1 DAT VAN DE
Coenzyme Qio (CoQio) 1a mot trong những loại coenzyme tham gia vào chuỗi vận chuyển điện tử ở màng tế bào của sinh vật nhân sơ và lớp màng trong ty thể của sinh vật nhân chuẩn, được cấu tạo bởi
vòng benzoquinone và chuỗi isoprenoid kị nước Do có vai trò quan trọng trong việc sản xuất ra ATP - nguồn năng lượng sinh học của cơ thê và là chất chống oxy hóa mạnh, CoQ¡o ngày càng được sử dụng nhiều làm nguồn thực phẩm chức năng, giúp cải thiện sức khỏe và được đưa vào các mỹ phâm làm đẹp như một chất chống oxy hóa, chống lão hóa đê giúp cơ thể trẻ hóa và ngăn ngừa ung thư do tính chất trung hòa các gốc tự do
Trên thế giới, CoQ¡o được sản xuất chủ yếu
bằng con đường sinh học nhờ vi sinh vật Các chủng
vi sinh vật trong tự nhiên có khả năng sinh tổng hợp CoQ¡o xuất hiện ở cả vi khuẩn (Agrobacterium,
Agromonas, Paracoccus, Pseudomonas, Rhizobium, Rhodobacter, Rhodospirill um ) va nam (Asperillus, Bullera, Bulleromyces, Cyptococcus, Fellomyces, Kockovaella, Rhodoturola,
Utilago ) (Yajima va cOng sy, 2003) Trước đây, các nghiên cứu về sinh tông hợp CoQio chủ yếu tập Sporobolomyces,
trung ở các chủng vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens, Paracoccus denitrificans va Rhizobium radiobacter, Rhodobacter sphaeroides, Rhodobacter sulfidophilus, Rhodopseudomonas spheroids , (Ha va cong sur, 2007; Sakato va cOng su, 1992; Urakami va Yoshida, 1993; Wu va cộng sự, 2003) Trong nhimg nam gan day, nấm men là đối tượng mới được quan tâm, sản xuất CoQ\o từ nấm men có ưu điểm nồi bật so với vi khuẩn vì một số đặc điểm như môi trường nuôi cấy đơn giản, có thể nuôi cấy bằng
quy mô công nghiệp trong các nỗi lên men lớn và dễ
¿ửj)
- 7 + 5 : ã
a yeeene PTE BRM PHAN LOẠI oUA CAC CHUNS NAM Y OATS ruben ortzipTe MARS
110 PHAN LAP G VIET NAM
Đào Thị Lương, Trân Thị Lệ Quyên Viện Vi sinh vật và CNSH-Dai hoe Quốc Gia Hà Nội
tách chiết (Cheng và cộng su, 2010; Kawamukai, 2009; Ye, 2009)
Bảo tàng giống chuẩn Vi sinh vật (Viện Vi sinh vật và Công nghệ Sinh học) có bộ giếng nắm men
rất phong phú, được phân lập tại Việt Nam Trong đó, nhiều chủng có ubiquinon chủ yếu là CoQ10 Từ
đó, mở ra một hướng mới với nội dung tìm kiếm,
nghiên cứu và phát triển các chủng nấm men sinh CoQ10 để sản xuất theo hướng công nghiệp nhằm ứng dụng trong lĩnh vực y học và mỹ phẩm
II NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 2.1 Nguyên liệu
Thuyết Nguồn vỉ sinh vật
- Nắm men: 80 chủng thuộc 12 chi (Bullera,
Candida, Cryptococcus, Dexomyces, Hannaella, Pseudozyma, Rhodosporium, Rhodotorula, Sporobolomyces, Sympodiomycopsis, Trichosporon và Usiilago) được lưu giữ tại Bảo tàng giống chuẩn Vi sinh vật — Viện Vi sinh vật và Công nghệ Sinh học
2.1.2 Môi trường nghiên cứu
- Môi trường YM (g/l): glucoza-10, pepton-5, cao men-3, cao malt-3, thạch-18, thạch- 15,0; nước cất" vừa đủ- llít; pH= 6,0; khử trùng 121°C/15 phút
- Môi trường YM dịch thể: Có thành phần như trên
ngoại trừ thạch
2.2 Phương pháp nghiên cứu
2.2.1 Phương pháp tuyển chọn nắm men sinh CoQ10
- Nuôi nắm men trên môi trường đĩa thạch YM ở
25°C trong 1 tuần, gạt lấy phần sinh khối
- Nuôi nấm men trên môi trường YM dịch thể ở 25°C, lắc 200v/ph trong 4 ngày Ly tâm 5000 v/ph
trong 30 phút, thu sinh khối J Genetics and Applications — Special Issue: Biotechnology
Trang 2- Tach chiét, tinh Sạch CoQ10 theo mô tả của Kondo và cộng sự (1973) Định lượng CoQio bằng HPLC theo phương pháp của Nakase và Suzuki (1986) 2.2.2 Phương pháp phân ieui
- Xác định các đặc điển hình thái: Theo phương pháp của Yarrow (1998)
- Phân tích trình tự và xây dựng cây phát sinh chủng
Sổ 5 — 2000 khảo dùng trong nghiên cứu cây phát sinh chủng
loại được lấy từ đữ liệu của GenBank, Cây phát sinh
được xây dựng theo Kimura (1980), sử dụng phương phap cta Saitou va Nei (1987), phan tich bootstrap (Felsenstein, 1985) được thực hiện từ 1000 lần lặp lại ngẫu nhiên,
Ill KET QUA VA THAO LUAN co is | loại: Trình tự đoạn D1/D2 của ADNr 26S được xác 3.1 Tuyển chọn nắm men sinh CoQ10 L định theo phương pháp của Kurtman và Robnett
80 chủng nắm men có CoQ¡o được nuôi trong (1997), sử dụng phần mềm CLUSTAL X của môi trường thạch YM, thu sinh khối, tách chiết và ie
Thompson va Cộng sự (1997) Các trình tự tham xác định hàm lugng CoQio, s } Ỷ CƯ i li f Ầ Hình 1 Sắc kí đồ CoQg _ A, CoQio chudn (0,2 mg/ml); B, chủng DN2.3 > + z + a oA z Bang 1 CoQ;ạ của các ching nam men nghién ciru
; Số lượng S6 ching cé ham luoug CoQio* ¬
Chi ching Cao
Trung binh Thap a Candida 1 0 1 0 , : Sympodiomycopsis 1 0 0 1 = i Bullera_ 2 0 1 I _ Ustilago .2 0 1 1 ' Hannaella 3 0 2 1 3 Pseudozyma 9 0 2 7 Rhodotorula 12 0 6 6 Sporobolomyces 17 0 8 9 | Dexomyces 5 I 4 0 Trichosporon - 4 1 0 3 Rhodosporium 2 4 1 a Cryptococcus 17 5 4 8 vớ) Tổng số 80 9 (11,25%) 33 (41,25%) | 38 (47,50%) ¿ *Chú thích: Cao - CoQ10 > 2,0 mg/g sinh khối; Trung binh- 2 > CoQ10 >1,0 mg/g sinh khéi: Thấp- CoQ10 > 2,0 mg/g sinh khối :
yong nnorn sana ncrsaseneeneccnnensnnane TR Ra 9
J Genetics and Applications — Special Issue: Biotechnology