(LUẬN văn THẠC sĩ) tổng hợp các hạt nano từ tính với các lớp kháng thể trên bề mặt ứng dụng trong chẩn đoán bệnh truyền nhiễm

ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP.HCM ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI PHỊNG THÍ NGHIỆM CƠNG NGHỆ NANO TRƢỜNG ĐẠI HỌC CƠNG NGHỆ TRƢƠNG THỊ BÍCH CHÂU TỔNG HỢP CÁC HẠT NANO TỪ TÍNH VỚI CÁC LỚP KHÁNG THỂ TRÊN BỀ MẶT ỨNG DỤNG TRONG CHẨN ĐOÁN BỆNH TRUYỀN NHIỄM LUẬN VĂN THẠC SĨ TP HCM - 2015 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP.HCM PHỊNG THÍ NGHIỆM CÔNG NGHỆ NANO ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC CƠNG NGHỆ TRƢƠNG THỊ BÍCH CHÂU TỔNG HỢP CÁC HẠT NANO TỪ TÍNH VỚI CÁC LỚP KHÁNG THỂ TRÊN BỀ MẶT ỨNG DỤNG TRONG CHẨN ĐOÁN BỆNH TRUYỀN NHIỄM Chuyên ngành: VẬT LIỆU VÀ LINH KIỆN NANO Mã số: Chuyên ngành đào tạo thí điểm LUẬN VĂN THẠC SĨ GVHD: PGS.TS TRẦN HOÀNG HẢI TP HCM - 2015 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Lời cảm ơn! Tôi xin gửi lời biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Trần Hoàng Hải – Viện Hàn lâm khoa học Việt Nam, Viện Vật lý Sự hiểu biết sâu sắc khoa học nhƣ kinh nghiệm thầy tiền đề giúp đạt đƣợc nhiều kiến thức quý báu Ths Dƣợc sĩ Cao Minh Thắng – Viện Pasteur, khoa Miễn dịch, vi sinh – ngƣời thầy, ngƣời chị, dành nhiều tâm huyết tạo điều kiện, động viên, giúp đỡ tơi hồn thành luận văn Chị Lê Thụy Thảo – Viện Hàn lâm khoa học Việt Nam, Viện Vật lý – hỗ trợ, giúp đỡ, chia sẻ khó khăn với tơi q trình thực đề tài Q thầy Khoa Công nghệ Vật liệu Linh kiện nano – ĐH Quốc Gia TP Hồ Chí Minh ĐH Quốc Gia Hà Nội – giúp đỡ suốt thời gian học tập trƣờng Và cuối xin cảm ơn gia đình ln sát cánh, ủng hộ, tiếp thêm sức mạnh để tơi vƣợt qua khó khăn, thử thách sống hồn thành luận văn Trân trọng TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Hƣớng dẫn khoa học: PGS TS Trần Hoàng Hải Lời cam đoan Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết luận văn trung thực Tôi xin chịu trách nhiệm nghiên cứu Trƣơng Thị Bích Châu TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Hƣớng dẫn khoa học: PGS TS Trần Hoàng Hải DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT BSA Bovine serum albumin BPW Buffered peptone water ELISA Enzyme-linked immunosobent assay FA Flourescent antibody Fab Antigen binding fragment Fc Crystallisation fragment FT-IR Fourier Transform Infrared spectroscopy OD Optical Density PAGE Polyacrylamide gel electrophoresis PBS Phosphate buffered saline Ig Immunoglobulin RNA Ribonucleic axit GPS 3-Glycidyloxypropyl imethoxysilane IMS Immuno magnetic separation TEA Triethylamine TEM Transmission Electron Microscope TEOS Tetraethyl orthosilicate XRD X-ray diffraction VSM Vibrating Specimen Magnetometer SDS Sodium dodecyl sulfate TSA Tryticase Soya Agar XLD Xylose Lysine Desoxycholate TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Hƣớng dẫn khoa học: PGS TS Trần Hoàng Hải DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Đƣờng cong từ hóa vật liệu siêu thuận từ .14 Hình 1.2 Sự định hƣớng hạt siêu thuận từ 16 Hình 1.3 Hình dạng chất lỏng từ .17 Hình 1.4 Cấu trúc silica bề mặt hạt từ .19 Hình 1.5 Cấu tạo phân tƣ̉ APTES 19 Hình 1.6 Ngun lí dẫn thuốc dùng hạt nano từ tính 21 Hình 1.7 Sơ đồ phân tách tế bào đơn giản 23 Hình 1.8 Cấu trúc IgG 25 Hình 1.9 Kĩ thuật ELISA có sử dụng hạt nano từ 26 Hình 1.10 Mô tả cấu trúc Virus Dengue 27 Hình 1.11 Cơ chế hình thành hạt nano 29 Hình 1.12 Sơ đồ trình thủy phân ngƣng tụ TEOS 30 Hình 1.13 Sơ đồ phản ứng gắn APTES lên hạt nano Fe3O4@SiO2 30 Hình 1.14 Phƣơng pháp tách miễn dịch từ (IMS) 31 Hình 1.15 Các tình xảy kháng thể đƣợc gắn ngẫu nhiên vào pha rắn 32 Hình 2.1 Mẫu γ-Fe3O4 Fe3O4 sau sấy nghiền mịn 37 Hình 2.2 Cơ chế cộng hợp kháng thể lên hạt từ 42 Hình 3.1 Phổ hấp thu hồng ngoại FT-IR mẫu hạt nano oxit sắt Fe3O4 trần 45 Hình 3.2 Giản đồ XRD mẫu nano oxit sắt Fe3O4 (F2) 45 Hình 3.3 Ảnh TEM mẫu hạt nano oxit sắt F2 46 Hình 3.4 Phổ hồng ngoại mẫu FS 47 Hình 3.5 Ảnh TEM mẫu với lƣợng TEOS 0,6 ml FS6; 0,4 ml FS4; 0,2 ml FS2 48 Hình 3.6 Ảnh TEM mẫu với lƣợng TEOS 0,2ml FS2; 0,1ml FS1; 0,05ml FS05 49 Hình 3.7 Phổ từ kế mẫu rung – VSM mẫu F2 khảo sát với mẫu FS4, FS2, FS1 50 Hình 3.8 VSM mẫu F2, FS FSA 51 Hình 3.9 TGA mẫu hạt FS .52 Hình 3.10 TGA mẫu hạt FSGA 53 Hình 3.11 Phƣơng pháp phân tích Gel Western blot kháng thể NS3 54 Hình 3.12 Miễn dịch huỳnh quang kháng thể NS3-DN3 Tỷ lệ 1:5000 55 Hình 3.13 Đồ thị đƣờng chuẩn kháng thể NS3 56 Hình 3.14 Đồ thị đƣờng chuẩn Glypican .58 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Hƣớng dẫn khoa học: PGS TS Trần Hoàng Hải MỤC LỤC CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 13 1.1 Tổng quan hạt nano từ 13 1.1.1 Vật liệu từ 13 1.1.2 Tính chất hạt nano oxit sắt từ 14 1.1.2.1 Tính chất vật liệu nano 14 1.1.2.2 Vật liệu nano từ .14 1.2 Tính siêu thuận từ oxit sắt từ Fe3O4 15 1.3 Chất lỏng từ 16 1.3.1 Khái niệm 16 1.3.2 Đặc trƣng chất lỏng từ 17 1.3.3 Từ độ chất lỏng từ 18 1.4 Các lớp bề mặt hạt nano oxit sắt Fe3O4 18 1.4.1 Bọc silica lên bề mặt hạt nano oxit sắt 18 1.4.2 Phủ 3-aminopropyltriethoxysilane (APTES) lên hạt nano Fe3O4 @SiO2 19 1.4.3 Các hạt nano Fe3O4 @SiO2/NH2 đƣợc hoạt hóa glutaraldehyde 20 1.5 Ứng dụng hạt nano composite siêu thuận từ lĩnh vực y sinh học 20 1.5.1 Dẫn truyền thuốc 20 1.5.2 Phƣơng pháp đốt nhiệt từ .21 1.5.3 Chẩn đoán dịch bệnh 22 1.5.4 Phân tách chọn lọc tế bào 22 1.6 Chất sinh miễn dịch – kháng nguyên 24 1.7 Kháng thể 24 1.8 Chẩn đốn sớm xác bệnh truyền nhiễm phƣơng pháp ELISA có sử dụng hạt nano từ 26 1.9 Sơ lƣợc bệnh sốt xuất huyết 26 1.9.1 Giới thiệu .26 1.9.2 Đặc điểm virus gây bệnh sốt xuất huyết 27 1.10 Sơ lƣợc bệnh ung thƣ gan .28 1.11 Phƣơng pháp đồng kết tủa tổng hợp hạt nano từ Fe3O4 28 1.12 Phƣơng pháp tạo lớp bao phủ Sio2 lên hạt nano từ Fe3O4 29 1.13 Phƣơng pháp chức hóa bề mặt hạt nano Fe3O4@SiO2 VỚI APTES 30 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Hƣớng dẫn khoa học: PGS TS Trần Hoàng Hải 1.14 Phƣơng pháp tách miễn dịch từ (IMS) 31 1.15 Phƣơng pháp cố định kháng thể vào giá rắn .31 1.16 Phƣơng pháp xác định hàm lƣợng protein theo Bradford 32 1.17 Các phƣơng pháp phân tích .33 1.17.1 Phân tích cấu trúc phổ nhiễu xạ tia X 33 1.17.2 Phổ hấp thụ hồng ngoại .33 1.17.3 Từ kế mẫu rung 33 1.17.4 Kính hiển vi điện tử truyền qua (TEM) .34 1.17.5 Phổ tử ngoại khả kiến 34 1.17.6 Phân tích nhiê ̣t tro ̣ng lƣơ ̣ng (TGA) .34 CHƢƠNG 2: PHƢƠNG PHÁP THỰC NGHIỆM .36 2.1 Vật liệu 36 2.2 Hóa chất .36 2.3 Tổng hợp hạt trần nano oxít sắt từ fe3o4 phƣơng pháp đồng kết tủa 37 2.4 Quy trình tổng hợp hạt ơxít sắt bọc SiO2 38 2.5 Chức hóa bề mặt hạt nano Fe3O4@SiO2 với aptes glutaraldehyde 39 2.6 Kiểm tra độ tinh thể kháng thể phƣơng pháp điện di gel polyacrylamide 12%–SDS 39 2.7 Xác định nồng độ kháng thể phƣơng pháp Bradford 40 2.8 Cộng hợp kháng thể lên hạt từ 41 2.9 Xác định hiệu suất cộng hợp .42 2.10 Phƣơng pháp tách miễn dịch từ (IMS) 42 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ ĐỀ NGHỊ .44 3.1 Tổng hợp hạt nano oxit sắt Fe3O4 (F2) .44 3.1.1 Phân tích liên kết phổ hấp thụ hồng ngoại FT – IR .44 3.1.2 Phân tích cấu trúc tinh thể phổ nhiễu xạ tia X 45 3.1.3 Phân tích hình thái kích thƣớc hạt ảnh hiển vi điện tử truyền qua (TEM) 46 3.2 Khảo sát lớp vỏ bọc silica mẫu F2 .46 3.2.1 Phân tích liên kết phổ FT – IR với mẫu FS 47 3.2.2 Khảo sát lƣợng TEOS nhỏ vào 48 3.2.3 Phổ từ kế mẫu rung – VSM mẫu hạt từ F2, FS1, FS2, FS4 .49 3.2.4 So sánh phổ từ kế mẫu rung – VSM mẫu hạt từ trƣớc sau chức hóa bề mặt 50 3.2.5 Phƣơng pháp nhiệt trọng lƣợng TGA 51 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Hƣớng dẫn khoa học: PGS TS Trần Hoàng Hải 3.3 Ứng dụng hạt nano từ tính với lớp kháng thể trê bề mặt ứng dụng chẩn đoán bệnh truyền nhiễm .53 3.3.1 Chẩn đoán bệnh bệnh sốt xuất huyết với kháng thể NS1 53 3.3.1.1 Xác định thành phần protein kháng huyết thƣơng mại phƣơng pháp điện di SDS-PAGE 10% 53 3.3.1.2 Miễn dịch huỳnh quang với kháng thể thƣơng mại NS3 54 3.3.2 Khảo sát chọn nồng độ kháng thể NS3 liên kết vào hạt từ 55 3.3.2.1 Độ hấp thu kháng thể NS3 55 3.3.2.2 Chọn nồng độ kháng thể NS3 liên kết vào hạt từ 56 3.3.2.3 Khảo sát đối chứng kết xét nghiệm ELISA có sử dụng hạt nano từ với kết Viện Pasteur Viện Y tế cộng đồng 57 3.3.3 Chẩn đoán ung thƣ gan với Glypican 58 3.3.3.1 Gắn Glypican lên hạt từ .58 3.3.3.2 Khảo sát đối chứng kết xét nghiệm ELISA có sử dụng hạt nano từ với kết siêu âm gan Bệnh viện Ung bứu Cần Thơ .59 3.4 Kết luận chung .60 3.5 Kiến nghị .60 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Hƣớng dẫn khoa học: PGS TS Trần Hoàng Hải DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 1.2 Một số giá trị lực kháng từ số vật liệu từ tiêu biểu 16 Bảng 2.1 Danh mục hóa chất sử dụng thực nghiệm 37 Bảng 3.1 Khảo sát lƣợng TEOS nhỏ vào mẫu FS6, FS4, FS2 48 Bảng 3.2 Khảo sát lƣợng TEOS nhỏ vào mẫu FS2, FS1, FS05 48 Bảng 3.3 Độ từ hóa bão hịa mẫu FS1, FS2 FS4 50 Bảng 3.4 Độ hấp thu kháng thể NS3 .55 Bảng 3.5 Hiệu suất cộng hợp kháng thể hạt từ .56 Bảng 3.6 Kết xét nghiệm ELISA có sử dụng hạt nano từ với kết Viện Pasteur .57 Bảng 3.7 Kết xét nghiệm ELISA có sử dụng hạt nano từ với kết Viện y tế cộng đồng 57 Bảng 3.8 Độ hấp thu 595 mẫu Glypican chuẩn 58 Bảng 3.9 Hiệu suất bám dính Glypican số cấu trúc hạt nano .58 Bảng 3.10 Kết xét nghiệm ELISA có sử dụng hạt nano từ với kết Bệnh viện ung bứu Cần Thơ 59 10 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Hƣớng dẫn khoa học: PGS TS Trần Hoàng Hải Loại kháng thể IgG1 Điện di SDS–PAGE 12% để xác định thành phần protein kháng huyết thƣơng mại – Kháng thể đối NS3 nhận biết đƣợc loại virút sốt xuất huyết (16681 với NGC) – Kháng nguyên virut chất nhị trùng (dimer) nên ko tách (bằng cách đun sơi) trọng lƣợng phân tử gấp đôi (khoảng 80K dalton; kháng nguyên nặng khoảng 40,08K dalton Chiết xuất toàn tế bào virút Dengue type nhiễm tế bào BHK-21 Dãy 1: Đối chứng dƣơng protein abumin, kiểm tra khả hoạt động hệ chạy ổn định  Dãy 2: Kháng thể NS3, 75kD Dãy 3: Đối chứng âm Hình 3.11 Phương pháp phân tích Gel Western blot kháng thể NS3 3.3.1.2 Miễn dịch huỳnh quang với kháng thể thƣơng mại NS3 Đầu tiên bôi (stain) tế bào bị nhiễm NS3 cytofix/cytoderm