(LUẬN án TIẾN sĩ) nghiên cứu một số biến đổi di truyền và mối liên quan với các yếu tố tiên lượng, định hướng điều trị bệnh nhân u nguyên bào thần kinh

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN _ VŨ ĐÌNH QUANG NGHIÊN CỨU MỘT SỐ BIẾN ĐỔI DI TRUYỀN VÀ MỐI LIÊN QUAN VỚI CÁC YẾU TỐ TIÊN LƯỢNG, ĐỊNH HƯỚNG ĐIỀU TRỊ BỆNH NHÂN U NGUYÊN BÀO THẦN KINH LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC Hà Nội - 2019 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN _ Vũ Đình Quang NGHIÊN CỨU MỘT SỐ BIẾN ĐỔI DI TRUYỀN VÀ MỐI LIÊN QUAN VỚI CÁC YẾU TỐ TIÊN LƯỢNG, ĐỊNH HƯỚNG ĐIỀU TRỊ BỆNH NHÂN U NGUYÊN BÀO THẦN KINH Chuyên ngành: Di truyền học Mã số: 62420121 LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS Nguyễn Thị Hồng Vân TS BS Phùng Tuyết Lan Hà Nội - 2019 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com LỜI CAM ĐOAN Tơi là: Vũ Đình Quang, nghiên cứu sinh khóa 2013-2018, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội, chuyên ngành Di truyền học, xin cam đoan: Đây luận án thân trực tiếp thực hướng dẫn PGS TS Nguyễn Thị Hồng Vân TS Phùng Tuyết Lan Cơng trình khơng trùng lặp với nghiên cứu khác công bố Các số liệu thông tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực khách quan, xác nhận chấp thuận sở nơi nghiên cứu Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm cam kết Hà Nội, ngày 04 tháng 03 năm 2019 NGƯỜI CAM ĐOAN VŨ ĐÌNH QUANG TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, muốn gửi lời cảm ơn sâu sắc tới PGS TS Nguyễn Thị Hồng Vân TS BS Phùng Tuyết Lan, hai người thầy khoa học tận tâm hướng dẫn, bảo, động viên suốt năm thực đề tài nghiên cứu Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến tất bệnh nhân gia đình bệnh nhân đồng ý tham gia vào nghiên cứu Chính đau đớn, mát em động lực thơi thúc tơi hồn thiện nghiên cứu này, cho em cho bệnh nhân sau em Tôi xin cảm ơn tất đồng nghiệp khoa Di truyền Sinh học Phân tử, nhà thứ hai tôi, bên lúc vui, lúc buồn, thành công hay thất bại Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn tới thầy giáo, cô giáo cán nghiên cứu Bộ môn Di truyền học, Khoa Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQGHN tạo điều kiện tốt cho học tập, nghiên cứu khuôn khổ đề tài nghiên cứu Tôi xin cảm ơn đến anh chị, bạn bè đồng nghiệp bệnh viện Nhi Trung ương bệnh viện Đa khoa Quốc tế Vinmec đạt sản phẩm khoa học ngày hôm Tôi xin cảm ơn người bạn thân thiết bên Cuối cùng, xin dành lời cảm ơn tới gia đình mình, tới bố, tới người mẹ khuất, tới người bạn đời yêu thương hai tơi với lo lắng, chăm sóc, sẻ chia tình u lớn lao dành cho tơi Hà Nội, ngày 04 tháng 03 năm 2019 Vũ Đình Quang TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com MỤC LỤC MỞ ĐẦU 11 Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 15 1.1 Khái quát u nguyên bào thần kinh 15 1.1.1 Tỷ lệ mắc 15 1.1.2 Nguyên nhân hình thành khối u nguyên bào thần kinh 15 1.1.3 Phôi thai học u nguyên bào thần kinh 16 1.1.4 Mô bệnh học u nguyên bào thần kinh 18 1.2 Một số đặc điểm lâm sàng cận lâm sàng u nguyên bào thần kinh 20 1.2.1 Một số đặc điểm lâm sàng bệnh u nguyên bào thần kinh 20 1.2.2 