phát hiện tần suất thiếu hụt g6pd ở dân tộc tày và dân tộc nùng bằng phương pháp bán định lượng formazan

Đặt vấn đề Glucose 6 phosphatdehydrogenase (G6PD) là một enzym ôxy hoá khử, là một enzym then chốt trong quá trình chuyển hoá Glucose theo con đờng Hexose monophosphate trong hồng cầu. Con đờng này chỉ tạo ra năng lợng không đáng kể (10%glucose tham gia vào con đờng này) nhng lại đảm nhiệm hai chức năng quan trọng là cung cấp ribose cho quá trình sinh tổng hợp các nucleotid, acid nucleic và đặc biệt tạo ra một chất khử vô cùng quan trọng là NADPH. Chất này có khả năng chống lại tác nhân gây oxy hóa, loại bỏ H 2 0 2 , giúp bảo vệ cho màng hồng cầu đựơc bền vững, bảo vệ cấu trúc của Hemoglobin, cấu trúc của các enzym có trong hồng cầu để duy trì sự sống cho tế bào hồng cầu. Bệnh thiếu hụt G6PD là một trong những bệnh lý hay gặp nhất của hồng cầu. Cơ sở di truyền học của bệnh này là đột biến gen nằm trên đầu mút tận cùng nhiễm sắc thể X ở đoạn q với các dạng đột biến khác nhau (nh Gâoh,Viangchan ) Các dạng đột biến khác nhau có thể tạo những mức độ thiếu hụt G6PD khác nhau và gây ra những biểu hịên lâm sàng khác nhau. Đây là bệnh di truyền gen lặn liên kết nhiễm sắc thể giới tính X không có alen tơng ứng trên Y nên gặp nhiều ở nam hơn ở nữ,bệnh mang tính di truyền do đó biểu hiện khác nhau ở những dân tộc khác nhau. Các nghiên cứu gần đây cho thấy những biểu hiện lâm sàng của bệnh cũng đa số xuất hiện do sử dụng các biện pháp điều trị nh thuốc hay sử dụng thức ăn có tính oxy hoá, do vậy ở vùng lãnh thổ khác nhau do tập quán sinh hoạt, thói quen và đặc điểm bệnh tật khác nhau nên tỷ lệ thiếu hụt của enzym này cũng thay đổi. Việt Nam là một trong những nớc nằm trong bản đồ thiếu hụt G6PD, với tỷ lệ mắc bệnh tơng đối cao. Thiếu G6PD thờng có những biểu hiện tan máu gây vàng da, đái huyết sắc tố, thiếu máu, suy thận cấp và trờng hợp nặng là tử vong. Bệnh xuất hiện khi tiếp xúc với các tác nhân gây oxy hoá nh vi sinh vật, hoá chất (thuốc, thực phẩm). Ngời bình thờng với số lợng và chất lợng G6PD đảm bảo thì khi tiếp xúc với hàm lợng cao chất oxy hoá thì vẫn có khả năng sản xuất ra đủ NADPH để loại bỏ tác động của chúng và sẽ không có những biểu hiện lâm sàng trên. Tròng 1 hợp thiếu hụt nặng enzym thì hay gây ra những cơn tan máu cấp kể cả khi sử dụng rất ít chất õy hoá, nhng cũng có tròng hợp do sử dụng một lợng chất oxy hoá tuy ít nhng kéo dài sẽ dẫn đến hiện tọng không đủ enzym để tham gia quá trình khử, đây chính là hiện tợng thiếu enzym thứ phát. Bởi vậy việc phát hiện ra sự thiếu hụt G6PD là rất quan trọng. Qua sự phát hiện bằng những phong pháp định tính, định lợng chúng ta có thể biết đợc mức độ suy giảm để có đợc kế hoạch điều trị cũng nh cách thức sinh hoạt hợp lý nhằm hạn chế thấp