Vật liệu và phương pháp nghiên cứu
Nội dung nghiên cứu
3.1.1 Điều tra khả năng sinh sản của đàn lợn nái ngoại qua các lứa: 1; 2 – 4; > 4
3.1.2 Khảo sát tỷ lệ mắc hội chứng M.M.A ở đàn lợn nái sau khi sinh 3.1.3 Xác định một số chỉ tiêu lâm sàng của lơn nái mắc hội chứng M.M.A 3.1.4 Xác định ảnh hưởng của hội chứng M.M.A đến năng suất sinh sản
3.1.5 Xác định thành phần các loại vi khuẩn trong dịch tiết tử cung của lợn nái tại trại lợn
3.1.6 Xác định độ mẫn cảm của các loại vi khuẩn phân lập từ dịch viêm tử cung, âm đạo của lợn nái với thuốc kháng sinh
3.1.7 Xác định độ mẫn cảm của tập đoànvi khuẩn phân lập được từ dịch viêm tử cung, âm đạo của lợn nái với thuốc kháng sinh
3.1.8 Thử nghiệm điều trị hội chứng M.M.A và theo dõi khả năng sinh sản sau khi khỏi bệnh của lợn nái
3.1.9 Thử nghiệm phòng hội chứng M.M.A cho lợn nái ngoại sản
Đối tượng và nguyên liệu nghiên cứu
3.2.1 Đối tượng nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu của đề tài là đàn lợn nái ngoại sinh sản nuôi tại trại lợn giống Huyện Bình Lục - Hà Nam
3.2.2.1 Các môi trường nuôi cấy và phân lập vi khuẩn
* Các môi trường phổ thông
- Môi trường nước thịt: dùng để nuôi cấy mẫu xét nghiệm ngay từ đầu
- Môi trường thạch thường: dùng để kiểm tra khuẩn lạc và làm kháng sinh đồ
*Các môi trường chuyên dụng dùng trong phân lập và giám định vi khuẩn
- Môi trường Sapman: dùng để phân lập và xác định độc lực của cầu khuẩn
- Môi trường Brilliant Green agar: dùng để phân lập vi khuẩn E Coli và Salmonella
- Môi trường Edwards medium: dùng để phân lập vi khuẩn Streptococcus
- Môi trường thạch máu: dùng để giữ và bảo quản vi khuẩn
- Các mảnh giấy chuẩn đã được tẩm kháng sinh theo đúng tiêu chuẩn Quốc tế do hãng Oxoid (Phạm Hữu Doanh) sản xuất
Các thuốc kháng sinh được sử dụng trong nghiên cứu đều đạt tiêu chuẩn dược điển Việt Nam 1994, do phòng quản lý thuốc thú y thuộc Cục thú y Trung ương cung cấp Nghiên cứu được thực hiện tại phòng thí nghiệm trọng điểm.
Phương pháp nghiên cứu
Để xác định tỷ lệ lợn nái mắc bệnh Viêm tử cung, cần tiến hành điều tra và phỏng vấn trực tiếp công nhân tại trại, đồng thời theo dõi trực tiếp tình trạng sức khỏe của lợn Bên cạnh đó, việc phân lập và giám định thành phần vi khuẩn trên các môi trường chuyên dụng cũng cần được thực hiện theo các phương pháp vi sinh vật thường quy.
Kỹ thuật kháng sinh đồ theo phương pháp Kirby - Bauer là một phương pháp quan trọng trong việc xác định độ nhạy cảm của vi khuẩn đối với kháng sinh Bằng cách tẩm kháng sinh vào đĩa giấy với nồng độ thích hợp, kháng sinh sẽ khuếch tán ra bề mặt thạch và ức chế sự phát triển của vi khuẩn Đường kính vòng ức chế cho thấy mức độ nhạy cảm của vi khuẩn, trong khi không có vòng ức chế cho thấy vi khuẩn kháng lại thuốc Các vi khuẩn thường được xác định trong quá trình nuôi cấy bao gồm Staphylococcus, Streptococcus, E Coli và Salmonella.