Một số đặc điểm cận lâm sàng bệnh u nguyên bào thần kinh 26 1.3 Các đặc điểm di truyền bệnh u nguyên bào thần kinh .27 1.3.1 Biến đổi số lượng nhiễm sắc thể 27 1.3.2 Biến đổi cấu trúc nhiễm sắc thể 28 1.3.3 Khuếch đại gen MYCN 30 1.3.4 Sự biến đổi biểu gen bệnh u nguyên bào thần kinh 36 1.3.5 U nguyên bào thần kinh di truyền 39 1.3.6 Mơ hình biến đổi di truyền bệnh u nguyên bào thần kinh 40 1.4 Các kỹ thuật di truyền sử dụng để phát biến đổi di truyền bệnh u nguyên bào thần kinh 43 1.4.1 Kỹ thuật lai huỳnh quang chỗ 43 1.4.2 Kỹ thuật khuếch đại đa mồi dựa vào phản ứng nối 46 1.4.3 Kỹ thuật lai so sánh hệ gen 49 1.5 Tình hình nghiên cứu bệnh u NBTK Việt Nam 52 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 55 2.1 Đối tượng nghiên cứu 55 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com 2.1.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 55 2.1.2 Đối tượng nghiên cứu 55 2.1.3 Tiêu chuẩn lựa chọn bệnh nhân 55 2.1.4 Tiêu chuẩn loại trừ bệnh nhân 56 2.1.5 Cỡ mẫu: 56 2.1.6 Thiết kế nghiên cứu 57 2.2 Phương pháp nghiên cứu .57 2.2.1 Thu thập bảo quản mẫu bệnh phẩm 57 2.2.2 Kỹ thuật lai huỳnh quang chỗ 58 2.2.3 Kỹ thuật tách chiết DNA 60 2.2.4 Kỹ thuật MLPA 61 2.2.5 Kỹ thuật lai so sánh hệ gen 63 2.3 Các bước tiến hành nghiên cứu 64 2.3.1 Nghiên cứu số biến đổi di truyền bệnh u nguyên bào thần kinh 64 2.3.2 Nghiên cứu mối liên quan số biến đổi di truyền với số biểu lâm sàng, cận lâm sàng điều trị bệnh nhân 65 2.4 Xử lý số liệu 65 2.5 Đạo đức nghiên cứu .65 2.6 Sơ đồ nghiên cứu 67 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN 69 3.1 Phát số bất thường di truyền bệnh nhân nhi mắc u nguyên bào thần kinh 69 3.1.1 Xác định trạng thái khuếch đại gen MYCN kỹ thuật FISH 69 3.1.2 Xác định số biến đổi cấu trúc nhiễm sắc thể kỹ thuật MLPA CGH 76 3.1.3 Quy trình xét nghiệm biến đổi di truyền bệnh nhân u NBTK 93 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com 3.2 Xác định mối liên quan biến đổi di truyền với số yếu tố tiên lượng định hướng điều trị u nguyên bào thần kinh 95 3.2.1 Mối liên quan trạng thái gen MYCN với tuổi chẩn đoán 95 3.2.2 Mối liên quan trạng thái gen MYCN với giới tính 98 3.2.3 Mối liên quan trạng thái gen MYCN với giai đoạn bệnh 99 3.2.4 Mối liên quan trạng thái gen MYCN với số VMA/HVA 103 3.2.5 Mối liên quan trạng thái gen MYCN với số LDH 107 3.2.6 Mối quan hệ trạng thái gen MYCN với trạng thái biệt hóa tế bào 109 3.2.7 Mối quan hệ trạng thái gen MYCN với tiên lượng mô bệnh học 111 3.2.8 Ý nghĩa biến đổi di truyền với điều trị 114 KẾT LUẬN 120 KIẾN NGHỊ VỀ NHỮNG NGHIÊN CỨU TIẾP THEO 121 DANH MỤC CƠNG TRÌNH KHOA HỌC CỦA TÁC GIẢ ĐÃ CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN 122 TÀI LIỆU THAM KHẢO 124 PHỤ LỤC DANH SÁCH BỆNH NHÂN .PL01 PHỤ LỤC KẾT QUẢ MLPA CỦA MỘT SỐ BỆNH NHÂN .PL10 PHỤ LỤC KẾT QUẢ TÁCH DNA CỦA MỘT SỐ BỆNH NHÂN .PL15 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt BDNF Nghĩa tiếng Anh Nghĩa tiếng Việt Brain-derived neurotrophic Yếu tố tăng trưởng thần kinh factor có nguồn gốc từ não BH CGH Biệt hóa Comparative Genomic Lai so sánh hệ gen Hybridization CNV Copy number variation