nhất sự biểu hiện của bệnh. Sử dụng phơng pháp bán định l- ợng tạo vòng Formazan với u điểm nhanh chóng, đơn giản sẽ giúp cho chúng ta phát hiện đợc sự thiếu hụt này một cách đồng loạt và có hiệu quả. Tôi tiến hành làm khoá luận tốt nghiệp về đề tài: "Phát hiện tần suất thiếu hụt G6PD ở dân tộc Tày và dân tộc Nùng bằng phơng pháp bán định lợng Formazan." Với hai mục tiêu sau đây: - Đánh giá các điều kiện của phản ứng Formazan. - Sử dụng kỹ thuật bán định lợng Formazan để phát hiện tần suất thiếu hụt G6PD ở dân tộc Tày và Nùng. 2 Chơng 1: Tổng quan tài liệu 1. Những hiểu biết về G6PD: 1.1.Đại cơng: G6PD đợc Warburg và Christan phát hiện năm 1931 ở hồng cầu ngạ, động vật, vi sinh vật, men bia và hồng cầu ngời. Năm 1936 G6PD đã đợc nghiên cứu và tiến hành chiết suất làm sạch nhng phải 25 năm sau mới thành công. Bớc đầu nghiên cứu enzym đã đựơc tìm hiểu về cấu trúc phân tử, dạng có hoạt tính sinh học, các dạng biến thể của enzym. Quá trình tách chiết enzym ra khỏi hồng cầu cũng ngày càng đạt đợc độ tinh sạch cao hơn, trải qua các bớc nh điện di, phơng pháp sắc ký trao đổi ion, sắc ký ái lực độ tinh sạch của enzym đã đạt đựơc tới 1448,2 lần [2]. Cùng với sự phát triển của sinh học phân tử các dạng đột biến của G6PD ngày càng đợc phát hiện nhiều, các phơng pháp phát hiện thiếu hụt từ định lợng, định tính, bán định lợng, test nhanh ngày càng đợc phát triển chính xác hơn và áp dụng rộng rãi hơn trong cộng đồng. 1.2.Cấu trúc: Cấu trúc bậc một (monomer): là chuỗi polypeptid gồm 515 acid amin liên kết với nhau bằng những liên kết peptid (nhóm cacboxyl(-C00H) của acid amin trớc sẽ liên kết với nhóm amin (-NH 2 ) của acidamin sau bằng cách chung nhau mất đi một phân tử nớc). Trọng lợng phân tử của enzym nặng 59265 Daltons. Trình tự acid amin đã đợc giải mã, tính đồng nhất của trình tự này thay đổi tuỳ theo từng vùng. Vùng có tính đồng nhất cao đợc cho là vùng có chức năng quan trọng (hay còn gọi là trung tâm hoạt động) của enzym, ở ngời vùng này thuộc acidamin 188-291. Cấu trúc bậc cao hơn: G6PD có cấu trúc không gian là pôlymer, đó là các dạng dimer, tetramer, hexamer. Dạng cấu trúc không gian mới đảm bảo cho enzym hoạt động đợc. Trong hồng cầu ngời thì dạng dimer chiếm u thế hơn. Các cấu trúc bậc 1, bậc cao hơn có sự chuyển dạng lẫn nhau tuỳ vào điều kiện của môi trờng, nh ở pH thấp thì chủ yếu là dạng tetramer, pH gần trung tính thì là dạng dimmer, ở pH 3 trung tính thì hai dạng đó gần bằng nhau. G6PD là một enzym không đồng nhất và đa dạng phân tử, bằng phơng pháp hoá sinh WHO đã mô tả có 442 dạng khác nhau [1,3]. Hình 1: cấu trúc bậc bốn của G6PD 1.3.Chức năng: G6PD là một enzym oxy hoá khử xúc tác phản ứng chuyển hoá đầu tiên của chu trình Pentose( chu trình Hexomonophosphate), có ký hiệu quốc