯƠNG NGUYÊN LIỆU, TRANG THIẾT BỊ, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 43 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU, TRANG THIẾT BỊ NGHIÊN CỨU .43 2.1.1 Nguyên vật liệu 43 2.1.2 Thiết bị, dụng cụ 45 2.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 47 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 47 2.3.1 Phương pháp tổng hợp hóa học 47 2.3.2 Các phương pháp đánh giá độ tinh khiết dẫn chất 51 2.3.3 Phương pháp xác định cấu trúc dẫn chất 51 2.3.4 Phương pháp thử độ tan dẫn chất 52 2.3.5 Phương pháp đánh giá số đặc tính sinh dược học dẫn chất tiềm 53 2.3.6 Phương pháp đánh giá tác dụng sinh học dẫn chất 55 2.3.7 Phương pháp đánh giá hoạt tính chống viêm in vivo dẫn chất tiềm 59 2.3.8 Phương pháp đánh giá độc tính cấp dẫn chất tiềm 60 2.3.9 Phương pháp docking 61 2.3.10 Phương pháp dự đốn tính giống thuốc 62 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 63 3.1 BÁN TỔNG HỢP CÁC DẪN CHẤT MỚI CỦA CURCUMIN HƯỚNG CẢI THIỆN ĐỘ TAN TRONG NƯỚC VÀ ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG SINH HỌC CÁC DẪN CHẤT TỔNG HỢP ĐƯỢC .63 3.1.1 Tổng hợp dẫn chất acid carboxylic curcumin tạo muối natri carboxylat 63 3.1.2 Tổng hợp dẫn chất dinatri O,O′-bis(2-sulfonatoethyl)curcumin (PH5) .66 3.1.3 Tổng hợp dẫn chất mono-O-(2-hydroxyethyl)curcumin (PH6) di-O(2-hydroxyethyl)curcumin (PH7) curcumin .68 3.1.4 Tổng hợp dẫn chất curcumin thông qua chất trung gian PH6 70 3.1.5 Tổng hợp dẫn chất curcumin thơng qua chất trung gian PH7 75 3.1.6 Tóm tắt kết tổng hợp hóa học kết phân tích phổ dẫn chất 80 3.1.7 Đánh giá sơ độ tan dẫn chất 84 3.1.8 Đánh giá tác dụng sinh học dẫn chất 84 3.2 LỰA CHỌN, NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH TỔNG HỢP DẪN CHẤT TIỀM NĂNG VÀ ĐÁNH GIÁ MỘT SỐ ĐẶC TÍNH SINH DƯỢC HỌC 88 3.2.1 Lựa chọn dẫn chất tiềm 88 3.2.2 Xây dựng quy trình tổng hợp dẫn chất mono-O-(2-hydroxyethyl)-curcumin (PH6) 93 3.2.3 Xây dựng quy trình tổng hợp dẫn chất mono-O-(2-(succinyloxy)ethyl)curcumin (PH9) .103 3.2.4 Đánh giá số tiêu chất lượng đề xuất tiêu chuẩn sở cho dẫn chất mono-O-(2-(succinyloxy)ethyl)curcumin (PH9) 109 3.2.5 Đánh giá số đặc tính sinh dược học dẫn chất mono-O-(2(succinyloxy)ethyl)curcumin (PH9) .111 3.3 ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH KHÁNG VIÊM VÀ ĐỘC TÍNH CẤP TRÊN CHUỘT CỦA DẪN CHẤT MONO-O-(2-(SUCCINYLOXY)ETHYL)CURCUMIN (PH9) 113 3.3.1 Đánh giá hoạt tính kháng viêm tai chuột theo đường bơi ngồi da 113 3.3.2 Đánh giá độc tính cấp chuột 114 CHƯƠNG BÀN LUẬN 116 4.1 BÀN LUẬN VỀ TỔNG HỢP HÓA HỌC 116 4.1.1 Bàn luận phản ứng tạo dẫn chất acid carboxylic (PH3) muối carboxylat (PH4) .116 4.1.2 Bàn luận phản ứng tạo muối dinatri O,O′-bis(2-sulfonatoethyl)curcumin (PH5) .117 4.1.3 Bàn luận phản ứng tạo dẫn chất hydroxyethyl curcumin (PH6 PH7) 119 4.1.4 Bàn luận phản ứng tạo dẫn chất monoester glutarat (PH8) succinat (PH9 PH10) 120 4.1.5 Bàn luận phản ứng tạo dẫn chất diester glutarat (PH14) succinat (PH15) .122 4.1.6 Bàn luận phản ứng tạo dẫn chất phosphat PH11 PH12 123 4.1.7 Bàn luận phản ứng tạo dẫn chất sulfat PH13 .124 4.1.8 Bàn luận phản ứng tạo liên hợp PH16 125 4.2 BÀN LUẬN VỀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC CÁC DẪN CHẤT 127 4.2.1 Bàn luận cấu trúc dẫn chất PH1 PH2 .127 4.2.2 Bàn luận cấu trúc dẫn chất PH3 128 4.2.3 Bàn luận cấu trúc dẫn chất PH4 129 4.2.4 Bàn luận cấu trúc dẫn chất PH5 130 4.2.5 Bàn luận cấu trúc dẫn chất PH6 131 4.2.6 Bàn luận cấu trúc dẫn chất PH7 133 4.2.7 Bàn luận cấu trúc dẫn chất PH8 134 4.2.8 Bàn luận cấu trúc dẫn chất PH9 135 4.2.9 Bàn luận cấu trúc dẫn chất PH10 140 4.2.10 Bàn luận cấu trúc dẫn chất PH11 .141 4.2.11 Bàn luận cấu trúc dẫn chất PH12 .142 4.2.12 Bàn luận cấu trúc dẫn chất PH13 .144 4.2.13 Bàn luận cấu trúc dẫn chất PH14 .145 4.2.14 Bàn luận cấu trúc dẫn chất PH15 .146 4.2.15 Bàn luận cấu trúc dẫn chất PH16 .148 4.3 BÀN LUẬN VỀ HOẠT TÍNH SINH HỌC IN VITRO CỦA CÁC DẪN CHẤT 148 4.4 BÀN LUẬN VỀ DẪN CHẤT TIỀM NĂNG MONO-O-(2(SUCCINYLOXY)ETHYL)CURCUMIN (PH9) 151 4.4.1 Bàn luận xây dựng quy trình tổng hợp dẫn chất tiềm PH9 151 4.4.2 Bàn luận đặc tính sinh dược học dẫn chất PH9 153 4.4.3 Bàn luận hoạt tính chống viêm độc tính cấp chuột dẫn chất tiềm PH9 155 4.5 NHỮNG ĐÓNG GÓP MỚI CỦA LUẬN ÁN .156 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 157 KẾT LUẬN 157 KIẾN NGHỊ 158 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ .159 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT STT Ký hiệu 13 10 11 12 13 14 15 16 Ac AR BDMC COSY CTCT CTPT DCC DCM DCU dd DDMC DEPT DMAP DMC 17 DMEM 18 19 20 21 22 23 24 25 26 DMF DMSO DPPH đvC EPP eq Et FBS H% 27 Hela 28 HEPES 29 HepG2 C-NMR H-NMR Chú giải Phổ cộng hưởng từ hạt nhân carbon 13 (Carbon-13 Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy) Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton (1H-Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy) Acetyl (CH3CO-) Hóa chất tiêu chuẩn phân tích (Analytical reagent) Bisdemethoxycurcumin (curcumin III) Phổ tương quan (Correlation spectroscopy) Công thức cấu tạo Công thức phân tử N,N′-Dicyclohexylcarbodiimid Dicloromethan N,N′-Dicyclohexylurea Dung dịch Di-O-Demethylcurcumin Phổ DEPT (distortionless enhancement by polarization transfer) 4-Dimethylaminopyridin Demethoxycurcumin (curcumin II) Môi trường nuôi cấy Dulbecco (Dulbecco′s Modified Eagle′s Medium) Dimethylformamid Dimethyl sulfoxid 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl Đơn vị carbon Ethyl phenylpropiolat Đương lượng (Equivalent) Ethyl (C2H5-) Huyết bào thai bò (Fetal bovine serum) Hiệu suất phản ứng (%) Dòng tế bào ung thư tử cung người (Human cervix carcinoma cell lines) Acid 4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazinethansulfonic Dòng tế bào