Thực tập vi sinh kỹ thuật môi trường Nguyễn Mỹ Linh, Nguyễn Thị Tịnh Ấu

60 NGUYỄN MỸ LINH NGUYỄN THỊ TỊNH ẤU THỰC TẬP VI SINH KỸ THUẬT MƠI TRƯỜNG NHÀ XUẤT BẢN ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HỒ CHÍ MINH BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KỸ THUẬT THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH ******************* TS NGUYỄN MỸ LINH TS NGUYỄN THỊ TỊNH ẤU THỰC TẬP VI SINH KỸ THUẬT MÔI TRƯỜNG NHÀ XUẤT BẢN ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – NĂM 2020 THỰC TẬP VI SINH KỸ THUẬT MÔI TRƯỜNG NGUYỄN MỸ LINH, NGUYỄN THỊ TỊNH ẤU Chịu trách nhiệm xuất nội dung TS ĐỖ VĂN BIÊN Biên tập TRẦN THỊ ĐỨC LINH Sửa in ÁI NHẬT Trình bày bìa TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KỸ THUẬT TP.HCM Website: http://hcmute.edu.vn Đối tác liên kết – Tổ chức thảo chịu trách nhiệm tác quyền TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KỸ THUẬT TP.HCM Website: http://hcmute.edu.vn NHÀ XUẤT BẢN ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH Phịng 501, Nhà Điều hành ĐHQG-HCM, phường Linh Trung, quận Thủ Đức, TP Hồ Chí Minh ĐT: 028 6272 6361 - 028 6272 6390 E-mail: vnuhp@vnuhcm.edu.vn Website: www.vnuhcmpress.edu.vn VĂN PHÒNG NHÀ XUẤT BẢN PHÒNG QUẢN LÝ DỰ ÁN VÀ PHÁT HÀNH Tòa nhà K-Trường Đại học Khoa học Xã hội & Nhân văn, số 10-12 Đinh Tiên Hoàng, phường Bến Nghé, Quận 1, TP Hồ Chí Minh ĐT: 028 66817058 - 028 62726390 - 028 62726351 Website: www.vnuhcmpress.edu.vn Nhà xuất ĐHQG-HCM tác giả/ đối tác liên kết giữ quyền© Copyright © by VNU-HCM Press and author/ co-partnership All rights reserved ISBN: 978-604-73-7770-1 In 250 cuốn, khổ 16 x 24 cm, XNĐKXB số: 2282-2020/CXBIPH/4-49/ĐHQGTPHCM QĐXB số 104/QĐ-NXB ĐHQGTPHCM, cấp ngày 25/6/2020 In tại: Cơng ty TNHH In & Bao bì Hưng Phú Địa chỉ: 162A/1, KP1A, P An Phú, TX Thuận An, Bình Dương Nộp lưu chiểu: Quý III/2020 THỰC TẬP VI SINH KỸ THUẬT MÔI TRƯỜNG NGUYỄN MỸ LINH, NGUYỄN THỊ TỊNH ẤU Bản tiếng Việt ©, TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KỸ THUẬT TP HCM, NXB ĐHQG-HCM TÁC GIẢ Bản quyền tác phẩm bảo hộ Luật Xuất Luật Sở hữu trí tuệ Việt Nam Nghiêm cấm hình thức xuất bản, chụp, phát tán nội dung chưa có đồng ý Trường đại học Sư phạm Kỹ thuật TP HCM Tác giả ĐỂ CÓ SÁCH HAY, CẦN CHUNG TAY BẢO VỆ TÁC QUYỀN! LỜI NÓI ĐẦU Giáo trình “Thực tập vi sinh kỹ thuật mơi trường” biên soạn nhằm phục vụ cho công tác giảng dạy môn học Thực tập vi sinh vật kỹ thuật môi trường cho sinh viên ngành Công nghệ kỹ thuật môi trường Môn học cung cấp kiến thức kỹ thuật phân tích; kiểm tra tiêu vi sinh lĩnh vực kỹ thuật môi trường Nội dung sách bao gồm phần từ hướng dẫn thao tác việc chuẩn bị môi trường nuôi cấy, phân lập vi sinh vật giữ giống vi sinh vật đến việc phân tích tiêu Coliforms; tổng vi khuẩn hiếu khí tiêu đáng quan tâm tiêu chuẩn xử lý nước thải; nước cấp Quyển sách sử