+ Xác định phác đồ điều trị bệnh hữu hiệu qua theo dõi khả năng sinh sản của những lợn nái sau khi được điều trị lành bệnh
3.3.1 Lấy mẫu dịch tử cung của lợn nái
* Cách lấy mẫu dịch tử cung lợn để xét nghiệm
Thực hiện lấy mẫu dịch tử cung của lợn nái bình thường sau đẻ 12 -24 giờ và lợn nái bị viêm tử cung ở các trại được điều tra
Sử dụng mỏ vịt đã được sát trùng để mở âm đạo, sau đó dùng thìa sản khoa để thu thập dịch tử cung vào ống nghiệm đã được vô trùng, mỗi lần lấy khoảng 3-5 ml.
* Bảo quản và xử lý mẫu
Các mẫu dịch thí nghiệm cần được bảo quản lạnh trong thùng đá trong suốt quá trình vận chuyển và giữ ở nhiệt độ -20°C tại phòng thí nghiệm cho đến khi tiến hành phân tích.
3.3.2 Phương pháp xác định số loại và số lượng vi khuẩn
3.3.2.1 Phương pháp xác định số loại vi khuẩn
Mỗi loại vi khuẩn phát triển trên các môi trường khác nhau sẽ tạo ra những khuẩn lạc với đặc tính riêng biệt Dựa vào những đặc điểm này, chúng ta có thể xác định loại vi khuẩn có trong mẫu dịch tử cung.
+ Staphylococcus: khuẩn lạc dạng S, tròn bóng, rìa gọn, mặt lồi, có màu vàng + Streptococcus: khuẩn lạc dạng S, nhỏ, màu hơi xám, bóng
+ Salmonella: khuẩn lạc dạng S, có thể dạng R, tròn, trong hoặc hơi xám, nhẵn bóng, hơi lồi lên ở giữa
+E Coli: khuẩn lạc dạng S, có thể dạng R, tròn, ướt, màu tro hay trắng nhạt, hơi lồi
+ E Coli: hình thành những khuẩn lạc dạng S, màu hồng cánh sen
+ Salmonella: khuẩn lạc tròn, trong không màu, nhẵn bóng, hơi lồi ở giữa
- Môi trường thạch Birrilliant Green Agar:
+ E Coli: khuẩn lạc dạng S, màu vàng chanh
+ Salmonella: khuẩn lạc dạng S, màu hồng nhạt
+ Staphylococcus: khuẩn lạc to, rìa gọn, nếu là tụ cầu gây bệnh làm môi trường biến màu vàng, nếu là tụ cầu không gây bệnh: môi trường màu đỏ
+ Streptococcus: vi khuẩn mọc tốt, khuẩn lạc nhỏ, mịn, ướt, mặt hơi lồi, trong sáng
Sau khi nuôi cấy mẫu trên môi trường thạch trong tủ ấm ở 37°C trong 18-24 giờ, chúng ta có thể quan sát hình thái và kích thước khuẩn lạc để phân loại và xác định số lượng từng loại vi khuẩn Tiếp theo, các khuẩn lạc điển hình sẽ được chọn và chuyển sang các môi trường chuyên dụng để tiến hành phân lập và giám định.
3.3.2.2 Phương pháp xác định số lượng vi khuẩn
Chúng tôi áp dụng phương pháp Koch để đếm số khuẩn lạc trên môi trường thạch, tùy thuộc vào lượng vi khuẩn có trong bệnh phẩm Mẫu xét nghiệm cần được pha loãng đến mức cần thiết Qua nhiều lần cấy mẫu với các độ pha loãng khác nhau, chúng tôi đã xác định được độ pha loãng phù hợp cho các bệnh phẩm.
+ Dịch tử cung lợn sau đẻ là: 10 -4
+ Dịch tử cung lợn bị viêm tử cung là: 10 -7
Sau khi pha loãng mẫu, chúng tôi cấy vi khuẩn vào đĩa thạch và đếm số lượng khuẩn lạc (CFU) để xác định số lượng vi khuẩn Để đảm bảo kết quả chính xác, cần duy trì nhiệt độ và thời gian nuôi cấy đồng nhất Số vi khuẩn trong 1 ml dịch mẫu được tính theo một công thức cụ thể.