tế là: 1.1.49. Chức năng quan trọng của nó là tạo ra NADPH để chống lại các tác nhân oxy hoá và vì vậy trong hồng cầu nó ý nghĩa lớn trong việc bảo vệ màng hồng cầu đơc bền vững, đảm bảo thời gian tồn tại trong máu ngoại vi của hồng cầu là khoảng 120 ngày nhằm đáp ứng nhu cầu ôxy của cơ thể. Chu trình Hexomonophosphate ( pentosephosphat) Sự oxy hóa glucose theo con đờng Hexomonophosphate xảy ra ở các mô song song với con đờng đơng phân song chiếm tỉ lệ thấp hơn nhiều (7%-10%). Tuy nhiên ở một số tế bào nh: hồng cầu, gan, tuyến mỡ, tuyến sữa thời kì hoạt động Sự thoái hóa glucose theo con đờng này chiếm u thế xảy ra trong phần dịch bào của tế bào. + G6P đợc tạo ra qua sự phosphorin hóa Glutathion dới tác dụng của enzym Hexokinase + G6P bớc vào con đờng Pentose qua 2 giai đoạn: 4 Giai đọan 1: khử cacboxyl oxy hóa G6P thành pentose phosphat, quá trình này tạo ra NADPH 2 ở một số tổ chức con đờng pentose dừng tại đây và phơng trình tổng quát là: G6P + 2NADP + + H 2 O > R5P + CO 2 + 2NADPH + 2H NADPH dùng cho các phản ứng sinh tổng hợp, còn R5P là tiền chất tổng hợp Nucleotid. Giai đoạn 2: biến hóa tiếp tục của pentose phosphat có sự vận chuyển các đơn vị 2C hoặc 3C dới tác dụng của các enzym tơng ứng là fructose 6 phosphat và 1 phân tử phospho glyconat: 6 G6P + 12NADP + + 6 H 2 O > 5G6P +12 NADPHH + + 6CO 2 + Pi Đây là giai đoạn oxy hóa ở những tổ chức cần nhiều NADPH hơn R5P thì các pentose phosphat đợc đi vào chu trình biến hóa thành G6P để tiếp tục oxy hóa nhờ sắp xếp lại khung C mà 6 phân tử pentosephosphat trở thành 5 Hexo phosphat. Glucose-6-phosphate dehydrogenase Glucose-6-phosphat 6-phosphogluconolacton Mg 2+ NADP + NAPDH +H + Lactonase 6-phosphogluconat NADP + Mg 2+ 6-phosphogluconate dehydrogenase NADPH+ H + Ribulose-5-phosphat Phosphopentose isomerase D-Ribose-5-phosphat ( 5C) Hình 2: giai đoạn 1 của chu trình Hexomonophosphate 5 5C 7C 6C 5C 3C 4C 6C 5C 3C 6C 5C 3C 5C 3C 4C 6C 5C 7C 6C H×nh 3: giai ®o¹n 2 cña chu tr×nh Hexomonophosphate Glutathion reductase H×nh 4: S¬ ®å ho¹t ®éng cña G6PD 6 Glucose Glucose 6 phosphate ATP ADP 6phosphogluconat G6PD NADP+ NADPH + +hHHHH Glutathion d¹ng OXH(G-S-S-G) Glutathion d¹ng khö (2G-SH) Hexokinase Glutathion peroxydase MetHb Hb Thông qua quá trình photphoryl hóa tạo thành G6P qua xúc tác của G6PD để tạo ra sản phẩm 6PG đồng thời tạo thành NADPH từ NADP + là chất cung cấp H + để khử Glutathion dạng oxy hóa thành dạng khử thông qua enzym Glutathion reductase để từ đó trực tiếp bảo vệ hồng cầu chống lại các tác nhân gây oxy hóa ngoài ra còn khử MetHb thành Hb do đó tránh đợc sự biến tính Hb.Nếu không đủ G6PD thì lợng NADPH không đủ dẫn đến màng hồng cầu diễn ra quá trình peroxy hóa lipit dẫn đến hiện tợng vỡ hồng cầu gây ra tan máu và Hemoglobin