dụng làm tài liệu học tập cho sinh viên chuyên ngành kỹ thuật môi trường Đồng thời, cán nghiên cứu, cán quản lý kỹ sư mơi trường sử dụng sách làm tài liệu tham khảo trình nghiên cứu học tập Các tác giả xin trân trọng gửi đến bạn đọc mong nhận ý kiến đóng góp nội dung sách để lần tái sau hoàn chỉnh chất lượng Các tác giả MỤC LỤC LỜI NÓI ĐẦU CÁC KÝ HIỆU VÀ ĐƠN VỊ 11 MỞ ĐẦU 13 BÀI THỰC HÀNH SỐ 1: CÁC THIẾT BỊ PHÒNG THÍ NGHIỆM VI SINH VÀ CÁC PHƯƠNG PHÁP KHỬ TRÙNG 17 1.1 CƠ SỞ LÝ THUYẾT 17 1.1.1 Dụng cụ 17 1.1.2 Thiết bị .19 1.1.3 Các phương pháp khử trùng dụng cụ 23 1.1.4 Kỹ thuật bao gói dụng cụ 25 1.2 DỤNG CỤ VÀ THIẾT BỊ 26 1.2.1 Thiết bị .26 1.2.2 Dụng cụ 26 1.3 THỰC NGHIỆM 27 1.3.1 Thí nghiệm 1: Khử trùng bao gói ống nghiệm .27 1.3.2 Thí nghiệm 1: Khử trùng bao gói đĩa petri 27 1.4 CÂU HỎI ƠN TẬP 27 1.5 BÁO CÁO KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM 27 BÀI THỰC HÀNH SỐ 2: CHUẨN BỊ MÔI TRƯỜNG DINH DƯỠNG NUÔI CẤY VI SINH VẬT 28 2.1 CƠ SỞ LÝ THUYẾT 28 2.1.1 Khái niệm 28 2.1.2 Phân loại môi trường dinh dưỡng 28 2.1.3 Điều chỉnh độ pH môi trường .29 2.1.4 Phân phối môi trường vào dụng cụ 30 2.1.5 Bảo quản kiểm tra môi trường 31 2.1.6 Các phương pháp khử trùng môi trường dinh dưỡng 32 2.2 HÓA CHẤT 32 2.3 THIẾT BỊ VÀ DỤNG CỤ 33 2.3.1 Thiết bị .33 2.3.2 Dụng cụ 33 2.4 THỰC NGHIỆM 33 2.4.1 Thí nghiệm 1: Pha chế mơi trường dinh dưỡng ni cấy nấm men (Hansen) 33 2.4.2 Thí nghiệm 2: Phân phối mơi trường vào ống nghiệm (thạch đứng, thạch nghiêng) 34 2.5 CÂU HỎI ÔN TẬP 34 2.6 BÁO CÁO KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM 35 BÀI THỰC HÀNH SỐ 3: CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN LẬP VI SINH VẬT 36 3.1 CƠ SỞ LÝ THUYẾT 36 3.1.1 Khái niệm 36 3.1.2 Kỹ thuật phân lập vi sinh vật khiết 36 3.2 HÓA CHẤT 39 3.3 THIẾT BỊ VÀ DỤNG CỤ 39 3.3.1 Thiết bị .39 3.3.2 Dụng cụ 39 3.4 THỰC NGHIỆM 39 3.4.1 Thí nghiệm 1: Thực kỹ thuật cấy ria chủng vi sinh nấm men .39 3.4.2 Thí nghiệm 2: Thực kỹ thuật đổ đĩa chủng vi sinh nấm men .41 3.4.3 Thí nghiệm 3: Thực kỹ thuật trải đĩa chủng vi sinh nấm men 41 3.5 CÂU HỎI ÔN TẬP 42 3.6 BÁO CÁO KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM 43 BÀI THỰC HÀNH SỐ 4: KỸ THUẬT GIEO CẤY VI SINH VẬT 44 4.1 CƠ SỞ LÝ THUYẾT 44 4.1.1 Khái niệm 44 4.1.2 Nguyên tắc 44 4.2 HÓA CHẤT 45 4.3 THIẾT BỊ VÀ DỤNG CỤ 45 4.3.1 Thiết bị .45 4.3.2 Dụng cụ 45 4.4 THỰC NGHIỆM 46 4.5 CÂU HỎI ÔN TẬP 47 4.6 BÁO CÁO KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM 47 BÀI THỰC HÀNH SỐ 5: CÁC PHƯƠNG PHÁP NHUỘM MÀU VÀ QUAN SÁT HÌNH THÁI VI SINH VẬT .48 5.1 CƠ SỞ LÝ THUYẾT 48 5.1.1 Phương pháp làm tiêu tạm thời 48 5.1.2 Phương pháp làm tiêu cố định 49 5.2 HÓA CHẤT 50 5.3 THIẾT BỊ VÀ DỤNG CỤ 50 5.3.1 Thiết bị .50 5.3.2 Dụng cụ 50 8.2 HÓA CHẤT - Môi trường Endo-agar - Môi trường Lactose Broth Lauryl tryptose - Môi trường Brillian Green Bile