để tế bào sáng lên Ngâm dung dịch với kháng thể đối NS3 Kháng thể đơn dòng từ chuột, nên sau cho kháng thể bám vô tế bào bị truyền nhiễm, đem ngâm thêm dung dịch kháng thể thứ Kháng thể thứ bám vô tế bào mơ có kháng thể chuột Kháng thể thứ đƣợc nhuộm thêm Alexa fluoro  Nồng độ, hiệu suất hoạt động kháng thể 95% 54 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Hƣớng dẫn khoa học: PGS TS Trần Hoàng Hải Xanh dương nhân tế bào BHK-21 Xanh tế bào bị nhiễm NS3 Hình 3.12 Miễn dịch huỳnh quang kháng thể NS3-DN3 Tỷ lệ 1:5000 3.3.2 Khảo sát chọn nồng độ kháng thể NS3 liên kết vào hạt từ 3.3.2.1 Độ hấp thu kháng thể NS3 Từ mẫu chuẩn suy đƣợc phƣơng trình f(x) = 0,0902x + 0,003 ; R2 = 0,988, từ phƣơng trình suy đƣợc nồng độ NS3 thuộc phần NS3 (mg/ml) 0,00 0,40 0,80 1,20 1,60 2,00 Abs - 595nm 0,000 0,042 0,069 0,121 0,154 0,175 Bảng 3.4 Độ hấp thu kháng thể NS3 55 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Hƣớng dẫn khoa học: PGS TS Trần Hồng Hải Hình 3.13 Đồ thị đường chuẩn kháng thể NS3 3.3.2.2 Chọn nồng độ kháng thể NS3 liên kết vào hạt từ Mật độ kháng thể vào hạt từ yếu tố định hiệu liên kết hạt từ với vi-rút sau Theo hƣớng dẫn từ nhà sản xuất, nồng độ gắn lên hạt tối đa 400 g/ml hạt có đƣờng kính 100 nm Do đó, chúng tơi tiến hành gắn kháng thể nồng độ khác nhƣng không vƣợt nồng độ khuyến cáo nhà sản xuất Lƣợng kháng thể cần sử dụng phải tối ƣu sinh phẩm có giá thành tƣơng đối cao nhƣng phải đảm bảo khả gắn kết với hạt từ Hạt từ FS1 FS2 Kháng thể NS3 trƣớc cộng hợp A2 (µg/ml hạt) Kháng thể cộng hợp A1 (µg/ml hạt) Hiệu suất A1/A2 100 100 27.5% 200 175 87,5% 400 165 41,25% 100 87 87% 200 125 62,5% 400 110 27,5% Bảng 3.5 Hiệu suất cộng hợp kháng thể hạt từ Nhận xét: Kết cho thấy FS2 bám dính tốt với kháng thể điều kiện lượng kháng thể 200 µg/ml hạt mẫu FS1 bám dính tốt với kháng thể điều kiện lượng kháng thể 100 µg/ml hạt 56 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Hƣớng dẫn khoa học: PGS TS Trần Hoàng Hải 3.3.2.3 Khảo sát đối chứng kết xét nghiệm ELISA có sử dụng hạt nano từ với kết Viện Pasteur Viện Y tế cộng đồng Abs Mẫu (450nm) Nồng độ NS3 (ng/mL serum) Kết xét nghiệm ELISA sử dụng hạt nano từ Kết Viện Pasteur Ghi FS1AG 1106 0,222 0,52 + + Đúng FS1AG 1716 0,153 0,08 - - Đúng FS1AG 1345 0,156 0,39 - FS1AG 1405 0,156 0,52 - + Sai FS1AG 1606 0,351 0,25 + + Đúng Sai Bảng 3.6 Kết xét nghiệm ELISA có sử dụng hạt nano từ với kết Viện Pasteur Abs Mẫu (450nm) Nồng độ NS3 (ng/mL serum) Kết xét nghiệm ELISA sử dụng hạt nao từ Kết Viện Y tế cộng đồng Ghi FS2AG 132 0,102 0,32 + + Đúng FS2AG 176 0,133 0,16 - - Đúng FS2AG 135 0,156 0,24 + - Sai FS2AG 148 0,150 0,42 - - Đúng FS2AG 161 0,313 0,28 + + Đúng Bảng 3.7 Kết xét nghiệm ELISA có sử dụng hạt nano từ với kết Viện y tế cộng đồng Nhận xét: - Gắn kháng thể NS1 lên hạt từ để chẩn đoán bệnh sốt xuất huyết - Kết so sánh với xét nghiệm Viện Pasteur trùng khớp 60% - Kết so với xét nghiệm Viện Y tế cộng đồng trùng khớp 80% 57 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Hƣớng dẫn khoa học: PGS TS Trần Hồng Hải 3.3.3 Chẩn đốn ung thƣ gan với Glypican 3.3.3.1 Gắn Glypican lên hạt từ Glypican (ng/mL) 0,00 1,60 4,00 6,40 8,00 16,00 32,00 64,00 Abs-595nm 0,000 0,075 0.130 0.193 0.275 0.5 1.001 1.685 Bảng 3.8 Độ hấp thu mẫu Glypican chuẩn Từ mẫu chuẩn suy đƣợc phƣơng trình f(x) = 0,0266x + 0,0439 ; R = 0,9919, từ phƣơng trình suy đƣợc