(LUẬN văn THẠC sĩ) đánh giá định lượng thiếu enzyme glucose 6 phosphate dehydrogenase (G6PD) trên hồng cầu bằng bộ cảm biến carestar G6PD ở cộng đồng dân sống tại vùng sốt rét lưu hành huyện kroong năng, đắk lắk

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC QUY NHƠN ĐẶNG THỊ HỒNG XUÂN THỦY ĐÁNH GIÁ ĐỊNH LƢỢNG THIẾU ENZYME GLUCOSE-6PHOSPHATE DEHYDROGENASE (G6PD) TRÊN HỒNG CẦU BẰNG BỘ CẢM BIẾN CARESTARTTM G6PD Ở CỘNG ĐỒNG DÂN SỐNG TẠI VÙNG SỐT RÉT LƢU HÀNH HUYỆN KRÔNG NĂNG, ĐĂK LĂK Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 8420114 Ngƣời hƣớng dẫn : TS HUỲNH HỒNG QUANG download by : skknchat@gmail.com LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi với nghiên cứu viên đồng thực thực địa huyện Krông Năng, tỉnh Đăk Lăk La bô Khoa Nghiên cứu Điều trị, Viện Sốt rét - Ký sinh trùng - Côn trùng Quy Nhơn Các số liệu kết nêu luận văn hoàn toàn trung thực chƣa đƣợc công bố cơng trình khác Tác giả luận văn Đặng Thị Hồng Xuân Thủy download by : skknchat@gmail.com LỜI CẢM ƠN Luận văn hồn thành khơng có giúp đỡ Quý thầy cô, bạn đồng nghiệp gia đình Với lịng kính trọng biết ơn sâu sắc, xin trân trọng cảm ơn: TS.BS Huỳnh Hồng Quang Thầy giáo dành nhiều thời gian, tận tình hƣớng dẫn, truyền đạt kiến thức, giúp đỡ, chỉnh sửa toàn đề cƣơng luận văn, nhƣ động viên tơi q trình học tập làm luận văn Trân trọng cảm ơn đến Trƣờng Đại học Quy Nhơn, Ban Giám hiệu Nhà trƣờng, Phòng Đào tạo sau đại học giúp cho hoàn thiện hồ dự tuyển chƣơng trình cao học, đồng thời dành điều kiện cho học tập nghiên cứu Xin trân trọng cảm ơn đến Quý thầy cô, đồng nghiệp công tác Khoa Sinh - Kỹ thuật Nông nghiệp, Đại học Quy Nhơn, Khoa Nghiên cứu Điều trị, Khoa Xét nghiệm - Sinh học phân tử, Viện Sốt rét - Ký sinh trùng - Côn trùng Quy Nhơn tạo điều kiện thực hành tốt nhất, đóng góp ý kiến sâu sắc để luận văn hồn chỉnh Chân thành cảm ơn đến Quý cán y tế từ TTYT huyện đến Trạm y tế xã, y tế thôn buôn giúp đỡ suốt thời gian tham gia thực đề tài thực địa Kính trân trọng cảm ơn cha mẹ hai bên chồng - ngƣời mong muốn tiến bộ, động lực mạnh mẽ, thay gánh vác việc gia đình cho tơi n tâm học tập, nghiên cứu khoa học Cuối cùng, xin cảm ơn đến tất ngƣời dân chia sẻ thông tin mẫu bệnh phẩm để số liệu xét nghiệm nghiên cứu cách đầy đủ Tác giả luận văn Đặng Thị Hồng Xuân Thủy download by : skknchat@gmail.com DANH MỤC CÁC TỪ VIÊT TẮT CDC Centers for Disease Control and Prevention G6PD Glucose-6- Phosphate Dehydrogenase G6P Glucose-6-Phosphate GR Glutathion reductase GPx Glutathion peroxidase Hb Haemoglobine HC Hồng cầu HMP Hexose Monophosphate KST Ký sinh