PHƯƠNG PHÁP CHẨN ĐOÁN HIV TRONG PHÒNG XÉT NGHIỆM

CHẨN ĐOÁN THƯƠNG HÀN BẰNG PHẢN ỨNG WIDAL CÁC PHƯƠNG PHÁP CHẨN ĐOÁN HIV TRONG PHÒNG XÉT NGHIỆM Nguyễn Ngọc Điệp Khoa Vi sinh, bệnh viện Bạch Mai MỤC TIÊU BÀI HỌC Sau khi học xong bài này, học viên có khả năng 1 Trình bày được mục đích của xét nghiệm chẩn đoán HIV 2 Trình bày được các phương pháp chẩn đoán HIV trong phòng xét nghiệm 3 Rèn luyện tính cẩn thận, trung thực, chính xác, đảm bảo an toàn sinh học khi thực hiện xét nghiệm ĐẠI CƯƠNG ◼ HIV là vi khuẩn, virút hay ký sinh trùng ? HIV Human im.

CÁC PHƯƠNG PHÁP CHẨN ĐỐN HIV TRONG PHỊNG XÉT NGHIỆM Nguyễn Ngọc Điệp Khoa Vi sinh, bệnh viện Bạch Mai MỤC TIÊU BÀI HỌC Sau học xong này, học viên có khả năng: Trình bày mục đích xét nghiệm chẩn đốn HIV Trình bày phương pháp chẩn đốn HIV phịng xét nghiệm Rèn luyện tính cẩn thận, trung thực, xác, đảm bảo an toàn sinh học thực xét nghiệm ĐẠI CƯƠNG HIV vi khuẩn, virút hay ký sinh trùng ? HIV : Human immunodeficiency Virus Là virus gây nhiểm trùng mãn tính tiến triển chậm thuộc giống Lentivirus, họ Retrovirus ◼ ĐẠI CƯƠNG ◼ - CẤU TẠO HIV Bao (envelop) Bao (capsid) Lõi: genom enzym ĐẠI CƯƠNG ◼ Phân loại: - Theo týp huyết thanh: Có týp HIV-1 HIV- - Dưới týp ◼ Sự xâm nhập vào tế bào nhân lên HIV: - Sự hấp phụ lên bề mặt TB - Sự xâm nhập vào TB - Sự nhân lên TB ĐẠI CƯƠNG ◼ - Đường lây truyền HIV: Đường tình dục Đường máu Mẹ sang ĐẠI CƯƠNG ◼ - - - Hậu quả: Các bệnh nhiễm trùng: Lao, Mycobacterium, CMV, herpess simplex Các bệnh ung thư: Sarcoma Kaposi, U lympho giới hạn não Bệnh lý hệ thống thần kinh Bệnh lý dày-ruột MỤC ĐÍCH XÉT NGHIỆM An tồn truyền máu, cấy ghép mô, phận thể, thụ tinh nhân tạo Giám sát dịch tễ học Chẩn đoán phát nhiễm NGUYÊN TẮC XÉT NGHIỆM Đảm bảo tính bí mật, tự nguyện Cung cấp thơng tin trước tư vấn sau XN Tuân thủ chiến lược, phương cách, quy trình XN Đảm bảo chất lượng xét nghiệm an toàn sinh học Kết nối với chương trình dự phịng chăm sóc điều trị CÁC PHƯƠNG PHÁP XÉT NGHIỆM 1.Phương pháp xét nghiệm huyết thanh: phát diện kháng thể kháng HIV và/hoặc kháng nguyên HIV máu dịch tiết để xác định tình trạng nhiễm HIV người lớn trẻ em 18 tháng tuổi Bao gồm kỹ thuật sau: ◼ - Xét nghiệm HIV kỹ thuật đơn giản; ◼ - Xét nghiệm HIV kỹ thuật miễn dịch đánh dấu Phương pháp dùng xét nghiệm sinh học phân tử :phát diện ADN/ARN HIV máu dịch tiết Ưu điểm xét nghiệm miễn dịch đánh dấu CÁC KỸ THUẬT MD ĐÁNH DẤU -ƯU ĐIỂM ◼ + Thực đồng thời nhiều mẫu ◼ ◼ ◼ ◼ + Có thể dùng máy tự động giảm bớt thao tác cho người làm xét nghiệm, tránh sai sót lây nhiễm + Đọc kết máy không phụ thuộc vào chủ quan người làm xét nghiệm + Các máy hóa phát quang, điện hóa phát quang cho kết nhanh có cơng suất lớn + Có thể lưu bảng kết thông số kỹ thuật thuận lợi cho việc kiểm tra đánh giá chất lượng xét nghiệm Nhược điểm xét nghiệm miễn dịch đánh dấu CÁC KỸ THUẬT MD ĐÁNH DẤU ◼ ◼ ◼ ◼ ◼ ◼ HẠN CHẾ Cần có đầu tư cho trang thiết bị ban đầu bảo dưỡng, hiệu chuẩn, hiệu chỉnh máy móc Đối với máy miễn