sẽ bị kết tủa thành thể Heinz 1.4.Các yếu tố ảnh hởng đến cấu trúc và hoạt động sinh lý của G6PD: Một số tính chất chung của enzym: Enzym là những chất xúc tác sinh học bản chất là prôtêin do cơ thể sống sinh ra nhờ đó mà các phản ứng hóa học trong cơ thể sống xảy ra với tốc độ rất nhanh trong điều kiện sinh lý bình thờng: nhiệt độ, áp suất không cao, pH môi trờng gần nh trung tính. Có những enzym chỉ là những prôtêin đơn thuần nhng cũng có những enzym có thành phần cấu tạo gồm có 1 thành phần là prôtêin đơn thuần (Apoenzym) và một thành phần là chất hữu cơ đặc biệt (chất cộng tác cofactor hay coenzym). Ngoài ra còn cần đến sự có mặt của các ion kim loại trong cấu trúc của enzyme, là thành phần để liên kết enzym và cơ chất, liên kết apoenzym và coenzym. Vị trí diễn ra phản ứng của enzym là trung tâm hoạt động có tính chất đặc hiệu đối với từng cơ chất cấu trức và hoạt tính của enzym chịu tác động của rất nhiều yếu tố khác nh: nhiệt độ, pH muối kim loại nặng, chất hoạt hóa và ức chế hay các dung môi hữu cơ nh rợu, axeton Mỗi một cơ chất enzym có một Km xác định, đây chính là hằng số Michailis-Menten: là nồng độ của cơ chất (mol/lit) đủ làm cho tốc độ phản ứng enzym đạt tới một nửa tốc độ cực đại (Vmax). Km thể hiện ái lực của enzym tới cơ chất Km càng nhỏ thì ái lực càng lớn và ngợc lại. Có 6 loại enzym: enzym oxy hoá -khử (oxidoreductase), enzym vận chuyển nhóm (Transferase), enzym thuỷ phân (Hydrolase), enzym phân cắt (lyase), 7 enzym chuyển đồng phân (Isomerase), enzym tổng hợp (Ligase). G6PD là enzym oxy hoá khử. Những điều kiện ảnh h ởng đến hoạt động của G6PD: + Nhiệt độ: enzym bắt đầu biến tính nhẹ từ 40C, đến 60C thì hoạt tính của enzym còn lại không đáng kể. + Độ pH: pH kiềm nhẹ sẽ làm cho nồng độ dạng dimer nhiêù và enzym sẽ hoạt động tốt nhất, bởi vậy có mặt một lợng nhỏ NaHCO 3 sẽ giúp enzym phản ứng tốt hơn. pH tối u của G6PD là 8,0 [2] + Nồng độ của của các chất nội bào nh cơ chất, cofactor, chất tạo thành: tuân theo quy luật của các phản ứng hoá học khác. Sự trùng hợp của enzym từ dạng monomer sang dạng dimer và các cấu trúc bậc cao hơn cần có sự có mặt của NAPD+, chất vừa là cơ chất vừa là cofator. Mỗi dimer có 2 vị trí gắn NADP+, đó là NADP+ xúc tác, gắn lỏng lẻo và dễ dàng bị khử thành NADPH, còn lại là NAPD+ chức năng gắn chặt chẽ hơn cần thiết để duy trì cấu trúc hoạt động của enzym. +Khi ở ngoài cơ thể thì để đảm bảo cho enzym hoạt động đợc tốt thì vấn đề bảo quản là hết sức quan trọng G6PD là một enzym mất nhạy cảm, không bền vững, nhng nếu hồng cầu đợc rửa và bảo quản nguyên vẹn trong dung dịch NaCl 0,9% ở nhiệt dộ lạnh (4 0 C) ngay sau 24h thì hoạt độ enzym cha bị thay đổi. Trái lại chỉ bảo quản theo tiêu chuẩn máu thì sau 24h sẽ giảm 17% hoạt tính. +Ion Mg 2+ là ion đặc hiệu cho hồng cầu ngời, với nồng độ 0,01 mol/l thì hoạt độ enzym là 100%[2], theo nghiên cứu thì ion kim loại này đóng vai trò tạo phức hợp giữa enzym và cơ chất. 1.5 Cơ sở di truyền học của G6PD Gen quy định cấu trúc của G6PD nằm trên nhánh dài, locus q28 của nhiễm sắc thể X (vùng 2, băng 8) không có alen tơng ứng trên Y. Vùng 2 là vùng mang thông tin di truyền mã hóa khá nhiều tính trạng khác nh: nhìn màu, hemophilia A. 8 Gen G6PD gồm có 13 exon và 12 intron. Dài khoảng 18,5 kilobases. Chức năng của từng exon khác nhau, và kích thớc của các exon mã hóa thay đổi rất nhiều từ 38 - 236 bp. Trong đó exon 1 không mã hoá [12], exon 6 mã hoá sản phẩm là nơi gắn cơ chất G6P [6]. mARN G6PD gồm 2269 ribonucleotid, m RNA của G6PD có một đoạn đầu 3' không mã hóa dài 655 bp và đoạn đầu 5' không mã hóa dài 69 bp. Gen G6PD có sự điều hòa và kiểm soát chặt chẽ. Vùng promotor của G6PD kéo dài khoảng 300 nucleotid giầu GC và nhiều GC không bị methyl hóa. 2. Bệnh lý thiếu hụt G6PD. 2.1.Cơ chế bệnh sinh và cơ sở di truyền học: 2.1.1. Cơ chế bệnh sinh : Giảm G6PD sẽ giảm lợng Glutathione dạng khử không đủ để khử HbH 2 O 2 tạo thành Met Hemoglobin và Choleglobin do đó Hemoglobin bị biến tính và kết tủa thành thể Heinz [2][9]. Cơ chất tạo ra là NADPH còn có tác dụng bảo vệ nhóm -SH (nhóm chức năng hoạt động) của enzym phosphoglyceral-dehydrogenase, đây là 1 enzym quan trọng trong chuỗi phản ứng xúc tác NAD + thành NADH (một chất khử quan trọng chống lại sự ôxy hóa của hồng cầu [2]). Ngoài ra giảm NADPH dẫn đến hồng cầu phải sử dụng nhiều NADH 2 làm giảm lợng ATP cần thiết và lợng Na + trong tế bào bị ứ đọng, nớc vào trong hồng cầu nhiều cộng với sự bền vững của màng hồng cầu bị yếu dẫn đến hồng cầu bị hủy hoại. 2.1.2 Bệnh lý gen học của thiếu hụt G6PD: Giảm G6PD là bệnh di truyền gen hoặc nằm trên nhiễm sắc thể X không alen tơng ứng trên Y do vậy tỷ lệ bị bệnh gặp ở nam giới là nhiều hơn và thờng nặng hơn. Nam giới XY: giả sử a là gen quy định tính trạng giảm G6PD sẽ có kiểu gen là X a Y: ở nam giới chỉ cần ngời alen a ở X là có biểu hiện bị bệnh. 9 Nữ giới XX: có 3 dạng X A X A : bình thờng. X A X a : có thể bình thờng hoặc thiếu hụt G6PD từ nhẹ đến trung bình, hiếm khi thiếu hụt nặng (trừ phi ở vùng trung tâm hoạt động). Nguyên nhân là do sự bất hoạt nhiễm sắc thể từ trong bào thai, trong quá trình phát triển của phôi tạo ra thể khảm giữa dòng tế bào lành và dòng tế bào bệnh, tỷ lệ giữa 2 loại tế bào này thay đổi rất lớn: tế bào giảm G6PD chiếm từ 1% -> 90%. X a X a : biểu hiện kiểu hình thiếu nặng nhng tần suất gặp kiểu gen này rất nhỏ. Gen cấu trúc đột biến sẽ bây biến đổi về mặt chất lợng ngợc lại gen điều hòa bị đột biến gây thiếu G6PD về mặt số lợng, nhng biến đổi ở intron không gây biến