nồng độ Glypican thuộc phần Hình 3.14 Đồ thị đường chuẩn Glypican Cấu trúc Nồng độ Glypican (ng/mL) Độ hấp thu 595nm Glypican3 không dính (ng/mL) Tỷ lệ dính (%) 30 FS2SAG 65,00 0,467 15,91 75,52 30 FS05SAG 65,00 0,741 26,23 59,65 30 FS4AG 65,00 1,340 48,75 25,00 30 FS1aAG 65,00 0,973 34,95 46,23 30 FS1AG 65,00 0 100 30 FS2aAG 65,00 0,245 7,57 88,35 Hạt nano (mg) Bảng 3.9 Hiệu suất bám dính Glypican số cấu trúc hạt nano 58 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Hƣớng dẫn khoa học: PGS TS Trần Hoàng Hải 3.3.3.2 Khảo sát đối chứng kết xét nghiệm ELISA có sử dụng hạt nano từ với kết siêu âm gan Bệnh viện Ung bứu Cần Thơ Kết xét nghiện 14 mẫu bệnh phẩm Bệnh viện Ung Bƣớu Cần Thơ cung cấp phƣơng pháp ELISA có sử dụng hạt nano từ Mẫu Abs (450nm) Nồng độ Glypican3 (ng/mL serum) Kết xét nghiệm ELISA có sử dụng hạt nano từ Kết siêu âm gan Ghi 0,383 1,286 + + Đúng 0,537 1,863 + + Đúng 0,287 0,926 + + Đúng 0,351 1,167 + + Sai 0,222 0,683 – – Đúng 0,153 0,424 – – Đúng 0,156 0,436 – – Đúng 0,442 1,507 + – Sai 0,178 0,52 – + Sai 10 0,016 0,08 – – Đúng 11 0,144 0,39 – – Đúng 12 0,551 1,916 + – Sai 13 0,294 0,953 + + Đúng 14 0,540 1,875 + + Đúng Bảng 3.10 Kết xét nghiệm ELISA có sử dụng hạt nano từ với kết Bệnh viện ung bứu Cần Thơ Kết luận: – Gắn kháng thể Glypican lên hạt từ chẩn đoán bệnh ung thư gan – Kết so sánh với kết siêu âm gan Bệnh viện Ung bứu Cần Thơ: có 10/14 cho kết – Hiệu suất cho kết 70%  KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 59 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Hƣớng dẫn khoa học: PGS TS Trần Hoàng Hải 3.4 Kết luận chung Kết luận 1: TỔNG HỢP CÁC HẠT NANO TỪ TÍNH Thử nghiệm tổng kết quy trình tối ƣu bọc silica (SiO2) lên hạt nano oxit sắt Fe3O4 với dạng hình cầu, có kích thƣớc 20nm độ từ hóa bão hịa sau bọc SiO2 tƣơng đối cao 46 emu/g Lớp phủ SiO2 đồng đều, ổn định mỏng Gắn đƣợc APTES, Glutaraldehyde lên bề mặt hạt nano Kết luận 2: GẮN KHÁNG THỂ LÊN HẠT TỪ ỨNG DỤNG ĐỂ CHẨN ĐOÁN BỆNH TRUYỀN NHIỄM Gắn đƣợc kháng thể NS1 lên hạt từ để chẩn đốn bệnh sốt xuất huyết đạt hiệu suất xác 60% - 80 % Gắn đƣợc kháng thể Glypican lên hạt từ chẩn đoán bệnh ung thƣ gan đạt hiệu xuất xác 70% 3.5 Kiến nghị Trong giai đoạn nghiên cứu cần đƣợc tiếp tục Đo đạc thêm 1H-NMR, XPS để xác định cấu trúc hóa học nhƣ liên kết chất hữu bề mặt hạt bao gồm APTES, Glutaraldehyde Sử dụng hạt từ để gắn thêm số kháng thể để chẩn đoán bệnh truyền nhiễm cho kết lâm sàng 60 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Hƣớng dẫn khoa học: PGS TS Trần Hoàng Hải TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Bs Lê Xuân Thủy, Cách phòng bệnh Sốt xuất huyết Cục y tế dự phòng, Bộ y tế, 2015 Gs Phạm Hoàng Phiệt, Miễn dịch – sinh lý bệnh NXB Y học TP.HCM Nguyễn Thị Nguyệt Thu Tách chiết, phân tích aflatoxin thực phẩm dƣợc liệu sắc kí lực miễn dịch sắc kí lỏng hiệu cao Trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội, 2011 PGS TS Nguyễn Hoàng Hải, Ứng dụng hạt nano từ tính oxit sắt Khoa Vật lý, Trƣờng ĐH Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội Phan Văn Bé Bảy, Hoàng Tiến Mỹ Elisa to detect NS1 antigen for the diagnosis of Dengue fever and Dengue haemorrhagic fever Y học thành phố Hồ Chí Minh *Vol.13 – Supplement of No1-2009: 249-255 Phòng Xét nghiệm Y khoa NK-BIOTEK Xét nghiệm phát định type Dengue để chẩn đoán sớm Sốt Dengue Sốt xuất huyết Dengue, 2009 TIẾNG