trùng KSTSR Ký sinh trùng sốt rét LTSR Loại trừ sốt rét Methaemoglobin MetHb NADP+ Nicotinamid Adenin Dinucleotit Phosphate (dạng oxy hóa) NADPH Nicotinamid Adenin Dinucleotit Phosphate (dạng khử) NST Nhiễm sắc thể PCSR Phòng chống sốt rét PCR Polymerase chain reaction_Phản ứng chuỗi trùng hợp PMS Phenazine methosulphate P falciparum Plasmodium falciparum P vivax Plasmodium vivax PQ Primaquin phosphat SR Sốt rét TCYTTG Tổ chức Y tế giới WHO World Health Organization download by : skknchat@gmail.com MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC TỪ VIÊT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH MỞ ĐẦU .1 Lý chọn đề tài luận văn Mục tiêu nghiên cứu Những đóng góp đề tài luận văn Bố cục luận văn .3 Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu vai trò enzyme glucose phosphat dehydrogenase 1.1.1 Cấu trúc chế hoạt động enzyme G6PD .5 1.1.2 Đặc điểm di truyền, cấu trúc đột biến G6PD 1.2 Phát hiện, chẩn đoán điều trị thiếu hụt enzyme G6PD 10 1.2.1 Phát hiện, chẩn đoán 10 1.2.2 Điều trị .12 1.3 Các phƣơng pháp phát thiếu hụt enzyme G6PD 13 1.4 Bệnh sốt rét khía cạnh liên quan enzyme G6PD 16 1.4.1 Giới thiệu loài ký sinh trùng sốt rét Plasmodium spp 16 1.4.2 Chu kỳ sinh học ký sinh trùng sốt rét 16 1.4.3 Điều trị sốt rét 17 1.5 Nghiên cứu biến thể thiếu hoạt độ enzyme G6PD bệnh sốt rét 18 1.5.1 Tại Việt Nam 18 1.5.2 Trên giới 21 1.6 Thiếu enzyme G6PD sử dụng thuốc primaquine phosphate .23 1.7 Các biến thể thiếu enzyme G6PD mức độ nghiêm trọng 25 Chƣơng ĐỔI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 29 2.1 Địa điểm thời gian nghiên cứu 29 download by : skknchat@gmail.com 2.2 Đối tƣợng nghiên cứu 30 2.2.1 Tiêu chuẩn lựa chọn 30 2.2.2 Tiêu chuẩn loại trừ 30 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu .31 2.3.1 Thiết kế nghiên cứu 31 2.3.2 Cỡ mẫu 31 2.3.3 Phƣơng pháp chọn mẫu 31 2.4 Kỹ thuật nghiên cứu .31 2.5 Các biến số số nghiên cứu 37 2.6 Nội dung nghiên cứu 37 2.7 Phân tích xử lý số liệu .38 2.8 Bảo quản lƣu trữ liệu 39 2.9 Đảm bảo chất lƣợng nghiên cứu 39 2.7 Khía cạnh đạo đức nghiên cứu 40 Chƣơng KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN 41 3.1 Đặc điểm chung quần thể xã nghiên cứu, huyện Krông Năng .41 3.2 Trị số trung vị hoạt độ enzyme G6PD theo giới tính nam hiệu chỉnh .42 3.3 Tỷ lệ thiếu hoạt độ enzyme G6PD theo giới tính, nhóm dân tộc 44 3.3.1 Tỷ lệ thiếu hoạt độ enzyme G6PD theo giới tính 44 3.3.2 Tỷ lệ thiếu hoạt độ enzyme G6PD theo nhóm dân tộc 49 3.4 Phân tích biến thể di truyền thiếu hoạt độ enzyme G6PD .57 KẾT LUẬN .70 Giá trị bình thƣờng hoạt độ enzyme glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD) quần thể nghiên cứu .70 Tình trạng thiếu hoạt độ enzyme G6PD cảm biến định lƣợng CareStartTM điểm nghiên cứu 70 KIẾN NGHỊ 71 TÍNH KHOA HỌC, TÍNH MỚI VÀ KHẢ THI CỦA ĐỀ TÀI .72 Tính khoa học 72 Tính 72 Tính khả thi 72 download by : skknchat@gmail.com DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO 74 DANH MỤC CƠNG TRÌNH KHOA HỌC ĐÃ CƠNG BỐ CỦA TÁC GIẢ 81 PHỤ LỤC QUYẾT ĐỊNH GIAO TÊN ĐỀ TÀI LUẬN VĂN THẠC SĨ (BẢN SAO) download by : skknchat@gmail.com DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Các lớp thiếu enzyme G6PD biểu bệnh lâm sàng Bảng 1.2 Phân loại đột biến thiếu G6PD theo Tổ chức Y tế giới 11 Bảng 1.3 Phân nhóm biến thể thiếu enzyme G6PD 18 Bảng 2.1 Biến thể enzyme phân cắt giới hạn áp dụng phân tích 36 Bảng 2.2 Biến số, số, định nghĩa biến số cách thu thập biến số 37 Bảng 2.3 Tiêu chuẩn phân loại hoạt độ enzyme G6PD (WHO, 2018) 38 Bảng 3.1 Đặc điểm chung quần thể nghiên cứu 41 Bảng 3.2 Giá trị chung hemoglobin hoạt độ enzyme G6PD quần thể 42 Bảng 3.3 Đặc điểm hoạt độ enzyme G6PD quần thể nghiên cứu .42 Bảng 3.4 Tỷ lệ thiếu, bán thiếu bình thƣờng hoạt độ enzyme G6PD phân tích theo giới tính .44 Bảng 3.5 Tỷ lệ thiếu hoạt độ enzyme G6PD theo dân tộc .49 Bảng 3.7 Các biến thể enzyme G6PD tất nhóm dân tộc thiếu G6PD 57 Bảng 3.8 Các biến thể enzyme G6PD phân theo nhóm dân tộc vùng 64 download by : skknchat@gmail.com DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Sơ đồ q trình tổng hợp glutathione có tham gia enzyme G6PD Hình 1.2 Sơ đồ di truyền khiếm khuyết thiếu enzyme G6PD .6 Hình 1.3 Sơ đồ di truyền nhiễm sắc thể liên quan đến thiếu enzyme G6PD .8 Hình 1.4 Bản đồ phân bố tần suất alen G6PD liên quan đến thiếu enzyme G6PD | Nguồn: WHO, 2017 10 Hình 1.5 Cơ chế thiếu enzyme G6PD dẫn đến hồng cầu dễ vỡ tan máu cấp 12 Hình 1.6 Cấu trúc enzyme G6PD không đột biến (2BHL 2BH9) 15 Hình 1.7 Tần suất thiếu enzyme G6PD biến thể đa hình thiếu enzyme G6PD 22 Hình 1.8 Vùng q28 nhiễm sắc thể X phân tích biến thể enzyme G6PD 23 Hình 2.1 Địa điểm nghiên cứu xã thuộc huyện Krông Năng, tỉnh Đăk Lăk 29 Hình 2.2a Máy đo hoạt độ enzyme G6PD .32 Hình 2.2b Máy đo nồng độ Hb .32 Hình 2.3 Phân loại thiếu hoạt độ enzyme G6PD theo mốc 30% 80% so với giá trị bình thƣờng sau tính giá trị trung vị 39 Hình 3.1 Phân loại hoạt độ G6PD theo mức 30% 80% so với bình thƣờng.43 Hình 3.2 Tỷ lệ thiếu, bán thiếu hoạt độ enzyme G6PD theo giới 44 Hình 3.3 Phân bố tỷ lệ thiếu hoạt độ enzyme G6PD nhóm dân tộc 50 Hình 3.4 Phân bố tỷ lệ thiếu hoạt độ enzyme G6PD nhóm dân tộc Kinh, dân tộc