document_tailieudaihoc

uDaiHoc.com > BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH NGUYỄN THỊ HOA PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ QUẢ THỂ NẤM THƯỢNG HOÀNG (PHELLINUS PINI) Ở VIỆT NAM LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC VINH, 2015 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH NGUYỄN THỊ HOA PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ QUẢ THỂ NẤM THƯỢNG HOÀNG (PHELLINUS PINI) Ở VIỆT NAM CHUYÊN NGÀNH: HÓA HỮU CƠ Mã số: 60440114 LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS TRẦN ĐÌNH THẮNG VINH, 2015 MỤC LỤC DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ DANH MỤC SƠ ĐỒ, BẢNG BIỂU LỜI CẢM ƠN Luận văn thực phịng thí nghiệm chuyên đề Hóa hữu Khoa Hóa học, Trung tâm kiểm định chất lượng an toàn thực phẩm môi trường Trường Đại Học Vinh, Viện Hàn lâm – Viện khoa học công nghệ Việt Nam Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành sâu sắc đến PGS.TS Trần Đình Thắng, Trường Đại Học Vinh giao đề tài tận tình hướng dẫn, tạo điều kiện suốt trình thực luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn PGS.TS Hồng Văn Lựu, Đại Học Vinh giúp đỡ bảo tận tình cho tơi hồn thành luận văn Xin cảm ơn TS Ngô Anh, Đại học Khoa học, Đại học Huế, TS Đỗ Ngọc Đài định danh mẫu Nhân dịp này, xin gửi lời cảm ơn đến thầy cơ, cán bộ mơn hóa hữu cơ, khoa hóa học, anh chị nghiên cứu sinh, học viên cao học, bạn sinh viên phịng thí nghiệm chun đề hóa hữu cơ, gia đình người thân giúp đỡ tơi hồn thành luận văn Vinh, ngày … tháng 10 năm 2015 TÊN HỌC VIÊN Nguyễn Thị Hoa DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ CÁI VIẾT TẮT CC: Column Chromatography (Sắc kí cột) FC: Flash Chromatography (Sắc ký cột nhanh) TLC: Thin Layer Chromatography (Sắc kí lớp mỏng) IR: Infrared Spectroscopy (Phổ hồng ngoại) MS: Mass Spectroscopy (Phổ khối lượng) EI-MS: Electron Impact-Mass Spectroscopy (Phổ khối va chạm electron) H-NMR: Proton Magnetic Resonance Spectroscopy (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton) 13 C-NMR: Carbon Magnetic Resonance Spectroscopy (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân cacbon-13) DEPT: Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer HSQC: Heteronuclear Single Quantum Correlation HMBC: Heteronuclear Multiple Bond Correlation COSY: Correlation Spectroscopy s: Singlet br s: Singlet tù t: Triplet d: Doublet dd: Doublet doublet dt: Doublet triplet m: Multiplet TMS: Tetramethylsilan DMSO: Dimethylsulfoxide MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Việt Nam vùng nhiệt đới với địa hình đa dạng, khí hậu phức tạp, hệ thực vật nấm đa dạng ghi nhận trung tâm đa dạng sinh học giới Số loài nấm lãnh thổ Việt Nam ước tính gấp lần số lồi thực vật bậc cao, khoảng 80.000 lồi có khoảng 2500 lồi xác định định danh [15, 16, 22] Trong có nhiều loại nấm có giá trị dinh dưỡng dùng y học từ lâu như: nấm Linh Chi, Hoàng Chi, Cổ Chi,… sử dụng nhiều y học cổ truyền để điều trị bệnh như: ho, tăng huyết áp, làm thuốc an thần, bổ gan, dưỡng tim, tăng cường trí nhớ, làm da tươi trẻ, kéo dài tuổi thọ,…[2] Nấm Thượng Hồng (Phellinus) có đặc tính giống Linh Chi tăng cường khả miễn dịch, điều hòa huyết áp, lọc thận, giúp giảm tình trạng máu nhiễm mỡ, gan nhiễm mỡ Nấm Phellinus đặc biệt quan tâm có chất Basidiomycetes có tác dụng phịng chống bệnh ung thư, đột quỵ, đặc biệt có hiệu cao chống lại bệnh ung thư dày, thực quản phổi [5] Các loài nấm thuộc họ Hymenochaetaceae có giá trị mặt dược liệu có hoạt tính sinh học quý song việc nghiên cứu thành phần hóa học chưa tiến hành nhiều Việt Nam [20] Chính chọn đề tài: “Phân lập xác định cấu trúc số hợp chất từ thể nấm Thượng Hồng (Phellinus pini) Việt Nam”từ góp phần xác định thành phần hoá học hợp chất tìm nguồn ngun liệu cho ngành hố dược 2 Đối tượng nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu dịch chiết từ thể nấm Phellinus pini Pù Huống – Nghệ An Mục đích - Nghiên cứu thành phần hóa học thể nấm Phellinus pini Nhiệm vụ nghiên cứu Trong luận văn chúng tơi có nhiệm vụ - Chiết chọn lọc với dung mơi thích hợp để thu hỗn hợp chất từ thể nấm Phellinus pini - Sử dụng phương pháp sắc ký kết tinh phân đoạn để phân lập hợp chất - Sử dụng phương pháp phổ để xác định cấu trúc hợp chất thu Phương pháp nghiên cứu - Sử dụng sắc kí cột sắc kí mỏng với dung môi rửa giải phù hợp để tách hợp chất từ Phellinus pini - Sử dụng có phương pháp đo phổ đại như: phổ hồng ngoại IR, phổ tử ngoại UV, phổ khối lượng va chạm eclectron EI – MS, HR-ESIMS phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H-NMR, 13C-NMR, phổ DETP, phổ Phổ HSQC, HMBC, COSY để xác định cấu trúc hợp chất Chương TỔNG QUAN 1.1 Chi Phellinus 1.1.1 Một số hoạt tính phân loại nấm Thượng Hồng(Phellinus) Năm 1998, Ngô Anh Lê Thức báo cáo “Dẫn liệu bước đầu họ Hymenochaetaceae Donk Thừa Thiên Huế” với 39 lồi, 10 lồi ghi nhận cho khu hệ nấm Việt Nam Các loại nấm thuộc chi Phellinus biết đến sử dụng nhiều năm chúng có đặc tính giống Linh Chi có tăng cường khả miễn dịch, điều hịa huyết áp, lọc thận, giúp giảm tình trạng máu nhiễm mỡ, gan nhiễm mỡ Nấm Phellinus đặc biệt quan tâm có chứa chất Basidiomycetes với hàm lượng cao gấp ba lần, chất có tác dụng phòng chống bệnh ung thư, đột quỵ, đặc biệt có hiệu cao việc chống lại bệnh ung thư dày, thực quản phổi[5] Theo phân tích nhóm nghên cứu TS Chihara trung tâm nghiên cứu trung ương quốc gia Tokyo Nhật Bản từ năm 1976 cho thấy dịch chiết 27 loài nấm thuộc chi Phellinus cho tỉ lệ ức chế tế bào ung thư chuột 87,4% ( nấm Phellinus igniarius) 96,7% (nấm Phellinus linteus), [5] Theo Walder cộng sự, phần dịch chiết nước loài nấm lớn Fomitella supina, Phellnius rhabarius, Trichaptum perottotti Trametes cubensis thể khả kháng vi rút HIV – không gây độc tế bào Lympho[41] Theo Mi – Yae Shon cộng Phellinus baumii có khả chống oxi hóa ngăn