Thay đổi số lượng DM Double minute Đoạn kép ngắn chất nhiễm sắc EFS Event-free survival Tỷ lệ sống không bệnh FISH Fluorescent in-situ Lai huỳnh quang chỗ Hybridization HSR Homogeneously staining Vùng bắt màu đồng region HVA INRGSS Homo-vanillic Acid Homo-vanillic Acid International Neuroblastoma Hệ thống phân giai đoạn u Risk Group Staging System nguyên bào thần kinh theo nhóm nguy International Neuroblastoma Hệ thống phân giai đoạn u Staging System nguyên bào thần kinh quốc tế LDH Lactate Dehydrogenase Lactate Dehydrogenase LTS Life-threatening symptom Triệu chứng đe dọa sống INSS TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Nghĩa tiếng Anh Nghĩa tiếng Việt MIBG Meta-iodobenzyl-guanidine Meta-iodobenzyl-guanidine MKI Mitosis karyorrhexis Index Chỉ số nhân chia/nhân tan Multiplex ligation-dependent Khuếch đại đa mồi dựa vào probe amplification phản ứng nối Chữ viết tắt MLPA NBTK NCA NGF Nguyên bào thần kinh Numerical Chromosomal Biến đổi số lượng nhiễm Aberration sắc thể Nerve growth factor Yếu tố tăng trưởng thần kinh NST Nhiễm sắc thể PCR Polymerase chain reaction Phản ứng chuỗi trùng hợp SCA Segmental Chromosomal Biến đổi cấu trúc nhiễm sắc Aberration thể Tyrosine kinase Tyrosine kinase Vanillyl-mandellic Acid Vanillyl-mandellic Acid Trk VMA TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com DANH MỤC BẢNG Bảng Tên Trang Bảng 1.1 Các giai đoạn theo INRGSS 22 Bảng 1.2 Bảng phân loại nhóm nguy u NBTK 23 Bảng 1.3 Bảng phân nhóm điều trị bệnh nhân nguy không cao 25 Bảng 1.4 Các đoạn hệ gen khối u NBTK 41 Bảng 3.1 Phân bố trạng thái gen MYCN nghiên cứu 72 Bảng 3.2 Phân bố dạng khuếch đại gen MYCN nghiên cứu 72 Bảng 3.3 So sánh kết nghiên cứu tỷ lệ khuếch đại gen MYCN nghiên cứu với số nghiên cứu công bố 73 Bảng 3.4 Kết phân tích 10 mẫu kỹ thuật MLPA 77 Bảng 3.5 Kết lai so sánh hệ gen bệnh nhân u NBTK 85 Bảng 3.6 Số lượng dạng biến đổi số lượng nhiễm sắc thể tìm 89 Bảng 3.7 Số lượng dạng biến đổi cấu trúc nhiễm sắc thể tìm 90 Bảng 3.8 So sánh kết phát CNV nhiễm sắc thể số 17 kỹ thuật MLPA CGH 92 Phân bố bệnh nhân theo tuổi 95 Bảng 3.10 Phân bố trạng thái gen MYCN theo nhóm tuổi 97 Bảng 3.11 Phân bố trạng thái gen MYCN theo giới tính 99 Bảng 3.9 Bảng 3.12 So sánh kết nghiên cứu phân bố theo đoạn giai đoạn bệnh nghiên cứu với số nghiên cứu công bố 101 Bảng 3.13 Kết HVA niệu 103 Bảng 3.13 Kết VMA niệu 104 Bảng 3.15 Kết số LDH huyết 107 Bảng 3.16 Kết phân tích biệt hố tế bào 109 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com ... bào thần kinh Xác định mối liên quan biến đổi di truyền với số y? ?u tố tiên lượng định hướng đi? ?u trị u nguyên bào thần kinh Nội dung nghiên c? ?u luận án Nghiên c? ?u số biến đổi di truyền bệnh u NBTK... đổi di truyền mối liên quan với y? ?u tố tiên lượng, định hướng đi? ?u trị bệnh nhân u nguyên bào thần kinh? ?? tiến hành với mục ti? ?u sau: Phát số biến đổi di truyền bệnh nhân nhi mắc bệnh u nguyên bào. .. Xác định mối liên quan biến đổi di truyền với số y? ?u tố tiên lượng định hướng đi? ?u trị u nguyên bào thần kinh 95 3.2.1 Mối liên quan trạng thái gen MYCN với tuổi chẩn đoán 95 3.2.2 Mối liên