X= 10.A/N Trong đó: X: số khuẩn lạc trong 1ml dịch
A: số khuẩn lạc trung bình trên một đĩa petri
3.3.3 Xác định độ mẫn cảm của các chủng vi khuẩn và tập đoàn vi khuẩn phân lập được từ dịch tử cung lợn với thuốc kháng sinh
Sử dụng tampon vô khuẩn, nhúng vào nhuyễn dịch, sau đó ép nhẹ và xoay que gòn trên thành ống nghiệm để loại bỏ lượng huyễn dịch vi khuẩn thừa.
- Ria vi khuẩn lên mặt thạch Chờ thạch khô trong vòng 3 - 5 phút
Sử dụng pank vô trùng để đặt các mảnh giấy kháng sinh sao cho chúng tiếp xúc đều với bề mặt thạch, đảm bảo khoảng cách giữa các mảnh giấy không dưới 24 mm Sau khoảng 15 phút đặt các mảnh giấy vào đĩa thạch, tiến hành cho đĩa thạch vào tủ ấm.
37 o C, sau 16 - 18 giờ lấy ra đọc kết quả
- Sau khi ủ 16 - 18 giờ, vi khuẩn sẽ mọc thành những khóm mịn tiếp hợp nhau và vòng vô khuẩn là một vòng tròn đồng nhất
Để đo đường kính vòng vô khuẩn, sử dụng thước đo có đơn vị mm và áp thước lên mặt sau của đáy hộp thạch Nếu cạnh của vòng ức chế không rõ nét, cần đo tại chỗ hẹp nhất và chỗ rộng nhất, sau đó tính giá trị trung bình Đường kính của vòng vô khuẩn sẽ được ghi nhận bằng mm Trong trường hợp khuẩn lạc mọc rõ ràng trong vòng ức chế, cần tiến hành nuôi cấy, phân lập và thử nghiệm lại.
- Đánh giá kết quả dựa theo theo tiêu chuẩn của Hội đồng Quốc gia Hoa
Bảng 3.1 Bảng đánh giá đường kính vòng vô khuẩn theo tiêu chuẩn của Hội đồng Quốc gia Hoa Kỳ (1999)
Kháng sinh trong 1 mảnh giấy (g) Đường kính vòng vô khuẩn Kháng thuốc
- Kết quả kháng sinh đồ được ứng dụng trong điều trị như sau:
+ Khi vi khuẩn ở mức rất mẫn cảm và mẫn cảm trung bình với thuốc, chúng ta sử dụng thuốc ở liều điều trị trung bình
Khi vi khuẩn có độ nhạy cảm yếu, việc điều trị nên được thực hiện bằng cách sử dụng thuốc ở liều tối đa cho từng loại hoặc tiêm trực tiếp vào vị trí nhiễm bệnh trong cơ thể.
+ Vi khuẩn kháng thuốc tuyệt đối không dùng thuốc bị kháng để điều trị bệnh.
Thử nghiệm phòng và điều trị hội chứng M.M.A
Vệ sinh chuồng đẻ và lợn nái, đặc biệt là bộ phận sinh dục, là rất quan trọng để đảm bảo sức khỏe cho lợn Cần sử dụng 10ml dung dịch RTD-iodin 10% pha với 2 lít nước để sát trùng chuồng trại định kỳ 10 ngày một lần và 5 ngày trước khi lợn nái đẻ Giữ cho chuồng trại khô sạch và tắm cho lợn nái một ngày trước khi đẻ Sau khi đẻ, cần lau rửa bộ phận sinh dục của lợn nái bằng dung dịch sát trùng RTD-iodin để đảm bảo vệ sinh.
Để đảm bảo sức khỏe cho nái trong giai đoạn mang thai, cần chú ý vệ sinh nguồn nước uống và thức ăn Mỗi con nái nên được cung cấp khoảng 20 lít nước mỗi ngày Trước khi sinh, cần hạn chế khẩu phần ăn cho nái bằng cách giảm lượng chất đạm và tăng cường chất xơ trong chế độ dinh dưỡng.
Để đảm bảo quá trình đỡ đẻ diễn ra suôn sẻ, cần thực hiện đúng kỹ thuật và sát trùng tay người đỡ đẻ kỹ lưỡng trước khi thao tác Việc để lợn nái đẻ tự nhiên mà không can thiệp bằng tay, trừ trường hợp đẻ khó, là rất quan trọng để đảm bảo sức khỏe cho cả lợn mẹ và lợn con.