ANH Composed by J B Calvert, The metal of Mars gives us magnetism and life, 2002 Chen, J.P., et al., Targeted delivery of tissue plasminogen activator by binding to silica-coated magnetic nanoparticle Int J Nanomedicine, 2012 7: p 5137-49 Chikazumi S., B.J., Physics of Ferromagnetism Oxford: Clarendon Press, 1997: p 655 10 Christian Pfeiffer, Christoph Rehbock, Dominik Hühn, Carolina Carrillo-Carrion, Dorleta Jimenez de Aberasturi, Vivian Merk, Stephan Barcikowski, Wolfgang J Parak, Interaction of colloidal nanoparticles with their local environment: the (ionic) nanoenvironment around nanoparticles is different from bulk and determines the physicochemical properties of the nanoparticles, 2014 11 Epidemic and Pandemic Alert and Response (EPR)/WHO Dengue/dengue haemorrhagic fever, 2015 12 Gao, S., et al., Synthesis and Characterization of Fe(10)BO3/Fe3O4/SiO2 and GdFeO3/Fe3O4/SiO2: Nanocomposites of Biofunctional Materials ChemistryOpen, 2013 2(3): p 88-92 13 Gilchrist R K, Medal R, Shorey W D, Hanselman R C, Parrott J C and Taylor C B 1957 Selective inductive heating of lymph nodes Ann Surg 146 596–606 14 Granov A M, Muratov O V and Frolov V F Problems in the local hyperthermia of inductively heated embolized tissues Theor Foundations Chem Eng 36 63–6, 2002 61 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Hƣớng dẫn khoa học: PGS TS Trần Hoàng Hải 15 Greg T Hermanson, A.K.M., Paul Keith Smith, Immobilized Affinity Ligand Techniques Academic Press 1992 16 Jatin M Vyas, MD, PhD, Associate Professor in Medicine, Harvard Medical School; Assistant in Medicine, Division of Infectious Disease, Department of Medicine, Massachusetts General Hospital, Boston, MA, MedlinePlus Medical Encyclopedia Dengue Hemorrhgic Fever, 2014 17 Jaime Eduardo Castellanos, Carolina Coronel-Ruiz, Dengue disease diagnosis: A puzzle to be solved 2014 18 J Pan and Q Yang, Antibody-funtionalized magnetic nanoparticles for the detection of carcinoembryonic antigen using a flow-injection electrochemical device Analytical and Bioanalytic Chemistry, 2007 388(1): p 279-286 19 Joan Estelrich 1, Elvira Escribano 2, Josep Queralt and Maria Antònia Busquets, Iron Oxit Nanoparticles for Magnetically-Guided and Magnetically-Responsive Drug Delivery, International Journal of Molecular Sciences, Int J Mol Sci 2015 16, 8070-8101 20 Ki Do Kim, et al., Formation and surface Modification of Fe3O4 Nanoparticles by Co – Precipitation and Sol-gel Method J Ind Eng Chem, 2007 13 21 Laval J M., Mazeran P.E., and Thomas D, Nanotechnology and its role in the development of new analytical devices 2000 Analyst 125(1): p 29-33 22 Leslie-Pelecky D., et al., Nanobiomagnetics in Nanostructures, D.J Sellmyer and R.S Skomski, 2005 Advanced Magnetic 23 Ling Sun, Shuchao Hu, Hongmei Sun, Huiling Guo, Hongda Zhu, Mingxing Liu and Honghao, Sun Malachite green Adsorption onto Fe3O4@SiO2-NH2: Isotherms, Kinetic and Process Optimization, 2012 24 Lide, David CRC Handbook of Chemistry and Physics 2000 25 Media Center/WHO Dengue and dengue haemorrhagic fever, may 2015 26 M Tajabadi, M.E Khosroshahi, New Finding on Magnetite Particle Size Reduction by Changing Temperature and Alkaline Media Concentration, APCBEE Procedia, 3, 140-146, 2012 27 M.Yamaura, R.L Camilo, L.C Sampaio, M.A Macedo, M.Nakamura, H.E Toma, Preparation and characterization of (3-aminopropyl) triethoxysilane-coated