di cƣ từ tỉnh phía Bắc vào dân tộc địa phía Nam 56 Hình 3.5 Tỷ lệ biến thể thiếu enzyme G6PD tổng số 120 mẫu 58 Hình 3.6 Tỷ lệ loại biến thể thiêu enzyme G6PD nhóm dân tộc .58 Hình 3.7 Phân tích biến thể theo nhóm dân tộc địa nhóm dân tộc di cƣ từ tỉnh miền Bắc di cƣ từ Nam vào 65 download by : skknchat@gmail.com MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài luận văn Sốt rét bệnh truyền nhiễm nguy hiểm vấn đề y tế công cộng nƣớc châu Phi, Nam Mỹ khu vực châu Á-Thái Bình Dƣơng Trong cấu loài ký sinh trùng sốt rét (KSTSR) gây bệnh ngƣời, Plasmodium falciparum Plasmodium vivax thƣờng chiếm tỷ lệ cao Trong loài P falciparum chƣa thể loại trừ P vivax tăng lên vùng lƣu hành nhƣ gánh nặng thách thức điều trị tiệt điểm đặc biệt chu kỳ sinh học P vivax ngủ tế bào gan, tồn tái hoạt động sau vài tuần đến vài tháng, chí vài năm, tùy thuộc vào chủng Việc điều trị thể ngủ có loại thuốc thuộc nhóm 8-aminoquinolein primaquin phosphate (PQ) liệu trình kéo dài 14 ngày liên tục nên có khả gây tan máu cấp số bệnh nhân thiếu enzyme glucose-6-phosphate-dehydrogenase (G6PD) G6PD enzyme oxy hóa khử, nằm bề mặt hồng cầu Các đột biến gen mã hóa G6PD tạo nên kiểu hình G6PD khác tƣơng ứng với mức độ thiếu bán thiếu enzyme G6PD Bệnh nhân thiếu G6PD thƣờng biểu lâm sàng, nên họ khơng biết mắc bệnh, trừ “phơi nhiễm” tác nhân oxy hóa cao nhƣ nhiễm trùng, thực phẩm, thuốc hóa chất có tính oxy hóa cao gây tan máu Trong số thuốc gây tan máu đó, PQ dùng liệu trình dài ngày để điều trị sốt rét P vivax loại đƣợc quan tâm Do vậy, phát triển thuốc thay PQ dùng ngắn ngày an toàn quan trọng tafenoquine thuốc ứng viên đƣợc nghiên cứu đánh giá hiệu lực tính an tồn, bệnh nhân khiếm khuyết enzyme G6PD hồng cầu, nên điều tra tình trạng thiếu G6PD vùng sốt rét lƣu hành P vivax cần thiết Để đánh giá tỷ lệ thiếu enzyme G6PD cộng đồng vùng sốt rét lƣu hành để dùng thuốc PQ hay thử nghiệm thuốc tafenoquin an toàn, đề tài download by : skknchat@gmail.com ... skknchat@gmail.com ? ?Đánh giá định lƣợng thiếu enzyme Glucose- 6- Phosphate Dehydrogenase (G6PD) hồng cầu cảm biến CareStartTM G6PD cộng đồng dân sống vùng sốt rét lƣu hành huyện Krông Năng, Đăk Lăk" đƣợc tiến hành. .. nhân khiếm khuyết enzyme G6PD hồng cầu, nên điều tra tình trạng thiếu G6PD vùng sốt rét lƣu hành P vivax cần thiết Để đánh giá tỷ lệ thiếu enzyme G6PD cộng đồng vùng sốt rét lƣu hành để dùng thuốc... Xác định giá trị bình thƣờng hoạt độ enzyme glucose- 6- phosphate dehydrogenase (G6PD) quần thể nghiên cứu; 2.2 Đánh giá tình trạng thiếu hoạt độ enzyme G6PD cảm biến định lƣợng CareStartTM vùng sốt