Khi phối giống lợn, việc vệ sinh kỹ lưỡng cơ quan sinh dục của cả con cái và con đực là rất quan trọng Đối với phương pháp thụ tinh nhân tạo, cần đảm bảo vệ sinh sạch sẽ trước khi thực hiện, sát trùng kỹ các dụng cụ dẫn tinh Quá trình dẫn tinh cần được thực hiện nhẹ nhàng và đúng kỹ thuật, bởi nếu không, có thể gây tổn thương niêm mạc tử cung và tạo điều kiện cho mầm bệnh xâm nhập, dẫn đến lây lan từ con ốm sang con khỏe.
* Dùng thuốc ngay sau khi đẻ
Để phòng ngừa viêm đường sinh dục, cần tiêm ngay một liều thuốc kháng sinh không ảnh hưởng đến quá trình tiết sữa, như Terramycin, Vidan-T, Tylan 50 hoặc Suanavil Cụ thể, Terramycin được tiêm bắp 1ml/10kg trọng lượng cơ thể, liều duy nhất; Vidan-T tiêm 20ml/con, 2 lần/ngày; Tylan 50 hoặc Suanavil tiêm 10cc/con/ngày trong 3 ngày liên tục Trong thời gian tiêm kháng sinh, nên bổ sung vitamin C, B1, B12, B complex và Gluconat canxi để hỗ trợ sức khỏe và kích thích lợn ăn khỏe, từ đó tăng cường tiết sữa cho lợn con.
Tiêm 1 mũi Hanprost với liều 1,5ml/con giúp tạo ra các cơn co bóp nhẹ nhàng tương tự như cơn co bóp sinh lý, từ đó đẩy các chất bẩn ra ngoài Ngoài ra, Hanprost còn kích thích cơ tử cung hồi phục nhanh chóng và phá hủy thể vàng, giúp hạn chế viêm tử cung và thúc đẩy gia súc nhanh chóng động dục trở lại sau cai sữa.
3.4.2 Điều trị bệnh Viêm nội mạc tử cung
Sau khi nhận được kết quả từ kháng sinh đồ, chúng tôi đã lựa chọn ba loại kháng sinh mà vi khuẩn nhạy cảm nhất để phát triển các phác đồ điều trị hiệu quả.
+ Dùng Amoxycillin: 1 ml/ 10 kg P, tiêm bắp, liệu trình 3-5 ngày (2 lần/ ngày)
+ Dùng Oxytocin: tiêm bắp liều 6 ml/lần/ ngày, liệu trình 3-5 ngày
+ Dùng Dexamethazol: 10 ml/con/ngày
+ Dùng Lincomycin: 1 ml/10 kg P, tiêm bắp ngày 2 lần, kết hợp thụt rửa bằng dung dịch KMnO4 0,1 % với liều 2000 ml/lần/con/ngày, liệu trình 3- 5 ngày
+ Dùng Oxytocin 6 ml/lần/ngày, liệu trình 3-5 ngày
Để điều trị, sử dụng Hanprost với liều 1,5 - 2 ml/con, chỉ tiêm một lần trong suốt quá trình Amoxycillin được tiêm bắp với liều 1 ml/10kg trọng lượng cơ thể, liệu trình kéo dài từ 3-5 ngày, tiêm hai lần mỗi ngày Ngoài ra, dung dịch Lugol 0,1% cũng được sử dụng để thụt rửa, với liều 1500 ml/con/ngày trong thời gian 3-5 ngày.
+ Dùng Oxytocin 6 ml/lần/ngày, liệu trình 3- 5 ngày
Cả 3 phác đồ đều dùng thêm thuốc bổ, trợ sức, trợ lực, dịch truyền, hạ sốt
Phương pháp xử lý số liệu
Tất cả các số liệu được theo dõi, ghi chép và xử lý bằng phương pháp thống kê sinh vật học thông qua phần mềm Excel trên máy tính.
Tổng số con mắc bệnh
Tổng số con theo dõi
Tổng số con động dục
+ Tỷ lệ động dục lại (%) = x 100
Tổng số con đã khỏi bệnh
Tổng số con có thai khi phối lần đầu + Tỷ lệ có thai khi phối lần đầu (%) = x 100 Tổng số con khỏi bệnh được phối lần đầu