ung thư gan người (Human hepatocellular carcinoma cell lines) 30 HIV 31 HL-60 32 HPLC 33 HMBC 34 HSQC 35 IC50 36 37 IPA IR 38 IUPAC 39 K562 40 41 42 43 44 45 KL LD100 LD50 L-NMMA logP LPS 46 MCF7 47 48 49 50 51 Me MS MTT OD PEG 52 PH1 53 PH2 Virus gây suy giảm miễn dịch người (Human immunodeficiency virus) Dòng tế bào ung thư bạch cầu người (Human leukemia cell lines) Sắc ký lỏng hiệu cao (High-performance liquid chromatography) Phổ tương quan đa liên kết dị nhân (Heteronuclear multiple bond correlation) Phổ tương quan đơn lượng tử dị nhân (Heteronuclear single quantum coherence) Nồng độ ức chế 50 % đối tượng thử (Inhibition concentration at 50 %) Isopropanol Phổ hồng ngoại (Infrared spectroscopy) Danh pháp Hóa học theo Liên minh Quốc tế Hóa học túy Hóa học ứng dụng (International Union of Pure and Applied Chemistry Nomenclature) Dòng tế bào ung thư bạch cầu cấp người (Human myelogenous leukemia cell lines) Khối lượng Liều thấp gây chết 100 % động vật thí nghiệm Liều gây chết 50 % động vật thí nghiệm NG-methyl-L-arginin acetat Hệ số phân bố dầu nước Lipopolysaccharid Các dòng tế bào ung thư vú người (Human breast carcinoma cell lines) Methyl (CH3-) Phổ khối lượng (Mass spectrometry) 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazoli bromid Mật độ quang học (Optical density) Polyethylen glycol Dimethyl 3,3-bis((E)-3-(3-methoxy-4-(2-methoxy-2oxoethoxy)phenyl)acryloyl)pentandioat (4,4,O,O′-tetra(methoxycarbonyl-methyl)curcumin) Diethyl 3,3-bis((E)-3-(4-(2-ethoxy-2-oxoethoxy)-3methoxyphenyl)acryloyl)pentandioat (4,4,O,O′-tetra(ethoxycarbonyl-methyl)curcumin) 54 PH3 55 PH4 56 PH5 57 PH6 58 PH7 59 PH8 60 PH9 61 PH10 62 PH11 63 PH12 64 PH13 Acid 3,3-bis((E)-3-(4-(carboxymethoxy)-3methoxyphenyl)acryloyl)pentandioic (4,4,O,O′-tetra(carboxymethyl)curcumin) Natri 3,3-bis((E)-3-(4-(carboxylatomethoxy)-3methoxyphenyl)acryloyl)pentandioat (Tetranatri 4,4,O,O′-tetra(carboxylatomethyl)curcumin) Natri 2,2'-((((1E,6E)-3,5-dioxohepta-1,6-dien-1,7-diyl)bis(2methoxy-4,1-phenylen))bis(oxy))bis(ethan-1-sulfonat) (Dinatri O,O′-bis(2-sulfonatoethyl)curcumin) (1E,6E)-1-(4-Hydroxy-3-methoxyphenyl)-7-(4-(2hydroxyethoxy)-3-methoxyphenyl)hepta-1,6-dien-3,5-dion (Mono-O-(2-hydroxyethyl)curcumin) (1E,6E)-1,7-Bis(4-(2-hydroxyethoxy)-3-methoxyphenyl)hepta1,6-dien-3,5-dion (Di-O-(2-hydroxyethyl)curcumin) Acid 5-(2-(4-((1E,6E)-7-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-3,5dioxohepta-1,6-dien-1-yl)-2-methoxyphenoxy)ethoxy)-5oxopentanoic (Mono-O-(2-(glutaryloxy)ethyl)curcumin) Acid 4-(2-(4-((1E,6E)-7-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-3,5dioxohepta-1,6-dien-1-yl)-2-methoxyphenoxy)ethoxy)-4oxobutanoic (mono-O-(2-(succinyloxy)ethyl)curcumin) Natri 4-(2-(4-((1E,6E)-7-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-3,5dioxohepta-1,6-dien-1-yl)-2-methoxyphenoxy)ethoxy)-4oxobutanoat (Muối dinatri