đổi cấu trúc và sản lợng G6PD. Hoạt tính G6PD phụ thuộc vào cả chất lợng và số lợng. Ngày nay đã phát hiện đợc hơn 140 dạng đột biến khác nhau đại diện cho 442 biến thể khác nhau có tính chất đặc hiệu và phân biệt bằng các chỉ số sinh hóa. Do 1 axit amin có thể đợc quy định bởi ngời bộ ba nên có khi 2 biến đổi khác nhau trên AND chỉ gây nên một loại đột biến. Ví dụ nh: - Dạng đột biến Aaches: đột biến nucleotid 1089C -> G - Dạng đột biến Loma Linda: 1089C -> A hai loại này đều làm thay đổi acid amin 363 Asn -> Lys. Dựa vào hoạt độ của enzym trong hồng cầu và những bệnh nhân lâm sàng của chúng, WHO đã chia các biến thể của thiếu hụt G6PD ra làm 4 lớp: + Lớp 1: thiếu enzym nặng với biểu hiện thiếu máu tan máu, hồng cầu hình không trò ngời mạn tính. + Lớp 2: Thiếu G6PD nặng (hoạt độ enzym < 10% so với bình thờng + Lớp 3: Thiếu G6PD vừa đến nhẹ. (Hoạt độ từ 10 - 60% so với bình thờng). + Lớp 4: thiếu rất nhẹ hoặc không thiếu G6PD (60 - 100%). Tuy vậy nhng sự phân biệt này là không rõ ràng giữa các phân lớp. Lớp 1, lớp 2 là gây nguy hiểm nhất vì thờng có tan máu cấp diễn. 10 [...]... việc nhận định kết quả còn phụ thuộc vào kinh nghiệm của ngời đọc 4.2 .Tần suất thiếu hụt G6PD 4.2.1 Tần suất thiếu hụt G6PD giữa các dân tộc trong đó có dân tộc Tày và Nùng 30 Theo kết quả nghiên cứu gần đây nhất thì tần suất thiếu hụt G6PD ở các dân tộc khác nhau ở nớc ta có sự khác biệt nhiều: Bảng 8: Tần suất thiếu hụt G6PD ở các dân tộc ở các tỉnh khác nhau Dân tộc Kinh+ Mờng+ Racley+ Tày+ Thái++... (9,626 ) Biểu đồ 4: Tỷ lệ thiếu enzym G6PD ở dân tộc Tày và Nùng theogiới Nhận xét: ở dân tộc Tày: tần suất thiếu hụt G6PD ở nam là 31,58% cao hơn nữ là 9,01%, sự khác biệt này có ý nghĩa thống kê với p < 0,01 ở dân tộc Nùng: tần suất thiếu hụt G6PD ở nam là 20% cao hơn nữ là 5,882%, sự khác biệt này không có ý nghĩa thống kê với p < 0,1 ở hai dân tộc: tần suất thiếu hụt G6PD ở nam là 25,64% cao hơn... lệ thiếu enzym G6PD ở dân tộc Tày và Nùng Dân tộc Tày Nùng 2 dân tộc N 130 71 201 9% 8% 7% 6% 5% 4% 3% 2% 1% 0% Thiếu hoàn toàn 7/130 (5,385%) 6/71 (8,451%) 13/201 (6,467%) Bán thiếu 9/130 (6,923%) 1/71 (1,14%) 10/201 (4,975%) Tổng 12,308% 9,861% 11,442% 8.45% 6.92% 6.47% 5.39% 5% THIếu Bán THIếu 1.41% Tày Nùng Chung Biểu đồ 3: Tỷ lệ thiếu enzym G6PD ở dân tộc Tày và Nùng Nhận xét: tần suất thiếu hụt. .. trên ta thấy, nhóm có tần suất thiếu enzym hụt lớn nhất là dân tộc Mờng tỉnh Hoà Bình (26%) và ở dân tộc Thái tỉnh Sơn La (23,6%) Nhóm Tày ở Khánh Hoà, Tày ở Cao Bằng và Nùng ở Cao Bằng có tần suất thiếu hụt enzym trung bình Ba nhóm còn lại là dân tộc Kinh ở Hà Nội, Racley ở Khánh Hoà, Bana ở Gia Lai có tần suất thiếu hụt enzym ít nhất tơng ứng là 1,04%; 2,92%; 1,7% Hoà Bình và Lai Châu là hai tỉnh... giờ 26 - ở 25 