magnetite nanoparticles, Journal of Magnetism and Magnetic Materials 279 (2004) 210–217, 2004 28 M S Krakov (1993), Magnetic fluid, Oxford University press, New York 29 Normile D Tropical medicine Surprising new dengue virus throws a spanner in disease control efforts Science 342 (6157): 415, 2013 30 Ozaki., M., Formation of Magnetic Particles, in Fine Particles T Sugimoto, Ed New York: Marcel Dekker, Inc., p 662-682, 2000 31 Pankhurst, Q.A., J Connolly, S.K Jones, and J Dobson, 36 (2003) R167.], J Phys., D: Appl Phys, 2003 36: p 167 62 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Hƣớng dẫn khoa học: PGS TS Trần Hoàng Hải 32 P Davies, J Popplewell, G Martin and R.W Chantrell, Monte Carlo simulation of the sttrure of magnetic fluid composites, Appl Phý., 19(469), 1986 33 Perry, R; Green D, Maloney J Perry's Chemical Engineers' Handbook Book Company 1984 34 Perera R, Kuhn RJ Structural proteomics of dengue virus Current Opinion in Microbiology 11 (4): 369–77, 2008 35 Thermo Scientific Crosslinking Technical Handbook Picercenet 36 Q.A Pankhurst, J Connolly, S K Jones and J Dobson , Application of magnetic nanoparticles in biomedicine, Appl Phys., 36(13), p167-181, 2003 37 Reilly J P., Principles of nerve and heart excitation by time-varying magnetic fields Ann New York Acad Sci 649 96–117, 1992 38 Rosensweig R E, Heating magnetic fluid with alternating magnetic field J Magn Magn Mater 252 370–4, 2002 39 R Khatiri, A Reyhani, S.Z Mortazavi, M Hossainalipour, Immobilization of serum albumin on the synthesized three layers core–shell structures of superparamagnetic iron oxit nanoparticles, Journal of Industrial and Engineering Chemistry, 19, 1642-1647, 2013 40 Rodenhuis-Zybert IA, Wilschut J, Smit JM "Dengue virus life cycle: viral and host factors modulating infectivity" Cell Mol Life Sci 67 (16): 2773–86, 2010 41 Safarík I1, Safaríková M, Forsythe SJ The application of magnetic separations in applied microbiology, J Appl Bacteriol.;78(6):575-85, 1995 42 Senyei A, W.K.a.C.C., Magnetic guidance of drug carrying microspheres J.Appl Phys., 49 p 3578–83, 1978 43 U, M.K.a.S.o., Preparation and application of magnetic polymers for targeting of drugs FEBS Lett 102 p 112–6, 1979 44 Whitesides G M and Zhang X , Enviroment technology Nat biotech, 2003 21: p 1161-1165 45 Xiang-Hong Peng, Ximei Quian, Hui Mao A Y Wang, Zhuo (Georgia) Chen, Shuming Nei, D M Shin, Targeted magnetic iron oxit nanoparticles for tumor imaging and therapy, International Joural of Nanomedicine, p1311-p321, 2008 46 Xianqiao Liu, Zhiya Ma, Jianmin Xing, Huizhou Liu, Preparation and characterization of amino–silane modified Superparamagnetic silica nanospheres, Journal of Magnetism and Magnetic Materials 270 (2004) 1–6], 2004 47 X Xue, J Wang, L Mei, Z Wang, K Qi, B Yang, Recognition and enrichment specificity of Fe3O4 magnetic nanoparticles surface modified by chitosan and Staphylococcus aureus enterotoxins A antiserum, Colloids Surf B Biointerfaces, 103, 107-13, 2013 48 X Wang, G Zhou, H Zhang, S Du, Y Xu, C Wang, Immobilization and catalytic activity of lipase on mesoporous silica prepared from biocompatible gelatin organic template, Journal of Non-Crystalline Solids, 357, 3027-3032, 2011 63 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Hƣớng dẫn khoa học: PGS TS Trần Hoàng Hải 49 X.C Shen, X.Z Fang, Y.H