hoạt động gốc tự [32] Một vài loài nấm thuộc chi Phellinus Phellinus linteus, Phellinus igniarius, Phellinus glivus, Phellinus baumi có tác dụng điều trị ung thư, bệnh tiểu đường, kháng khuẩn, nhiễm vi rút khối u [24, 26] 1.1.2 Các hợp chất phân lập từ chi Phellinus Trên giới năm gần việc nghiên cứu thành phần hóa học chi Phellinus cho thấy hợp chất tạo trình chuyển đổi thứ cấp bao gồm hợp chất tritecpenoit có cấu trúc khung thuộc dạng lanostan (1 – 18), sterol (ergosterol (19) ergosterol peoxit (20)), dẫn xuất axit benzoic (21 – 28), hợp chất có cấu trúc tương tự hispdin (29 – 52), melanin polysaccarit bao gồm β-glucan, heteroglucan [2] Basidiomycetes, polysaccarit, protein-polisaccarit β-glucan hoạt chất có khả cơng mạnh mẽ tiêu diệt tế bào ung thư Axit heteroglucan giúp trẻ hóa tế bào, kéo dài tuổi thọ Mesima có tác dụng tăng cường khả miễn dịch thể, cịn có hiệu đặc biệt điều trị ung thư dày, thực quản, tá tràng, ruột kết, trực tràng, Ngoài ra, theo Maiti cộng năm 2008 nấm heteroglucan Phellnius cịn vài chất có hoạt tính sinh học tritecpen, lipit, phenol [5] 1.1.2.1.Các tritecpenoit có khung lanostan R2 HO Lanosterol (R1= H, R2= CH3) R1 Inotodiol (R1= OH, R2= CH3) Axit trametenolic (R1= H, R2= COOH) 3β -hydroxylanosta-8,24-dien-21-al (R1= H, R2= CHO) Năm 2005, Tajj cộng phân lập thành công lanosta-24-en-3β ,21diol, lanosta-8,23E-dien-3β , 22R,25-triol lanosta-79(11)-23E-trien-3β ,22R,25-triol [39] OH OH OH HO HO Lanosta-24-en-3β ,21-diol Lanosta-8,23E-dien-3β ,22R,25-triol OH OH HO 3β ,22,25-trihydroxyl-lanosta-8-en OH HO Lanosta-79(11)-23E-trien-3β ,22R,25-triol OH HO 3β ,22-dihydroxy-lanosta-7,9(11),24-trien OH O OH HO 10 3β , 22-dihydroyl-24-hydroperoxyl-lanosta-8,25(27)-dien OH O OH HO 11 3β , 22-dihydroxyl-25-hydroperoxyl-lanosta-8-en O OH HO 12 Inonotusoxit A O OH HO 13 Inonotusoxit B O O HO 14 3β -hydroxyl-8,24-dien-lanosta-21-lacton OH OH H HO 15 Inonotsutriol A (24S) 16 Inonotsutriol B (24R) OH H OH H O H HO OH HO 17 Inonotsutriol C 18 Axit betulinic 1.1.2.2.Các sterol Ergosterol ergosterol peroxit hợp chất đặc trưng có mặt thành phần hóa học lồi nấm khác Chúng phân lập từ loài chi Phellinus [19] HO 19 Ergosterol HO O O 20 Ergosterol peroxit 1.1.2.3.Dẫn xuất axit benzoic CH2 OH HO 21 5-(2’-etene-6’,6’-dimethyl-cyclohexa)-3-methyl pentanol OH O H 3C O O OH HO H3 C O 22 4-hydroxyl-3,5-dimethoxyl benzoic axit-2-isopropanyl este R5 R4 R1 R3 R2 23 Axit protocatechic (R1= H, R2= OH, R3= OH, R4= H, R5= COOH) 24 3,4-dihydrobenal aldehit (R1= H, R2= OH, R3= OH, R4= H, R5= CHO) 25 Axit syringic (R1= OCH3, R2= OH, R3= OCH3, R4= H, R5= COOH) 26 Axit 2,5-dihydroxylterephtalic R1= COOH, R2= OH, R3= COOH, R4= H, R5= OH) R O OH OH 10 27 Axit caffeic, R=OH 28 3,4-dihydroxyl-benzal axetat (R = CH3) 1.1.2.4.Các hợp chất có cấu trúc tương tự hispdin [18] OH OH O COOH O OH OH HO 29 Fuscoprine O OH HO HO 30 Hispolon OH HO O HO 31 Hispidin O 11 OH HO