dịch tự động (hóa phát quang, điện hóa phát quang, miễn dịch men vi hạt) sử dụng với sinh phẩm sử dụng đồng với máy + Các sinh phẩm phải bảo quản nhiệt độ lạnh (4-8 oC) + Thời gian thực xét nghiệm ELISA từ 2-3 + Chỉ thích hợp với nơi có số lượng mẫu > 40 mẫu/ngày WESTERN-BLOT ◼ ◼ ◼ Nguyên tắc: kỹ thuật theo nguyên lý ELISA gián tiếp thực băng giấy, cho phép xác định KT kháng thành phần khác proteins vi rút Có Western blot riêng cho HIV HIV Ủ huyết mẫu thử với băng giấy Nếu mẫu thử có KT kháng HIV chúng gắn đặc hiệu lên protein KN tương ứng phát cộng hợp KT kháng Immunoglobuline người đánh dấu enzyme cho phản ứng màu với chất Vị trí băng màu tương ứng với thành phần protein virút gắn với KT đặc hiệu Chứng dương Chứng âm Mẫu bệnh nhân CÁC KỸ THUẬT SINH HỌC PHÂN TỬ TRONG XN HIV KỸ THUẬT REAL TIME PCR PHÁT HIỆN HIV - - Phát HIV-DNA provirus từ TB nhiễm Phát HIV-RNA huyết tương KỸ THUẬT PCR – LAI PHÂN TỬ PHÁT HIỆN HIV-DNA PROVIRUS CÁC KỸ THUẬT SINH HỌC PHÂN TỬ TRONG XN HIV Nguyên tắc: Phản ứng PCR kỹ thuật cho phép khuếch đại lượng nhỏ phân tử DNA đích tách chiết từ TB nhiễm tổng hợp từ RNA VR nhờ enzym chép ngược RT Dựa nguyên lý phản ứng PCR, nhiều kỹ thuật triển khai cho phép định tính, bán định lượng định lượng HIV-DNA RNA ◼ CÁC KỸ THUẬT SINH HỌC PHÂN TỬ TRONG XN HIV - Áp dụng XN phát sớm nhiễm HIV đo tải lượng VR để định theo dõi ĐT - Các kỹ thuật PCR PCR theo thời gian thực phát DNA provirus TB nhiễm HIV-RNA huyết tương để chẩn đoán sớm nhiễm HIV cho trẻ < 18 tháng XÉT NGHIỆM TRỰC TIẾP??? PHƯƠNG PHÁP XÉT NGHIỆM TRỰC TIẾP Phát kháng nguyên p24 thơng thường sử dụng trong: ◼ Chẩn đốn nhiễm HIV trẻ sơ sinh: ◼ Phát sớm giai đoạn nhiễm HIV ◼ Theo dõi diễn tiến nhiễm HIV ◼ Theo dõi đáp ứng điều trị với thuốc kháng virút ◼ Phát có nhân lên virút nuôi cấy tế bào PHƯƠNG PHÁP XÉT NGHIỆM TRỰC TIẾP ◼ PHÁT HIỆN KHÁNG NGUYÊN P24 KN p24 protein cấu thành lõi virut, bao bọc chất liệu di truyền số phản ánh nhân lên virut KN p24 tồn dạng tự phức hợp KN-KT Nguyên tắc : kỹ thuật ELISA sandwich XÉT NGHIỆM TRỰC TIẾP ◼ ◼ Phát nhiễm HIV trẻ 18 tháng tuổi Trẻ cần khẳng định sớm tình trạng nhiễm HIV để điều trị sớm không cần chờ có dấu hiệu lâm sàng suy giảm miễn dịch Phát tác nhân virút dùng trường hợp chẩn đoán sớm nhiễm HIV người lớn giai đoạn cửa sổ chưa có chuyển đổi huyết xét nghiệm phương pháp gián tiếp tìm KT có kết khơng rõ ràng ... bày mục đích xét nghiệm chẩn đốn HIV Trình bày phương pháp chẩn đốn HIV phịng xét nghiệm Rèn luyện tính cẩn thận, trung thực, xác, đảm bảo an toàn sinh học thực xét nghiệm ĐẠI CƯƠNG HIV vi khuẩn,... nhiễm HIV- RNA huyết tương để chẩn đoán sớm nhiễm HIV cho trẻ < 18 tháng XÉT NGHIỆM TRỰC TIẾP??? PHƯƠNG PHÁP XÉT NGHIỆM TRỰC TIẾP Phát kháng nguyên p24 thông thường sử dụng trong: ◼ Chẩn đoán nhiễm... chiến lược, phương cách, quy trình XN Đảm bảo chất lượng xét nghiệm an toàn sinh học Kết nối với chương trình dự phịng chăm sóc điều trị CÁC PHƯƠNG PHÁP XÉT NGHIỆM 1 .Phương pháp xét nghiệm huyết