oC hầu hết các mẫu bán thiếu đều có đờng viền của vòng dung huyết không rõ ràng ở cả hai nồng độ - ở 37 oC các mẫu bán thiếu ở nồng độ thấp phân biệt rõ hơn Sau 24giờ - ở 25 oC các mẫu bán thiếu có màu nhạt hơn hẳn so với thời điểm 8h và 12h - ở 37 oC các mẫu bán thiếu ở nồng độ thấp có màu nhạt hơn do đó dễ phân biệt hơn 3.3 Tần suất thiếu hụt G6PD ở dân tộc Tày và dân tộc Nùng Bảng... nhân loại máu thiếu G6PD 3 Kỹ thuật phát hiện thiếu hụt G6PD 3.1.Các mức độ phát hiện thiếu hụt G6PD: Phơng pháp định tính: Phơng pháp phát quang (Beutler và Mitchelt-1968), phơng pháp đợc tiến hành bằng cách lấy máu từ đầu ngón tay sau đó dùng thuốc chống đông Trộn đều máu đã chống đông bằng dung dịch đã chuẩn bị sẵn gồm NADP và G6P, sau đó nhỏ vào giấy Whatman số 1 vào thời điểm 0 phút, 5 và 10 phút... dân tộc Tày và Nùng Nhận xét: tần suất thiếu hụt enzym chung ở cả hai dân tộc trong quần thể là 11,442%, tần suất thiếu hụt enzym của ngời Tày là 12,308% cao hơn ở ngời Nùng là 9,861% nhng sự khác biệt này không có ý nghĩa về mặt thống kê ( p > 0,05 ) 27 Bảng 4: Tỷ lệ thiếu enzym G6PD theo giới ở dân tộc Tày và Nùng Giới tính Tày Nùng 2 dân tộc n 130 71 201 Nam 6/19 ( 31,58% ) 4/20 ( 20% ) 10/39 ( 25,64%... ở nồng độ cao: sau 8h ta thấy có 12 mẫu bán thiếu đựơc phát hiện, nồng độ thấp chỉ phát hiện đợc 8 mẫu bán thiếu, nh vậy là có 4 mâu bán thiếu không đợc phát hiện ở nồng độ thấp Do việc đọc kết quả ở nồng độ cao dễ hơn nên so sánh giữa các mẫu bán thiếu với chứng (-) và chứng (+) rõ hơn Đến sau 12h và 24 h thì cả 12 mẫu bán thiếu này cũng phân biệt rõ hơn do màu của vòng dung huyết nhạt hơn nhiều ở. .. quả và phát hiện đợc cả những mẫu bán thiếu 4.1.2 Về hai điều kiện nhiêt độ khác nhau: Tiến hành thí nghiệm ở nhiệt độ phòng 25 oC, đây là nhiệt độ có thể áp dụng đợc ở những nơi không có tủ sấy Đồng thời tiến hành ở nhiệt độ sinh lý của cơ thể là 37 oC, áp dụng ở nơi có tủ sấy Nhiệt độ 25 oC: ở 8h và ở cả hai nồng độ tất cả các mẫu thiếu hoàn toàn đều đợc phát hiện, không phát hiện đợc mẫu bán thiếu. .. Beutler đã phát hiện có 400 triệu ngời thiếu máu G6PG gặp ở tất cả các dân tộc Việt Nam nằm trong vùng có tỉ lệ thiếu hụt G6PD khác nhau tùy từng vùng và tùy từng dân tộc Theo nghiên cứu của tác giả Đoàn Hạnh Nhân thiếu G6PD hồng cầu, có tỉ lệ cao tại một số vùng Sốt Rét Kim Bôi (34,1%), Mai Châu (20,4%), Nh Xuân (19,7%), tỷ lệ thiếu lại thờng thấp ở nơi không có lu hành bệnh sốt rét ở dân tộc Mờng (tỉ . loạt và có hiệu quả. Tôi tiến hành làm khoá luận tốt nghiệp về đề tài: " ;Phát hiện tần suất thiếu hụt G6PD ở dân tộc Tày và dân tộc Nùng bằng phơng pháp. máu thiếu G6PD. 3. Kỹ thuật phát hiện thiếu hụt G6PD 3.1.Các mức độ phát hiện thiếu hụt G6PD: Ph ơng pháp định tính: Phơng pháp phát quang (Beutler và