O O O O OH O O HO OH OH HO 32 Inonoblin A OH HO O O O O OH O OH OH 33 Inonoblin B OH HO O O O OH O OH OH 34 Inonoblin C 12 OH HO O O O O OH 35 Phelligridin C OH HO O O O O OH OH 36 Phelligridin D OH HO O O O O O O OH OH 37 Phelligridin E O O HO HO O OMe O 38 Phelligridin F OH OH 13 HO OH OH HO O O O O O O OH OH 39 Phelligridin G OH HO O OH O O HO O OH O O HO O 40 Phelligridin H OH OH O O HO HO O HO O O O OH OH 41 Phelligridin I 14 O HO HO O HO O OH HO OH 42 Interfungin A HO R O O HO O OH HO OH 43 Interfungin B (R = CH3) 44 Interfungin C (R = OCH3) HO O O O O HO OR O OH 45 inoscavin A (R = H) 46 methyl inoscavin A (R = CH3) HO HO O O MeO O O OR OH 47 inoscavin B (R = H) 48 metyl inoscavin B (R = CH3) 15 HO O O HO O OR O OH 49 inoscavin C (R = H) 50 metyl inoscavin C (R = CH3) H3C O O O HO HO OH OH OH 51 Davallialacton (R = H) 52 Metyl davallialacton (R = CH3) 1.1.3 Một số hợp chất khác tách từ Phellinus linteus Từ Phellninus gồm vài loài Phellius linteus, Phellius ribis Phellinus igniarius có tác dụng tốt điều trị ung thư [24, 26, 44] Trong Phellinus linteus loài nấm dược liệu sử dụng để phòng ngừa điều trị rối loạn chức gastroenteric, bệnh tiêu chảy, xuất huyết, dị ứng, bệnh tiểu đường ung thư [44] Chất hispidin phân lập từ Phellinus linteus có tác dụng ức chế tế bào ung thư, làm giảm trình apopsis, ức chế superoxit chống oxi hóa [19, 20, 34] Năm 2006, Min BS cộng xác định hai hợp chất dẫn xuất furan từ thể Phellinus linteus có khả chống hoạt động bổ thể 53 Phellinusfran A 54 Phellinusfran B [31] 16 HO HO O O OH HO HO O O O O OCH OCH 53 Phellinusfran A 54 Phellinusfran B Từ thể nấm Phellinus linteus nhà khoa học phân lập hispindin 31 dẫn chất từ 55 đến 60 [35] Ngồi cịn có 61 axit protocatechuic, 62 protacatechuandehit, 27 axit cafeic 64 axit ellagic [27] Các hợp chất 55, 59, 60 có khả ức chế hoạt động thông tin hemoglobin A1C [28] Nagatsu cộng phân lập 65 styrylpyron meshim akibnol A, 66 meshimakibnol B, 67 phellifuropyanon 39 phelligridin G từ thể Phellinus linteus [23, 33] OH HO O O HO OO HO HO OH O OH OO O O OH O OH OH 55 17 O O O O OR1 HO HO OH OH 56 R1 = H; 57 R1= CH3 O HO O O H H O OH HO OH HO 58 HO O HO O O HO OH HO OH 59 HO HO O O O O O OH OH 60 HO HO R2 18 61 R2=COOH axit protocatechuic 62 R2=CHO protacatechuandehit OH OH O OH O HO O O HO O O O OH 64 axit ellagic R3 O OH 65 R3=OH styrylpyron meshim akibnol A 66 R3=H meshimakibnol B O HO O HO OH O OH 67 Phellifuropyanon Một dẫn chất axit retinolic 68 axit (2E, 4E) – γ-ionylideneacetic phân lập từ mycelium Phellinus linteus [42] Một dẫn chất furanon 69 phellinon phân lập từ thân nấm Phellinus linteus có khả chống lại Bacullus subtilis [43] 70 cerebroside B, 60 protpcatechuandehit, 71 5-hydroxymetyl-2furandehit, 72 axit succnic 73 axit fumaric Kang cộng phân lập từ thể nấm Phellinus linteus năm 2004 [21] O OH O O O 68 axit (2E, 4E) – γ-ionylideneacetic 69 Phellinon TaiLieuDaiHoc.com