Zhou, H Liang, Synthesis and characterization of 3amino propyl triethoxy silane - modified super paramagnetic magnetite Nanoparticles, Chemistry Letters, 33, 1468-1469, 2004 50 Weiwei Huang, Xin Yang, Song Zhao, Min Zhang, Xinglong Hu, Jing Wang and Haitian Fast and selective recognizes polysaccharide by surface molecularly imprinted film coated onto aldehyde-modified magnetic nanoparticles Zhao, Analyst, 2013 51 WHO Dengue haemorrhagic fever: diagnosis, treatment, prevention and control WHO 2nd Edition (1997) 52 Yunkai Zhu, Ying Sun, Yaqing Chen, Weiyong Liu, Jun Jiang, Wenbin Guan, Zhongyang Zhang and Yourong Duan, In Vivo Molecular MRI Imaging of Prostate Cancer by Targeting PSMA with Polypeptide-Labeled Superparamagnetic Iron Oxit Nanoparticles, Int J Mol Sci 2015, 16, 9573-9587 NGUỒN INTERNET 53 http://www.dieutri.vn/truyennhiem/25-4-2011/S203/Benh-truyennhiem.htm#ixzz3unnvQW1X 54 http://www.who.int/csr/disease/dengue/en/ 55 http://www.bc.edu/schools/cas/biology/research/insect/dengue 56 http://www.ipt.acr.nasa.gov/nanotechnology.html 57 https://www.lifetechnologies.com/vn/en/home/life-science/protein-biology/proteinbiology-learning-center/protein-biology-resource-library/pierce-proteinmethods/covalent-immobilization-affinity-ligands.html 64 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Hƣớng dẫn khoa học: PGS TS Trần Hoàng Hải PHỤ LỤC Một số ứng dụng hạt nano từ tính Bảng 1: Hạt nano từ tính bao bọc polymer tự hủy sinh học Chất mang Ứng dụng sinh học Dẫn thuốc Erythrocytes Tách tế bào Liposomes Dẫn thuốc Phospholipids Cố định enzym Dẫn thuốc Albumin Tách tế bào Dẫn thuốc Starch MRI Xạ trị Poly(lactic axit) Xạ trị Tách tế bào Cố định enzym Dextran MRI Đốt nhiệt từ Dẫn thuốc Chitosan Dẫn thuốc Polyalkylcyanoacrylate Dẫn thuốc Polyethylene imine Dẫn thuốc 65 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Hƣớng dẫn khoa học: PGS TS Trần Hồng Hải Bảng 2: Hạt nano từ tính bao bọc polymer thƣờng Chất mang Ứng dụng Ethyl-cellulose Thâm nhập động mạch Polymers tổng hợp: Polystyrene Tách tế bào, siêu vi, kí sinh trùng Polymethylmetacrylate Bảng 3: Một số loại polymer thƣờng dùng để chức hóa bề mặt hạt nano từ tính Loại polymer Ứng dụng Polyethylene glycol Tăng thời gian lƣu thơng hệ tuần hồn Dextran Tăng thời gian lƣu thơng hệ tuần hồn Polyvinylpyrrolidone Tăng thời gian lƣu thơng hệ tuần hồn Fatty axits Ổn định hệ huyền phù, cung cấp nhóm carboxyl Polyvinyl alcohol (PVA) Giúp hạt đồng Polyacrylic axit Tƣơng hợp sinh học Polypeptides Sinh học tế bào, dẫn thuốc Phosphorylcholine Ổn định hệ huyền phù Poly (D, L- lactide) Tƣơng hợp sinh học Poly(N-isopropylacryl amide) Dẫn thuốc, tách tế bào Chitosan Ứng dụng nhiều nông nghiệp, dƣợc phẩm Gelatin Tƣơng hợp sinh học 66 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Hƣớng dẫn khoa học: PGS TS Trần Hoàng Hải Bảng 4: Thống kê kết xét nghiệm so sánh kết (độc lập) bệnh viện Ung Bƣớu Cần Thơ 67 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Hƣớng dẫn khoa học: PGS TS Trần Hoàng Hải Nhận xét bảng 4: Số mẫu lần 1: 14 mẫu (6 mẫu lâm sàng nghi K) Số mẫu lần 2: 33 mẫu (8 mẫu lâm sàng nghi K) Tổng số mẫu lâm sàng nghi K 14 mẫu/ 47 trƣờng hợp Trong đó: số trƣờng hợp có số GPC3 cao (> 1.0) 7/ 14 trƣờng hợp: 50 %  dƣơng thật: 50 % Số trƣờng hợp có số GPC3 thấp ( 1.0) 16/33 trƣờng hợp 48,48 %  dƣơng giả 48,48 % Số trƣờng hợp có số GPC3 thấp (