mono-O-(2-(succinyloxy)ethyl)curcumin) 2-(4-((1E,6E)-7-(4-Hydroxy-3-methoxyphenyl)-3,5-dioxohepta1,6-dien-1-yl)-2-methoxyphenoxy)ethyl dihydrophosphat (2-(curcumin-O-yl)ethyl dihydrophosphat) Natri 2-(4-((1E,6E)-7-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-3,5dioxohepta-1,6-dien-1-yl)-2-methoxyphenoxy)ethyl phosphat (Muối natri 2-(curcumin-O-yl)ethyl dihydrophosphat) Muối natri 2-(4-((1E,6E)-7-(4-(2-hydroxyethoxy)-3methoxyphenyl)-3,5-dioxohepta-1,6-dien-1-yl)-2methoxyphenoxy)ethyl sulfat (Natri 2-(O-(2-hydroxyethyl)-curcumin)ethyl sulfat) Phụ lục 158: Kết thử hoạt tính kháng tế bào ung thư dẫn chất di-O-(2-(glutaryloxy)ethyl)-curcumin (A2 ≈ PH14) di-O-(2-(succinyloxy)ethyl)-curcumin (A3 ≈ PH15) I-219 Phụ lục 159: Kết thử hoạt tính chống viêm in vivo tai chuột dẫn chất mono-O-(2-(succinyloxy)ethyl)-curcumin (PH9) I-220 Phụ lục 159: Kết thử hoạt tính chống viêm in vivo tai chuột dẫn chất mono-O-(2-(succinyloxy)ethyl)-curcumin (PH9) I-221 Phụ lục 159: Kết thử hoạt tính chống viêm in vivo tai chuột dẫn chất mono-O-(2-(succinyloxy)ethyl)-curcumin (PH9) I-222 Phụ lục 160: Kết đánh giá độc tính cấp chuột dẫn chất mono-O-(2-(succinyloxy)ethyl)-curcumin (PH9) I-223 Phụ lục 160: Kết đánh giá độc tính cấp chuột dẫn chất mono-O-(2-(succinyloxy)ethyl)-curcumin (PH9) I-224 Phụ lục 160: Kết đánh giá độc tính cấp chuột dẫn chất mono-O-(2-(succinyloxy)ethyl)-curcumin (PH9) I-225 Phụ lục 160: Kết đánh giá độc tính cấp chuột dẫn chất mono-O-(2-(succinyloxy)ethyl)-curcumin (PH9) I-226 Phụ lục 160: Kết đánh giá độc tính cấp chuột dẫn chất mono-O-(2-(succinyloxy)ethyl)-curcumin (PH9) I-227 Phụ lục 161: Một số hình ảnh sắc ký đồ curcumin, PH9 hỗn hợp curcumin, PH6, PH9 I-228 Phụ lục 162: Một số hình ảnh sắc ký đồ curcumin môi trường pH khác I-229 Phụ lục 163: Một số hình ảnh sắc ký đồ dung dịch PH9 nước I-230 Phụ lục 164: Một số hình ảnh sắc ký đồ PH9 mơi trường pH khác I-231 Phụ lục 165: Một số hình ảnh sắc ký đồ PH9 mơi trường pH khác I-232 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI PHẠM THỊ HIỀN NGHIÊN CỨU BÁN TỔNG HỢP MỘT SỐ DẪN CHẤT CURCUMIN NHẰM CẢI THIỆN ĐỘ TAN TRONG NƯỚC HƯỚNG ỨNG DỤNG TRONG DƯỢC PHẨM LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI, NĂM 2022 ... vậy, luận án: ? ?Nghiên cứu bán tổng hợp số dẫn chất curcumin nhằm cải thiện độ tan nước hướng ứng dụng dược phẩm? ?? thực với mục tiêu sau: Bán tổng hợp số dẫn chất curcumin theo hướng cải thiện độ tan. .. 3.1 BÁN TỔNG HỢP CÁC DẪN CHẤT MỚI CỦA CURCUMIN HƯỚNG CẢI THIỆN ĐỘ TAN TRONG NƯỚC VÀ ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG SINH HỌC CÁC DẪN CHẤT TỔNG HỢP ĐƯỢC .63 3.1.1 Tổng hợp dẫn chất acid carboxylic curcumin. .. tử curcumin nhận thấy, hướng biến đổi chuỗi bên aryl hướng nghiên cứu quan tâm nhiều Hướng nghiên cứu hướng tới mục tiêu nghiên cứu tổng hợp dẫn chất curcumin theo hướng tăng độ tan nước, từ cải