Lactose Broth - Nước cất khử trùng - Mẫu nước 8.3 THIẾT BỊ VÀ DỤNG CỤ 8.3.1 Thiết bị - Tủ sấy - Nồi hấp tiệt trùng (Autoclave) - Tủ cấy vi sinh - Cân kỹ thuật 8.3.2 Dụng cụ - Đĩa petri pipette khử trùng - Kẹp gắp - Bình tam giác 250 mL - Bơng gịn khơng thấm - Đèn cồn 8.4 THỰC NGHIỆM 8.4.1 Thí nghiệm 1: Kiểm tra sơ E coli ống chuông Bước 1: Pha lỗng mẫu Bước 2: Ni cấy dịch mẫu môi trường Laury Trytose (LT) nồng độ liên tiếp, ống/nồng độ, mL dịch pha loãng/ ống nghiệm Ủ 370C/24 Bước 3: Đọc kết ống Laury Tryptose dương tính (+), cấy chuyển ống LT + vào ống môi trường E.C Ủ 440C/24 70 Nếu ống LT +: môi trường đục ống durham (ống chng) có bọt khí ống chng (thể tích bọt khí ống chng = 1/10 thể tích ống chng) Bước 4: Từ ống E.C +, cấy phân lập môi trường Endo agar E.M.B Agar Ủ 370C/24 Bước 5: Nhận diện khuẩn lạc điển hình Mơi trường Endo agar: trịn, bóng, có ánh kim Mơi trường E.M.B Agar: khuẩn lạc trịn, bóng, có tâm đen, có ánh kim Bước 6: Từ khuẩn lạc nghi ngờ, cấy chuyền sang môi trường N.A (Nutrient Agar), ủ 370C/24 Bước 7: Làm nghiệm pháp IMViC với vi khuẩn cấy bước Ủ 370C/24 Bước 8: Đọc kết IMViC Bước 9: Kết luận 8.4.2 Thí nghiệm 2: Ni cấy E coli phương pháp trải đĩa Bước 1: Chuẩn bị đĩa có chứa mơi trường Endo Agar hấp tiệt trùng Bước 2: Lấy 0,1 mL mẫu pha loãng đưa lên bề mặt thạch Dùng que trang trải mẫu bề mặt đĩa lửa đèn cồn Bước 3: Ủ đĩa petri nhiệt độ 350C vòng 24 - 48 Bước 4: Đếm số lượng khuẩn lạc tính tốn số E coli mẫu 8.5 CÂU HỎI ÔN TẬP Câu 1: Trình bày khái niệm E coli Câu 2: Trình bày số loại môi trường sử dụng kỹ thuật nuôi cấy E coli Câu 3: Đặc điểm môi trường LT (+)/ LT (-) sau thời gian ủ? Câu 4: Trình bày đặc điểm nhận dạng E coli môi trường Endor agar E.M.B agar 71 8.6 BÁO CÁO KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM Sinh viên báo cáo kết sau buổi thí nghiệm theo mẫu BÁO CÁO (phần phụ lục) Sinh viên báo cáo tổng kết theo mẫu BÁO CÁO TỔNG KẾT so sánh kết theo TCVN (phần phụ lục) sau kết thúc môn học 72 PHỤ LỤC NHÓM: BÁO CÁO LỚP : NGÀY : BÀI THỰC HÀNH SỐ CÁC THIẾT BỊ PHỊNG THÍ NGHIỆM VI SINH VÀ CÁC PHƯƠNG PHÁP KHỬ TRÙNG Họ tên Bao gói ống nghiệm Bao gói đĩa petri Nguyễn Văn A … 73 NHÓM: BÁO CÁO LỚP : NGÀY : BÀI THỰC HÀNH SỐ CHUẨN BỊ MÔI TRƯỜNG DINH DƯỠNG NUÔI CẤY VI SINH VẬT Họ tên Nguyễn Văn A … 74 Thạch đứng Thạch nghiêng Đĩa petri NHÓM: BÁO CÁO LỚP : NGÀY : BÀI THỰC HÀNH SỐ CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN LẬP VI SINH VẬT Họ tên Đĩa petri Đĩa petri Kỹ thuật trải đĩa Nguyễn Văn A Kỹ thuật đổ đĩa Kỹ thuật cấy ria 75 NHÓM: BÁO CÁO LỚP : NGÀY : BÀI THỰC HÀNH SỐ KỸ THUẬT GIEO CẤY VI SINH VẬT Họ tên Nguyễn Văn A … 76 Ống nghiệm Ống nghiệm NHÓM: BÁO CÁO LỚP : NGÀY : BÀI THỰC HÀNH SỐ CÁC PHƯƠNG PHÁP NHUỘM MÀU VÀ QUAN SÁT HÌNH THÁI VI SINH VẬT Họ tên Đĩa petri (Chụp hình) Đĩa petri (Vẽ) Hình thái vi khuẩn S Cerevisiae (Nấm men) Nguyễn Văn A Hình thái vi khuẩn Lactobacillus (Dưa chua) Hình thái vi khuẩn S Cerevisiae Lactobacillus 77 Hình thái vi khuẩn Gram dương Hình thái vi khuẩn Gram âm Hình thái vi khuẩn hiếu khí bùn hoạt tính 78 NHĨM: BÁO CÁO LỚP : NGÀY : BÀI THỰC HÀNH SỐ TỔNG SỐ VI SINH VẬT HIẾU KHÍ Họ tên Nguyễn Văn A Đĩa petri Đĩa petri Kỹ thuật trải đĩa Kỹ thuật đổ đĩa 79 NHÓM: BÁO CÁO LỚP : NGÀY : BÀI THỰC HÀNH SỐ PHƯƠNG PHÁP KIỂM TRA TỔNG COLIFORM TRONG NƯỚC THẢI Họ tên Đĩa petri Nguyễn Văn A Phương pháp màng lọc Tổng số khuẩn lạc đếm = Tổng số Coliforms = Phương pháp MPN Tổng số Coliforms = 80 Đĩa petri NHÓM: BÁO CÁO LỚP : NGÀY : BÀI THỰC HÀNH SỐ KIỂM TRA E COLI TRONG NƯỚC THẢI Họ tên Nguyễn Văn A Đĩa petri Đĩa petri Kiểm tra Coliforms ống chuông Nuôi cấy E coli môi trường Endo agar Tổng số E coli = 81 PHỤ LỤC HƯỚNG DẪN BÁO CÁO TỔNG KẾT Dựa kết đạt trình thực hành, sinh viên cần báo chi tiết sau: Trang bìa Giới thiệu chung: Trình bày ngắn gọn (khơng q 1/2 trang) ý nghĩa mơi trường tiêu phân tích Ngun tắc Phương pháp phân tích; nguồn lấy mẫu cụ thể Các bước tiến hành thí nghiệm (hình ảnh thao tác cụ thể) Kết thí nghiệm Ghi nhận lại kết hình ảnh Nhận xét bàn luận kết thí nghiệm Chú ý: - Viết báo cáo giấy A4, in mặt 82 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Đặng Vũ Bích Hạnh, Đặng Vũ Xuân Huyền, Đặng Thị Bích Huyền (2019) Giáo trình Thí nghiệm vi sinh vật mơi trường Nhà xuất Xây dựng Lê Văn Việt Mẫn, Lại Mai Hương (2006) Thí nghiệm Vi sinh vật học thực phẩm Nhà xuất Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh Đỗ Hồng Lan Chi, Bùi Lê Thanh Khiết, Nguyễn Thị Thanh Kiều, Lâm Minh Triết (2014) Vi sinh vật môi trường Nhà xuất Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh Tiếng Anh Jamie Bartram, Richard Ballance (2000) Water Quality Monitoring - A Practical Guide to the Design and Implementation of Freshwater Quality Studies and Monitoring Programmes Published on behalf of United Nations Environment Programme and the World Health Organization © 1996 UNEP/WHO ISBN 419 22320 (Hbk) 419 21730 (Pbk) Ralph Mitchell, Ji Dong Gu (2010) Environmental Microbiology, Wiley Blackwell James G Cappuccino, Chad Welsh (2017) Microbiology A Laboratory Manual, Pearson 83 ... trình ? ?Thực tập vi sinh kỹ thuật mơi trường? ?? biên soạn nhằm phục vụ cho công tác giảng dạy môn học Thực tập vi sinh vật kỹ thuật môi trường cho sinh vi? ?n ngành Công nghệ kỹ thuật môi trường Môn... Bình Dương Nộp lưu chiểu: Quý III/2020 THỰC TẬP VI SINH KỸ THUẬT MÔI TRƯỜNG NGUYỄN MỸ LINH, NGUYỄN THỊ TỊNH ẤU Bản tiếng Vi? ??t ©, TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KỸ THUẬT TP HCM, NXB ĐHQG-HCM TÁC GIẢ Bản... NĂM 2020 THỰC TẬP VI SINH KỸ THUẬT MÔI TRƯỜNG NGUYỄN MỸ LINH, NGUYỄN THỊ TỊNH ẤU Chịu trách nhiệm xuất nội dung TS ĐỖ VĂN BIÊN Biên tập TRẦN THỊ ĐỨC LINH Sửa in ÁI NHẬT Trình bày bìa TRƯỜNG ĐẠI